生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 第十二章 肝膽疾病的檢驗(yàn)

職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)第十二章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE2菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校劉觀昌目錄肝病時(shí)的生物化學(xué)變化及異常1肝膽疾病檢驗(yàn)2肝功能試驗(yàn)的選擇與評價(jià)3眼睛保護(hù)不好，看不到世界；肝臟保護(hù)不好，你將從這個(gè)世界上消失！本章內(nèi)容概要：本章教學(xué)要求：第二節(jié)肝功能試驗(yàn)第一節(jié)概述

掌握:黃疸的發(fā)生機(jī)理和各型黃疸的代謝特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷要點(diǎn)；肝功能實(shí)驗(yàn)生化檢查指標(biāo)的種類和重點(diǎn)項(xiàng)目的測定方法及評價(jià)。

熟悉:肝臟的生物化學(xué)功能，膽紅素代謝；各測定項(xiàng)目的臨床意義

了解：肝臟的基本機(jī)構(gòu)；肝功能實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目選擇的原則。

第三節(jié)肝功能試驗(yàn)的選擇與評價(jià)（一）解剖學(xué)特點(diǎn)雙重血液供應(yīng)腹主動脈的分枝-肝動脈氧氣等門靜脈胃腸吸收的物質(zhì)雙重輸出管道肝靜脈代謝降解物

下腔靜脈膽道系統(tǒng)脂溶性物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物腸道第一節(jié)肝病時(shí)的生物化學(xué)變化及異常肝臟結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（二）肝臟的顯微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（組織學(xué)結(jié)構(gòu)）1、組織結(jié)構(gòu)—肝小葉2、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)（三）肝細(xì)胞的再生肝細(xì)胞是體內(nèi)唯一具有再生能力的實(shí)質(zhì)細(xì)胞。實(shí)質(zhì)細(xì)胞，一個(gè)器官內(nèi)，承擔(dān)該器官功能的細(xì)胞，間質(zhì)細(xì)胞是這個(gè)器官內(nèi)存在的那些輔助實(shí)質(zhì)細(xì)胞完成器官功能的細(xì)胞。如肝臟細(xì)胞是實(shí)質(zhì)細(xì)胞，肝小葉間的纖維細(xì)胞就是間質(zhì)細(xì)胞，起支持作用第一節(jié)肝病時(shí)的生物化學(xué)變化及異常肝的生物化學(xué)功能總攬物質(zhì)代謝功能排泄功能（膽汁酸、膽色素）生物轉(zhuǎn)化重要生化功能第一節(jié)肝病時(shí)的生物化學(xué)變化及異常分類肝的正常代謝及疾病時(shí)的異常蛋白質(zhì)代謝合成與分泌血漿蛋白質(zhì)（除γ-球蛋白外）：減少。清除血漿蛋白。分解苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸等芳香族氨基酸：降低。合成尿素：減少。脂類代謝①促進(jìn)脂類的消化與吸收：消化減弱，吸收減少，腹脹、腹瀉。②合成甘油三酯、磷脂、膽固醇及脂蛋白：減少，血③甘油三酯、磷脂、膽固醇及脂蛋白的代謝場所：④生成酮體：糖代謝糖原分解：減少糖原合成：肝糖原減少糖異生作用：減弱激素代謝激素在肝臟中滅活維生素代謝①維生素A,E,K和B12的主要儲存場所②維生素K參與肝細(xì)胞內(nèi)凝血酶原及凝血因子的合成③將維生素D轉(zhuǎn)化為25-羥維生素D一、肝的生化代謝功能及疾病時(shí)的異常變化（總攬）肝疾病的肝外表現(xiàn)二、生物轉(zhuǎn)化作用的變化定義：

生物轉(zhuǎn)化作用:

機(jī)體對許多外源性或內(nèi)源性非營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)變，增加其水溶性(或極性)，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內(nèi)變化過程稱生物轉(zhuǎn)化作用(biotransformation)。

轉(zhuǎn)化對象－－非營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化特點(diǎn)：生理意義：保護(hù)機(jī)體,致癌、致畸內(nèi)源性非營養(yǎng)物:氨、胺、膽色素、激素等外源性非營養(yǎng)物:藥物、毒物、食品防腐劑、色素①連續(xù)性，②多樣性，③失活與活化雙重性練習(xí)題1.哪一種物質(zhì)的合成過程僅在肝臟進(jìn)行？A.尿素B.糖原C.血漿蛋白D.脂肪酸E.膽固醇2.肝臟合成最多的血漿蛋白是A.α-球蛋白B.β-球蛋白C.清蛋白D.纖維蛋白原E.凝血酶原3.肝臟進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化時(shí)葡萄醛酸的活性供體是A.GA

