DB21T 3253-2020 小反芻獸疫病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法

DB21Developmentthemethodofreal-timefluorescentRT-PCRfordetectionofPPRV遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I II 1 1 1 1 1 2 2 4 4 5標(biāo)準(zhǔn)起草單位通訊地址：遼寧省動(dòng)物及產(chǎn)品檢疫中心（沈陽(yáng)市沈河區(qū)萬(wàn)柳塘路105號(hào)甲），1小反芻獸疫病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了小反芻獸疫病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法的病學(xué)調(diào)查，適用于反芻動(dòng)物血液血清、淋巴結(jié)及口鼻棉拭子中小反芻GB/T19495.2-2004轉(zhuǎn)基農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《病死及病害動(dòng)物無(wú)害化處理技術(shù)規(guī)范》的通知（農(nóng)醫(yī)PPRV：小反芻獸疫病毒（PestedesPetitsRuminantsviRNase：核糖核酸酶（ribonuclRT-PCR：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reversetranscriptionpolymerasechainreactidNTP：脫氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonPBS：磷酸鹽緩沖液（phosphatebuffersolutTAE：三羥甲基氨基甲烷-乙酸電泳緩沖液（Trisacetate-EDTAbuf基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用儀器對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性5.1臺(tái)式冷凍離心機(jī)（離心范圍0～2注：本標(biāo)準(zhǔn)中使用的試劑，除另有說(shuō)明外，所有實(shí)驗(yàn)使用的試劑等級(jí)均為不含R3實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。按照《獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)管理規(guī)范》進(jìn)行樣品的生物安全標(biāo)反應(yīng)體系的成分：去離子水7.5ul，上游引物PPRVF0.5ul，下游引物PPRVR0.5ul，探針7.2.4.2取樣本準(zhǔn)備區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管，放置411陽(yáng)性對(duì)照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，呈典型的S型曲線。陰性對(duì)照：C陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞43或無(wú)Ct值，表明樣本中未檢測(cè)可疑：樣本檢測(cè)結(jié)果Ct值在40~43范圍9檢測(cè)過(guò)程中防止交叉污染的措