水稻品種（系）稻瘟病室內(nèi)和田間抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)范

1DBXX/TXXXX—XXXX水稻品種（系）稻瘟病室內(nèi)和田間抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了水稻品種（系）稻瘟病室內(nèi)和田間抗性鑒定與評價方法的術(shù)語和定義、鑒定方法、內(nèi)容及時期、調(diào)查方法、抗性綜合評價和匯總報告格式。本文件適用于我省省級水稻品種稻瘟病抗病性鑒定與評價試驗，包括在屬于華南早秈類型區(qū)、華南感光晚秈類型區(qū)的水稻品種同一適宜生態(tài)區(qū)進(jìn)行的區(qū)試、綠色通道、聯(lián)合體及引種等試驗。水稻品種（系）的抗病性比較、主導(dǎo)品種的抗病性監(jiān)測及抗病資源的篩選等試驗可參照執(zhí)行。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2646-2014水稻品種試驗稻瘟病抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1病原物（稻瘟病菌）3.1.1稻瘟病riceblast由無性型真菌稻梨孢（無性代：Pyriculariaoryzae；有性代：Magnaportheoryzae）所致的水稻病害。主要包括葉瘟、穗瘟。水稻三葉期后至分蘗盛期，稻苗葉片上發(fā)生的稻瘟病，病菌侵染葉片引起圓形、橢圓形或梭型病斑，嚴(yán)重時使植株枯死。穗瘟panicleblast水稻抽穗后至成熟期，穗頸、枝梗和谷粒發(fā)生的稻瘟病，病菌侵染稻穗致白穗，或增加空秕率，降低千粒重。3.1.2接種體inoculum接種體指用于人工接種鑒定用的稻瘟病菌的分生孢子懸浮液。接種體適用范圍為根據(jù)7個中國鑒別品種劃分的ZA、ZB、ZC、ZD、ZE、ZF、ZG群小種。[來源：參見全國稻瘟病生理小種聯(lián)合試驗組論文]3.2寄主植物（水稻）3.2.12DBXX/TXXXX—XXXX試驗品種（系）testingvariety（line）抗病性鑒定參試的水稻品種（系）。3.2.2感病對照品種susceptiblecontrolvariety抗病性鑒定時選定的當(dāng)?shù)叵鄳?yīng)熟期感病品種。3.2.3誘發(fā)品種diseasespreadervariety在試驗品種（系）和感病對照品種四周種植的用于誘發(fā)稻瘟病發(fā)生的當(dāng)?shù)叵鄳?yīng)熟期高感品種。3.2.4鑒別品種differentialvariety中國稻瘟病聯(lián)合試驗組篩選出的7個品種：Tetep、珍龍13、四豐43、東農(nóng)363、關(guān)東51、合江18、和麗江新團黑谷。用于鑒別與監(jiān)測稻瘟病菌小種群及其變化的一組水稻品種。[來源：參見全國稻瘟病生理小種聯(lián)合試驗組論文]3.3鑒定方法3.3.1抗性鑒定resistanceidentification在水稻生長發(fā)育階段，通過室內(nèi)人工接種、田間病圃自然誘發(fā)等方法感染稻瘟病菌，以確定水稻試驗品種（系）對稻瘟病菌的抗感反應(yīng)類型。室內(nèi)人工接種greenhouseartificialinoculation通過人工控制適宜的發(fā)病條件，在溫室內(nèi)用接種體進(jìn)行水稻苗期葉片人工噴霧接種?？刹皇芴镩g條件和季節(jié)的限制，常年進(jìn)行試驗。田間自然誘發(fā)病圃naturalblastnursery在稻瘟病常發(fā)、重發(fā)區(qū)設(shè)立的通過田間自然誘發(fā)方式進(jìn)行水稻苗期和成株期稻瘟病抗病性評價的鑒定圃。