專題24 細(xì)胞工程與胚胎工程 十年（2015 2024）高考生物真題分類匯編（全國）（解析版）

2013-2024年十年高考真題匯編PAGEPAGE1專題24細(xì)胞工程與胚胎工程考點(diǎn)十年考情（2015-2024）命題趨勢考點(diǎn)1動(dòng)物細(xì)胞工程（10年10考）2024·吉林、浙江、湖北、江西、全國、廣東2023·北京、海南、湖南、湖北2022·遼寧、江蘇、福建、湖北、山東、浙江、海南2021·湖北、山東、浙江、重慶、江蘇、湖南2020·海南、北京、天津、浙江、江蘇、全國2019·江蘇2018·全國、江蘇2017·全國、浙江、江蘇2016·北京、江蘇、全國、天津2015·福建、重慶、安徽、山東、天津、江蘇從近10年全國各地的高考試題來看，細(xì)胞工程與胚胎工程專題創(chuàng)設(shè)科研情景考查動(dòng)植物細(xì)胞工程與胚胎工程的具體操作過程和整個(gè)過程涉及的原理、技術(shù)應(yīng)用等，此部分內(nèi)容在選擇題和非選擇題都有考察?？键c(diǎn)2植物細(xì)胞工程（10年10考）2024·北京、貴州、甘肅、安徽、湖北、吉林、浙江、山東、湖南2023·山東、浙江、廣東、湖北、海南2022·重慶、遼寧、浙江2021·江蘇、福建、湖北、北京、浙江2020·北京、江蘇、山東、天津、浙江2019·全國、上海、江蘇、浙江2018·浙江、江蘇2017·海南、浙江、天津2016·江蘇、北京2015·天津、北京、江蘇考點(diǎn)3胚胎工程（10年10考）2024·北京、貴州、甘肅、湖北2023·廣東、浙江、天津2022·北京、江蘇、全國2021·江蘇、遼寧、浙江2020·海南、山東、浙江、江蘇、全國2019·江蘇2018·江蘇2017·江蘇2016·上海、江蘇2015·江蘇、天津、四川、廣東、山東、重慶考點(diǎn)1動(dòng)物細(xì)胞工程〖2024年高考真題〗1．（2024·吉林·高考真題）從小鼠胚胎中分離獲取胚胎成纖維細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，在傳代后的不同時(shí)間點(diǎn)檢測細(xì)胞數(shù)目，結(jié)果如圖。下列敘述正確的是（

）A．傳代培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿需密封防止污染B．選?、俚募?xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)比②更合理C．直接用離心法收集細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)D．細(xì)胞增長進(jìn)入平臺期可能與細(xì)胞密度過大有關(guān)【答案】D【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要的條件有：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)主要應(yīng)用在：制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測有毒物質(zhì)等。【詳解】A、傳代培養(yǎng)時(shí)需要營造無菌、無毒以及95%空氣+5%CO2的氣體環(huán)境，而非密封，A錯(cuò)誤；B、選?、诘募?xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)比①更合理，②時(shí)細(xì)胞增長開始變得緩慢，B錯(cuò)誤；C、對于貼壁生長的細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，先需要用胰蛋白酶等處理，使之分散為單個(gè)細(xì)胞，然后再用離心法收集，C錯(cuò)誤；D、細(xì)胞增長進(jìn)入平臺期可能與細(xì)胞密度過大、細(xì)胞間產(chǎn)生接觸抑制有關(guān)，D正確。故選D。2．（2024·浙江·高考真題）某動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞貼壁生長至接觸抑制時(shí)，需分裝培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)操作過程如圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．①加消化液的目的是使細(xì)胞與瓶壁分離 B．②加培養(yǎng)液的目的是促進(jìn)細(xì)胞增殖C．③分裝時(shí)需調(diào)整到合適的細(xì)胞密度 D．整個(gè)過程需要在無菌、無毒條件下進(jìn)行【答案】B【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的PH）?！驹斀狻緼、①加消化液的目的是使細(xì)胞與瓶壁分離，A正確；B、②加培養(yǎng)液，多次加培養(yǎng)液先洗去殘留的消化酶，然后終止消化液的消化作用，并對細(xì)胞加以稀釋，B錯(cuò)誤；C、③分裝時(shí)需調(diào)整到合適的細(xì)胞密度，因?yàn)槿裘芏冗^大細(xì)胞直接仍存在接觸抑制，C正確；D、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要無菌無毒環(huán)境，因此整個(gè)過程需要在無菌、無毒條件下進(jìn)行，D正確。故選B。3．（2024·湖北·高考真題）糖尿病是危害人類健康的主要疾病之一?；謴?fù)功能性胰島B細(xì)胞總量是治療糖尿病的重要策略。我國學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，向患有糖尿病的小鼠注射胰高血糖素受體單克隆抗體（mAb），可以促進(jìn)胰島A細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)少數(shù)胰島A細(xì)胞向胰島B細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)功能性胰島B細(xì)胞再生。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．mAb的制備可能涉及細(xì)胞融合技術(shù)B．注射mAb可降低胰腺分泌胰高血糖素的量C．mAb和胰高血糖素均能與胰高血糖素受體特異性結(jié)合D．胰高血糖素主要通過促進(jìn)肝糖原分解和非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)化為糖，升高血糖水平【答案】B【詳解】A、單克隆抗體的制備涉及細(xì)胞融合技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，mAb屬于單克隆抗體，其制備可能涉及細(xì)胞融合技術(shù)，A正確；B、單克隆抗體（mAb），可以促進(jìn)胰島A細(xì)胞增殖；而胰島A細(xì)胞可分泌胰高血糖素，可見注射mAb可提高胰島A細(xì)胞分泌胰高血糖素的量，B錯(cuò)誤；C、題干信息，mAb是胰高血糖素受體單克隆抗體，可見Ab和胰高血糖素均能與胰高血糖素受體特異性結(jié)合，C正確；D、胰高血糖素主要作用于肝，促進(jìn)肝糖原分解成葡萄糖進(jìn)入血液，促進(jìn)非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)變成糖，使血糖濃度回升到正常水平，D正確。故選B。4．（2024·江西·高考真題）某病毒顆粒表面有一特征性的大分子結(jié)構(gòu)蛋白S（含有多個(gè)不同的抗原決定基，每一個(gè)抗原決定基能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體）。為了建立一種靈敏、高效檢測S蛋白的方法，研究人員采用雜交瘤技術(shù)制備了抗-S單克隆抗體（如圖）。下列說法正確的是（

）A．利用膠原蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細(xì)胞B．制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B是相同的單克隆抗體C．用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可傳代培養(yǎng)，但不能凍存D．單克隆抗體A和單克隆抗體B都能夠特異性識別S蛋白【答案】AD【詳解】A、膠原蛋白酶可以催化分解細(xì)胞外的膠原蛋白，因此利用膠原蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細(xì)胞，A正確；B、由于蛋白S含有多個(gè)不同的抗原決定基，每一個(gè)抗原決定基能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體，單克隆抗體A和單克隆抗體B來自不同的雜交瘤細(xì)胞，因此制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B不是相同的單克隆抗體，B錯(cuò)誤；C、用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可傳代培養(yǎng)，也可以冷凍保存，C錯(cuò)誤；D、單克隆抗體A和單克隆抗體B都來自篩選出的雜交瘤細(xì)胞，因此都能夠特異性識別S蛋白上的抗原決定簇，D正確。故選AD。5．（2024·全國·高考真題）某種病原體的蛋白質(zhì)A可被吞噬細(xì)胞攝入和處理，誘導(dǎo)特異性免疫?；卮鹣铝袉栴}。(1)病原體感染誘導(dǎo)產(chǎn)生漿細(xì)胞的特異性免疫方式屬于。(2)溶酶體中的蛋白酶可將蛋白質(zhì)A的一條肽鏈水解成多個(gè)片段，蛋白酶切斷的化學(xué)鍵是。(3)不采用熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)A，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證蛋白質(zhì)A的片段可出現(xiàn)在吞噬細(xì)胞的溶酶體中，簡要寫出實(shí)驗(yàn)思路和預(yù)期結(jié)果?！敬鸢浮?1)體液免疫(2)肽鍵(3)實(shí)驗(yàn)思路：以蛋白質(zhì)A的片段為抗原，制備單克隆抗體，利用差速離心法將吞噬細(xì)胞中的溶酶體分離，并提取溶酶體中的蛋白質(zhì)，利用抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測預(yù)期結(jié)果：出現(xiàn)雜交帶，表明蛋白質(zhì)A的片段可出現(xiàn)在吞噬細(xì)胞的溶酶體中【分析】非特異性免疫（先天性免疫）：第一道防線：皮膚、黏膜等；第二道防線：體液中的殺菌物質(zhì)和吞噬細(xì)胞；特異性免疫（獲得性免疫）第三道防線：由免疫器官和免疫細(xì)胞借助血液循環(huán)和淋巴循環(huán)組成?！驹斀狻浚?）特異性免疫包括體液免疫和細(xì)胞免疫。病原體感染誘導(dǎo)產(chǎn)生漿細(xì)胞的特異性免疫方式屬于體液免疫。（2）蛋白酶可將蛋白質(zhì)A的一條肽鏈水解成多個(gè)片段，因此蛋白酶切斷的是肽鍵。（3）為驗(yàn)證蛋白質(zhì)A的片段可出現(xiàn)在吞噬細(xì)胞的溶酶體中，可以蛋白質(zhì)A的片段為抗原，制備單克隆抗體，利用差速離心法將吞噬細(xì)胞中的溶酶體分離，并提取溶酶體中的蛋白質(zhì)，利用抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，若出現(xiàn)雜交帶，則表明蛋白質(zhì)A的片段可出現(xiàn)在吞噬細(xì)胞的溶酶體中。6．（2024·廣東·高考真題）某些腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1與細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）表面的PD-1結(jié)合能抑制CTL的免疫活性，導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸。免疫檢查點(diǎn)療法使用單克隆抗體阻斷PD-Ll和PD-1的結(jié)合，可恢復(fù)CTL的活性，用于腫瘤治療。為進(jìn)一步提高療效，研究者以黑色素瘤模型小鼠為材料，開展該療法與化療的聯(lián)合治療研究。部分結(jié)果見圖。

