《N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸》

ICSXX.XXX.XX

CCSXXX

T/CIXX

中國國際科技促進會團體標準

T/CIXX—2023

N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸

Fmoc-Trp(Boc)-OH

（草案）

2023-XX-XX發(fā)布2023-XX-XX實施

中國國際科技促進會發(fā)布

T/CIXX—2023

N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸

1范圍

本文件規(guī)定了N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸的術語和定義、結構式、分子式和相對分子

量、要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、標志、包裝、運輸、貯存和有效期。

本文件適用于多肽藥物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件,

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T191包裝儲運圖示標志

GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定

JJF1070定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則

《定量包裝商品計量監(jiān)督管理辦法》國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局令第75號（2005）

3術語和定義

本文件沒有需要界定的術語和定義。

4結構式、分子式和相對分子量

4.1結構式

4.2分子式

C31H30N2O6

4.3相對分子量

526.58（按2019年國際相對原子質量）。

5要求

1

T/CIXX—2023

5.1技術指標

應符合表1的規(guī)定。

表1技術指標

項目要求

感官要求白色至類白色粉末

溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后應澄清透明

鑒別（IR）供試品的紅外光吸收圖譜應與結構式一致

純度（HPLC）≥98.5%

游離氨基酸（TLC）≤0.1%

異構體(Fmoc-D-Trp(Boc)-OH)（HPLC）≤0.3%

水分（KF)≤1.0%

比旋光度[20/D]-20.0°±4.0°（c=1，DMF）

含量（滴定）≥92.0%

6實驗方法

本試驗所用試劑和水除特殊注明外，均為分析純試劑和純化水。

6.1感官要求

采用目視法測定，應為白色至類白色粉末。

6.2技術指標

6.2.1溶解性

6.2.1.1儀器

50ml具塞比色管。

6.2.1.2試劑

6.2.1.3操作方法

6.2.1.3.1稱取本品約5.3g，置于一個干燥潔凈的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超聲溶解后應澄

清透明。

6.2.2鑒別（IR）

6.2.2.1儀器

紅外光譜儀、電子天平。

6.2.2.2測定方法

取供試品適量，按照紅外光譜儀操作規(guī)程進行測定，本品的紅外光吸收圖譜應與結構式一致。

6.2.3純度（HPLC）

2

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6.2.3.1儀器

高效液相色譜儀，電子天平。

6.2.3.2試劑

乙腈（色譜級）、甲醇（色譜級）、三氟醋酸、高純水。

6.2.3.3色譜條件

a)色譜柱參考條件如下：

1)型號：ZORBAXSB-C18（或等效的色譜柱）；

2)規(guī)格：4.6mm*25cm，5um。

b)流動相參考條件如下：

1)流動相A：0.1%三氟醋酸-水；

2)流動相B：0.1%三氟醋酸-乙腈；

3)洗脫方式：梯度。

c)梯度洗脫條件如下：

表2色譜梯度洗脫條件

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

03070

30595

30.13070

353070

d)其他色譜條件如下：

1)流速：1.0ml/min；

2)柱溫：30℃；

3)進樣體積：10μl；

4)檢測波長：220nm；

5)運行時間：35min。

e)參考保留時間如下：

3

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表3參考保留時間

名稱保留時間（min）相對保留時間備注

Fmoc-β-Ala-OH3.5140.33雜質

Fmoc-OH4.2950.41雜質

Fmoc-Trp-OH4.5650.43雜質

Fmoc-Osu5.0840.48雜質

Fmoc-β-Ala-Trp(Boc)-OH7.4510.70雜質

Fmoc-Trp(Boc)-OH10.5731.00主峰

Fmoc-Trp(Boc)-OEt19.4591.84雜質

Fmoc-Trp(Boc)-Trp(Boc)-OH20.6301.95雜質

6.2.3.4試驗步驟

6.2.3.4.1供試品溶液的配制

取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用甲醇溶解后稀釋至刻度，搖勻。

6.2.3.4.2測定

分別進甲醇空白和供試品溶液各1針，按照6.2.3.3的色譜條件進行測定。

6.2.3.5定量方法

以峰面積歸一化法計算純度和雜質。

6.2.4游離氨基酸(TLC)

6.2.4.1儀器

硅膠G薄層板、層析缸。

6.2.4.2試劑

a)正丁醇、冰醋酸；

b)顯色劑：2%茚三酮丙酮溶液。

6.2.4.3分析步驟

6.2.4.3.1對照品溶液的配制

取L-色氨酸約0.01g，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加適量(0.1%TFA-水)溶解后定容至刻度，搖

勻，做為對照品溶液。濃度：0.1mg/ml。

6.2.4.3.2供試品溶液的配制

取本品約1.0g，精密稱定，置于10ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。

6.2.4.3.3點板

4

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精密吸取上述2種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，用正丁醇：冰醋酸：水(3:1:1）（v/v/v)

為展開劑，展開，晾干。

6.2.4.3.4顯色

噴以2%茚三酮丙酮溶液，在105℃烘烤加熱至斑點出現(xiàn)，立即檢視。

6.2.4.3.5結果判定

對照品溶液應顯一個清晰的斑點，供試品溶液如顯雜質斑點，其顏色與對照品溶液的主斑點比較，

不得更深。

6.2.5異構體(HPLC)