B.UDPG

C.ADPGA

D.UDPGA

E.CDPGA4.生物轉(zhuǎn)化中最常見的一種結(jié)合物是A.乙基化B.甲基C.谷胱甘肽D.葡萄糖醛酸E.硫酸三、膽色素代謝及其異常膽色素

尿膽素原糞膽素原

尿膽素糞膽素膽綠素膽紅素未結(jié)合膽紅素(單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)如骨髓、脾臟)結(jié)合膽紅素（肝臟）膽素原膽色素(bilepigment)是體內(nèi)鐵卟啉化合物的主要分解代謝產(chǎn)物，包括膽紅素、膽綠素、膽素原和和膽素等。膽素原“尿三膽”指的是什么？

膽素第一節(jié)衰老紅細(xì)胞：80％～85％非血紅蛋白的含血紅素的蛋白質(zhì)無效造血（一）膽紅素的正常代謝1．膽紅素的生成（網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)）來源生成過程部位：肝、脾、骨髓單核－巨噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞微粒體與胞液中。

過程：血紅蛋白血紅素＋珠蛋白氨基酸膽紅素游離膽紅素的性質(zhì)：親脂疏水，對組織尤其是大腦具有毒性作用降解衰老紅細(xì)胞2．膽紅素在血液中的運(yùn)輸意義①增加膽紅素在血漿中的溶解度；②限制膽紅素自由通過生物膜產(chǎn)生毒性作用。競爭性結(jié)合劑如磺胺藥，水楊酸，膽汁酸等

運(yùn)輸形式：膽紅素－清蛋白復(fù)合物復(fù)合物與化合物有何區(qū)別？未結(jié)合膽紅素3．膽紅素在肝中的轉(zhuǎn)變＊攝?。耗懠t素可以自由雙向通透肝血竇，通過肝細(xì)胞膜受體攝取進(jìn)入肝細(xì)胞內(nèi)。＊轉(zhuǎn)運(yùn)：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在胞漿與配體蛋白結(jié)合部位：滑面內(nèi)網(wǎng)質(zhì)反應(yīng)：結(jié)合反應(yīng)（主要為結(jié)合物為葡萄糖醛酸GA，由UDPGA提供活性GA）主要轉(zhuǎn)化酶類：葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物：主要為雙葡萄糖醛酸膽紅素，另有少量單葡萄糖醛酸膽紅素、硫酸膽紅素，統(tǒng)稱為結(jié)合膽紅素。＊肝內(nèi)轉(zhuǎn)化過程膽紅素葡糖醛酸一酯

+UDP-葡糖醛酸UDP-葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶膽紅素葡糖醛酸二酯

+UDP膽紅素

+UDP-葡糖醛酸膽紅素葡糖醛酸一酯

+UDPUDP-葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶

葡糖醛酸膽紅素的生成＊排泄結(jié)合膽紅素從肝細(xì)胞分泌至毛細(xì)膽管排泄入膽汁中，再隨膽汁排入腸道。4．膽紅素在腸道中的變化和膽素原的腸肝循環(huán)

結(jié)合膽紅素膽素原腸菌葡萄糖醛酸還原膽素氧化＊過程﹡膽素原：中膽素原，糞膽素原，d-尿膽素原﹡膽素：i-尿膽素，糞膽素，d-尿膽素游離膽紅素＊膽素原的腸肝循環(huán)：

在小腸下段生成的膽素原約有10％～20％可被腸粘膜重吸收，再經(jīng)肝門靜脈入肝，重吸收入肝的膽素原大部分以原形再排入膽道，構(gòu)成腸肝循環(huán)，小部分(每日0.4mg～4.0mg)經(jīng)體循環(huán)隨尿排出。血清膽紅素結(jié)合膽紅素：在肝中與葡萄糖醛酸結(jié)合的膽紅素稱為結(jié)合膽紅素，又稱肝膽紅素。未結(jié)合膽紅素：存在于血中未與葡萄糖醛酸結(jié)合的膽紅素稱為未結(jié)合膽紅素，又稱血膽紅素。＊存在于血中的兩種膽紅素80%為未結(jié)合膽紅素，20%為結(jié)合膽紅素，兩者合稱總膽紅素，含量約1～17.1

mol/l，項(xiàng)目未結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素別名間接膽紅素血膽紅素直接膽紅素肝膽紅素與葡萄糖醛酸結(jié)合未結(jié)合結(jié)合與重氮試劑反應(yīng)慢或間接反應(yīng)迅速直接反應(yīng)水中溶解度（水溶性）小大經(jīng)腎隨尿排出不能能通過細(xì)胞膜對腦的毒性作用大無

