抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響評價(jià)技術(shù)導(dǎo)則（試行）（HJ1344-2023）

HJ1344—2023

抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響評價(jià)技術(shù)導(dǎo)則（試行）

1適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響評價(jià)的原則、程序、內(nèi)容和方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于在開放環(huán)境條件下進(jìn)行生產(chǎn)性試驗(yàn)和生產(chǎn)應(yīng)用的抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響

的評價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T30989高通量基因測序技術(shù)規(guī)程

GB/T32722土壤質(zhì)量土壤樣品長期和短期保存指南

GB/T32725實(shí)驗(yàn)室測定微生物過程、生物量與多樣性用土壤的好氧采集、處理及貯存指南

HJ710.1生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則陸生維管植物

HJ710.3生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則陸生哺乳動物

HJ710.4生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則鳥類

HJ710.6生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則兩棲動物

HJ710.7生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則內(nèi)陸水域魚類

HJ710.8生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則淡水底棲大型無脊椎動物

HJ710.9生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則蝴蝶

HJ710.10生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則大中型土壤動物

HJ710.13生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則蜜蜂類

農(nóng)業(yè)部953號公告—8.4—2007轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品環(huán)境安全檢測抗蟲水稻第4部分：生物多

樣性影響

農(nóng)業(yè)部953號公告—10.4—2007轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品環(huán)境安全檢測抗蟲玉米第4部分：生物

多樣性影響

農(nóng)業(yè)部953號公告—12.4—2007轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品環(huán)境安全檢測抗蟲棉花第4部分：生物

多樣性影響

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1

抗蟲轉(zhuǎn)基因植物insect-resistanttransgenicplants

通過基因工程技術(shù)引入或修飾基因，改變受體植物基因組構(gòu)成而培育出的具有抗蟲性狀的植物。

1

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3.2

靶標(biāo)生物targetorganisms

轉(zhuǎn)基因抗蟲性狀所針對的生物。

3.3

非靶標(biāo)生物non-targetorganisms

抗蟲轉(zhuǎn)基因植物中轉(zhuǎn)基因性狀所針對的靶標(biāo)生物以外的其他生物。

3.4

生物多樣性biodiversity

生物（動物、植物、微生物）與環(huán)境形成的生態(tài)復(fù)合體以及與此相關(guān)的各種生態(tài)過程的總和，包括

生態(tài)系統(tǒng)、物種和基因三個(gè)層次。本標(biāo)準(zhǔn)主要指調(diào)查區(qū)域內(nèi)可能受到抗蟲轉(zhuǎn)基因植物影響的物種多樣性。

4評價(jià)原則

4.1預(yù)先防范原則

對于可能會對生物多樣性產(chǎn)生不利影響的抗蟲轉(zhuǎn)基因植物，即使目前缺乏充分的試驗(yàn)證據(jù)，也應(yīng)對

該抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的生物多樣性影響進(jìn)行評價(jià)，并采取適當(dāng)措施預(yù)防可能出現(xiàn)的不利影響。

評價(jià)區(qū)域存在重點(diǎn)保護(hù)物種等敏感對象（如農(nóng)作物的野生近緣種）的，需要采取專門措施將抗蟲轉(zhuǎn)

基因植物局限在最小影響范圍內(nèi)或者禁止轉(zhuǎn)基因植物在該區(qū)域種植。

4.2科學(xué)性原則

必須基于嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度、采用科學(xué)的方法和技術(shù)評價(jià)抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性的影響，對調(diào)

查到的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)的統(tǒng)計(jì)分析，得出可驗(yàn)證的評價(jià)結(jié)果，并對評價(jià)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的解釋。

4.3個(gè)案分析原則

針對外源基因特征、受體植物類型、釋放環(huán)境及用途、待調(diào)查生物的特性等，采用適當(dāng)流程和方法，

開展抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物群落或特定生物種群的影響評價(jià)。

4.4比較分析原則

抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響評價(jià)需要以非轉(zhuǎn)基因植物為對照，在條件一致的環(huán)境中進(jìn)行比較

和分析。

5評價(jià)程序

抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性的影響評價(jià)程序見圖1，一般包括如下5個(gè)步驟：

a）收集和整理抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的相關(guān)生物學(xué)背景資料、種植狀況和管理措施等信息；

b）確定生物多樣性調(diào)查的對象、區(qū)域、時(shí)間和方法；

c）根據(jù)評價(jià)目的開展群落或者種群水平生物多樣性調(diào)查，包括對自然保護(hù)地等環(huán)境中可能受到抗

蟲轉(zhuǎn)基因植物影響的重點(diǎn)保護(hù)物種、極小種群動植物進(jìn)行調(diào)查；

d）判斷抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物群落或特定生物種群是否具有顯著影響。如果評價(jià)結(jié)果顯示抗蟲轉(zhuǎn)

基因植物對生物群落或特定生物種群無顯著影響，則進(jìn)入確定評價(jià)結(jié)論環(huán)節(jié)；如果評價(jià)結(jié)果顯

示抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物群落或特定生物種群具有顯著影響，則進(jìn)一步判斷該影響的范圍、持

續(xù)性、程度、原因等是否明確，如未明確則繼續(xù)開展資料收集和調(diào)查，直至明確影響的范圍、

2

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持續(xù)性、程度、原因等才可以進(jìn)入確定評價(jià)結(jié)論環(huán)節(jié)；

e）確定評價(jià)結(jié)論，編制評價(jià)報(bào)告。

步驟1：收集和整理抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的

相關(guān)生物學(xué)背景資料及種植狀況等信息

步驟2：確定生物多樣性調(diào)查的對象、區(qū)域、時(shí)間和方法

否

步驟3：群落或種群水平生物多樣性調(diào)查

判斷顯著影響的步驟4：對生物群

是

持續(xù)性、程度、落或特定生物種

原因等是否明確群是否具有顯著

影響

否

是

步驟5：確定抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響的評價(jià)結(jié)

論，編制評價(jià)報(bào)告

圖1抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響評價(jià)程序

6背景資料

6.1受體植物

受體植物的背景資料主要包括：

a）學(xué)名、分類學(xué)地位、生物學(xué)特性和進(jìn)化史；

b）原產(chǎn)地及引進(jìn)時(shí)間，用途和在國內(nèi)的應(yīng)用情況；

c）對人體健康和生態(tài)環(huán)境的安全性記錄；

d）生活史和在自然界中生存繁殖的能力；

e）在國內(nèi)的地理分布和自然生境，生長發(fā)育、繁殖所要求的生態(tài)環(huán)境條件；

f）遺傳變異和遺傳穩(wěn)定性，監(jiān)測方法和監(jiān)控的可能性；

g）在無法獲得受體植物時(shí)，可參考上述要求調(diào)查非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参锏挠嘘P(guān)背景資料。