回答下列問題：(1)據(jù)圖分析，療法的治療效果最佳，推測其原因是。(2)黑色素瘤細(xì)胞能分泌吸引某類細(xì)胞靠近的細(xì)胞因子CXCL1.為使CTL響應(yīng)此信號，可在CTL中導(dǎo)入基因后再將其回輸小鼠體內(nèi)，從而進(jìn)一步提高治療效果。該基因的表達(dá)產(chǎn)物應(yīng)定位于CTL的（答位置）且基因?qū)牒蟛挥绊慍TL的能力。(3)某興趣小組基于現(xiàn)有抗體—藥物偶聯(lián)物的思路提出了兩種藥物設(shè)計(jì)方案。方案一：將化療藥物與PD-L1單克隆抗體結(jié)合在一起。方案二：將化療藥物與PD-1單克隆抗體結(jié)合在一起。你認(rèn)為方案（填“一”或“二”）可行，理由是。【答案】(1)聯(lián)合該療法既發(fā)揮了化療藥物的作用，也增加了活化的CTL數(shù)量(2)CXCL1受體(細(xì)胞膜)表面殺傷腫瘤細(xì)胞(3)一方案一的偶聯(lián)物既可阻斷PD-1與PD-L1結(jié)合，恢復(fù)CTL的活性，又使化療藥物靶向腫瘤細(xì)胞【分析】根據(jù)題圖可知，腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1通過與T細(xì)胞表面的PD-1蛋白特異性結(jié)合，抑制T細(xì)胞增殖分化，從而逃避免疫系統(tǒng)的攻擊?！驹斀狻浚?）由圖a可知，聯(lián)合療法腫瘤體積最小，再根據(jù)圖b可知，采用聯(lián)合療法時(shí)活化的CTL的數(shù)目明顯高于免疫檢查點(diǎn)療法和化療等，原因是該療法既發(fā)揮了化療藥物的作用，也增加了活化的CTL數(shù)量。（2）由于黑色素瘤細(xì)胞能分泌吸引某類細(xì)胞靠近的細(xì)胞因子CXCL1，故要進(jìn)一步提高治療效果，可以在CTL中導(dǎo)入細(xì)胞因子CXCL1受體基因，使CTL表達(dá)出細(xì)胞因子CXCL1受體，達(dá)到治療的效果。由于細(xì)胞因子是一類肽類化合物，故該基因的表達(dá)產(chǎn)物應(yīng)定位于CTL的細(xì)胞膜上，且基因?qū)牒蟛挥绊慍TL殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。（3）某腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1與細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）表面的PD-1結(jié)合能抑制CTL的免疫活性，故應(yīng)該將化療藥物與PD-L1單克隆抗體結(jié)合在一起，即方案一的偶聯(lián)物既可阻斷PD-1與PD-L1結(jié)合，恢復(fù)CTL的活性，又使化療藥物靶向腫瘤細(xì)胞。〖2023年高考真題〗1．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）甲狀旁腺激素（PTH）水平是人類多種疾病的重要診斷指標(biāo)。研究者制備單克隆抗體用于快速檢測PTH，有關(guān)制備過程的敘述不正確的是（）A．需要使用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)B．需要制備用PTH免疫的小鼠C．利用抗原-抗體結(jié)合的原理篩選雜交瘤細(xì)胞D．篩選能分泌多種抗體的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞【答案】D【詳解】A、單克隆抗體制備過程中需要對骨髓瘤細(xì)胞等進(jìn)行培養(yǎng)，即需要使用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，A正確；B、該操作的目的是制備單克隆抗體用于快速檢測PTH，故應(yīng)用PTH刺激小鼠，使其產(chǎn)生相應(yīng)的B細(xì)胞，B正確；C、抗原與抗體的結(jié)合具有特異性，可利用抗原-抗體結(jié)合的原理篩選雜交瘤細(xì)胞，C正確；D、由于一種B細(xì)胞經(jīng)分化形成漿細(xì)胞后通常只能產(chǎn)生一種抗體，故篩選出的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞無法分泌多種抗體，D錯(cuò)誤。故選D。2．（2023·海南·高考真題）某團(tuán)隊(duì)通過多代細(xì)胞培養(yǎng)，將小鼠胚胎干細(xì)胞的Y染色體去除，獲得XO胚胎干細(xì)胞，再經(jīng)過一系列處理，使之轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣?xì)胞。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．營養(yǎng)供應(yīng)充足時(shí)，傳代培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞不會發(fā)生接觸抑制B．獲得XO胚胎干細(xì)胞的過程發(fā)生了染色體數(shù)目變異C．XO胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣?xì)胞的過程發(fā)生了細(xì)胞分化D．若某瀕危哺乳動(dòng)物僅存雄性個(gè)體，可用該法獲得有功能的卵母細(xì)胞用于繁育【答案】A【詳解】A、營養(yǎng)供應(yīng)充足時(shí)，傳代培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞也會發(fā)生接觸抑制，A錯(cuò)誤；B、XO胚胎干細(xì)胞中丟失了Y染色體，因而該細(xì)胞的獲得過程發(fā)生了染色體數(shù)目變異，B正確；C、XO胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣?xì)胞的過程發(fā)生了細(xì)胞分化，即細(xì)胞的功能發(fā)生了特化，因而發(fā)生了細(xì)胞分化，C正確；D、若某瀕危哺乳動(dòng)物僅存雄性個(gè)體，可用該法，即獲得有功能的卵母細(xì)胞，進(jìn)而用于繁育，實(shí)現(xiàn)瀕危物種的保護(hù)，D正確。故選A。3．（2023·湖南·統(tǒng)考高考真題）某些植物根際促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等作用。回答下列問題：(1)若從植物根際土壤中篩選分解淀粉的固氮細(xì)菌，培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括水和。(2)現(xiàn)從植物根際土壤中篩選出一株解淀粉芽孢桿菌H，其產(chǎn)生的抗菌肽抑菌效果見表。據(jù)表推測該抗菌肽對的抑制效果較好，若要確定其有抑菌效果的最低濃度，需在μg·mL-1濃度區(qū)間進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。測試菌抗菌肽濃度/（μg?mL-1）55.2027.6013.806.903.451.730.86金黃色葡萄球菌++枯草芽孢桿菌++禾谷鐮孢菌-++++++假絲酵母-++++++注：“+”表示長菌，“-”表示未長菌。(3)研究人員利用解淀粉芽孢桿菌H的淀粉酶編碼基因M構(gòu)建高效表達(dá)質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌成功構(gòu)建基因工程菌A。在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M。分析可能的原因是（答出兩點(diǎn)即可）。(4)研究人員通過肺上皮干細(xì)胞誘導(dǎo)生成肺類器官，可自組裝或與成熟細(xì)胞組裝成肺類裝配體，如圖所示。肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及（答出兩點(diǎn)）等基本條件。肺類裝配體形成過程中是否運(yùn)用了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)（填“是”或“否”）。

