牛流感病毒抗體血凝抑制試驗(yàn)檢測方法征求意見稿

1牛流感病毒抗體血凝抑制試驗(yàn)檢測方法4儀器和材料水浴鍋、單道及多道微量移液器、計(jì)時(shí)器、吸25.1阿氏（Alsevers）液，按照附錄A.1配置。5.5禽流感病毒血凝素分型標(biāo)準(zhǔn)抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清。到吸附后的血清中，含原始血清20μL，則應(yīng)加入80μ在37°C下，將RDE與牛血清的混合溶液孵育18-20小時(shí)。將血清樣本在56°C水浴中如果需要更長時(shí)間的儲(chǔ)存，需冷凍保存在-20°C或更低的溫度下。6.2.1使用微量移液器在血凝板A觀察紅細(xì)胞有無淚珠狀流淌，完全無淚珠狀流淌（100%凝集）表明該抗原稀釋度可導(dǎo)致紅細(xì)胞全血凝，導(dǎo)致完全血凝的病毒最高稀釋度即HA血36.3.1根據(jù)HA試驗(yàn)測定的效價(jià)配置4個(gè)血凝單位（即4HAU）病毒抗原。4HAU抗原應(yīng)根據(jù)回滴檢示例：配制的4HAU抗原需檢査血凝價(jià)是否準(zhǔn)確，將配制的25μL混勻。將血凝板在室溫（20~25℃)靜置30min或4℃60min，如果配制的抗原液為4HAU，6.3.4第1孔~第11孔均加入25μL4HAU抗原，在室溫（20~25℃)靜置30min或4℃60min。6.3.5每孔加入25μL1.0%（體積分?jǐn)?shù)）雞紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，在室溫（20~25℃)靜置30min7.1若樣品無非特異性吸附，可不使用雞紅細(xì)胞預(yù)吸附去除非特異性凝集素。非特異性凝集檢測的方7.21.0%（體積分?jǐn)?shù)）的紅細(xì)胞懸液可存在批4試劑配置A.1阿氏(Alsevers)液配制稱取葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸A.21.0%雞紅細(xì)胞懸液采集至少三只SPF雞或無禽流感和新城疫等抗體的健康公雞的血液與等體積阿氏液混合，用pH配成1%（體積分?jǐn)?shù)）紅細(xì)胞懸液，4取1×PBS，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)pH至7.2，滅菌或過濾除菌，PBS一經(jīng)使用，于4℃保存不應(yīng)超5有些牛血清可能對雞紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性凝集,可先用待檢血清做檢測,如果待檢血清出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象,則說明有非特異凝集因子存在,宜按6.1.B.2.5在室溫(22°C至25°C6[3]WOAHTerrestrialManual2023CHAPTE[4]YuJ,WenZ,HuW,ChenM,ZhangY,LiuS,WangG,WangZ,WangD,ZhaiSL,WeiWK,LiT,LiaoM.InfluenzaDvirusinfectioninChdoi:10.1080/2222175