6.2基因操作

基因操作方面的背景資料主要包括：

a）引入或修飾基因的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列及其功能和安全性；

b）引入或修飾基因序列在植物細(xì)胞中的定位及其確定方法；

c）引入或修飾基因表達(dá)的器官和組織，如根、莖、葉、花、果、種子等；

3

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d）引入或修飾基因表達(dá)的穩(wěn)定性；

e）其他類型的基因操作。

6.3抗蟲轉(zhuǎn)基因植物

抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的背景資料主要包括：

a）抗蟲性；

b）雜草性和入侵性；

c）基因漂移及其環(huán)境影響；

d）種植情況；

e）耕作栽培措施的變化。

6.4種植區(qū)域生物多樣性本底

種植區(qū)域生物多樣性本底的背景資料主要包括：

a）生境特征（如土壤性質(zhì)、氣象特點(diǎn)、生態(tài)類型）；

b）植物物種多樣性；

c）動物物種多樣性；

d）土壤微生物多樣性；

e）其他可能涉及的生物物種多樣性。

7評價(jià)內(nèi)容

7.1對主要靶標(biāo)生物的影響

評價(jià)抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對主要靶標(biāo)生物生長發(fā)育、繁殖、種群動態(tài)的影響。

7.2對物種多樣性的影響

對物種多樣性的影響評價(jià)應(yīng)包括以下內(nèi)容：

a）優(yōu)勢種種群動態(tài)；

b）指示種種群動態(tài)；

c）具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值、生態(tài)價(jià)值、文化價(jià)值、觀賞價(jià)值等物種種群動態(tài)；

d）國家重點(diǎn)保護(hù)物種、極小種群動植物、特有種等種群動態(tài)；

e）其他可能涉及的物種多樣性動態(tài)。

7.3對生物群落多樣性的影響

對生物群落多樣性的影響評價(jià)應(yīng)包括以下內(nèi)容：

a）草本、木本等植物群落多樣性；

b）植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動物群落多樣性；

c）細(xì)菌、真菌等微生物群落多樣性；

d）其他可能涉及的生物群落多樣性。

4

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8調(diào)查方案

8.1一般要求

評價(jià)抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響的調(diào)查方案一般包括調(diào)查對象、調(diào)查區(qū)域和采樣點(diǎn)、調(diào)查時(shí)

間和頻次、調(diào)查內(nèi)容、調(diào)查方法等。

8.2調(diào)查對象

直接或者間接暴露于抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的生物，主要包括取食抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的動物、生存于抗蟲轉(zhuǎn)

基因植物內(nèi)部和表面的微生物。

8.3調(diào)查區(qū)域和采樣點(diǎn)

調(diào)查區(qū)域主要為抗蟲轉(zhuǎn)基因植物生長地及周邊的農(nóng)田、林地、水體。

采樣點(diǎn)應(yīng)具有所評價(jià)環(huán)境中生物多樣性的代表性；采樣點(diǎn)面積應(yīng)根據(jù)抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的生物學(xué)特性、

對生物多樣性影響的方式和特點(diǎn)、調(diào)查對象的生長繁殖特性等確定；采樣點(diǎn)數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的基本要

求。

8.4調(diào)查時(shí)間和頻次

根據(jù)抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的生活周期確定調(diào)查時(shí)間和頻次。

短期影響應(yīng)進(jìn)行3次以上的調(diào)查，調(diào)查時(shí)間應(yīng)包括抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的旺盛生長期和抗蟲基因表達(dá)高

峰期。中長期影響應(yīng)進(jìn)行不少于5年的調(diào)查，可根據(jù)抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的生活周期，每年在其重要生長階

段（如苗期、花期、結(jié)實(shí)期、收獲期）進(jìn)行調(diào)查。

8.5調(diào)查內(nèi)容及方法

8.5.1調(diào)查內(nèi)容

8.5.1.1靶標(biāo)生物多樣性

在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其對照植物的主要生育期，調(diào)查主要靶標(biāo)生物的種類及其落卵量、幼蟲齡期和

數(shù)量、為害率等。

8.5.1.2非靶標(biāo)生物物種多樣性

8.5.1.2.1優(yōu)勢種

在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其對照植物的主要生育期，調(diào)查優(yōu)勢種的種類、數(shù)量、密度和分布等。

8.5.1.2.2指示種

在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其對照植物的主要生育期，調(diào)查指示種的種類、數(shù)量、密度和分布等。

8.5.1.2.3具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值、生態(tài)價(jià)值、文化價(jià)值、觀賞價(jià)值的物種

在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其對照植物的主要生育期，調(diào)查具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值、生態(tài)價(jià)值、文化價(jià)值、觀

賞價(jià)值等物種的種類、數(shù)量、密度和分布等。

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8.5.1.2.4國家重點(diǎn)保護(hù)物種、極小種群動植物、特有種

在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其對照植物的主要生育期，調(diào)查國家重點(diǎn)保護(hù)物種、極小種群動植物、特有種

的種類、數(shù)量、密度和分布等。

8.5.1.3非靶標(biāo)生物群落多樣性

8.5.1.3.1草本、木本等植物群落多樣性

調(diào)查主要草本、木本等植物的種類、數(shù)量、高度、蓋度、生長狀態(tài)、群落結(jié)構(gòu)等。

8.5.1.3.2植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動物群落多樣性

調(diào)查主要植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動物的種類、數(shù)量、密度、群落結(jié)構(gòu)和分布等。

8.5.1.3.3土壤細(xì)菌、真菌等微生物群落多樣性

調(diào)查土壤細(xì)菌、真菌等微生物的種類及其數(shù)量。

8.5.2調(diào)查方法

應(yīng)根據(jù)評價(jià)時(shí)間、調(diào)查內(nèi)容和調(diào)查對象生物學(xué)特性的不同，確定具體的調(diào)查方法。不同生物種群或

生物群落的調(diào)查方法可參考附錄A。

抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物群落影響評價(jià)中主要生物多樣性指標(biāo)的計(jì)算公式見附錄B。

9評價(jià)結(jié)論判定

采用方差分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)“7評價(jià)內(nèi)容”和“8調(diào)查方案”獲得的調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)

計(jì)分析，得到抗蟲轉(zhuǎn)基因植物生長區(qū)域與受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)域的生物多樣性指標(biāo)

之間差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果，再結(jié)合本標(biāo)準(zhǔn)“6背景資料”的信息對評價(jià)結(jié)果進(jìn)行分析，綜合給出抗蟲轉(zhuǎn)

基因植物對生物多樣性影響的評價(jià)結(jié)論，以及評價(jià)的置信度、不確定性因素、其它支持評價(jià)結(jié)果的證據(jù)、

評價(jià)結(jié)果的解釋等。

10風(fēng)險(xiǎn)管理策略和方案

根據(jù)評價(jià)結(jié)論制訂風(fēng)險(xiǎn)管理策略，并提出預(yù)防和控制抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性可能產(chǎn)生不利影