(5)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是一種耐藥菌，嚴(yán)重危害人類健康?？蒲腥藛T擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力。以下實(shí)驗(yàn)材料中必備的是。①金黃色葡萄球菌感染的肺類裝配體

②MRSA感染的肺類裝配體

③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽

④生理鹽水

⑤青霉素（抗金黃色葡萄球菌的藥物）

⑥萬古霉素（抗MRSA的藥物）【答案】(1)無機(jī)鹽、淀粉(2)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌1.73~3.45(3)淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；重組質(zhì)粒在大腸桿菌分裂過程中丟失(4)無菌、無毒環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境否(5)②③④⑥【詳解】（1）由題意可知，根際促生菌具有固氮作用，可利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?，因此用于篩選根際促生菌的培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括水、無機(jī)鹽和淀粉。（2）由題表可知，在抗菌肽濃度為3.45-55.20μg·mL-1范圍內(nèi)，金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均不能生長，表明該抗菌肽對它們的抑菌效果較好；因?yàn)榭咕牡臐舛葹?.73μg·mL-1時(shí)，它們均能生長，所以要確定抗菌肽抑菌效果的最低濃度，應(yīng)在1.73~3.45μg·mL-1的濃度區(qū)間進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。（3）在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M，可能的原因是淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；或者是重組質(zhì)粒在大腸桿菌分裂過程中丟失。（4）肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及無菌、無毒環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境等基本條件；由圖示可知，肺類裝配體形成的過程中沒有運(yùn)用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，只涉及了細(xì)胞的分裂和分化等內(nèi)容。（5）科研人員擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力，必備實(shí)驗(yàn)材料為：②MRSA感染的肺類裝配體、③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽、④生理鹽水（設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)使用）、⑥萬古霉素（抗MRSA的藥物，比較解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽的療效），故選②③④⑥。4．（2023·湖北·統(tǒng)考高考真題）某病毒對動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴(yán)重。我國學(xué)者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病毒，其主要技術(shù)路線如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：(1)與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合前，已免疫的脾細(xì)胞（含漿細(xì)胞）（填“需要”或“不需要”）通過原代培養(yǎng)擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量；添加脂溶性物質(zhì)PEG可促進(jìn)細(xì)胞融合，該過程中PEG對細(xì)胞膜的作用是。(2)在雜交瘤細(xì)胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基對和生長具有抑制作用。(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，其目的是。(4)構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用DNA連接酶。下列屬于DNA連接酶底物的是?！敬鸢浮?1)不需要使細(xì)胞接觸處的磷脂分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合(2)未融合的親本細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞(3)通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞(4)④【詳解】（1）漿細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，不能增殖，所以不需要通過原代培養(yǎng)擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量。脂溶性物質(zhì)PEG可使細(xì)胞接觸處的磷脂分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。（2）在雜交瘤細(xì)胞篩選過程中，用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長。（3）單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，是運(yùn)用了抗原-抗體雜交技術(shù)，抗體檢測呈陽性的細(xì)胞，即為所需的雜交瘤細(xì)胞。（4）DNA連接酶能連接DNA片段，脫氧核苷酸的磷酸基團(tuán)位于5'端，-OH位于3'端，①②③脫氧核苷酸鏈的兩端基團(tuán)有誤；DNA連接酶能催化合成磷酸二酯鍵，即將一條脫氧核苷酸5'端的磷酸基團(tuán)與另一條脫氧核苷酸鏈的3'端的-OH相連，④符合題意。故選④?！?022年高考真題〗5．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）二甲基亞砜（DMSO）易與水分子結(jié)合，常用作細(xì)胞凍存的滲透性保護(hù)劑。干細(xì)胞凍存復(fù)蘇后指標(biāo)檢測結(jié)果見下表。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）凍存劑指標(biāo)

合成培養(yǎng)基+DMSO合成培養(yǎng)基+DMSO+血清G1期細(xì)胞數(shù)百分比（%）65.7879.85活細(xì)胞數(shù)百分比（%）15.2941.33注：細(xì)胞分裂間期分為G1期、S期（DNA復(fù)制期）和G2期A．凍存復(fù)蘇后的干細(xì)胞可以用于治療人類某些疾病B．G1期細(xì)胞數(shù)百分比上升，導(dǎo)致更多干細(xì)胞直接進(jìn)入分裂期C．血清中的天然成分影響G1期，增加干細(xì)胞復(fù)蘇后的活細(xì)胞數(shù)百分比D．DMSO的作用是使干細(xì)胞中自由水轉(zhuǎn)化為結(jié)合水【答案】B【詳解】A、凍存復(fù)蘇后的干細(xì)胞可以經(jīng)誘導(dǎo)分裂分化形成多種組織器官，用于治療人類某些疾病，A正確；B、G1期細(xì)胞數(shù)百分比上升，說明細(xì)胞進(jìn)入分裂間期，但不會導(dǎo)致干細(xì)胞直接進(jìn)入分裂期，還需經(jīng)過S和G2期，B錯(cuò)誤；C、分析表格可知，血清中的天然成分影響G1期（該期細(xì)胞數(shù)百分比增大），能增加干細(xì)胞復(fù)蘇后的活細(xì)胞數(shù)百分比，C正確；D、二甲基亞砜（DMSO）易與水分子結(jié)合，可以使干細(xì)胞中自由水轉(zhuǎn)化為結(jié)合水，D正確。故選B。6．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細(xì)胞跳動(dòng)的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具和試劑都要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時(shí)候既需要氧氣也需要二氧化碳C．心肌細(xì)胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖D．心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出的神經(jīng)沖動(dòng)的支配下跳動(dòng)【答案】B【詳解】A、培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，但是試劑并不都需要滅菌，如動(dòng)物血清不能進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，否則會使其中的成分失活，A錯(cuò)誤；B、培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時(shí)候既需要氧氣（有助于進(jìn)行有氧呼吸）也需要二氧化碳（有助于維持培養(yǎng)液的pH），B正確；C、在體外培養(yǎng)條件下，細(xì)胞會因接觸抑制、細(xì)胞密度過大、代謝廢物積累、營養(yǎng)物質(zhì)消耗而停止分裂，C錯(cuò)誤；D、心肌細(xì)胞節(jié)律性收縮，受植物性神經(jīng)的支配，是不隨意的，在神經(jīng)細(xì)胞釋放的神經(jīng)遞質(zhì)的支配下跳動(dòng)，D錯(cuò)誤。故選B。7．（2022·福建·統(tǒng)考高考真題）我國科研人員在航天器微重力環(huán)境下對多能干細(xì)胞的分化進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)與正常重力相比，多能干細(xì)胞在微重力環(huán)境下加速分化為功能健全的心肌細(xì)胞。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．微重力環(huán)境下多能干細(xì)胞和心肌細(xì)胞具有相同的細(xì)胞周期B．微重力環(huán)境下進(jìn)行人體細(xì)胞的體外培養(yǎng)需定期更換培養(yǎng)液C．多能干細(xì)胞在分化過程中蛋白質(zhì)種類和數(shù)量發(fā)生了改變D．該研究有助于了解微重力對細(xì)胞生命活動(dòng)的影響【答案】A【詳解】A、連續(xù)分裂的細(xì)胞才有細(xì)胞周期，心肌細(xì)胞已經(jīng)高度分化，不能再分裂，沒有細(xì)胞周期，A錯(cuò)誤；B、進(jìn)行細(xì)胞的體外培養(yǎng)需定期更換培養(yǎng)液，避免代謝廢物對細(xì)胞的毒害作用，B正確；C、分化過程的本質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，故多能干細(xì)胞在分化過程中蛋白質(zhì)種類和數(shù)量發(fā)生了改變，C正確；D、由題意可知，多能干細(xì)胞在微重力環(huán)境下能加速分化，所以該研究有助于了解微重力對細(xì)胞生命活動(dòng)的影響，D正確。故選A。8．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能的是（）A．實(shí)驗(yàn)材料取自小鼠胚胎的腦組織 B．為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封C．血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基 D．所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性【答案】A【詳解】A、小鼠胚胎腦組織中含有豐富的原代神經(jīng)元，細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，不會造成生長緩慢，A符合題意；B、培養(yǎng)瓶瓶口密封會使培養(yǎng)液中缺氧，影響細(xì)胞有氧呼吸，造成供能不足，可能使細(xì)胞生長緩慢，B不符合題意；C、血清經(jīng)過高溫處理后，其中活性成分變性，失去原有功能，細(xì)胞生存環(huán)境嚴(yán)重惡化，可能使細(xì)胞生長緩慢，C不符合題意；D、小鼠內(nèi)環(huán)境為弱堿性，所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性，使細(xì)胞生存環(huán)境惡劣，可能造成細(xì)胞生長緩慢，D不符合題意。故選A。9．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）滅菌、消毒、無菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的操作。下列敘述正確的是（）A．動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無菌條件下進(jìn)行B．微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D．可用濕熱滅菌法對實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌【答案】D【詳解】A、動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取不需要在無菌條件下進(jìn)行，A錯(cuò)誤；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)不能加入抗生素，B錯(cuò)誤；C、一般用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；D、可用濕熱滅菌法對實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。故選D。10．（2022·山東·高考真題）如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡稱雙抗。下列說法錯(cuò)誤的是（

