DB37T 2958-2017 氟喹諾酮類藥物可溶性粉中非法添加物利巴韋林的測定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法　　

DB37DB37/T2958—2017氟喹諾酮類藥物可溶性粉中非法添加物利巴韋林的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法山東省質(zhì)量技術監(jiān)督局發(fā)布IDB37/T2958—2017本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由山東省畜牧獸醫(yī)局管理并提出。本標準由山東省畜牧業(yè)專業(yè)標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：山東省獸藥質(zhì)量檢驗所。本標準主要起草人：高迎春、魏秀麗、陳玲、張傳津、張呈軍、楊林、薄永恒、陸慶泉、陳志強、1DB37/T2958—2017氟喹諾酮類藥物可溶性粉中非法添加物利巴韋林的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標準規(guī)定了氟喹諾酮類藥物可溶性粉中非法添加物利巴韋林的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜本標準適用于氟喹諾酮類藥物可溶性粉(10%乳酸環(huán)丙沙星可溶性粉、10%恩諾沙星粉、5%鹽酸沙拉沙星可溶性粉)中非法添加物利巴韋林的測定。件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3原理氟喹諾酮類藥物可溶性粉中非法添加的利巴韋林以甲醇-乙腈(1+1)提取稀釋后，取上清液經(jīng)高效液相色譜分離，用串聯(lián)質(zhì)譜檢測，外標法定量。除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑，水符合GB/T6682一級水的規(guī)定。4.1甲醇(CH?OH):色譜純。4.2甲酸(HCOOH):色譜純。4.5甲醇-乙腈(1+1):準確量取甲醇(4.1)100mL,加入乙腈(4.3)100mL,混勻，備用。4.6流動相流動相A:準確量取甲酸(4.2)1.0mL,加乙腈(4.3)稀釋至1000mL,過0.22μm有機系微孔濾流動相B:稱取乙酸銨(4.4)0.7708g,加水100mL,加入甲酸(4.2)1.0mL,用水稀釋至1000mL,4.7利巴韋林對照品：純度≥96.0%。4.8利巴韋林對照品儲備液：精密稱取利巴韋林對照品10mg,加乙腈溶解并定容至100mL,制成1004.9利巴韋林對照品中間工作液：準確量取0.2mL上述儲備液(4.8),加初始比例流動相并定容至100mL,為200ng/mL的對照中間工作液，4℃冰箱保存，有效期1周。2DB37/T2958—20175儀器設備5.1高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源(ESI)。5.2天平：感量0.001g,感量0.00001g。5.3振蕩器。5.4離心機(5000r/min)。6試驗步驟6.1陰性空白樣品經(jīng)檢測不含利巴韋林的氟喹諾酮類藥物可溶性粉。稱取陰性空白樣品、供試試樣各0.2g(準確到0.0001g)分別置于50mL離心管中，準確加入甲醇-乙腈(4.5)20mL,振蕩10min,5000r/min離心10min,準確量取0.5mL上清液，用初始流動相定容至100mL容量瓶，搖勻，從中準確量取0.5mL,用初始流動相定容至20mL容量瓶，搖勻，用濾膜(0.22μm)濾過，濾液待測。6.3儀器參考條件6.3.1高效液相色譜參考條件色譜柱：氨基色譜柱(100mm×2.1mm,1.7μm),填料基于亞乙基橋雜化顆粒的三鍵鍵合酰胺基?；蛐阅芟喈斦?；流速：0.25mL/min;柱溫：35℃;液相色譜梯度洗脫程序見表1。表1液相色譜梯度洗脫程序時間/minA/%B/%0126.3.2質(zhì)譜參考條件電噴霧離子源，正離子掃描(ESI+);掃描模式：多反應監(jiān)測(MRM);離子源溫度：150℃;脫溶劑溫度：500℃;3DB37/T2958—2017脫溶劑氮氣流速：1000L/hr;毛細管電壓：3kV;測試藥物定性、定量離子對及對應的錐孔電壓和碰撞能量見表2。表2定性離子對、定量離子對、錐孔電壓和碰撞能量藥物定量離子對定性離子對錐孔電壓/V碰撞能量/eV保留時間/min利巴韋林(Ribavirin)245.4>113.4245.4>113.4245.4>96.26.4.1標準曲線的配制準確吸取對照品中間工作液(4.9)0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL分別置20mL容量瓶中，用初始流動相定容，配制成濃度為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL對照溶液，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。以對照溶液中利巴韋林峰面積為縱坐標，對照溶液中相應利巴韋林的濃度為橫坐標，繪制標準曲線。6.4.2定性測定通過試樣色譜圖的的特征離子與對照溶液各色譜峰的特征離子相對照定性。試樣與對照品保留時間的相對偏差不大于2.5%;試樣特征離子的相對離子豐度與對照溶液的相對離子豐度一致，相對離子豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷試樣中添加了利巴韋林。典型的利巴韋林對照溶液特征離子質(zhì)量色譜圖參見附錄圖A1。表3離子豐度比的允許偏差范圍6.4.3定量測定取對照溶液、試樣溶液上機測定，以峰面積按外標法采用單點或多點定量。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，典型的利巴韋林對照品溶液特征離子的質(zhì)量色譜圖參見附錄A。7試驗數(shù)據(jù)處理利巴韋林的含量按下列公式計算：.....................................(1)式中：X——供試試樣中利巴韋林的含量，單位為毫克每克(mg/g);4DB37/T2958—2017Cs——對照品溶液中利巴韋林濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);m——供試試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。計算結果需扣除空白值，測定結果用平行測定的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字。f=1000000V=1600008檢測方法的靈敏度、準確度和精密度8.1靈敏度本方法檢出限為0.5mg/g,定量限為2mg/g。8.2準確度本方法在2mg/g、40mg/g、50mg/g、60mg/g添加濃度水平上的回收率在80%～120%之間。8.3精密度本方法在重復性測定條件下相對偏差≤15%。5DB37/T2958—2017(資料性附錄)利巴韋林對照溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見圖A1。li-00251Sm(Mn,1x3)2.24;328400245.4>113.16(libaweilin)2.51e6Area0li-00251Sm(Mn,1x3)2.202.252.302.352.402.452.502.552.2.24;78445