兩種膽紅素的區(qū)別1．黃疸的概念：

指高膽紅素血癥引起的皮膚、鞏膜和粘膜等組織黃染的現(xiàn)象。①正常人血清膽紅素小于17.1μmol/L。②當(dāng)膽紅素超過正常范圍，但又在34.2μmol/L以內(nèi)肉眼難于察覺，稱為隱性黃疸。③如膽紅素超過34.2μmol/L即為顯性黃疸。（二）膽紅素代謝障礙（黃疸）黃疸分類:(血中膽紅素增多)阻塞性黃疸－膽紅素排出減少，返流入血

溶血性黃疸-膽紅素生成過多肝細(xì)胞性黃疸－肝清除膽紅素的能力降低2．黃疸的產(chǎn)生機(jī)制與黃疸分類血清膽紅素定量（μmol/L）尿液糞便總膽紅素非結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素尿膽原尿膽紅素顏色糞膽原健康人3.4-17.１＜13.70-3.4(＋)(－)黃褐色正常溶血性黃疸↑↑↑↑輕度↑或正常強(qiáng)（+）（一）加深增加阻塞性黃疸↑↑輕度↑或正?！ㄒ唬ǎ┳儨\或陶土色↓或消失肝細(xì)胞性黃疸↑↑↑（+）或（-）（+）變淺或正常↓或正常三種黃疸的鑒別膽紅素代謝過程（復(fù)習(xí)）

溶血性黃疸時(shí)膽紅素代謝溶血性黃疸發(fā)生機(jī)制示意圖

肝性黃疸時(shí)膽紅素代謝肝細(xì)胞性黃疸發(fā)生機(jī)制示意圖

梗阻性黃疸時(shí)膽紅素代謝膽汁淤滯性黃疸發(fā)生機(jī)制示意圖（四）膽汁酸代謝及其異常膽汁酸：是由膽固醇轉(zhuǎn)變生成的一類膽烷酸的總稱。由多種成分組成，是膽汁的主要組成成分。膽汁的相關(guān)知識：膽汁功能：膽汁中的膽汁酸鹽（膽鹽）促進(jìn)脂類的消化吸收，同時(shí)能將體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物及生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物不斷地排入腸道隨糞便排出體外。膽汁的來源：肝膽汁

膽囊膽汁排入十二指腸膽汁的成分：膽汁酸（含量最多）、卵磷脂、蛋白質(zhì)、脂肪酸和膽固醇肝細(xì)胞分泌，500－1000ml/天膽囊濃縮，300－700ml/天初級膽汁酸（肝細(xì)胞合成）初級游離膽汁酸初級結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔┠懰幔–A）鵝脫氧膽酸（CDCA）甘氨膽酸牛磺膽酸甘氨鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸次級膽汁酸（腸道轉(zhuǎn)變)次級游離膽汁酸次級結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔┟撗跄懰幔―CA）石膽酸（LCA）甘氨脫氧膽酸牛磺脫氧膽酸甘氨石膽酸?；鞘懰崮懝檀迹ǜ危?α

－羥膽固醇初級膽汁酸（膽烷酸）次級膽汁酸肝7α－羥化酶腸菌酶門靜脈重吸收膽汁酸代謝示意圖(3)膽汁酸肝腸循環(huán)（4）膽汁酸的功能：①促進(jìn)脂類消化②促進(jìn)脂類吸收③抑制膽固醇從膽汁中析出沉淀各型膽汁酸13－3