）A．雙抗可同時(shí)與2種抗原結(jié)合B．利用雙抗可以將蛋白類藥物運(yùn)送至靶細(xì)胞C．篩選雙抗時(shí)需使用制備單克隆抗體時(shí)所使用的2種抗原D．同時(shí)注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞【答案】D【詳解】A、根據(jù)抗原和抗體發(fā)生特異性結(jié)合的原理推測，雙抗可同時(shí)與2種抗原結(jié)合，A正確；B、根據(jù)抗原與抗體能夠發(fā)生特異性結(jié)合的特性，利用雙抗可以將蛋白類藥物運(yùn)送至靶細(xì)胞，從而使藥物發(fā)揮相應(yīng)的作用，B正確；C、在兩種不同的抗原刺激下，B細(xì)胞增殖、分化產(chǎn)生不同的漿細(xì)胞分泌形成兩種抗體，因此，篩選雙抗時(shí)需使用制備單克隆抗體時(shí)所使用的2種抗原來進(jìn)行抗原-抗體檢測，從而實(shí)現(xiàn)對雙抗的篩選，C正確；D、同時(shí)注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化形成不同的漿細(xì)胞，而不是分化成產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞，D錯(cuò)誤。故選D。11．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下圖表示利用細(xì)胞融合技術(shù)進(jìn)行基因定位的過程，在人-鼠雜種細(xì)胞中人的染色體會以隨機(jī)方式丟失，通過分析基因產(chǎn)物進(jìn)行基因定位?，F(xiàn)檢測細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4種酶活性，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性。下列相關(guān)敘述正確的有（

）A．加入滅活仙臺病毒的作用是促進(jìn)細(xì)胞融合B．細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別為人-人、人-鼠、鼠-鼠融合細(xì)胞C．芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色上D．胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上【答案】ACD【詳解】A、動(dòng)物細(xì)胞融合過程中，可以利用滅活的仙臺病毒或聚乙二醇作誘導(dǎo)劑促進(jìn)細(xì)胞融合，A正確；B、細(xì)胞Ⅲ中保留了人的X、11、17號染色體，故不會是鼠-鼠融合細(xì)胞，B錯(cuò)誤；CD、根據(jù)分析可知，芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色上，胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上，CD正確。故選ACD。12．（2022·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：（一）紅曲霉合成的紅曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者進(jìn)行了紅曲色素的提取及紅色素的含量測定實(shí)驗(yàn)，流程如下：(1)取紅曲霉菌種斜面，加適量洗下菌苔，制成菌懸液并培養(yǎng)，解除休眠獲得菌種。經(jīng)液體發(fā)酵，收集紅曲霉菌絲體，紅曲霉菌絲體與70%乙醇溶液混合，經(jīng)浸提、，獲得的上清液即為紅曲色素提取液。為進(jìn)一步提高紅曲色素得率，可將紅曲霉細(xì)胞進(jìn)行處理。(2)紅曲色素包括紅色素、黃色素和橙黃色素等，紅色素在390nm、420nm和505nm波長處均有較大吸收峰。用光電比色法測定紅曲色素提取液甲的紅色素含量時(shí)，通常選用505nm波長測定的原因是。測定時(shí)需用作空白對照。(3)生產(chǎn)上提取紅曲色素后的殘?jiān)?，?jīng)處理后作為飼料添加劑或有機(jī)肥，這屬于廢棄物的無害化和處理。（二）我國在新冠疫情方面取得了顯著的成效，但全球疫情形勢仍然非常嚴(yán)峻、尤其是病毒出現(xiàn)了新變異株——德爾塔、奧密克戎，更是威脅著全人類的生命健康。(4)新冠病毒核酸定性檢測原理是：以新冠病毒的單鏈RNA為模板，利用酶合成DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增，然后在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入特異的，如果檢測到特異的雜交分子則核酸檢測為陽性。(5)接種疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段。腺病毒疫苗的制備技術(shù)要點(diǎn)是：將腺病毒的復(fù)制基因敲除；以新冠病毒的基因?yàn)槟０搴铣傻腄NA插入腺病毒基因組，構(gòu)建重組腺病毒。重組腺病毒在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生新冠病毒抗原，從而引發(fā)特異性免疫反應(yīng)。在此過程中，腺病毒的作用是作為基因工程中目的基因的。將腺病毒復(fù)制基因敲除的目的是。(6)單克隆抗體有望用于治療新冠肺炎。單克隆抗體的制備原理是：取免疫陽性小鼠的細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)，使其融合，最后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。與植物組織培養(yǎng)相比，雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)需要特殊的成分，如胰島素和?！敬鸢浮?1)無菌水活化離心破碎(2)其它色素對該波長光的吸收相對較少，干擾相對較小70%乙醇溶液(3)滅菌資源化(4)逆轉(zhuǎn)錄核酸探針(5)抗原載體使腺病毒失去復(fù)制能力(6)脾動(dòng)物血清【詳解】（1）防止污染，洗菌苔可加適量的無菌水，制成菌懸液并培養(yǎng)，解除休眠獲得活化菌種。紅曲霉菌絲體與70%乙醇溶液混合，經(jīng)浸提、離心，獲得的上清液即為紅曲色素提取液。為進(jìn)一步提高紅曲色素得率，可將紅曲霉細(xì)胞進(jìn)行破碎處理，使細(xì)胞內(nèi)的紅曲色素釋放出來。（2）用光電比色法測定紅曲色素提取液甲的紅色素含量時(shí)，通常選用505nm波長測定的原因是其它色素對該波長光的吸收相對較少，干擾相對較小。由于提取紅曲色素是用的70%乙醇溶液，故測定時(shí)需用70%乙醇溶液作空白對照。（3）生產(chǎn)上提取紅曲色素后的殘?jiān)?jīng)滅菌處理殘?jiān)?，作為飼料添加劑或有機(jī)肥，這屬于廢棄物的無害化和資源化處理。（4）RNA做模板合成DNA，利用逆轉(zhuǎn)錄酶；PCR擴(kuò)增，然后在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入特異的核酸探針，檢測新冠病毒核酸。如果檢測到特異的雜交分子則核酸檢測為陽性。（5）腺病毒疫苗的制備技術(shù)要點(diǎn)是：將腺病毒的復(fù)制基因敲除；以新冠病毒的抗原基因?yàn)槟０搴铣傻腄NA插入腺病毒基因組，構(gòu)建重組腺病毒。重組腺病毒在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生新冠病毒抗原，從而引發(fā)特異性免疫反應(yīng)。在此過程中，腺病毒的作用是作為基因工程中目的基因的載體。將腺病毒復(fù)制基因敲除的目的是使腺病毒失去復(fù)制能力。（6）單克隆抗體的制備原理是：取免疫陽性小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)，使其融合，最后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。與植物組織培養(yǎng)相比，雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)需要特殊的成分，如胰島素和動(dòng)物血清。13．（2022·福建·統(tǒng)考高考真題）美西螈具有很強(qiáng)的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細(xì)胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細(xì)胞的作用機(jī)制，科研人員制備了抗巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下?；卮鹣铝袉栴}：（一）基因工程抗原的制備(1)根據(jù)美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR擴(kuò)增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3’—OH與加入的脫氧核苷酸的5’—P形成磷酸二酯鍵，則新合成鏈的延伸方向是（填“5’→3’”或“3’→5’”）。

(2)載體和CD14片段的酶切位點(diǎn)及相應(yīng)的酶切抗性基因序列如圖1所示。用XhoI和Sal1分別酶切CD14和載體后連接，CD14接入載體時(shí)會形成正向連接和反向連接的兩種重組DNA．可進(jìn)一步用這兩種限制酶對CD14的連接方向進(jìn)行鑒定，理由是。培養(yǎng)能表達(dá)CD14蛋白的大腸桿菌，分離純化目的蛋白。（二）抗CD14單克隆抗體的制備流程如圖2所示：

