DB2308T 211-2024水稻稻瘟病菌孢子保存技術規(guī)范

ICS65.020.20CCSB05DB2308佳木斯市市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB2308/T211—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由佳木斯市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件由佳木斯市市場監(jiān)督管理局批準發(fā)布。本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院水稻研究所。本文件主要起草人：王桂玲、宋成艷、陸文靜、韓笑、周雪松。本文件2024年首次發(fā)布。DB2308/T211—2024水稻稻瘟病菌孢子保存技術規(guī)程本文件規(guī)定了佳木斯市水稻稻瘟病病菌定義、使用設備、保存方法等。本文件適用于佳木斯市水稻稻瘟病病菌保存技術，為更深入研究稻瘟病菌提供菌種來源。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1病原物pathogeny稻瘟病菌：無性階段為灰梨孢菌（學名：PyriculariaoryzaeCav.有性階段為灰色大角間座殼菌（學名：MagnaporthegriseaBarr.），屬子囊菌廣大角間座殼屬。3.2水稻莖節(jié)ricestemnodes水稻莖節(jié)是指水稻莖上的特定部位，這些部位是芽與葉的著生處，通常凸出或微凹下，是辨別莖枝的主要特征。以下簡稱稻節(jié)。4材料和用具4.1常用儀器用具常用儀器及用具包括：剪刀、超凈工作臺、小試管（直徑12mm，長100mm）、接種針、培養(yǎng)皿、冰箱、生物顯微鏡、培養(yǎng)箱、高壓滅菌器、干燥滅菌器、醫(yī)用白瓷盤、變色硅膠、普通玻璃干燥器、酒精燈、記號筆，鑷子等。4.2試劑及培養(yǎng)基2DB2308/T211—2024試劑：75%酒精、凡士林。培養(yǎng)基：稻節(jié)。5預保存菌株要求培養(yǎng)在試管斜面培養(yǎng)基上的或培養(yǎng)皿里的菌種，以及高梁粒培養(yǎng)基上的新鮮菌種，都可以使用。6保存方法6.1稻節(jié)采集與備用秋季水稻（普通水稻，不包括彩色水稻等特種稻）收獲時，采集水稻植株較細的莖節(jié)，用剪刀剪成長約3cm～5cm的稻節(jié)，且要求稻節(jié)干凈無病，采集后放在干燥通風處晾干保存?zhèn)溆谩?.2稻節(jié)培養(yǎng)基的制備選保存?zhèn)溆玫母蓛舻竟?jié)，保留節(jié)部，剪成長約0.5cm～1cm的小節(jié)，用蒸餾水洗凈后放在容器內(nèi)，根據(jù)需要放入稻節(jié)數(shù)量，然后加入蒸餾水適量（沒過稻節(jié)以上15cm），加熱煮沸20min后，常溫烝餾水冷過濾至常溫，然后裝入小試管內(nèi)，每管放10個稻節(jié)，蓋上棉塞，放入高壓滅菌器（蒸氣滅菌器）內(nèi)溫度達到121℃,滅菌40min，取出晾涼備用。6.3接種培養(yǎng)在無菌室內(nèi)，把要保存的新鮮菌株切成小的菌塊，接種在稻節(jié)培養(yǎng)基上，在試管上注明菌株編號、接種日期，放入28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待菌絲長滿稻節(jié)后，從培養(yǎng)箱內(nèi)取出放在室內(nèi)通風干燥處。6.4變色硅膠干燥將變色硅膠倒入玻璃培養(yǎng)皿或者瓷盤中，放入烘箱80℃干燥2h至硅膠變?yōu)樯钏{色(干燥的變色硅膠呈深藍色，根據(jù)吸濕量的多少顏色會依次呈淡藍色、藍白色、藍紫色和粉紅色)后冷卻，然后倒入玻璃干燥器中備用。6.5病菌保存準備普通玻璃干燥器（根據(jù)需要準備干燥器型號），在干燥器底部放入變色硅膠(干燥的變色硅膠呈深藍色)，把通風干燥后的小試管5個～10個為一組，用硫酸紙包住試管上部（棉塞部分）扎好，DB2308/T211—2024做上編號標記便于查找，在干燥器磨口處摸上凡士林，蓋上干燥器蓋子，用力壓實，以干燥器磨口處不漏氣為準，最后將干燥器放入低溫（4℃)通風干燥處保存。6.6保存菌種干燥狀態(tài)檢查檢查玻璃干燥器中硅膠顏色的變化，濕度為0時呈深藍色；濕度約為10%時呈淡藍色；濕度約為25%時呈藍白色；濕度約為40%時呈藍紫色；濕度約為50%時呈粉色，菌種保存過程中如果變色硅膠呈粉紅色，表明其吸濕性已經(jīng)很弱，無法繼續(xù)維持所保存菌種的干燥環(huán)