2、膽汁酸代謝障礙（1）膽汁酸合成障礙：肝功能嚴(yán)重減退（2）膽汁酸排出障礙：主要見于肝外膽道阻塞（3）膽汁酸腸肝循環(huán)紊亂：（4）膽汁淤積：主要見于微小膽管病變血清膽汁酸測定的主要成分：初級游離膽汁酸（CA、CDCA）、次級游離膽汁酸（DCA、LCA）（五）血漿酶類代謝的異常1．肝臟合成的血漿酶類:膽堿脂酶、凝血因子、銅藍(lán)蛋白（亞鐵氧化酶）等;2.肝細(xì)胞內(nèi)酶（肝細(xì)胞損傷）:

ALT、AST

等3．膽管阻塞性疾病酶活性改變：ALP、GGT4．肝硬化疾病酶活性改變：單胺氧化酶（MAO）

第三節(jié)肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)（肝功能試驗(yàn)）（肝功能檢查）肝臟實(shí)驗(yàn)室檢查的主要目的了解肝細(xì)胞有無損傷與損傷程度及損傷的類型、定位等。動態(tài)觀察肝臟功能,了解病情的變化，治療效果和預(yù)后評估。協(xié)助診斷肝臟疾病（病毒性肝炎、肝癌等）,協(xié)助判斷病原、病種和病型等。評價(jià)某些病人對一些手術(shù)的耐受力和用藥監(jiān)護(hù)。健康咨詢，幫助了解各種理化和環(huán)境因素對肝臟的損害。

肝功能試驗(yàn)的常用檢驗(yàn)項(xiàng)目血清（漿）蛋白質(zhì)測定血清酶活性測定血清膽紅素測定血清膽汁酸測定血氨測定這些指標(biāo)從不同方面如物質(zhì)代謝、細(xì)胞損傷、膽道通暢情況、肝纖維組織增生等方面全面評價(jià)肝功能。一、血清（漿）蛋白測定（一）總蛋白、清蛋白、及清蛋白/球蛋白（A/G）比值測定

1．總蛋白（TP）測定化學(xué)法(雙縮脲法)、物理法、染料結(jié)合法、電泳法染料結(jié)合法(BCG、BCP）、沉淀法2．清蛋白（Alb、A）測定3．A/G比值計(jì)算【參考范圍】總蛋白60～80g/L清蛋白35～55g/L球蛋白：15～32g/LA/G比值：1.5～2.5/1【臨床意義】

嚴(yán)重肝病時(shí)，肝臟合成分子量小的蛋白質(zhì)能力降低，血中清蛋白含量減少；而免疫系統(tǒng)、單核巨噬細(xì)胞合成球蛋白增加，導(dǎo)致A/G比值減少。嚴(yán)重則會出現(xiàn)A/G比值小于1，稱為A/G比值倒置，表示肝功能損害嚴(yán)重。（二）纖維蛋白原(Fib)測定（凝血因子Ⅰ）

測定方法：分為三大類①根據(jù)纖維蛋白原的生物學(xué)特性測定②根據(jù)纖維蛋白原理化性質(zhì)而建立的測定方法。

③根據(jù)纖維蛋白原免疫學(xué)特點(diǎn)而建立的測定方法。

【參考區(qū)間】2.22~4.22g/L(熱沉淀比濁法)【臨床意義】

(1)纖維蛋白原增加：①感染；②無菌炎癥；③其它。(2)纖維蛋白原減少:①嚴(yán)重的肝臟疾??；②其它疾病引起纖維蛋白原減少的疾病。人血液中有多少凝血因子？化學(xué)本質(zhì)是什么？用何標(biāo)本測定？熱沉淀比濁法急性時(shí)相反應(yīng)（三）甲胎蛋白（α1-fetoprotein，AFP）測定

測定方法:【參考區(qū)間】成人10~30μg/L,>400μg/L作為肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)【臨床意義】

酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫分析法、斑點(diǎn)免疫結(jié)合法、火箭電泳放射自顯影法、酶聯(lián)火箭電泳法等(1)原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的診斷：血清AFP測定值超過400μg/L

(2)活動性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的診斷．(3)妊娠、新生兒血AFP亦可升高。（生理性）（五）銅藍(lán)蛋白測定【臨床意義】

肝豆?fàn)詈俗冃裕╓ilson病）和遺傳性色素沉積癥．【參考范圍】

52.9～167.7IU/L【臨床意義】

遺傳性血色素沉積癥（鐵沉積）（四）轉(zhuǎn)鐵蛋白【原理】同血清鐵測定，雙聯(lián)吡啶法。以轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度表示轉(zhuǎn)鐵蛋白的含量?！驹怼?/p>

