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DB22DB22/T3172.3—2020流感病毒HA和NA基因熒光RT-PCR檢測(cè)第3部分：H3N8亞型馬流感病毒Real-timeRT-PCRdetectiononHAandNAgenesofinfluenzavirusPart3：H3N8subtypeequineinfluenzavirus吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布I1Ct值：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到的設(shè)定的閾值時(shí)所RT-PCR：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reversetranscription-pTaq酶：Taq脫氧核糖核酸聚合酶（Thermusaquatic根據(jù)H3N8亞型馬流感病毒HA基因和NA基因序列設(shè)計(jì)特異引物和探針，探針結(jié)合部位在擴(kuò)增片段內(nèi)部。HA基因和NA基因探針?lè)謩e在5’端標(biāo)記FAM和CY3熒光素作為報(bào)告熒光基團(tuán)，3’端分別標(biāo)記MGB和BHQ1發(fā)出的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)所吸收，儀器檢測(cè)不到熒光信號(hào)；而反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時(shí)，Taq酶發(fā)揮25’–CTCCAAGAGGGGAAGATGCT–3’5’–CTGACCTGGAGGTTCGACTA–3’3將拭子經(jīng)前側(cè)鼻道伸入鼻腔深部蘸取呼吸道黏液，取出后立即放入盛鼻拭子樣品在2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)24h；若需長(zhǎng)期保存，應(yīng)放置-70℃冰箱中，但應(yīng)避在PCR溶液配制區(qū)，反應(yīng)體系配制見(jiàn)表2與表3，每份檢測(cè)樣品的熒光RT-PCR體系為25μL。用旋渦2×RT-PCRBuffer（6.1RTEnzymeMix5U/μL（6.12×RT-PCRBuffer（6.1RTEnzymeMix5U/μL（6.14Ct值均≤30.0，且HA基因

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