(3)步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射和。(4)步驟②所用的SP2/0細(xì)胞的生長特點(diǎn)是。(5)吸?、壑械纳锨逡旱舰艿呐囵B(yǎng)孔中，根據(jù)抗原—抗體雜交原理，需加入①進(jìn)行專一抗體檢測，檢測過程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細(xì)胞不能分泌抗CD14抗體，原因是②。(6)步驟⑥從中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測巨噬細(xì)胞?！敬鸢浮?1)5'→3'(2)正向連接的重組DNA有這兩種酶切位點(diǎn)（限制酶的識別序列）；而反向連接的重組DNA會形成新的序列，沒有這兩種酶的酶切位點(diǎn)（沒有限制酶的識別序列）(3)CD14蛋白/CD14抗原分泌抗CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞(4)能在體外無限增殖(5)CD14蛋白參與形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體(6)小鼠腹水【詳解】（1）PCR擴(kuò)增時(shí)，DNA聚合酶催化引物的3'-OH與加入的脫氧核苷酸的5'-P形成磷酸二酯鍵，因此新鏈合成的方向是從5'→3'。（2）可進(jìn)一步用限制酶XhoⅠ和SalⅠ對CD14的連接方向進(jìn)行鑒定，是因?yàn)檎蜻B接的重組DNA有這兩種酶切位點(diǎn)（限制酶的識別序列）；而反向連接的重組DNA會形成新的序列，沒有這兩種酶的酶切位點(diǎn)（沒有限制酶的識別序列）。（3）步驟①是注射特定抗原，針對本實(shí)驗(yàn)?zāi)康目芍@得抗CD14單克隆抗體，故應(yīng)該注射CD14蛋白/CD14抗原；步驟⑤是將分泌抗CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞注入小鼠體內(nèi)培養(yǎng)，以獲得大量單克隆抗體。（4）步驟②所用的SP2/0細(xì)胞是骨髓瘤細(xì)胞，特點(diǎn)是能在體外無限增殖。（5）根據(jù)抗原—抗體雜交原理，應(yīng)該用CD14蛋白檢測其中是否含抗CD14蛋白的抗體。因?yàn)樾纬呻s交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類很多，因此有些雜交瘤細(xì)胞不能分泌抗CD14抗體。（6）從制備單克隆抗體的流程可知，將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔后，最終要從小鼠的腹水中提取抗CD14抗體。14．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1(1)構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時(shí)，選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，目的是。用脂質(zhì)體將重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞，質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體（填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”）。(2)質(zhì)粒在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。Ⅱ．N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2(3)用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠脾組織用酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有混合氣體的中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。(4)用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行培養(yǎng)。用技術(shù)檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集，提取單克隆抗體。(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成，實(shí)現(xiàn)特異性治療。【答案】(1)檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞雙分子層中(2)蛋白質(zhì)外殼和含N蛋白胞外段基因的核酸(3)胰蛋白酶或膠原蛋白CO2培養(yǎng)箱(4)克隆化抗原抗體雜交細(xì)胞培養(yǎng)液(5)抗體-藥物偶聯(lián)物/ADC【詳解】（1）構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時(shí)，為檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，常選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因。重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞需要依賴膜融合，故質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體雙分子層中（即磷脂雙分子層）。（2）由于目的基因?yàn)镹蛋白胞外段基因，在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由蛋白質(zhì)外殼和含有N蛋白胞外段基因的核酸組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。（3）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要取小鼠脾組織用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有95%空氣和5%的CO2混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（4）用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。用抗原抗體雜交技術(shù)檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集細(xì)胞培養(yǎng)液，提取單克隆抗體。（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成抗體-藥物偶聯(lián)物ADC，實(shí)現(xiàn)特異性治療。15．（2022·海南·統(tǒng)考高考真題）以我國科學(xué)家為主的科研團(tuán)隊(duì)將OSNL（即4個(gè)基因Oct4／Sox2／Nanog／Lin28A的縮寫）導(dǎo)入黑羽雞胚成纖維細(xì)胞（CEFs），誘導(dǎo)其重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs），然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中，最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代，實(shí)驗(yàn)流程如圖?；卮鹣铝袉栴}。(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的，為了獲得單細(xì)胞懸液，雞胚組織剪碎后需用處理。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加等天然成分，以滿足細(xì)胞對某些細(xì)胞因子的需求。(2)體外獲取OSNL的方法有（答出1種即可）。若要在CEFs中表達(dá)外源基因的蛋白，需構(gòu)建基因表達(dá)載體，載體中除含有目的基因和標(biāo)記基因外，還須有啟動(dòng)子和等。啟動(dòng)子是識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)。(3)iPS細(xì)胞和iPGCs細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是。(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的主要區(qū)別是。(5)該實(shí)驗(yàn)流程中用到的生物技術(shù)有（答出2點(diǎn)即可）?！敬鸢浮?1)胰蛋白酶、膠原蛋白酶等動(dòng)物血清(2)PCR技術(shù)、人工合成法終止子RNA聚合酶目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終表達(dá)出所需要的蛋白質(zhì)(3)基因的選擇性表達(dá)(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)是將已經(jīng)分化的細(xì)胞誘導(dǎo)為類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs）的技術(shù)，而細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞內(nèi)，使這個(gè)重組的細(xì)胞發(fā)育為胚胎，繼而發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)(5)基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)【詳解】（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，雞胚組織剪碎后需用胰蛋白酶處理，以獲得單細(xì)胞懸液。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)一般需要在合成培養(yǎng)基中添加血清等天然成分，以滿足細(xì)胞對某些細(xì)胞因子的需求。（2）OSNL為目的基因，體外獲取目的基因可通過PCR技術(shù)大量擴(kuò)增或通過人工合成法來合成?；虮磉_(dá)載體中除目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因等。啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。（3）據(jù)圖可知，由iPS細(xì)胞誘導(dǎo)形成iPGCs細(xì)胞經(jīng)過了細(xì)胞分化，該過程遺傳物質(zhì)沒有改變，導(dǎo)致其細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是基因的選擇性表達(dá)。（4）誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)是將已經(jīng)分化的細(xì)胞誘導(dǎo)為類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs）的技術(shù)，而細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞內(nèi)，使這個(gè)重組的細(xì)胞發(fā)育為胚胎，繼而發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。（5）由圖可知，該實(shí)驗(yàn)流程中將OSNL基因?qū)腚u胚成纖維細(xì)胞利用了基因工程技術(shù)，誘導(dǎo)多能干細(xì)胞過程利用了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的技術(shù)?！?021年高考真題〗16．（2021·湖北·統(tǒng)考高考真題）自青霉素被發(fā)現(xiàn)以來，抗生素對疾病治療起了重要作用。目前抗生素的不合理使用已經(jīng)引起人們的關(guān)注。下列關(guān)于抗生素使用的敘述，正確的是（