銅藍(lán)蛋白具有氧化酶活性

【參考范圍】

TIBC男50～77μmol/L女54～77μmol/L轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度為33.0%～35.0%

轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度＝血清鐵/TIBC×100%二、血漿（清）酶活性測定

常用的有關(guān)肝膽疾病檢測的血清酶種類：1．肝臟合成酶類:膽堿脂酶、凝血因子、銅藍(lán)蛋白；2.肝細(xì)胞內(nèi)酶類:

ALT、AST

3．反應(yīng)膽管淤積性疾病的酶類：ALP、GGT4．反應(yīng)肝纖維增生的酶類：單胺氧化酶（MAO）

正常人組織中轉(zhuǎn)氨酶含量U/g或U/ml（一）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測定（速率法）1、測定原理：

丙氨酸＋α-酮戊二酸

谷氨酸＋丙酮酸丙酮酸＋NADH乳酸＋NAD＋在340nm處監(jiān)測吸光度的下降程度，可計(jì)算出ALT的活性。2、方法評價(jià)：（1）特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高。采用雙試劑法可消除內(nèi)源性丙酮酸

的影響。是ALT測定的首選方法。（2）嚴(yán)重高血氨可使測定結(jié)果偏高。（3）標(biāo)本冷藏可穩(wěn)定1周，但溶血對結(jié)果影響大。

ALTLDH（4）血清標(biāo)本不宜反復(fù)凍融，避免影響酶活性。舊稱：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)內(nèi)源性丙酮酸有干擾【參考區(qū)間】

5～40U/L

【臨床意義】(2)慢性活動性肝炎或脂肪肝：(1)肝細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo):ASTALT肝細(xì)胞兩種轉(zhuǎn)氨酶分布特點(diǎn)【參考區(qū)間】

5～40U/L

【臨床意義】肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎：血清AST也可輕度增高。心肌梗死：血清中AST活性增高各種肝病病人：血清AST的升高(二)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）的測定（速率法）［測定方法］略舊稱谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)（三）ALP測定

化學(xué)法連續(xù)監(jiān)測法（速率法）鮑氏法金氏法皮氏法速率法測定ALP原理：4－NPP＋AMP

對硝基酚

ALP磷酸對硝基酚二乙醇胺對硝基酚，在堿性環(huán)境中呈黃色，入m=405nm1.血清標(biāo)本應(yīng)新鮮。冷凍保存復(fù)融后活性增高30%；2.一般選血清，肝素抗凝標(biāo)本可用。3.EDTA、草酸鹽、檸檬酸鹽抗凝劑不可用。？方法評價(jià)【參考區(qū)間】男性：1～12歲≤500

U/L，12～25歲≤750U/L，25歲以上40～150U/L女性：1～12歲≤500

U/L，15歲以上40～150U/L成人：40～150U/LALP主要用于診斷肝膽和骨骼疾病

【臨床意義】受年齡影響最大的指標(biāo)(四)γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶（GGT，γ-GT）測定法

化學(xué)法（重氮反應(yīng)比色法）和連續(xù)監(jiān)測法。1.重氮反應(yīng)比色法測定GGT原理：

【參考范圍】男性3～17U/L；女性2～13U/L2.連續(xù)監(jiān)測法測定GGT(1)原理：

(2)方法評價(jià)：

(2)方法評價(jià)：重氮比色法活性單位：100ml血清在37℃下反應(yīng)1h,生成0.5μmol的α-苯胺為1個(gè)GGT活性單位。男性：11～50U/L；(以γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物)女性：7～32U/L男性：≤40U/L；女性：≤30U/L(以γ-谷氨酰-4-硝基苯胺為底物)【參考范圍】(五)單氨氧化酶（MAO）測定

原理:

MAO主要作用于CH2-NH2基團(tuán)，在氧參與下，氧化脫氨生成相應(yīng)的卞醛、氨及過氧化氫。以芐氨偶氮-β-萘酚為底物,在O2和H2O參與下，MAO催化生成芐醛偶氮-β-萘酚、氨及過氧化氫，用環(huán)己烷抽提后進(jìn)行比色測定。(2)方法評價(jià)：【單位定義】：