響的風(fēng)險(xiǎn)管理內(nèi)容和方案等。

11評價(jià)報(bào)告

抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響的評價(jià)報(bào)告應(yīng)包括但不限于以下內(nèi)容：

a）抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的背景資料；

b）評價(jià)單位的能力與經(jīng)驗(yàn)的陳述或相關(guān)證明，實(shí)施評價(jià)的人員情況；

c）評價(jià)的時(shí)間、地點(diǎn)及環(huán)境狀況等；

d）調(diào)查方案（包括調(diào)查內(nèi)容、調(diào)查方法等）；

e）抗蟲轉(zhuǎn)基因植物對生物多樣性影響評價(jià)的主要過程及其結(jié)論；

f）建議采用的風(fēng)險(xiǎn)管理策略、內(nèi)容和方案等。

6

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附錄A

（資料性附錄）

不同生物種群或生物群落的調(diào)查方法

A.1植物

按照HJ710.1、農(nóng)業(yè)部953號公告—8.4—2007、農(nóng)業(yè)部953號公告—10.4—2007等標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的

方法，調(diào)查抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)域內(nèi)及周圍自然環(huán)境中的植

物。

A.1.1調(diào)查樣方的設(shè)置

在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物和受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)域內(nèi)，以及生長區(qū)域周邊（距離生

長區(qū)100m～300m范圍內(nèi)）生境中同時(shí)設(shè)置樣方。

對于森林植物群落，在選定建立調(diào)查樣地的位置時(shí)，用森林羅盤儀確定樣地的方向（一般是正南

北方向）和基線，然后用經(jīng)緯儀（全站儀）將樣地劃分為20m×20m樣方；記錄測量點(diǎn)之間的水平

距、斜距和高差；對每個(gè)樣方的頂點(diǎn)編號并永久標(biāo)記；最后，用卷尺、測繩或便攜式激光測距儀將每

個(gè)20m×20m樣方劃分為5m×5m小樣方，樣方頂點(diǎn)用臨時(shí)PVC管標(biāo)記，邊界用塑料繩或其他材

料臨時(shí)標(biāo)記，這些5m×5m樣方作為基本調(diào)查單元；調(diào)查任務(wù)完成后將這些臨時(shí)標(biāo)記全部移除，并

作無害化處理。一般調(diào)查樣地面積（垂直投影面積）≤50hm2的設(shè)3個(gè)樣方，50hm2～500hm2的設(shè)5

個(gè)樣方；若面積＞500hm2，每增加100hm2增設(shè)1個(gè)樣方，但總樣方數(shù)量一般控制在10個(gè)以內(nèi)。

對于農(nóng)田植物群落，在選定的調(diào)查區(qū)域用卷尺或定制的模具設(shè)置1m×1m或2m×2m的樣方，

對樣方的頂點(diǎn)編號并永久標(biāo)記，邊界用塑料繩或其他材料臨時(shí)標(biāo)記。調(diào)查的樣方數(shù)量一般應(yīng)不少于5

個(gè)1m×1m或2m×2m的樣方。

A.1.2森林植物調(diào)查

在設(shè)置的樣方中采用目測估計(jì)法進(jìn)行喬木、灌木、草本等植物種類調(diào)查。所有個(gè)體應(yīng)鑒定到種水

平，對調(diào)查現(xiàn)場不能鑒定或有疑問的種，須采集標(biāo)本、拍照、記錄植物個(gè)體編號，請分類專家鑒定。

對于抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其對照植物的主要伴生種，應(yīng)該調(diào)查該種的胸徑或基徑、冠幅、生長狀態(tài)、蓋

度等。

A.1.3農(nóng)田植物調(diào)查

在設(shè)置的樣方中采用目測估計(jì)法進(jìn)行植物種類調(diào)查。所有個(gè)體應(yīng)鑒定到種水平，對調(diào)查現(xiàn)場不能

鑒定或有疑問的種，須采集標(biāo)本、拍照、記錄植物個(gè)體編號，請分類專家鑒定。對于抗蟲轉(zhuǎn)基因植物

及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┑闹饕樯N，應(yīng)該調(diào)查該種的多度、平均高度和冠幅、生活

力、蓋度等。

7

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A.2土壤微生物

按照GB/T30989、GB/T32722、GB/T32725等技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的土壤樣品采集和保存、微生物

測定方法，調(diào)查抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)域內(nèi)的土壤微生物。

A.2.1樣品采集

在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其對照植物生長區(qū)域采集根際土和根圍土，采集深度主要取決于植物種類：

一般農(nóng)作物為0～20cm，果林類作物為0～60cm。為了保證樣品的代表性，采取采集混合樣的方案。

每個(gè)采樣區(qū)可以是自然分割的一個(gè)田塊，也可以由多個(gè)田塊所構(gòu)成，范圍不小于400m（220m×20m），

采樣區(qū)采用對角線、梅花點(diǎn)、棋盤式或蛇形取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，每點(diǎn)1～2株植物。采樣前應(yīng)去除地

表植被、苔蘚及凋落物，采樣時(shí)還需去除土壤中植物的根系、碎片、落葉及土壤動物等肉眼可見的生

物材料。

A.2.2樣品貯存

土壤樣品應(yīng)避光通氣貯存，用于磷脂脂肪酸（PLFA）分析以及高通量測序的樣品應(yīng)在-20℃條件

下保存。

A.2.3微生物多樣性分析

A.2.3.1磷脂脂肪酸法

土壤微生物中脂類的提取采用Bligh&Dyer提取法，受試土壤經(jīng)土壤提取液振蕩分離去除水相，

有機(jī)相和懸浮液經(jīng)干燥后形成脂類提取物。

磷脂脂肪酸的提取方法：將脂類提取物通過硅膠柱分離后，經(jīng)中度堿水解，使磷脂轉(zhuǎn)化為脂肪酸

甲酯。利用固相萃取柱（包括強(qiáng)陽離子交換柱和氨丙基柱）將脂肪酸甲酯分離為飽和脂肪酸、單不飽

和脂肪酸、多不飽和脂肪酸、羥基脂肪酸、非酯鏈未取代脂肪酸和非酯鏈羥基取代脂肪酸，將不同的

脂肪酸經(jīng)衍生化后用于氣相測定。

磷脂醚酯的提取方法：將脂類提取物通過硅膠柱分離后，經(jīng)酸水解斷裂磷脂的極性基團(tuán)以獲得醚

酯，經(jīng)氫碘酸斷裂醚鍵來釋放醚酯中的醚鍵烴類（如碘代烷烴），最后通過鋅粉還原脫鹵后轉(zhuǎn)化為磷

脂醚酯用于氣相測定。

將不同的磷脂脂肪酸/磷脂醚酯采用氣相色譜/質(zhì)譜進(jìn)行分析測定，利用色譜分析軟件對各組分進(jìn)

