DB21T 3648-2022 鹿冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程　

21I杜岳純、樊琳琳、田景鑫、丁國(guó)偉、杜學(xué)海、宮婷、范雪、本文件起草單位通訊地址:桓仁強(qiáng)風(fēng)鹿業(yè)科研繁育基地（本溪市桓仁縣鏵來鎮(zhèn)），聯(lián)系電話1鹿冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程凍、凍精活力檢查、凍精包裝儲(chǔ)存和記錄等4采精前準(zhǔn)備4.1采精場(chǎng)所4.2采精員應(yīng)剪短指甲，更換好工作服和鞋帽，戴上工4.3種公鹿4.4器具和藥品移液槍（0.5mL～5mL）、膠頭滴管、無菌箱、水浴鍋（32℃~35℃),電刺激采精器（0V～30V）、電極棒(Φ40mm）、雙目生物顯微鏡（200倍～400倍）、恒溫加熱板（37℃~38℃)、簡(jiǎn)易冷凍箱2（3℃~5℃)、冰箱（0℃~5℃)、塑料盒（150mm×15mm）、液氮罐（30L）、一次性長(zhǎng)臂塑料手套、滅菌紗布、毛巾、醫(yī)用不銹鋼手術(shù)剪、細(xì)管夾（23cm）、集精杯（20mL）、液體石蠟、包裝袋（170mm×45mm）、拇指管(Φ13mm）、細(xì)管（0.25mL）、封口粉（聚乙烯醇粉）、載玻片（76mm精（75%）、陸眠寧（鹽酸塞拉嗪）、鹿醒寧（鹽酸苯噁唑）、Tris（三羥甲基氨基甲烷）、檸檬酸、4.5器具清洗和消毒膠塞、電極棒等，先在加有洗滌劑的溫水中洗刷，之后用清水沖洗干凈，晾干后用75%酒精消毒，待酒4.6稀釋液4.6.1稀釋液配方4.6.2稀釋液配制方法卵黃20mL、青霉素、鏈霉素各10萬IU，用磁力攪拌器攪拌30min，蓋緊膠塞，放入3℃~5℃冰箱中4.8包裝袋5.1采精頻率5.2采精方法5.2.1保定35.2.2處置先將電刺激采精器電壓調(diào)至“0”位，打開電源開關(guān)，刺激電壓從2V開始由低向高，但不應(yīng)超過6V。每次增加1個(gè)檔位，在每檔通、斷交替刺激2次～3次，每次通電3s、間斷2s，直至射精。從開始射精電刺激采精器旋鈕歸“0”，然后拔出電極棒，公鹿注射鹿醒寧4mL～6mL使其采用目測(cè)法，用肉眼直接觀看量筒上刻度讀取數(shù)量值（精確到0.1），前向運(yùn)動(dòng)的精子所占比例，確定活力，用百分率或相應(yīng)數(shù)值表示。評(píng)定時(shí)每個(gè)樣片至少觀察3個(gè)視野，畸形精子所占比例，確定畸形率，用百分率或相應(yīng)數(shù)值表示。評(píng)定時(shí)每個(gè)樣片至少觀察3個(gè)視野，取其4使用精子密度測(cè)定儀器進(jìn)行測(cè)定，精子密度應(yīng)大于等于6億V——應(yīng)加稀釋液量，單位為毫升（mL1000——每支細(xì)管凍精所含有效精子數(shù)，0.23——每支細(xì)管精液容量，單位為毫升（mL）。在22℃~25℃環(huán)境條件下，用經(jīng)32℃水浴加溫的稀釋液加入精液中至最終稀釋量。稀釋時(shí)，把精液稀釋10min后，在22℃~25℃環(huán)境條件下，用移液槍或膠頭滴管把精液吸入細(xì)管，要求細(xì)精液稀釋10min后，在22℃~25℃環(huán)境條件下，用自動(dòng)細(xì)管灌裝機(jī)進(jìn)行精液的分裝、標(biāo)識(shí)和封分裝后的細(xì)管精液放在塑料盒中或用毛巾包裹，放入3℃~5℃冷藏柜中平衡3h～4h。59精液冷凍在4℃~6℃低溫條件下，把細(xì)管精液碼放在托架上。碼放時(shí)把棉塞端靠近操作者，封口端遠(yuǎn)離操作者，放進(jìn)冷凍箱時(shí)也應(yīng)如此擺放。如同一個(gè)托架上有不同鹿的細(xì)管精液，應(yīng)分開碼冷凍箱要有良好的隔熱性能，深度應(yīng)在50cm以上。使用前加入液氮預(yù)冷，液氮面的高低應(yīng)根據(jù)冷剪掉細(xì)管兩端，取一滴精液于載玻片上，按照6.1.3規(guī)定的方法評(píng)定活力，活力大于0.11.1.1凍精包裝應(yīng)在-140℃以下的環(huán)境中進(jìn)行，包裝后的細(xì)管凍精其棉塞端應(yīng)朝向11.2.2凍精由一個(gè)液氮罐轉(zhuǎn)移到1鹿細(xì)管冷凍精液標(biāo)記由四部分組成，排列順a)第一部分：公鹿所在鹿場(chǎng)名稱前四個(gè)漢字的漢語拼音的第一個(gè)大寫字b)