1ml血清與底物在37℃孵育60分鐘，催化單胺氧化產(chǎn)生1nmol芐醛偶氮-β-萘酚為1個(gè)MAO單位?！緟⒖挤秶?2～40U/ml(12×103～40×103U/L)?！九R床意義】：肝硬化時(shí)，肝纖維化現(xiàn)象十分活躍，MAO活性明顯升高。

三、血清膽紅素測定重氮鹽改良J-G法膽紅素氧化酶（bilirubinoxidase,BOD）法高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)、導(dǎo)數(shù)分光光度法直接分光光度計(jì)法測定方法血清中存在的膽紅素形式：直接膽紅素（Dbil、結(jié)合膽紅素、肝膽紅素）間接膽紅素（Ibil、游離膽紅素、血膽紅素）總膽紅素（Tbil）

患者，男性，50歲。主述：乏力，下肢浮腫三個(gè)月。首先應(yīng)考慮什么疾病可能？應(yīng)作哪些實(shí)驗(yàn)室檢查？病例分析首先應(yīng)考慮“腎臟疾病”可能，尤其是“慢性腎小球腎炎”。1.尿常規(guī)：蛋白尿，有時(shí)有蛋白管型；2.血漿尿素：

6.5mmol/L；3.血漿肌酐：

110mol/L4.內(nèi)生肌酐清除率：

70~80ml/min5.血清尿酸：

0.4~0.7mmol/L6.尿濃縮稀釋試驗(yàn)：24h尿量

2500ml

，夜尿量

750ml，比重

1.010，7.酚紅排泌試驗(yàn)：2h55％，15min25％（一）膽紅素氧化酶（BOD）測定法(1)原理:

膽紅素→膽綠素－→淡紫色化合物

膽紅素λm＝450nm,

隨著膽紅素被氧化,A450下降，下降程度與膽紅素濃度成正比。

pH＝8.0時(shí),兩種膽紅素均被氧化，測定的為總膽紅素；

pH=4.5時(shí)，BOD僅能催化結(jié)合膽紅素氧化，測定的為結(jié)合膽紅素。BOD［O］【參考范圍】血清總膽紅素：3～17.1μmol/L血清結(jié)合膽紅素：0～3.4

μmol/L【臨床意義】1.黃疸的鑒別診斷。Dbil/Tbil比值鑒別黃疸類型：＜0.2溶血性黃疸；0.2－0.6肝細(xì)胞性黃疸；＞0.6阻塞性黃疸2.肝細(xì)胞損害程度及預(yù)后的判斷。(2)方法評價(jià)：1.特異性高，重復(fù)性好，適合自動化分析，是目前常規(guī)方法。2.線性范圍較寬。3.脂血、溶血標(biāo)本結(jié)果偏高。

（二）重氮鹽改良J-G（JendrassikandGrofmethod,J-G）法(1)原理:結(jié)合膽紅素＋重氮試劑→偶氮膽紅素（紫色）＋終止試劑＋堿性酒石酸鈉→藍(lán)綠色偶氮膽紅素游離膽紅素＋加速劑＋重氮試劑→偶氮膽紅素（紫色）＋終止試劑＋堿性酒石酸鈉→藍(lán)綠色偶氮膽紅素入m＝600nm下比色分析，求出血樣中總膽紅素的含量。呈色不穩(wěn)定咖啡因或甲醇重氮試劑的組成：由等百分比濃度的亞硝酸鈉和氨基苯磺酸按1:40的體積混合而成?！九R床意義】【參考范圍】

總膽紅素:3.4～17.1μmol/L直接膽紅素:0～3.4μmol/L(2)方法評價(jià)：

推薦的常規(guī)方法，其方法的線性范圍較寬，在342μmol/L濃度下有較好的準(zhǔn)確性和精確性，高濃度時(shí)準(zhǔn)確性和精確性降低。因此，建議濃度過高時(shí)減少血樣用量測定。見上法。四、血清膽汁酸（TBA）測定高效液相色譜法放射免疫分析法酶免疫分析法比色分析測定法測定方法酶比色法酶循環(huán)法酶循環(huán)法測定原理NAD+

Thio-NADThio-NADH(λm=405nm）

膽汁酸（3α-羥類固醇）3α-酮類固醇NADH+H+3α-HSD3α-羥類固醇脫氫酶硫代煙酰胺嘌呤二核苷酸氧化型（硫代氧化型輔酶I）(2)測定方法評價(jià)：1）快速、簡便、準(zhǔn)確、可靠和適用的優(yōu)點(diǎn)。2）既可以手工操作，也可以在自動化儀器上進(jìn)行。3）試劑價(jià)貴、不易保持。4）對酶量的要求嚴(yán)格，以保證酶促反應(yīng)在零級反應(yīng)下進(jìn)行，酶量不足易產(chǎn)生誤差。5）標(biāo)準(zhǔn)品的制備非常重要。常采用甘氨膽酸溶入小牛血清中制成凍干品。