行定性與定量分析?？偽⑸锪靠赏ㄟ^土壤總磷脂脂肪酸含量進(jìn)行估算。不同的脂肪酸甲酯含量可用

摩爾百分比表示。不同土壤類型或不同處理土壤之間的磷脂脂肪酸含量變化可采用主成分分析法進(jìn)一

步分析相關(guān)性。

A.2.3.2高通量測序法

將提取的土壤微生物DNA進(jìn)行高通量測序。擴(kuò)增引物基于細(xì)菌16SrRNA和真菌18SrRNA的保

守區(qū)域片段（引物序列見表A.1），通過測序獲得樣本的細(xì)菌16SrRNA和真菌18SrRNA的保守區(qū)域

片段的序列信息，利用Mothur、QIIME或R軟件與數(shù)據(jù)庫中來源明確、鑒定可靠的細(xì)菌和真菌基因

序列相比對，以確定不同土壤微生物種類。

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HJ1344—2023

表A.1擴(kuò)增細(xì)菌16SrRNA和真菌18SrRNA保守區(qū)域片段的引物序列

分類引物類型引物名稱引物序列片段大小

8F5?-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3?

16SV1-V3520bp

533R5?-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3?

357F5?-CTCCTACGGGAGGCAGCAG-3?

16SV3-V5560bp

926R5?-AAACTYAAAKGAATTGACGG-3?

520F5?-AYTGGGYDTAAAGNG-3?

細(xì)菌16SV4280bp

802R5?-TACHVGGGTWTCTAATCC-3?

515F5?-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3?

16SV4-V5420bp

907R5?-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3?

338F5?-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3?

16SV3-V4480bp

806R5?-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3?

ITS5F5?-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3?

ITS1350bp

ITS1R5?-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3?

真菌

ITS3F5?-GCATCGATGAAGAACGCGC-3?

ITS2400bp

ITS4R5?-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3?

A.3地上節(jié)肢動物

參照HJ710.9、HJ710.13、農(nóng)業(yè)部953號公告—8.4—2007、農(nóng)業(yè)部953號公告—10.4—2007、農(nóng)

業(yè)部953號公告—12.4—2007等技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)

基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)域內(nèi)的昆蟲等地上節(jié)肢動物。

A.3.1直接觀察法

在轉(zhuǎn)基因植物生長旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2

或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，每點(diǎn)調(diào)查至少5株植

物。采用目測法調(diào)查整個(gè)植株或單個(gè)枝葉及植株附近地面各種節(jié)肢動物的數(shù)量、種類和發(fā)育階段。對

田間不易識別的種類進(jìn)行采樣標(biāo)記，放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。

A.3.2吸蟲器調(diào)查法

在轉(zhuǎn)基因植物生長旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2

或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)。每點(diǎn)用吸蟲器吸取至

少5株植物或枝葉（全株）及其地面1m2范圍內(nèi)的所有節(jié)肢動物種類。將抽取的樣品帶回室內(nèi)清理和

初步分類后，放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。

A.3.3陷阱法

在轉(zhuǎn)基因植物生長旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2

或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，每點(diǎn)設(shè)置一個(gè)陷阱。

陷阱結(jié)構(gòu)是：使用3個(gè)塑料杯（Φ15cm×10cm），間隔0.5m，埋入土壤中作為陷阱，杯口與地面相

平，每個(gè)陷阱上都有用鐵絲支撐的塑料碗做棚。杯中放有濃度為5%的洗滌劑水，不超過杯容積的1/3。

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HJ1344—2023

在埋杯第2d調(diào)查杯中的節(jié)肢動物種類和數(shù)量，不易識別的種類編號后放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)

一步鑒定。

A.3.4誘捕法

在轉(zhuǎn)基因植物生長旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2

或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調(diào)查樣點(diǎn)，每150m2設(shè)置2至3個(gè)專

用誘捕器，各誘捕器間距離20m左右，在每個(gè)誘捕器內(nèi)放置一定量的性誘劑或食物。甜菜夜蛾、斜

紋夜蛾等大型昆蟲在距離植物頂部20cm左右放置專用誘捕器；小菜蛾等體型相對較小的昆蟲于靠近

植物頂部處放置專用誘捕器。誘捕器使用轉(zhuǎn)換接口外接容器（如可樂瓶）作為貯蟲設(shè)備。誘蟲點(diǎn)每月

更換一次以保證誘蟲效果，通過統(tǒng)計(jì)單瓶誘蟲量，監(jiān)測昆蟲種類和數(shù)量動態(tài)變化。

A.3.5振落法

在轉(zhuǎn)基因植物生長旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域。調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2

或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，每點(diǎn)至少調(diào)查5株植

物；對于高大樹木上的昆蟲，可用振落的方法進(jìn)行捕捉。其方法是：先在樹下鋪上白布，然后搖動或

敲打樹枝樹葉，利用昆蟲的假死習(xí)性，將其振落到白布上進(jìn)行收集。用這種方法可以采集到鞘翅目

（Coleoptera）、脈翅目（Neuroptera）和半翅目（Hemiptera）的許多種類昆蟲。有些沒有假死習(xí)性的

昆蟲，可在振動后的飛行過程中用網(wǎng)捕捉。

A.3.6網(wǎng)捕法

A.3.6.1空網(wǎng)法、掃網(wǎng)法和刮網(wǎng)法

根據(jù)用處不同制作空網(wǎng)、掃網(wǎng)和刮網(wǎng)。網(wǎng)口直徑通常為1/3m，網(wǎng)長2/3m，手柄1至數(shù)m?？站W(wǎng)：

用透氣、堅(jiān)韌、淺色的珠羅紗、尼龍紗等制成，專門用來采集蝴蝶、蜂類、蜻蜓等飛翔迅速的昆蟲。

掃網(wǎng)：用來掃捕樹叢、雜草中隱蔽的昆蟲，采用較結(jié)實(shí)的白布或亞麻布制作網(wǎng)袋，網(wǎng)框和網(wǎng)柄都要選

擇堅(jiān)固的材料，以承受掃網(wǎng)時(shí)較大的阻力。刮網(wǎng)：在樹皮上采集昆蟲時(shí)，可用粗鋁絲作架，前面連接

上一段有彈性的鋼條，縫上白布的網(wǎng)袋，底端可捆上個(gè)小瓶，以便接蟲。

在轉(zhuǎn)基因植物生長旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對象，設(shè)置不同大小的調(diào)查區(qū)域，但應(yīng)不小于150m2

或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，使用合適的捕蟲網(wǎng)對

至少5株植物上的節(jié)肢動物進(jìn)行采集，每次收集的標(biāo)本均按號放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。