）A．作用機(jī)制不同的抗生素同時(shí)使用，可提高對疾病的治療效果B．青霉素能直接殺死細(xì)菌，從而達(dá)到治療疾病的目的C．畜牧業(yè)中為了防止牲畜生病可大量使用抗生素D．定期服用抗生素可預(yù)防病菌引起的腸道疾病【答案】A【詳解】A、結(jié)合分析可知，抗生素的作用機(jī)理主要有四個(gè)方面，作用機(jī)制不同的抗生素同時(shí)使用，可從不同方面對于病原體進(jìn)行防治，故可提高對疾病的治療效果，A正確；B、青霉素殺死細(xì)菌可能是通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成或增強(qiáng)細(xì)菌細(xì)胞膜通透性等途徑實(shí)現(xiàn)的，不是直接殺死細(xì)菌，B錯(cuò)誤；C、抗生素大量使用會導(dǎo)致耐藥菌等的出現(xiàn)，不利于牲畜疾病的防控，C錯(cuò)誤；D、定期服用抗生素會導(dǎo)致耐藥菌等的出現(xiàn)，不能用于預(yù)防病菌引起的腸道疾病，D錯(cuò)誤。故選A。17．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）一個(gè)抗原往往有多個(gè)不同的抗原決定簇，一個(gè)抗原決定簇只能刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內(nèi)，可利用該小鼠的免疫細(xì)胞制備抗p72的單抗，也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗。下列說法正確的是（）A．注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大B．單抗制備過程中通常將分離出的漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合C．利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗D．p72部分結(jié)構(gòu)改變后會出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的情況【答案】D【詳解】A、單抗的制作需要篩選，而多抗不需要篩選，抗原純度越高，產(chǎn)生的多抗純度越高，因此原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響小，A錯(cuò)誤；B、單抗制備過程中通常將經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，B錯(cuò)誤；C、非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72上有多種抗原決定簇，一個(gè)抗決定簇只能刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體，所以向小鼠體內(nèi)注入p72后，可以刺激小鼠產(chǎn)生多種抗p72的單抗，C錯(cuò)誤；D、p72部分結(jié)構(gòu)改變只改變了部分抗原決定簇，因此由這部分抗原決定簇產(chǎn)生的抗體失效，但由于還存在由其他抗原決定簇刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體，所以多抗仍有效，D正確。故選D。18．（2021·浙江·統(tǒng)考高考真題）下圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述正確的是（）A．步驟①的操作不需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行B．步驟②中用鹽酸溶解細(xì)胞間物質(zhì)使細(xì)胞分離C．步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理D．步驟④培養(yǎng)過程中不會發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化【答案】C【詳解】A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程需要無菌操作，故步驟①的操作需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行，A錯(cuò)誤；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動(dòng)物組織，分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，B錯(cuò)誤；C、傳代培養(yǎng)時(shí)需要用胰蛋白酶處理貼壁生長的細(xì)胞，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，再分瓶培養(yǎng)，C正確；D、步驟④為傳代培養(yǎng)過程，該過程中部分細(xì)胞可能發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化，核型改變，D錯(cuò)誤。故選C。19．（2021·重慶·高考真題）為了研究PDCD4基因?qū)π∈笞訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。(1)取小鼠子宮時(shí)，為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行處理；子宮取出剪碎后，用處理一定時(shí)間，可獲得分散的子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞，再分離獲得基質(zhì)細(xì)胞用于培養(yǎng)。(2)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有（填寫兩種）；培養(yǎng)箱中CO2濃度為5%，其主要作用是。(3)在含PDCD4基因的表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的作用是。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對照組，分別為。經(jīng)檢測，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對照組，說明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有（填“抑制”或“促進(jìn)”）作用?！敬鸢浮?1)滅菌胰蛋白酶或膠原蛋白酶(2)無機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長因子、血清或血漿（填寫兩種即可）維持培養(yǎng)液的pH值(3)RNA聚合酶的識別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA基質(zhì)細(xì)胞懸浮液、空載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液促進(jìn)【詳解】（1）為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行滅菌處理；動(dòng)物組織取出剪碎后，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理一定時(shí)間，可獲得分散的動(dòng)物組織細(xì)胞。（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有無機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長因子、血清或血漿等；培養(yǎng)箱中為95%的空氣和5%的CO2，其中5%的CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH值。（3）啟動(dòng)子是RNA聚合酶的識別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對照組，分別為基質(zhì)細(xì)胞懸浮液（空白對照）、空載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液（排除空載體的作用）。經(jīng)檢測，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對照組，說明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用。20．（2021·江蘇·高考真題）根據(jù)新冠病毒致病機(jī)制及人體免疫反應(yīng)特征研制新冠疫苗，廣泛接種疫苗可以快速建立免疫屏障，阻擊病毒擴(kuò)大。圖1為新冠病毒入侵細(xì)胞后的增殖示意圖，圖2為人體免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體的一般規(guī)律示意圖。請據(jù)圖回答下列問題。(1)圖1中，新冠病毒通過S蛋白與細(xì)胞表面的ACE2受體結(jié)合，侵入細(xì)胞釋放出病毒的（+）RNA，在宿主細(xì)胞中經(jīng)合成病毒的RNA聚合酶。(2)在RNA聚合酶的作用下，病毒利用宿主細(xì)胞中的原料，按照原則合成（-）RNA。隨后大量合成新的（+）RNA。再以這些RNA為模板，分別在大量合成病毒的N蛋白和S、M、E蛋白。(3)制備病毒滅活疫苗時(shí)，先大量培養(yǎng)表達(dá)的細(xì)胞，再接入新冠病毒擴(kuò)大培養(yǎng)，滅活處理后制備疫苗。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需通入CO2，其作用是。(4)制備S蛋白的mRNA疫苗時(shí)，體外制備的mRNA常用脂質(zhì)分子包裹后才用于接種。原因一是人體血液和組織中廣泛存在，極易將裸露的mRNA水解，二是外源mRNA分子不易進(jìn)入人體細(xì)胞產(chǎn)生抗原。(5)第一次接種疫苗后，人體內(nèi)識別到S蛋白的B細(xì)胞，經(jīng)過增殖和分化，形成的細(xì)胞可合成并分泌特異性識別的IgM和IgG抗體（見圖2），形成的細(xì)胞等再次接觸到S蛋白時(shí)，發(fā)揮免疫保護(hù)作用。(6)有些疫苗需要進(jìn)行第二次接種，據(jù)圖2分析進(jìn)行二次接種的意義是?！敬鸢浮?1)翻譯(2)堿基互補(bǔ)配對游離核糖體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體(3)ACE2受體維持培養(yǎng)液的酸堿度(4)RNA酶(5)漿新冠病毒S蛋白記憶(6)激發(fā)再次應(yīng)答在人體內(nèi)產(chǎn)生更多維持時(shí)間更長的抗體,并儲備更多的記憶細(xì)胞【詳解】（1）結(jié)合分析可知，新冠病毒侵入細(xì)胞后釋放出病毒的（+）RNA，在宿主細(xì)胞中經(jīng)翻譯合成病毒的RNA聚合酶。（2）在RNA聚合酶的作用下，病毒利用宿主細(xì)胞中的原料，按照堿基互補(bǔ)配對原則合成（-）RNA；隨后再通過復(fù)制合成大量新的（+）RNA，再以這些RNA為模板，分別在游離核糖體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體大量合成病毒的N蛋白和S、M、E蛋白。（3）病毒表面的蛋白質(zhì)可作為抗原激發(fā)機(jī)體的特異性免疫過程，制備新冠病毒滅活疫苗時(shí)，先大量培養(yǎng)能夠表達(dá)ACE2受體的細(xì)胞，再接入新冠病毒擴(kuò)大培養(yǎng)，經(jīng)滅活處理后制備疫苗；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)常需通入CO2，其目的是維持培養(yǎng)液的酸堿度。（4）由于人體血液和組織中廣泛存在RNA酶極易將裸露的mRNA水解，另外外源mRNA分子不易進(jìn)入人體細(xì)胞產(chǎn)生抗原，因此，制備S蛋白的mRNA疫苗時(shí)，體外制備的mRNA常用脂質(zhì)分子包裹后才用于接種。（5）第一次接種疫苗后，刺激B細(xì)胞增殖和分化，形成的漿細(xì)胞可合成并分泌特異性識別新冠病毒S蛋白的IgM和IgG抗體，并產(chǎn)生記憶細(xì)胞；當(dāng)再次接觸到S蛋白時(shí)，記憶細(xì)胞增殖分化，產(chǎn)生大量漿細(xì)胞，分泌大量抗體，發(fā)揮免疫保護(hù)作用。（6）進(jìn)行二次接種的意義：激發(fā)再次應(yīng)答在人體內(nèi)產(chǎn)生更多維持時(shí)間更長的抗體,并儲備更多的記憶細(xì)胞。21．（2021·湖南·統(tǒng)考高考真題）M基因編碼的M蛋白在動(dòng)物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)。現(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物A，流程如圖所示。回答下列問題：（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是，這類酶能將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的斷開。（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是。（3）與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細(xì)胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為（答出兩點(diǎn)即可），功能上具有。（4）鑒定轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：以免疫小鼠的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，篩選融合雜種細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡要寫出利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M基因是否失活的實(shí)驗(yàn)思路。【答案】限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）磷酸二酯鍵清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害，同時(shí)給細(xì)胞提供足夠的營養(yǎng)動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對容易，動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯（任選兩點(diǎn)作答）發(fā)育的全能性B取動(dòng)物A和克隆動(dòng)物A的肝組織細(xì)胞，分別提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交【詳解】（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶），故在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）。限制性內(nèi)切核酸內(nèi)切酶是作用于其所識別序列中兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。不同的限制酶可以獲得不同的末端，主要分為黏性末端和平末端。（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。（3）由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對容易，動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難，故與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率低。胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。（4）先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體；若要利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M基因是否失活，如果M基因已經(jīng)失活，則克隆動(dòng)物A中無法產(chǎn)生M蛋白的單克隆抗體，則可利用抗原—抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測。故實(shí)驗(yàn)思路為：取動(dòng)物A和克隆動(dòng)物A的肝組織細(xì)胞，分別提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交?！?020年高考真題〗22．（2020·海南·統(tǒng)考高考真題）將人細(xì)胞與小鼠細(xì)胞融合得到的人-鼠雜種細(xì)胞進(jìn)行長期培養(yǎng)，雜種細(xì)胞隨機(jī)丟失一部分人的染色體后，染色體數(shù)目會保持穩(wěn)定。選取三種雜種細(xì)胞，對編碼人的芳烴羥化酶（AHH）和磷酸甘油酸激酶（PGK）的基因進(jìn)行染色體定位研究，結(jié)果如表（“+”表示有，“-”表示無）。雜種細(xì)胞人的染色體AHHPGK2號11號17號X甲－＋－＋－＋乙＋＋－－＋－丙－＋＋＋－＋下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．聚乙二醇可誘導(dǎo)入細(xì)胞與小鼠細(xì)胞融合B．培養(yǎng)雜種細(xì)胞時(shí)，通常需在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素C．編碼AHH的基因在11號染色體上D．編碼PGK的基因在X染色體上【答案】C【詳解】A、聚乙二醇是誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用化學(xué)試劑，A正確；B、培養(yǎng)雜種細(xì)胞時(shí)，通常需在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防止雜菌污染，B正確；CD、由表中信息可知，編碼AHH的基因在2號染色體上，編碼PGK的基因在X染色體上，C錯(cuò)誤，D正確。故選C。23．（2020·北京·統(tǒng)考高考真題）人體感染新冠病毒后，機(jī)體會產(chǎn)生多種特異性抗體。我國科學(xué)家從康復(fù)者的漿細(xì)胞中克隆出針對病毒表面抗原的抗體基因相關(guān)序列，構(gòu)建表達(dá)載體并在相應(yīng)系統(tǒng)中表達(dá)，可制備出全人源單克隆抗體。以下表述錯(cuò)誤的是（