空腹血清總膽汁酸0-12μmol/L

作空腹或餐后2h測定，后者更靈敏。膽汁酸是唯一能同時(shí)反映肝合成代謝、分泌狀態(tài)及肝細(xì)胞損傷三個(gè)方面的血清學(xué)指標(biāo)。對肝膽系統(tǒng)疾病診斷的靈敏度和特異性高于其他指標(biāo)。肝細(xì)胞損害：急性肝炎、慢性活動性肝炎、中毒性肝病、肝硬化、和肝癌時(shí)TBA顯著升高，尤其肝硬化時(shí)，TBA陽性率高于其他指標(biāo)。(攝取障礙）膽道梗阻：肝內(nèi)、外梗阻（分泌障礙，逆流）進(jìn)食后一過性增高[臨床意義]↑【意義評價(jià)】

任何引起肝細(xì)胞損傷的病理過程都可能引起血中膽汁酸升高可見于各種類型的肝病、肝硬化、脂肪肝，也見于急慢性膽道阻塞。其中空腹膽汁酸測定是一種敏感、特異性強(qiáng)并相對簡單的肝功能試驗(yàn)，是目前公認(rèn)最敏感的肝功能試驗(yàn)之一。特別適用于可疑有肝病但其它生化試驗(yàn)正?；蜉p度異常的病人診斷。五、血氨測定一步法：也叫直接測定，即不需從全血中分離出氨即可直接測定。兩步法：雙稱間接法，即先從全血中分離出氨,而后再進(jìn)行測定。主要方法包括：微量擴(kuò)散法、離子交換法主要有酶法和氨電極法。原理：

NH3＋α-酮戊二酸＋NADPH

谷氨酸＋NADP+＋H2O谷氨酸脫氫酶速率法：谷氨酸脫氫酶(2)方法評價(jià)：本法特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短，是較為理想的氨分析方法。在200μmol/L范圍內(nèi)、線性良好。精密度：批內(nèi)CV=3.9%；批間CV=4.5%。回收率為97.9%～102.7%。【參考范圍】血氨測定在診斷治療肝性腦病中占有重要作用。【臨床意義】18～72μmol/L

(酶法)第三節(jié)肝功能試驗(yàn)選擇原則一、肝功能試驗(yàn)的臨床意義①有助于了解肝臟疾病的病因；②檢測損傷的類型和定位；③了解肝功能有無異?；蛘哒系K及其嚴(yán)重程度、轉(zhuǎn)歸和預(yù)后；④判斷療效和對手術(shù)的耐受性；⑤體檢與健康咨詢。二、肝功能試驗(yàn)的分類1．反映肝細(xì)胞實(shí)質(zhì)病變的檢查項(xiàng)目：目前臨床應(yīng)用最多的是ALT、AST、總膽紅素、結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素。2．反映肝細(xì)胞合成功能的檢查項(xiàng)目：血清清蛋白、A/G比值、

膽堿脂酶、凝血酶原、纖維蛋白原等測定臨床應(yīng)用較多。3．反映肝內(nèi)外膽道阻塞的檢查項(xiàng)目：目前臨床應(yīng)用最多的是

總膽紅素、結(jié)合膽紅素、未結(jié)合膽紅素、ALP、GGT、膽汁酸等。4．反映肝纖維化病變的檢查項(xiàng)目：MAO、Ⅲ型前膠原肽（PⅢP）等1．選擇原則：任何單項(xiàng)的檢查都不能涵蓋肝功的全貌，理想的肝功能檢查項(xiàng)目應(yīng)該是：①診斷靈敏度高②診斷特異性強(qiáng)③對不同疾病鑒別的選擇性好２．但目前尚難找出完全符合條件的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，故應(yīng)遵循以下原則：①根據(jù)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的性質(zhì)和特點(diǎn)；②按臨床實(shí)際應(yīng)用的需要；③結(jié)合具體病情及所在實(shí)驗(yàn)室條件。三、臨床對肝