與病圃當(dāng)?shù)厮旧a(chǎn)同期進(jìn)行。鑒定結(jié)果能較準(zhǔn)確反映當(dāng)?shù)禺?dāng)時的實際情況，但對氣候、季節(jié)依賴性強。3.3.2鑒定年限yearsofevaluation根據(jù)試驗?zāi)康膽?yīng)達(dá)到的最低生產(chǎn)周期要求。省級品種（系）試驗?zāi)晗辻earsofprovincialtestingvariety（line）應(yīng)為與區(qū)域試驗同步進(jìn)行的兩個正季生產(chǎn)周期。其它品種（系）試驗?zāi)晗辻earsofnon-provincialtestingvariety（line）不做具體要求，可根據(jù)抗性鑒定目的參照進(jìn)行試驗。4鑒定方法4.1室內(nèi)苗期葉瘟抗性鑒定4.1.1采用室內(nèi)人工接種方法對參試材料進(jìn)行水稻苗期葉瘟接種，創(chuàng)造并保持適宜的發(fā)病條件待其充3DBXX/TXXXX—XXXX分發(fā)病，然后據(jù)其對接種菌株的抗性頻率確定品種（系）的抗性強弱，簡稱抗譜鑒定。對收集的稻瘟病菌單孢進(jìn)行小種鑒定及歸類。根據(jù)廣東稻作區(qū)稻瘟病菌小種發(fā)生比例，選用不少于60個有代表性的單孢分離菌株作為接種體進(jìn)行試驗。年度間接種的菌株與小種比例，應(yīng)根據(jù)田間小種群體變化情況作動態(tài)調(diào)整。每個菌株應(yīng)按均一孢子量進(jìn)行單獨接種。4.1.2接種體制備將單孢分離菌株在酵母淀粉培養(yǎng)基（酵母浸膏2g，可溶性淀粉10g，瓊脂15g～20g，蒸餾水1000ml）試管里培養(yǎng)7d～10d，挑取直徑為2mm的菌絲塊，轉(zhuǎn)接到玉米粒培養(yǎng)基上擴大培養(yǎng)10d～13d，待菌絲長滿玉米粒，用無菌水洗去玉米粒表面的菌絲，將玉米粒薄鋪于消毒的搪瓷盤中，上面覆蓋1層濕紗布，在日光燈下光照培養(yǎng)3d～4d。用無菌水洗下附在玉米粒上的孢子，用2層塑料細(xì)紗網(wǎng)隔去玉米殘渣，即為分生孢子懸浮液接種體。以上菌株培養(yǎng)及產(chǎn)孢均在26℃~28℃下進(jìn)行。在光學(xué)顯微鏡下觀察產(chǎn)孢情況，用血球計數(shù)板測定孢子濃度，用無菌水將孢子懸浮液濃度調(diào)節(jié)至約2×105個孢子/ml，作為苗期噴霧接種的接種體。接種體應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。4.1.3水稻苗準(zhǔn)備參試材料經(jīng)浸種、催芽后，每個材料選取發(fā)芽良好的種子15?！?0粒，按順序分別穴播于盛有肥沃土壤的育苗盆內(nèi)，穴間距為3cm左右；澆水蓋土，保證正常出苗生長。幼苗應(yīng)生長健壯、一致。接種前3d～5d酌施氮肥，保持稻苗嫩綠以利于發(fā)病。試驗設(shè)2次重復(fù)，均為隨機排列。每盆中分別設(shè)抗感對照各1個，通常感病對照品種是廣陸矮4號，抗病對照品種是三黃占2號。同時播種相應(yīng)接種菌株數(shù)量的鑒別品種一套，供每個接種菌株同時接種，作為本次接種菌株小種號的驗證試驗。4.1.4稻苗噴霧接種用單菌株接種。參試材料生長至3葉～4葉期時移至25℃~28℃溫室0.5d后進(jìn)行接菌。按0.8%的體積比濃度在接種體中加入吐溫20（Tween20），混勻后進(jìn)行噴霧接種。用高壓彌霧（壓力：2.0Pa，霧滴的體積中值直徑50μm～100μm）噴霧器將接種體噴灑于稻苗上，接種量以所有葉片上布滿孢子液為限。接種后置于25℃~28℃的溫室內(nèi)，保持相對濕度95%以上遮光保濕24h；然后去除遮光條件，每天定時噴霧清水3次～4次保濕，讓稻苗充分發(fā)病。