）A．該單抗可直接用于新冠病毒的核酸檢測B．在該單抗制備過程中利用了基因工程技術(shù)C．該單抗可與新冠病毒相應(yīng)蛋白特異性結(jié)合D．可用抗原-抗體反應(yīng)檢測抗體基因表達(dá)產(chǎn)物【答案】A【詳解】A、單抗檢測病毒是否存在的原理是抗原―抗體雜交，檢測病毒蛋白；直接檢測新冠病毒核酸是分子雜交，檢測是否含有病毒的核酸，所以抗體不能直接檢測核酸，A錯(cuò)誤；B、題意顯示，我國科學(xué)家從康復(fù)者的漿細(xì)胞中克隆出針對病毒表面抗原的抗體基因相關(guān)序列，構(gòu)建表達(dá)載體并在相應(yīng)系統(tǒng)中表達(dá)，制備出全人源單克隆抗體。據(jù)此可推測，在該單抗制備過程中利用了基因工程技術(shù)，B正確；C、針對新冠病毒表面抗原制備出的單抗，可與新冠病毒相應(yīng)蛋白特異性結(jié)合，C正確；D、抗體基因表達(dá)產(chǎn)物檢測的方法是采用抗原―抗體雜交反應(yīng)，若呈陽性，則說明已翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)，D正確。故選A。24．（2020·天津·統(tǒng)考高考真題）在克隆哺乳動(dòng)物過程中，通常作為核移植受體細(xì)胞的是去核的（