A.3.6.2馬來氏網(wǎng)法

在轉(zhuǎn)基因植物生長旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，但應(yīng)不小于400m2

（20m×20m）或覆蓋植株數(shù)不少于100株。

馬來氏網(wǎng)選用國際通用的馬來氏網(wǎng)Ⅰ型和Ⅱ型。馬來氏網(wǎng)Ⅰ型前部高180cm，后部高110cm，長

165cm，寬116cm；馬來氏網(wǎng)Ⅱ型前部高180cm，后部高110cm，長165cm，寬180cm；材質(zhì)選用

聚乙烯100目以上紗網(wǎng)布，網(wǎng)布高度110cm以下部分網(wǎng)為黑色，110cm以上部分為白色，網(wǎng)紗在前

部與昆蟲收集器之間緊密連接，并留有直徑3cm～4cm的收集孔；收集器分為上下兩部分，上部與網(wǎng)

體連通，下部用于盛放無水乙醇收集液且可替換。在布設(shè)馬來氏網(wǎng)時(shí)，確保中部開口部分朝向樣點(diǎn)區(qū)

域，如需多個(gè)馬來氏網(wǎng)，間隔應(yīng)大于500m。收集瓶內(nèi)應(yīng)灌滿無水乙醇，每10d～15d取樣一次，取

樣時(shí)將收集瓶擰下并迅速擰緊瓶蓋，每次收集的標(biāo)本均按號放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。

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HJ1344—2023

A.4浮游動物

A.4.1采樣點(diǎn)布設(shè)原則

調(diào)查區(qū)域?yàn)榭瓜x轉(zhuǎn)基因植物種植區(qū)的農(nóng)田水體以及周邊灌溉水、池塘、湖泊等自然水域。根據(jù)水

域的面積和形態(tài)、浮游動物的生態(tài)分布特點(diǎn)等決定采樣點(diǎn)數(shù)量（表A.2）。采樣點(diǎn)應(yīng)有代表性，能反

映整個(gè)水體浮游動物的基本情況。

表A.2采樣點(diǎn)數(shù)量設(shè)置

水域面積（km2）采樣點(diǎn)數(shù)量（個(gè)）

＜23

2～53～5

5～205～7

20～507～10

50～10010～15

100～50015～20

＞50020～30

A.4.2采樣

定量樣品應(yīng)在定性采樣之前用采水器采集。每個(gè)采樣點(diǎn)應(yīng)采水樣1000ml。分層采樣時(shí)，可將各

層水樣分別定量取平均值，或?qū)⒏鲗铀伤畼拥攘炕靹蚝笕?000ml再定量，作為此點(diǎn)的定量樣品。

枝角類和橈足類動物的定量樣品應(yīng)在定性采樣之前用采水器采集，每個(gè)采樣點(diǎn)應(yīng)采水樣

10000ml～50000ml，再用25號浮游植物網(wǎng)過濾濃縮至100ml，用37%～40%（V/V）甲醛溶液固定，

用量為水樣體積的5%。

原生動物、輪蟲和無節(jié)幼體定量樣品，可采集10000ml～50000ml水樣混合后，除留一部分供活

體觀察不固定外，其余立即用魯哥氏液固定，用量為水樣體積的1%～1.5%（V/V）。如樣品需較長時(shí)

間保存，則需加入37%～40%（V/V）甲醛溶液，用量為水樣體積的4%（V/V）。

A.4.3水樣的沉淀和濃縮

原生動物和輪蟲樣品固定后，靜置沉淀24h。虹吸濃縮后的水量多少視原生動物和輪蟲濃度大小

而定，一般情況下可用透明度作參考，根據(jù)透明度確定水樣濃縮體積見表A.3。

表A.3根據(jù)透明度確定水樣濃縮體積的方法

透明度（cm）1L水樣濃縮后的體積（ml）

＞10030～50

50～100100～50

30～50500～100

20～301000（不濃縮）

＜20＞1000（稀釋）

枝角類和橈足類動物常用過濾法濃縮水樣。

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A.4.4計(jì)數(shù)

依據(jù)調(diào)查對象、樣品體積和具體情況，取水樣進(jìn)行種類鑒定、個(gè)體計(jì)數(shù)和室內(nèi)分析。

A.4.5浮游動物生物量的測定

原生動物、輪蟲可根據(jù)體積法求得生物量；枝角類和橈足類可用體長-體重回歸方程求得體重（濕

重），也可用電子天平直接稱重。

A.5土壤動物

在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)域劃分網(wǎng)格，按照HJ710.10中

規(guī)定的簡單隨機(jī)抽樣法確定樣方，每個(gè)調(diào)查對象不少于3個(gè)樣方，每個(gè)樣方不小于5m×5m，樣方間

距離不小于10m。每樣方內(nèi)按照隨機(jī)或者均勻設(shè)置5個(gè)樣點(diǎn)，樣點(diǎn)需包含或緊鄰被評價(jià)的植物。

A.5.1大型土壤動物

每個(gè)樣點(diǎn)調(diào)查面積不小于1m×1m×0.2m（長×寬×深），利用鐵鏟等工具將被調(diào)查樣點(diǎn)土塊

快速取出，通過目視手檢法對大型土壤動物種類和數(shù)量鑒別統(tǒng)計(jì)。對于不能夠準(zhǔn)確鑒別的動物，應(yīng)保

存于75%乙醇或防壓標(biāo)本盒中，在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)一步鑒定。

蚯蚓等環(huán)節(jié)動物是土壤質(zhì)量與生態(tài)功能的指示類群，在調(diào)查中應(yīng)當(dāng)重點(diǎn)關(guān)注。

A.5.2中型土壤動物

每個(gè)樣點(diǎn)調(diào)查面積不小于0.2m×0.2m（長×寬）土壤，采用取土器（半徑2.5cm）鉆取0～0.2m

土層，每樣點(diǎn)三點(diǎn)取樣，混勻后迅速帶回實(shí)驗(yàn)室分離鑒定中、小型土壤動物，土壤樣品的運(yùn)輸保存按

照GB/T32722執(zhí)行。利用高溫高梯度Tullgren干法設(shè)備（篩網(wǎng)網(wǎng)眼為2mm），將土壤動物（主要分

離小節(jié)肢類土壤動物類群）從土壤樣品中分離出來。收集溫度：從20℃開始，每12h升高5℃，升

到40℃為止，共持續(xù)48h。用Torne氏收集液（1000ml異丙醇，30ml冰醋酸，3ml福爾馬林）收

集，然后轉(zhuǎn)移到75%的乙醇中。

A.5.3小型土壤動物

土壤樣品采集方法按照A.5.2進(jìn)行。利用Baermann淺盤法，將篩盤（網(wǎng)眼為2mm）放入相應(yīng)的

淺盤中，在篩盤上放置一層濾紙，稱取20g～50g的樣土（視土壤動物的密度而定），均勻鋪在濾紙

上，小心加水至浸沒土壤，置于20℃室溫條件下分離。12h時(shí)，可直接取淺盤上層水體，直接顯微

鏡觀察原生動物數(shù)量和種類。48h后，用篩盤（網(wǎng)眼為25μm）對淺盤中的水進(jìn)行過篩，沖洗，將收

集的土壤動物（主要為線蟲等類群）保存于75%的乙醇。

A.6兩棲動物

按照HJ710.6中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)

