第二章細胞生物學實驗技術

者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。光的波長和鏡口率以及介質的折射率，用公式表示為：式中：n=介質折射率；α=鏡口角（標本對物鏡鏡口的張角N.A.=鏡口率（numeric水1細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質本身雖不能發(fā)熒4）就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別：2.光源為紫外光，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡；3.有兩個特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護人目。），圖2-6LCSM照片，藍色為細胞核，綠色為微管，圖片來自內。調焦深度不一樣時，就可以獲得樣品不同深度層次的圖像，這些圖像信息都儲于計算機內，通過計算機分析和模擬，就能顯示細胞樣品的立體結構。激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于觀察細胞形態(tài)，也可以用于細胞內生化成分的定量分析、光密度統(tǒng)計以及細胞形態(tài)的測量。暗視野顯微鏡（darkfieldmicroscope，圖2-的。利用這種顯微鏡能見到小至4~200nm的微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高50倍。獲1953年諾貝爾物理獎。這種顯微鏡最大的特點是可以觀察未經(jīng)染色的標本和活細胞。間的對比度，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本后發(fā)生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ（波長如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減下，提高反差。在構造上，相差顯微鏡有不同于普通光學顯微鏡兩個特殊之處：1.環(huán)形光闌（annular?diaphrag成空心光錐，焦聚到標本上。2.相位板（annularphaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位），），物臺便能檢測到這種物體。1952年，Nomarski在相差顯微鏡原理的基microscope其優(yōu)點是能顯示結構的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比，其標本可點，折射率差別更大，故影像的立體感更強。器直接裝在聚光系統(tǒng)的前面，使光線發(fā)生線性偏振。在聚光器中則安裝了石英Wollaston棱鏡，即DIC棱鏡，此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同由于標本的厚度和折射率不同，引起了兩束光發(fā)生了光程差。在物鏡的后焦面處安裝了第二個Wollaston棱鏡，即DIC滑行器，它把兩束光然存在。最后光束穿過第二個偏振裝置，即檢偏器。在光束形成目鏡DI影像的反差達到最佳狀態(tài)，可通過調節(jié)DIC滑行器的縱行微調來改變像的亮度。調節(jié)DIC滑行器可使標本的細微結構呈現(xiàn)出正或負的投影合于顯微操作。目前像基因注入、核移植、轉基因等的顯微操作常在這種顯微鏡下進行。上（圖2-11用于觀察培養(yǎng)的活細胞，具有相差物鏡。現(xiàn)在，注重實用性和多功能方面的改進。在裝配設計上趨于采用組合方式，集普通光鏡加相差、選擇波長更短的光源，以提高顯微鏡的分辨率。1932年Ruska子顯微鏡（transmissione并且電子束的波長與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比，也就是說電的分辨力可達0.2nm。左右的超薄切片。這種切片需要用超薄切片機（ultramicrotome）制作。電子顯微鏡部分構成。X射線波長（nm）屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級電子信號。電子云重疊，外加一電壓（2mV~2V針尖與樣品之間產生隧道效應而有電品表面原子凹凸不平，使探針與物質表面間的距離不斷發(fā)生改變，從而引起電流不斷發(fā)生改變。而普通電鏡只能觀察制作好的固體標本。某些生物結構，如生物膜、細胞壁等的原子排列。圖2-20尼康NT-88NE顯微操作/注射儀（圖片來自http://ww顯微操作技術（micromanipulationtechnique）