4.1.5葉瘟病情調(diào)查調(diào)查時間、部位.1調(diào)查時間。接種后7d～10d。當(dāng)感病對照品種的發(fā)病程度大于等于7級時進(jìn)行調(diào)查，共.2調(diào)查部位。參試材料水稻葉片。調(diào)查方法4DBXX/TXXXX—XXXX.1參試材料以發(fā)病最重的稻株的葉片作為其抗性級別。.2每個參試材料、每個菌株記錄1個抗性級別數(shù)值。葉瘟病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)見表1。調(diào)查數(shù)據(jù)記載參見附錄C表C.1。[來源：NY/T2646-2014水稻品種試驗稻瘟病抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)程的內(nèi)容，有修改]表1水稻葉瘟病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)01234典型紡錘形病斑，直徑大于2mm，通常局限在兩葉脈之間，為害面56789注：葉片上無葉瘟，但有葉枕瘟發(fā)生的記作5級。4.1.6室內(nèi)葉瘟抗譜（抗性頻率）計算抗譜（抗性頻率）按式（1）計算?？偪棺V。全部接種菌株的抗性頻率。群抗譜。將接種菌株按鑒別品種劃分的小種群進(jìn)行分組（即ZA、ZB、ZC、ZD、ZE、ZF、ZG以每個小種群為計算單位，分別計算各群的抗性頻率。4.2田間成株期穗瘟抗性鑒定采用田間病圃自然誘發(fā)方法對參試材料進(jìn)行稻瘟病抗性鑒定試驗。主要進(jìn)行水稻黃熟期穗瘟抗性鑒定試驗，同時觀測分蘗期葉瘟抗性情況。4.2.1病圃選擇根據(jù)當(dāng)?shù)貧v年的發(fā)病情況，病圃宜設(shè)置在霧露重、寡日照、晝夜溫差大、結(jié)露時間長、土壤肥力中等、排灌方便的田塊。田塊選好后，應(yīng)盡量保全其原生態(tài)環(huán)境，避免小環(huán)境的人為改變。病圃應(yīng)在小種多樣性豐富、代表性好、年度間鑒定結(jié)果穩(wěn)定可靠、可持續(xù)開展試驗的不同水稻生態(tài)區(qū)域進(jìn)行多點設(shè)置。宜在省內(nèi)的粵北、中北、中南和西南稻作區(qū)進(jìn)行合理設(shè)置。若條件允許，病圃宜安裝適當(dāng)?shù)膰娝F設(shè)施以增加相對濕度利于發(fā)病；宜安裝小型氣象自動記錄儀。4.2.2病圃參試材料插植參試材料經(jīng)浸種、催芽后，按照常規(guī)方法進(jìn)行育秧。約6片～7片葉時進(jìn)行移栽。5DBXX/TXXXX—XXXX本田每個參試材料栽5行，每行6穴，每穴2棵～4棵基本苗，株行距為16.6cm×20.0cm或按當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實際情況進(jìn)行設(shè)置。每幅參試材料四周種植1行誘發(fā)品種，使整個病圃菌源量分布均勻，讓每個參試材料都與誘發(fā)品種相鄰，參見附錄A圖A.1。誘發(fā)品種要注意早、遲熟品種的搭配，滿足不同熟期鑒定材料發(fā)病的需要。可使用CO39（早熟）、廣陸矮4號（早熟）、青六矮（中熟）、珍桂矮（中熟）等2個～3個品種混合作誘發(fā)品種。不同生育期的參試材料之間應(yīng)栽插1個感病對照品種。每10個參試材料間宜栽插1個感病對照品種。試驗設(shè)2次重復(fù)，均為隨機排列。根據(jù)當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實際情況，也可以直播。