域內(nèi)的兩棲動物。

A.6.1樣線法

根據(jù)兩棲動物分布與生境因素的關(guān)系，如海拔梯度、植被類型、水域狀態(tài)等設(shè)置樣線。樣線盡可

能涵蓋不同生態(tài)系統(tǒng)類型。調(diào)查應(yīng)在太陽落山一小時(shí)后開展，每次調(diào)查應(yīng)重復(fù)3d。

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HJ1344—2023

在農(nóng)田或農(nóng)田與自然生態(tài)系統(tǒng)交接區(qū)，可采用長樣線，長度500m～1000m之間；在生境較為復(fù)

雜的自然生態(tài)系統(tǒng)，可設(shè)置多條短樣線，每條樣線長度20m～100m之間。每個(gè)調(diào)查樣地的樣線應(yīng)在

7條以內(nèi)，短樣線可適當(dāng)增加數(shù)量。樣線的寬度根據(jù)視野情況而定，一般為2m～6m。調(diào)查時(shí)速度應(yīng)

保持在2km/h左右，行進(jìn)期間記錄物種（成體、幼體、蝌蚪和卵）和個(gè)體數(shù)量，不宜拍照和采集。

A.6.2樣方法

在調(diào)查樣地內(nèi)隨機(jī)或均勻設(shè)置一定數(shù)量的樣方，樣方應(yīng)盡可能涵蓋不同的生境類型和環(huán)境梯度。

樣方一般設(shè)置為方形，大小可設(shè)置成5m×5m或10m×10m。樣方之間應(yīng)間隔100m以上。每個(gè)觀

測樣地的樣方數(shù)應(yīng)在7個(gè)以上。依次翻開樣方內(nèi)的石塊，檢視石塊下的個(gè)體（包括卵），記錄樣方內(nèi)

見到的所有兩棲動物種類和個(gè)體數(shù)量。

A.6.3人工庇護(hù)所法

在調(diào)查區(qū)內(nèi)隨機(jī)設(shè)置3個(gè)10m×10m的樣方，樣方之間應(yīng)間隔100m以上。在每個(gè)樣方內(nèi)，挑

選樹蛙常選擇的產(chǎn)卵樹10株，每株樹捆綁固定6個(gè)竹筒（或PVC桶），2個(gè)在地面，2個(gè)離地面70cm，

2個(gè)離地面150cm，共布設(shè)60個(gè)竹筒（或PVC桶）。竹筒長15cm～18cm，內(nèi)徑3cm～6cm，竹筒

內(nèi)加入5cm～10cm深的水。每3d巡視檢查一次，記錄兩棲動物的種類以及成體、亞成體、幼體、

蝌蚪和卵的數(shù)量。連續(xù)進(jìn)行3次。

A.6.4人工覆蓋物法

根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析的要求和兩棲動物物種個(gè)體大小、種群數(shù)量等因素確定人工覆蓋物的數(shù)目和尺寸。

人工覆蓋物的材料為木板或波浪狀瓦片較好。尺寸一般為30cm×20cm或以上。樣地內(nèi)應(yīng)采用統(tǒng)一的

覆蓋物。人工覆蓋物的排列方式一般設(shè)置成平行線、網(wǎng)格等形狀。網(wǎng)格形狀的排列方式可采用5個(gè)×

5個(gè)覆蓋物的樣方，覆蓋物之間的間距為5m?？稍诜胖酶采w物的地方下挖5cm，形成足夠的隱蔽空

間，坑底鋪放一些草葉，形成一個(gè)適宜的隱蔽環(huán)境。每天早晨8～10時(shí)查看一次。查看時(shí)迅速拿起覆

蓋物，捕獲匿居其下的兩棲動物，并臨時(shí)放在塑料袋或廣口瓶中以備測量、標(biāo)記和采樣。

A.7底棲動物

A.7.1調(diào)查樣地的設(shè)置

調(diào)查區(qū)域?yàn)榭瓜x轉(zhuǎn)基因植物及對照植物種植區(qū)的農(nóng)田水體以及周邊灌溉水、池塘、湖泊等自然水

域。根據(jù)調(diào)查水體（水田或者溝渠等）的形態(tài)特點(diǎn)、底質(zhì)類型和底棲無脊椎動物的分布特征等因素，

在調(diào)查水體內(nèi)設(shè)置若干具有代表性的樣線，使同一樣線上的差異程度盡可能小，在同一樣線上每隔一

定距離設(shè)置一個(gè)采樣點(diǎn)。

A.7.2樣品采集

使用底泥采泥器采集泥樣。采樣時(shí)每個(gè)采樣點(diǎn)累計(jì)采樣面積1/8m2～1/3m2。即使用1/16m2的彼

得生采泥器或改良的彼得生采泥器（1/12m2），采泥2～4次，采樣厚度一般為10cm～15cm。

A.7.2.1大型底棲動物

參照HJ710.8中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)

域內(nèi)的淡水底棲大型無脊椎動物。

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將獲得的底泥樣品置于40目篩中，在清水中輕輕搖蕩，洗去樣品中剩余的污泥，篩洗后挑出其中

的雜物和植物枝條、葉片等（仔細(xì)檢查并揀出摻雜在其中的動物），將篩上肉眼能看得見的全部樣品

倒入白瓷盤中進(jìn)行分揀，同時(shí)利用解剖鏡等工具進(jìn)行物種分類，并記錄大型底棲動物數(shù)量；如不能夠

及時(shí)分選鑒定，應(yīng)將初步淘洗后的樣品保存于70%乙醇中，可參考相關(guān)工具書或在相關(guān)分類學(xué)家的指

導(dǎo)下，對樣品進(jìn)行形態(tài)分類和物種鑒別。

A.7.2.2小型底棲動物

將獲得的底泥層置于上層為40目、下層為325目的套篩中，在清水中輕輕搖蕩，洗去樣品中剩余

的污泥。中間截留物用于小型底棲動物的分離，如不能夠立即操作，將中間截留物保存于濃度為5%

的福爾馬林溶液中。采用ludox離心分選法分離小型底棲動物：將中間截留物倒入離心管中，再加入

4倍體積的ludoxHS-40凝膠（密度約為1.2g/ml），2000rpm離心約5min，完成后將離心管中上清

液倒在325目的網(wǎng)篩上，用自來水沖洗干凈。重復(fù)上述步驟三次。將網(wǎng)篩（包括截留物）放入含有0.1%

虎紅溶液的染色缸中染色1h后，自來水洗凈。用吸管將染色后截留物轉(zhuǎn)移到玻璃平皿中，于體視顯

微鏡或解剖鏡下對小型底棲動物鑒定并計(jì)數(shù)。

A.8魚類

按照HJ710.7中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)