）A．卵原細(xì)胞B．初級卵母細(xì)胞C．次級卵母細(xì)胞D．卵細(xì)胞【答案】C【詳解】在克隆哺乳動(dòng)物過程中，通常選擇減數(shù)第二次分裂中期的去核卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，即次級卵母細(xì)胞。故選C。25．（2020·浙江·高考真題）下列關(guān)于病毒的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．有的病毒經(jīng)滅活處理后，可用于細(xì)胞工程中介導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞的融合B．適當(dāng)增加機(jī)體內(nèi)參與免疫的細(xì)胞數(shù)量與活性，可提高對新型冠狀病毒的抵御能力C．在某人的分泌物中檢測到新型冠狀病毒，推測該病毒的增殖不依賴于宿主細(xì)胞D．用高溫高壓處理病毒使其失去感染能力，原因之一是病毒的蛋白質(zhì)發(fā)生了熱變性【答案】C【詳解】A、有的病毒經(jīng)滅活處理后，可用于細(xì)胞工程中介導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞的融合，如滅活的病毒，A正確；B、適當(dāng)增加機(jī)體內(nèi)參與免疫的細(xì)胞數(shù)量與活性，可以參與免疫調(diào)節(jié)中的體液和細(xì)胞免疫，盡可能殺死更多的病毒，可提高對新型冠狀病毒的抵御能力，B正確；C、在某人的分泌物中檢測到新型冠狀病毒，是因?yàn)椴《窘爰?xì)胞后大量繁殖，病毒從細(xì)胞中釋放出來，不能說明該病毒的增殖不依賴于宿主細(xì)胞，C錯(cuò)誤；D、用高溫高壓處理病毒使其失去感染能力，原因之一是病毒的蛋白質(zhì)在高溫高壓下，空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，肽鏈松散，發(fā)生了變性，D正確。故選C。26．（2020·江蘇·統(tǒng)考高考真題）新型冠狀病毒可通過表面的棘突蛋白（S蛋白）與人呼吸道黏膜上皮細(xì)胞的ACE2受體結(jié)合，侵入人體，引起肺炎。圖1為病毒侵入后，人體內(nèi)發(fā)生的部分免疫反應(yīng)示意圖。單克隆抗體可阻斷病毒的粘附或入侵，故抗體藥物的研發(fā)已成為治療新冠肺炎的研究熱點(diǎn)之一。圖2為篩選、制備抗S蛋白單克隆抗體的示意圖。請據(jù)圖回答下列問題：（1）圖1中人體內(nèi)抗原遞呈細(xì)胞吞噬病毒，并將病毒的抗原暴露在細(xì)胞表面，被細(xì)胞表面的受體識別后激活該細(xì)胞。（2）B細(xì)胞識別入侵的病毒后，在淋巴因子作用下，經(jīng)過細(xì)胞的，形成細(xì)胞。（3）為判斷疑似患者是否為新型冠狀病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原學(xué)檢查，檢測病毒的；采集血液樣本主要用于血清學(xué)檢查，檢測。（4）據(jù)圖2所示，研制抗S蛋白單克隆抗體，需先注射免疫小鼠以激活小鼠的免疫細(xì)胞，再提取激活的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，用HAT培養(yǎng)基篩選獲得細(xì)胞。因?yàn)橥环N抗原可能激活細(xì)胞，還需繼續(xù)篩選才能獲得分泌單克隆抗體的細(xì)胞株?！敬鸢浮縏增殖、分化漿細(xì)胞和記憶核酸抗新型冠狀病毒抗體棘突蛋白（或S蛋白）雜交瘤多種B【詳解】（1）據(jù)題圖1可知，人體內(nèi)抗原遞呈細(xì)胞吞噬新冠病毒，并將新冠病毒的抗原暴露，呈遞給T細(xì)胞，被T細(xì)胞表面的受體識別后激活T細(xì)胞；（2）激活的T細(xì)胞釋放淋巴因子，并將抗原呈遞給B細(xì)胞，B細(xì)胞識別入侵的病毒后，迅速增殖分化成漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞；（3）臨床上為判斷疑似患者是否為新型冠狀病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原學(xué)檢查，檢測疑似患者的呼吸道是否有新冠病毒的核酸，采集血液樣本主要用于血清學(xué)檢查，檢測血清中是否產(chǎn)生抗新型冠狀病毒的抗體；（4）據(jù)題中圖2所示，結(jié)合單克隆抗體制備方法，要研制抗棘突蛋白單克隆抗體，需先注射新冠病毒的棘突蛋白（或S蛋白），以激活小鼠的免疫細(xì)胞，再提取激活的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，獲得融合的、未融合的細(xì)胞，用HAT篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)，未融合的B細(xì)胞不能長期生存而死亡，未融合的骨髓瘤細(xì)胞不能合成DNA而死亡，只有雜交瘤細(xì)胞能成活；由于同一種抗原可能激活多種B細(xì)胞，篩選出的融合的骨髓瘤細(xì)胞就可能分泌多種抗體，還需繼續(xù)篩選才能獲得分泌單克隆抗體的細(xì)胞。27．（2020·全國·統(tǒng)考高考真題）為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學(xué)以小鼠甲為實(shí)驗(yàn)材料設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)流程?；卮鹣铝袉栴}：（1）上述實(shí)驗(yàn)前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是。（2）寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細(xì)胞懸液的主要實(shí)驗(yàn)步驟：。（3）為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，需要進(jìn)行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于，使用該培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果是。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是。（4）若要使能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞大量增殖，可采用的方法有（答出2點(diǎn)即可）。【答案】誘導(dǎo)小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細(xì)胞取小鼠甲脾臟剪碎，用胰蛋白酶處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞，加入培養(yǎng)液制成單細(xì)胞懸液選擇培養(yǎng)基只有雜交瘤細(xì)胞能夠生存抗原與抗體的反應(yīng)具有特異性將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)【詳解】（1）實(shí)驗(yàn)前給小鼠甲注射病毒A，是為了誘導(dǎo)小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細(xì)胞。（2）取小鼠的脾臟，剪碎組織，用胰蛋白酶處理獲得單個(gè)細(xì)胞，加入培養(yǎng)液可以制成單細(xì)胞懸液。（3）圖中篩選1需要用到選擇培養(yǎng)基，只有雜交瘤細(xì)胞可以存活。篩選2是為了獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，該過程要用到抗原抗體雜交，故篩選所依據(jù)的原理是抗原-抗體反應(yīng)具有特異性。（4）獲得能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞后，可以在體外培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，或在小鼠的腹腔中進(jìn)行培養(yǎng)，使雜交瘤細(xì)胞大量增殖。〖2019年高考真題〗30．（2019·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下圖為雜交瘤細(xì)胞制備示意圖。骨髓瘤細(xì)胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT-），在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述正確的是A．可用滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合B．兩兩融合的細(xì)胞都能在HAT培養(yǎng)液中生長C．雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)一步篩選才能用于生產(chǎn)D．細(xì)胞膜的流動(dòng)性是細(xì)胞融合的基礎(chǔ)【答案】ACD【詳解】誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有電激、聚乙二醇、滅活的病毒（如滅活的仙臺病毒）等，A正確；兩兩融合的細(xì)胞包括免疫B細(xì)胞與免疫B細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞、免疫B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞雖然能無限增殖，但缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，免疫B細(xì)胞雖然有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但不具有無限增殖的本領(lǐng)，所以在HAT篩選培養(yǎng)液中，兩兩融合的具有同種核的細(xì)胞都無法生長，只有雜交瘤細(xì)胞才能生長，B錯(cuò)誤；因每個(gè)免疫B細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，因此在HAT篩選培養(yǎng)液中篩選出來的眾多的雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗體，不一定都是人類所需要的，還需要進(jìn)一步把能分泌人類所需要抗體的雜交瘤細(xì)胞篩選出來，C正確；動(dòng)物細(xì)胞融合是以細(xì)胞膜的流動(dòng)性為基礎(chǔ)的，D正確。故選ACD。〖2018年高考真題〗1．（2018·江蘇·高考真題）如圖為細(xì)胞融合的示意圖，下列敘述正確的是（）A．若a細(xì)胞和b細(xì)胞是植物細(xì)胞，需先去分化再誘導(dǎo)融合B．a(chǎn)細(xì)胞和b細(xì)胞之間的融合需要促融處理后才能實(shí)現(xiàn)C．c細(xì)胞的形成與a、b細(xì)胞膜的流動(dòng)性都有關(guān)D．c細(xì)胞將同時(shí)表達(dá)a細(xì)胞和b細(xì)胞中的所有基因【答案】BC【分析】據(jù)圖分析，圖示為細(xì)胞融合的過程，a細(xì)胞與b細(xì)胞融合形成融合細(xì)胞c，c細(xì)胞具有a細(xì)胞和b細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，融合過程常用聚乙二醇進(jìn)行誘導(dǎo)，對于動(dòng)物細(xì)胞融合還可以用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)?！驹斀狻緼、若a細(xì)胞和b細(xì)胞是植物細(xì)胞，應(yīng)該先用酶解法去掉它們的細(xì)胞壁再誘導(dǎo)融合，A錯(cuò)誤；B、無論是動(dòng)物細(xì)胞還是植物細(xì)胞，兩個(gè)細(xì)胞的融合都需要促融處理后才能實(shí)現(xiàn)，B正確；C、兩個(gè)細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞，利用了細(xì)胞膜的流動(dòng)性，C正確；D、c細(xì)胞同時(shí)具備了a細(xì)胞和b細(xì)胞中的所有基因，但是基因是選擇性表達(dá)的，因此c細(xì)胞中基因不一定都能夠表達(dá)，D錯(cuò)誤。故選BC。2．（2018·全國·高考真題）2018年《細(xì)胞》期刊報(bào)道，中國科學(xué)家率先成功地應(yīng)用體細(xì)胞對非人靈長類動(dòng)物進(jìn)行克隆，獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”?；卮鹣铝袉栴}：（1）“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程，核移植是指。通過核移植方法獲得的克隆猴，與核供體相比，克隆猴體細(xì)胞的染色體數(shù)目（填“減半”“加倍”或“不變”）（2）哺乳動(dòng)物的核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，胚胎細(xì)胞核移植獲得克隆動(dòng)物的難度（填“大于”或“小于”）體細(xì)胞核移植，其原因是。（3）在哺乳動(dòng)物核移植的過程中，若分別以雌性個(gè)體和雄性個(gè)體的體細(xì)胞作為核供體，通常，所得到的兩個(gè)克隆動(dòng)物體細(xì)胞的常染色體數(shù)目（填“相同”或“不相同”），性染色體組合（填“相同”或“不相同”）。【答案】將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞核，移入一個(gè)已去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞不變小于胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性相對容易相同不相同【分析】本題主要考查動(dòng)物核移植技術(shù)的有關(guān)知識。動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成為動(dòng)物個(gè)體；哺乳動(dòng)物的核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對容易，而動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難，因此體細(xì)胞核移植難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植；克隆動(dòng)物的細(xì)胞核來自供體，其染色體和供體一致，雌性供體和雄性供體的常染色體相同，性染色體前者是XX，后者是XY?！驹斀狻浚?）核移植是指將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)胚胎最后發(fā)育成為動(dòng)物個(gè)體；通過核移植方法獲得的克隆猴的細(xì)胞核來自供體，因此克隆猴體細(xì)胞的染色體數(shù)目和供體一致；（2）胚胎細(xì)胞核移植的難度小于體細(xì)胞核移植，其原因是動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對容易；（3）哺乳動(dòng)物雌性個(gè)體和雄性個(gè)體的體細(xì)胞染色體常染色體相同，性染色體前者是XX，后者是XY，因此分別以雌性個(gè)體和雄性個(gè)體的體細(xì)胞作為核供體，通常所得到的兩個(gè)克隆動(dòng)物體細(xì)胞的常染色體數(shù)目相同，性染色體組合不相同。3．（2018·全國·高考真題）某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5′末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱為甲），并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1~E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同?；卮鹣铝袉栴}：（1）據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時(shí)，使用了兩種限制酶，這兩種酶是。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證，也是為了保證。（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了和過程。（3）為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的移入牛的中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定。在鑒定時(shí)應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。【答案】E1和E4甲的完整甲與載體正確連接轉(zhuǎn)錄翻譯細(xì)胞核去核卵母細(xì)胞核DNA【詳解】【分析】本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學(xué)生對基因工程、核移植等相關(guān)知識的識記和理解能力。解答本題需熟記并理解核移植技術(shù)的過程、基因工程的基本操作程序，特別是明確PCR技術(shù)的原理和過程、基因表達(dá)載體的組成及其作用、限制酶的作用等相關(guān)知識并形成清晰的知識網(wǎng)絡(luò)。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合問題情境，從題圖中提取有效信息進(jìn)行相關(guān)問題的解答?！驹斀狻浚?）要保證目的基因在受體細(xì)胞中能夠正確表達(dá)，目的基因的首端應(yīng)有啟動(dòng)子，尾端應(yīng)有終止子。甲是將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5ˊ末端而獲得的L1-GFP融合基因，據(jù)此結(jié)合題意并分析圖示可知：該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時(shí)，如果用E2或E3，則目的基因不完整，而使用E1和E4這兩種限制酶進(jìn)行酶切保證了甲的完整，而且也保證了甲與載體正確連接，因此，使用的兩種限制酶，是E1和E4。（2）構(gòu)建的真核表達(dá)載體P1中含有GFP基因，而GFP基因的表達(dá)產(chǎn)物“某種熒光蛋白（GFP）”在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光。若在導(dǎo)入P1的牛皮膚細(xì)胞中觀察到了