動物飼料大豆及其加工產(chǎn)品中胰蛋白酶抑制劑活性測定 編制說明

1根據(jù)《國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會關(guān)于印發(fā)《202收，從而使動物胰腺酶過量分泌的作用。現(xiàn)代動物營養(yǎng)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，下處理大豆發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶的抑制活性得到在處理大豆過程中添加還原劑亞硫酸氫鈉，可使鈍3蛋白酶（Alcalase）水解大豆蛋白，在最），Determinationoftrypsininhibitoractivityofsoyaproducts》、GB5009.224-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)4已經(jīng)使用8年，其適用范圍表述比較籠統(tǒng)，-Determinationoftrypsininhibitoractivityofsoyaproducts》，是2001定步驟、結(jié)果計算、精密度等方面進行了全feedingstuffs-Determinationoftrypsininhibitoractivityofsoyaproducts》的形式進行制定。本次制定擬按相關(guān)飼料法律法規(guī)和等要求對其適用范圍進行進具體明確表述-2015對規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)文本。表1國內(nèi)外食品和飼料中胰蛋白酶抑制劑活性的測定方法標(biāo)準(zhǔn)序號標(biāo)準(zhǔn)編號標(biāo)準(zhǔn)名稱1ISO14902:2001Animalfeedingstuffs-Determinationoftrypsin產(chǎn)品的胰蛋白酶抑制劑活性的測定2GB5009.224-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)大豆制品中胰蛋白酶抑制劑活5性的測定3農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品食用安全檢測抗?fàn)I養(yǎng)素第2部分：胰蛋白酶抑制劑的測定任務(wù)分工項目主持人，負責(zé)項目的全面工作項目實施方案、標(biāo)準(zhǔn)文本和編制說明編寫和完善、征求意見、方法驗證標(biāo)準(zhǔn)文本和編制說明編寫和完善、樣品選取、樣品檢測譜尼測試集團股份有檢測方法研究、樣品檢測益海嘉里金龍魚糧油食品股份有限公司檢測方法研究、標(biāo)準(zhǔn)文本和編制說明編寫含國際標(biāo)準(zhǔn)ISO14902:2001《Animalfeedingstuffs-Determinatio62023年6月，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、益海嘉里金龍魚糧主要工作等內(nèi)容，并進一步確定了標(biāo)準(zhǔn)修訂↓↓↓↓↓↓2023年7~8月，在查詢、收集國內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、文7stuffs-Determinationoftrypsininhibitoractivityofsoyaproducts》（英2024年3月-7月，制標(biāo)單位采集了不同種類、規(guī)白樣品3個，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)草案進行了測定；后又采構(gòu)的修改進行研討，2024年8月份最終形成8規(guī)章，標(biāo)準(zhǔn)的編寫及表述按照GB/T1.1－202部分：以ISO/IEC標(biāo)準(zhǔn)化文件為基礎(chǔ)的oftrypsininhibitoractivityofsoyaproducts》（英文版）為依據(jù)，并依9的烘烤程度”屬于說明性內(nèi)容，屬于附加信息，不屬于范圍的內(nèi)容，式計算可得方法的檢出限為0.1mg/g，故而“7Sampling”根據(jù)GB/T20195的取樣規(guī)定修改為“選取有代表性的樣用”。根據(jù)征求意見，分別對氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液、乙酸溶液的2.1增加“規(guī)范性引用文件”GB/T6682和GB/T20195放入此章；本文件所用溶液按GB合并國際標(biāo)準(zhǔn)“7Sampling”和“8Preparation結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》要求，在本文件中單獨列一章節(jié)，列為“7樣品”。根據(jù)實際檢測過程的需要，刪除國際標(biāo)準(zhǔn)“8Preparationoftest國際標(biāo)準(zhǔn)“9.1Numberofdeter定，按照國內(nèi)表述習(xí)慣不必單列，本文件將該章節(jié)與“8Preparationoftestsample”合并列為“8試驗步報告和附錄B呈現(xiàn)了7個實驗室對3個大豆樣品的測定結(jié)果，是對“11.1Repeatability”和“11.2Repr將其具體解釋為“胰蛋白酶與苯甲酰-L-精氨酸-對硝基苯胺(L-BAPA)410nm處測定該反應(yīng)前后的吸光度值，對胰蛋白酶抑定量?！