域內(nèi)的內(nèi)陸水域魚類。

A.8.1調(diào)查樣地的設(shè)置

根據(jù)待調(diào)查區(qū)域的水體底質(zhì)、水生植物組成、水深、水體形態(tài)、水流等因素劃分成若干小區(qū)，使

同一小區(qū)內(nèi)變異程度盡可能小。小區(qū)的面積和數(shù)量可根據(jù)調(diào)查水體的面積、形態(tài)和生境特征、工作條

件、經(jīng)費(fèi)情況等因素確定。一般設(shè)置的小區(qū)數(shù)量不少于3個(gè)。

A.8.2捕撈調(diào)查法

根據(jù)調(diào)查水體的形態(tài)以及生境特征等因素，利用合適的網(wǎng)具進(jìn)行捕撈，鑒定記錄魚類的種類和數(shù)

量。對那些現(xiàn)場無法鑒定的物種，要盡可能采集完整的標(biāo)本并做好記錄，包括文字、影像和北斗定位

系統(tǒng)記錄，以備室內(nèi)鑒定之用。應(yīng)盡可能記錄各物種所有能觀察到的形態(tài)、生物學(xué)現(xiàn)狀和生態(tài)環(huán)境信

息等。在調(diào)查過程中注意收集標(biāo)本及其他相關(guān)資料，并記錄相關(guān)信息，保留作為憑證以備核查。

A.9鳥類

按照HJ710.4中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L區(qū)

域內(nèi)的鳥類。

應(yīng)根據(jù)待調(diào)查區(qū)域內(nèi)鳥類活動高峰期確定一天中的調(diào)查時(shí)間。調(diào)查時(shí)的天氣應(yīng)為晴天或多云天氣，

雨天或大風(fēng)天氣不能開展調(diào)查。一般在早晨日出后3小時(shí)內(nèi)和傍晚日落前3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行調(diào)查。需準(zhǔn)備

8～12倍的雙筒望遠(yuǎn)鏡（用于行走時(shí)或在樹林中調(diào)查近距離的鳥類）、25～60倍單筒望遠(yuǎn)鏡（用于調(diào)

查遠(yuǎn)距離且較長時(shí)間停留在某地的鳥類）、鳥類野外手冊或鳥類圖鑒等工具書、野外記錄表、照相機(jī)、

北斗衛(wèi)星定位儀、溫度計(jì)、必要的防護(hù)用品和應(yīng)急藥品等。

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HJ1344—2023

A.9.1分區(qū)直數(shù)法

根據(jù)地貌、地形或生境類型對整個(gè)調(diào)查區(qū)域進(jìn)行分區(qū)，逐一統(tǒng)計(jì)各個(gè)分區(qū)中的鳥類種類和數(shù)量，

得出調(diào)查區(qū)域內(nèi)鳥類總種數(shù)及其個(gè)體數(shù)量。該方法適用于較小面積的抗蟲轉(zhuǎn)基因植物種植區(qū)的鳥類調(diào)

查。

A.9.2樣線法

根據(jù)生境類型和地形設(shè)置樣線，各樣線互不重疊，調(diào)查者沿著固定的線路行走，并記錄樣線兩側(cè)

所見到的鳥類。每種生境類型的樣線在2條以上，每條樣線長度以1km～3km為宜，若因地形限制，

樣線長度不應(yīng)小于1km。調(diào)查時(shí)行進(jìn)速度通常為1.5km/h～3km/h。

根據(jù)對樣線兩側(cè)調(diào)查記錄范圍的限定，樣線法又分為不限寬度、固定寬度和可變寬度3種方法。

不限寬度樣線法即不考慮鳥類與樣線的距離，固定寬度樣線法即記錄樣線兩側(cè)固定距離內(nèi)的鳥類，可

變寬度樣線法需記錄鳥類與樣線的垂直距離。

該方法適用于大規(guī)?？瓜x轉(zhuǎn)基因植物種植區(qū)的鳥類調(diào)查。

A.9.3樣點(diǎn)法

樣點(diǎn)法是樣線法的一種變形，即調(diào)查者行走速度為零的樣線法。以固定距離設(shè)置調(diào)查樣點(diǎn)，樣點(diǎn)

之間的距離應(yīng)根據(jù)生境類型確定，一般在0.2km以上，在每個(gè)樣點(diǎn)調(diào)查3min～10min。

根據(jù)對樣點(diǎn)周圍調(diào)查記錄范圍的界定，樣點(diǎn)法又分為不限半徑、固定半徑和可變半徑3種方法。

不限半徑樣點(diǎn)法即調(diào)查時(shí)不考慮鳥類與樣點(diǎn)的距離，固定半徑樣點(diǎn)法即記錄樣點(diǎn)周圍固定距離內(nèi)的鳥

類，可變半徑樣點(diǎn)法需記錄鳥類與樣點(diǎn)的距離。

樣點(diǎn)法更適合在崎嶇的山地或抗蟲轉(zhuǎn)基因植物種植片段化的生境中使用。

A.9.4紅外相機(jī)自動拍攝法

紅外感應(yīng)自動照相機(jī)能拍攝到活動隱蔽的地面活動鳥類。安置紅外相機(jī)前，應(yīng)調(diào)查鳥類的活動區(qū)

域和日?；顒勇肪€。盡量將相機(jī)安置在目標(biāo)動物經(jīng)常出沒的通道上或其活動痕跡密集處。

可采用分層抽樣法或系統(tǒng)抽樣法設(shè)置觀測樣點(diǎn)。分層抽樣法中，每種生境類型設(shè)置7個(gè)以上樣點(diǎn)

（樣點(diǎn)之間間距0.5km以上）。系統(tǒng)抽樣法中，在觀測樣地內(nèi)按照固定間距設(shè)置觀測樣點(diǎn)，每1km2

至少設(shè)置1個(gè)觀測樣點(diǎn)。

記錄各樣點(diǎn)名稱，進(jìn)行編號，并用北斗衛(wèi)星定位儀定位。每個(gè)樣點(diǎn)于田間或樹干、樹樁上裝設(shè)1

或2臺紅外感應(yīng)自動相機(jī)。相機(jī)架設(shè)位置一般距離地面0.3m～1.0m，架設(shè)方向盡量不朝東方太陽直

射處。相機(jī)鏡頭與地面大致平行，略向下傾，一般與鳥類活動路徑呈銳角夾角，并清理相機(jī)前的空間，

減少對照片成像質(zhì)量的干擾。每一個(gè)樣點(diǎn)應(yīng)該至少收集1000個(gè)相機(jī)工作小時(shí)的數(shù)據(jù)。在夏季每個(gè)樣點(diǎn)