6.2.5.1儀器

高效液相色譜儀、電子天平。

6.2.5.2試劑

乙腈（色譜級）、三氟醋酸、高純水。

6.2.5.3色譜條件

a)色譜柱條件如下：

1)型號：PhenomenexLux5umCellulose-1；

2)規(guī)格：4.6mm*25cm，5um。

b)流動相條件如下：

1)A：0.1%三氟醋酸-水；

2)B：乙腈；

3)A：B=30：70。

c)稀釋劑條件如下：

1)甲醇。

d)其他色譜條件：

1)流速：1.0ml/min；

2)柱溫：30℃；

3)進樣體積：5μl；

4)檢測波長：254nm；

5)運行時間：25min。

e)參考保留時間條件如下：

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1)Fmoc-D-Trp(Boc)-OH：15.0min；

2)Fmoc-L-Trp(Boc)-OH：18.2min。

6.2.5.4試驗步驟

6.2.5.4.1對照品溶液的配制

取消旋體約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。

6.2.5.4.2供試品溶液的配制

取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。

6.2.5.4.3測定

取稀釋劑溶液、供試品溶液和對照品溶液各進1針，按照6.2.5.3的色譜條件進行測定。

6.2.5.5定量方法

以峰面積歸一化法計算異構體（Fmoc-D-Trp(Boc)-OH）的含量。

6.2.6水分（KF)

6.2.6.1儀器

分析天平、自動水分測定儀。

6.2.6.2試劑

卡爾費休氏試劑、無水甲醇。

6.2.6.3操作方法

取本品約0.2~0.5g，按照水分測定儀操作規(guī)程進行測定。

6.2.7比旋光度

6.2.7.1儀器

旋光儀、電子天平。

6.2.7.2試劑

6.2.7.3操作方法

稱取本品約1.0g，精密稱定，溫度以20℃，置于100ml的容量瓶中，加適量DMF溶解后定容至刻度，

搖勻。按照旋光測定儀操作規(guī)程進行測定。

6.2.7.4計算公式

按式（1）計算比旋光度值。

┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉(1)

100?

[20/?]=??

6

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式中：

α—為測得的旋光度；單位為：（°）；

l—為測定管的長度，單位為：（dm）；

c—為100ml溶液中含有被測物質的重量，單位為：（g）。

6.2.8含量（滴定）

6.2.8.1試劑和溶液

6.2.8.1.1中性甲醇

取甲醇500ml，加入2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標準溶液滴定至溶液顯淡紅色，保持30s

不褪。

6.2.8.1.2氫氧化鈉標準溶液（0.1mol/L)

6.2.8.1.3酚酞指示劑

6.2.8.2操作方法

取本品約1.2g，精密稱定，置于一個干燥潔凈的150ml錐形瓶中，加入50ml中性甲醇，振搖使供試

品溶解后加入2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標準溶液滴定至溶液顯淡紅色為終點。記錄消耗標

準溶液的體積。

6.2.8.3計算公式

按式（2）Fmoc-Trp(Boc)-OH含量。

×100┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉(2)

?×?×0.52658

??=?

式中：

—Fmoc-Trp(Boc)-OH的含量；單位為（%）；

mc—i為氫氧化鈉標準溶液的濃度，mol/L；

V—為供試品消耗氫氧化鈉標準溶液的體積，ml；

0.52658—為1.00ml氫氧化鈉標準溶液（0.1000mol/L）相當于Fmoc-Trp(Boc)-OH的質量；

m—為供試品的重量,單位為（g）。

6.2.8.4允許誤差

取兩次平行實驗結果的平均值為測定結果，兩次平行實驗結果之間的RSD不得大于0.3%。

7檢驗規(guī)則

7

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7.1檢驗分類

產品的檢驗分為出廠檢驗和型式檢驗。

7.2組批

以相同材料、相同生產工藝、連續(xù)生產或同一班次生產的同一規(guī)格的產品為一批，每批產品不應超

過150t。

7.3抽樣

7.3.1固體產品按《藥品生產質量管理規(guī)范》執(zhí)行。

7.3.2將采樣品置于干燥清潔，取固體樣品1000g,分別裝于2個潔凈、干燥的容器瓶中，密封并貼

上標簽，注明生產廠名稱、產品名稱、批量、取樣日期等，一份檢測使用，一份用于留樣。

7.3.3。

7.4出廠檢驗

7.4.1產品應經本公司質檢部門按本標準要求進行檢驗，檢驗合格后方可出廠。

7.4.2出廠檢驗項目為感官要求、溶解性、鑒別、純度、游離氨基酸、異構體、水分、比旋光度、

含量（滴定）。

7.5型式檢驗

7.5.1每年進行一次型式檢驗，有下列情況之一時，亦須進行型式檢驗：

a)更換主要設備或主要工藝；

b)長期停產再恢復生產時；

c)出廠檢驗結果與上次型式檢驗有較大差異時;

d)國家質量監(jiān)督機構進行抽查時。