DB21T 2591-2016 口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白單抗阻斷ELISA 檢測(cè)方法　

DB21DB21/T2591—2016口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白單抗阻斷ELISA檢測(cè)方法MonoclonalantibodyblockingELISAdetectionmethodoffoot-and-mouthdiseasevirusnonstructuralproteinantibody遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 3 41本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的檢測(cè)方法、判定標(biāo)件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試GB16548－2006病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（EnzymOD450nm值450nm波長(zhǎng)4檢測(cè)方法包被有口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗原的96孔ELISA板；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗口蹄疫病毒抗原的單克隆抗體；含有0.05%（體積分?jǐn)?shù)）Tween-20的磷酸鹽緩沖液（PBS－T），0.01mol/L，pH7.4,配制方法見(jiàn)附錄A.1章；含有0.1%（質(zhì)量濃度）牛血清白蛋白的PBS-T，使用當(dāng)日配制；含有TMB及過(guò)氧化氫尿素的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液，配制方法見(jiàn)附錄A.2章；2mol/L硫酸溶液，配制方法見(jiàn)附錄A.3章；本標(biāo)準(zhǔn)所用化學(xué)試劑除另有特殊規(guī)定外，均為分析純。試劑配制用水需滿足GB/T6682的要求。取動(dòng)物全血，24.3.2在記錄表上記錄陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品的位置。分別在相應(yīng)孔中加入陽(yáng)性對(duì)照（2孔）和阻斷率（Inh%）=（陰性對(duì)照孔OD450均值-樣品孔OD450——被檢樣品阻斷率（Inh%20%，判為FMDV-NS抗體陰性?！粰z樣品阻斷率（Inh%25%，判為FMDV-NS抗體陰性。檢測(cè)過(guò)程中的廢棄物，應(yīng)收集后按CB16548－2003主要試劑配方A.2底物溶液A液：水檸檬酸（C6H8O7?H2O）2.10gNa2HPO42.82g75%過(guò)氧化氫尿素A.3終止液4B.1血樣采集及處理過(guò)程，應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌操作，防止樣本因污染發(fā)生變質(zhì)。存放血樣的容器應(yīng)無(wú)菌，或B.2血液自然凝固后無(wú)菌分離血清裝入滅菌離心管或小瓶中，加蓋密封后冷藏保存。每份血清樣品貼標(biāo)簽并寫(xiě)明編號(hào)、采集地點(diǎn)、免疫背景、時(shí)間等，以便通過(guò)抗體檢測(cè)，做出B.4血樣處理及檢測(cè)過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)放入專門(mén)的廢棄物容器，廢棄