需至少連續(xù)工作30d，以完成一個(gè)觀測周期。

根據(jù)設(shè)備供電情況，定期巡視樣點(diǎn)并更換電池，調(diào)試設(shè)備，下載數(shù)據(jù)。記錄各樣點(diǎn)拍攝起止日期、

照片拍攝時(shí)間、動物物種與數(shù)量、年齡等級、性別、外形特征等信息，建立信息庫，歸檔保存。

A.10嚙齒動物

參照HJ710.3等標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮?/p>

生長區(qū)域內(nèi)的嚙齒動物。

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A.10.1單公頃弓形夾法

對于晝間活動為主的嚙齒類動物（如旱獺、黃鼠等）可采用單公頃弓形夾法，根據(jù)生境和地形，

選擇若干塊面積為1hm2（100m×100m或者50m×200m）的樣地，為了保證樣地為規(guī)整的正方形

或長方形，可采用羅盤或者北斗衛(wèi)星定位儀來定位。確定好樣地后，邊堵洞邊計(jì)數(shù)，24h后查盜開洞

（有效洞）數(shù)量。同時(shí)，在盜開洞口布放好弓形夾，24h后收夾，期間每隔1h～2h檢查1次（夜間

可不必檢查），檢查中凡捕獲的鼠類全部取下，夾子仍布放原洞口。

鼠類密度的計(jì)算公式(A.1)：

N

D（A.1）

S

式中：D——鼠密度，只/hm2；

N——捕獲鼠總數(shù)量，只；

S——總樣方面積，hm2。

有效洞口系數(shù)的計(jì)算公式（A.2）：

D

R（A.2）

N

式中：R——有效洞口系數(shù)；h

D——鼠密度，只/hm2；

2

Nh——單公頃有效洞口數(shù)量，個(gè)/hm。

根據(jù)鼠密度和有效洞口系數(shù)評價(jià)大面積鼠類種群數(shù)量和危害程度，對于大面積估算的面積應(yīng)不少

于該調(diào)查面積的0.5%。

A.10.2夾夜法

對于夜間活動為主的嚙齒類動物（如跳鼠、沙鼠等）可采用夾夜法，使用板夾每5m～10m布放

1夾，每行100夾，行間距20m～50m，用面粉加植物油或花生米等作餌料。一般天黑前布放，天亮

后檢查捕獲鼠類情況并收夾。以捕獲率表示鼠密度，捕獲率計(jì)算公式（A.3）：

Nr

R100%（A.3）

Ne

式中：R——捕獲率，%；

Nr——捕獲鼠的鼠夾數(shù)，夾；

Ne——有效鼠夾數(shù)，夾。

為了盡可能準(zhǔn)確反映當(dāng)?shù)貒X動物種群的數(shù)量，建議在一個(gè)地區(qū)布放的板夾數(shù)不低于1000個(gè)。

A.10.3單公頃樣方捕盡法

此法適用于群居的嚙齒類動物（如長爪沙鼠、高原鼠兔等），即把樣地分為高、中、低3種類型

進(jìn)行調(diào)查，每種類型設(shè)置2～3個(gè)樣方，將不同密度進(jìn)行平均作為該地區(qū)該種類的密度。樣方設(shè)定好后

采用堵洞盜開法連續(xù)布夾48h，捕盡樣地內(nèi)嚙齒類動物。

A.10.4標(biāo)記重捕法

單次標(biāo)記重捕法指根據(jù)第二次捕獲量中被標(biāo)記個(gè)體所占比例推算目標(biāo)動物種群數(shù)量的標(biāo)記重捕法。

目標(biāo)動物的種群大小N和方差Vn分別按下列公式（A.4～A.5）計(jì)算：

(M1)(n1)

N1（A.4）

m1

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式中：N——種群個(gè)體數(shù)，個(gè)；

M——第一次釋放的標(biāo)記個(gè)體數(shù)，個(gè)；

n——第二次捕捉個(gè)體數(shù)，個(gè)；

m——n中被標(biāo)記個(gè)體數(shù)，個(gè)。

(M1)(n1)(Mm)(nm)

V（A.5）

n(m1)2(m2)

式中：Vn——種群個(gè)體數(shù)的方差；

M——第一次釋放的標(biāo)記個(gè)體數(shù)，個(gè)；

n——第二次捕捉個(gè)體數(shù)，個(gè)；

m——n中被標(biāo)記個(gè)體數(shù)，個(gè)。

此法的前提假設(shè)是：目標(biāo)動物種群是封閉的，即沒有個(gè)體遷入或遷出；所有動物有同等的被捕獲

率；捕獲率不受動物是否做標(biāo)記的影響；標(biāo)記不會丟失，抽樣是隨機(jī)的。實(shí)際應(yīng)用時(shí)，如果個(gè)體受捕

率有明顯差異，可以將數(shù)據(jù)按性別、年齡等分組計(jì)算，以減少誤差。

開放種群的多次標(biāo)記重捕法的假設(shè)前提是種群中任意個(gè)體在抽樣期i有相同的受捕率；所有標(biāo)記

個(gè)體在此后有相同的存活率；抽樣必須瞬間完成，個(gè)體立即釋放。在時(shí)間節(jié)點(diǎn)i的種群數(shù)量按下列公

式（A.6～A.7）計(jì)算：

M'

i（）

Ni(ni1)A.6

(mi1)

式中：Ni——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i的種群數(shù)量，個(gè)；

ni——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i樣本中的捕獲總數(shù)，個(gè)；

Mi'——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i標(biāo)記個(gè)體在種群中的數(shù)量，個(gè)；

mi——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i樣本中的標(biāo)記個(gè)體總數(shù)，個(gè)。

z

i（）

Mi'mi(Ri1)A.7

(ri1)

式中：Mi'——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i標(biāo)記個(gè)體在種群中的數(shù)量，個(gè)；

mi——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i樣本中的標(biāo)記個(gè)體總數(shù)，個(gè)；

Ri——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i中標(biāo)記個(gè)體的釋放數(shù)，個(gè)；

zi——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i以前被標(biāo)記，在i中不被捕獲，i以后再捕獲的個(gè)體數(shù)，個(gè)；

ri——時(shí)間節(jié)點(diǎn)i中標(biāo)記釋放，其后又被捕獲的個(gè)體數(shù)，個(gè)。

A.10.5紅外相機(jī)自動拍攝法

紅外感應(yīng)自動照相機(jī)可用于調(diào)查活動隱蔽的地面活動嚙齒類動物。