眊rade3inaccordancewithlS按照GB/T603中對溶液配制的規(guī)定，將國際標(biāo)準(zhǔn)中5.6對于鹽酸溶液的要求由“c(HCl)=0.01mol/L”改為“5.11c(HCl)=0.溶液的配制要求更改為“5.13稱取0.735g二水氯化鈣（5.2加入溶液（5.6）調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.1”；將國際標(biāo)準(zhǔn)中5.16對三羥甲基氨基甲烷-氯化鈣緩沖溶液的配制步驟翻譯后調(diào)整表述，更改為“稱取6.05g三羥甲基氨基甲烷(5.4)和0.735g氯化鈣基于稱取L-BAPA及胰蛋白酶時稱樣量較低取結(jié)果的影響差異不顯著，本文件將國際標(biāo)準(zhǔn)“9.2Sampleextraction”中“Placeintherefrigeratorthequantityofwaterneededformakingupthesampleextracts”與“dilutetothemarkwithwaterfromtherefrigerator調(diào)整為“平行做兩份試驗。稱取1g(精確至0.001g)制備鹽酸溶液（5.4）和0.1mol/L鹽酸溶液（5.5）調(diào)節(jié)pH至9.提取液（8.1）稀釋三個不同稀釋度，確保在三個抑制第二段條文表述方式由推薦性更改為陳述性，修國際標(biāo)準(zhǔn)“9.4Measurementoftrypsinactivityofworkingsolution”如“Pipetteintocentrifugetubesaccordingtoth由于國際標(biāo)準(zhǔn)“9.4Measurementoftrypsinactivityofworkingsolution”和“9.5Measurementoftrypsininhibitoractivity”部分并未明確水浴的溫度，本文件確定為37℃,例如“Mixthecontentsofthetubeswiththetesttubemixer(本文件為使國際標(biāo)準(zhǔn)“9.4Measurementoftrypsinactivityofworkingsolution”中第一段條文表述更加準(zhǔn)確，翻譯后修改為“檢測則，需要檢查牛胰蛋白酶（5.2）的質(zhì)量。必要時，取用一瓶新鮮的牛胰蛋白酶（5.2）”；為了便于理解，本文件將其后各溶液加入量體系表1標(biāo)題更改為“胰蛋白酶工作液活性考慮到表中所有量的單位相同，在表的右上方單位用“單位為毫升”表述；將國際標(biāo)準(zhǔn)該章中“Thetrypsinusesolution（5.12）”min”；將國際標(biāo)準(zhǔn)該章中“Thesolutionmayremainstablewithin2h”更改為“上述溶液可保持穩(wěn)定至少2h”；以上變更在國際標(biāo)準(zhǔn)“9.5Measurementoftrypsininhibitoractivity”中出現(xiàn)相同表述處本文件相由于國際標(biāo)準(zhǔn)“9.5Measurementoftrypsininhibitoractivity”表2的胰蛋白酶抑制率以百分?jǐn)?shù)（%）表示，按式（1）計算……”，并液的稀釋度[(f1=100mL)/V),V為表A.1所示移取體積，單位為123456789粉碎68個樣品至0.5mm以下，充分混勻備用。稱取1搖勻。用1mol/L鹽酸溶液和0.1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至9.5±0.1，容量瓶中，稀釋液備用。將提取液保存于4±3℃冰分別吸取5mLL-BAPA溶液和3mL水溶液混勻后，將離心管放回到恒溫水浴鍋中，在37℃水浴中min后，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入1mL乙酸溶液，渦旋混勻。將離心心機中，以4000r/min速度離心10使用液的吸光度與空白液的吸光度之間的差值(Ar-Abr)為0按表2分別吸取一定量的四種溶液分別加入四個10mL離心管中。L-BAPA溶液55550011水33221010胰蛋白酶抑制劑活性按式(2)計算，以每克樣品f1——樣品提取液的稀釋度[1=100mL/V）,V為表A.1所示f2——2.8×10-4，該數(shù)值是滿足本實驗胰蛋白酶活性條件下(5.14產(chǎn)品的胰蛋白酶抑制劑活性差異較大。68個樣品中胰蛋白酶抑制劑制劑活性≥13mg/g、0.5mg/g≤TIA≤4.0mg/g和0.1mg/g≤TIA<1234567891234567891234567891234567896789檢20出樣15品數(shù)1050（n=68）大豆及其加工產(chǎn)品胰蛋白抑制劑活性分布（n=68）321TIA（mg/g）根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)中參考文獻TheDeterminationofTrypsinInhibitorLevelsinFoodstuffs.（J.），樣品胰蛋白酶抑制劑活性測定值區(qū)間30.0mg/g）與表4樣品測