4.2.3病圃管理播種后須覆蓋農(nóng)膜以防參試材料混亂，防雨水沖刷、防鼠、防鳥。晴天高溫時須揭膜防高溫灼傷秧苗，太陽下山后再蓋，待2葉1心停止蓋膜，讓秧苗暴露在病圃自然環(huán)境中。施肥量略高于當(dāng)?shù)厣a(chǎn)水平，可在水稻抽穗前5d增施一次氮肥。病圃防蟲不防病。紋枯病嚴(yán)重的田塊，可在分蘗中期、破口期各施井岡霉素1次。殺蟲劑的使用根據(jù)病圃內(nèi)害蟲發(fā)生種類和程度而定。田埂的雜草不宜施用除草劑以保護菌源環(huán)境，以利于維持病圃發(fā)病壓力年度間穩(wěn)定。其余均同當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)生產(chǎn)管理。病圃管理基本情況數(shù)據(jù)記載參見附錄C表C.2。4.2.4病圃病情調(diào)查調(diào)查時間、部位.1病圃葉瘟。在水稻分蘗盛期，當(dāng)感病對照品種的發(fā)病程度大于等于7級（高感）時，對參試材料的葉片進(jìn)行病情調(diào)查。.2病圃穗瘟。在水稻黃熟期（約80%穗尖端谷粒成熟時），對參試材料的稻穗進(jìn)行病情調(diào)查。生育期不同的參試材料應(yīng)分批進(jìn)行調(diào)查。調(diào)查方法.1病圃葉瘟。每個參試材料隨機調(diào)查不少于15株，以發(fā)病最重的稻株的葉片作為其抗性級別。共調(diào)查1次。調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)見表1。.2病圃穗瘟。每個參試材料進(jìn)行棋盤式隨機調(diào)查稻穗100穗，記錄100個數(shù)據(jù)，共調(diào)查1次。穗瘟病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)見表2。調(diào)查數(shù)據(jù)記載參見附錄C表C.3。表2水稻穗瘟病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)01僅個別枝梗（含第二次枝梗、第一次枝梗）3僅穗主軸上部發(fā)病，約1/3枝梗（主要為第一次枝梗）發(fā)5796DBXX/TXXXX—XXXX5抗性綜合評價5.1抗性綜合評價依據(jù)5.1.1抗性綜合評價以室內(nèi)葉瘟抗譜鑒定和田間病圃穗瘟鑒定的結(jié)果為依據(jù)。5.1.2室內(nèi)葉瘟抗譜鑒定依據(jù)為總抗譜數(shù)據(jù)（即全部接種菌株的抗譜）。ZB、ZC等優(yōu)勢小種群的葉瘟抗譜和田間病圃的葉瘟數(shù)據(jù)可作為評價參考。5.1.3田間病圃穗瘟鑒定依據(jù)為各個鑒定病圃穗瘟病級數(shù)據(jù)的算術(shù)平均值。5.2抗性綜合評價標(biāo)準(zhǔn)稻瘟病抗性綜合評價標(biāo)準(zhǔn)見表3。將水稻品種（系）劃分為高抗、抗、中抗、中感、感和高感共6個類型。表3水稻稻瘟病抗性綜合評價標(biāo)準(zhǔn)抗感感5.3抗性鑒定數(shù)據(jù)有效性判別5.3.1葉瘟。當(dāng)感病對照品種發(fā)病程度大于等于7級，其余鑒定材料為不同程度的病情反應(yīng)時，該組抗性鑒定數(shù)據(jù)有效。5.3.2穗瘟。當(dāng)感病對照品種穗瘟發(fā)病率大于等于25%，其余鑒定材料為不同程度的病情反應(yīng)時，該組抗性鑒定數(shù)據(jù)有效。5.3.3田間自然誘發(fā)病圃。病圃因異常氣候影響等原因?qū)е抡T發(fā)強度過低，則該批次抗性鑒定數(shù)據(jù)無效，該病圃點的數(shù)據(jù)不計入算術(shù)平均數(shù)作為評價依據(jù)。但可以作為分析該品種（系）稻瘟病抗性鑒定年度間趨勢時的參考。6鑒定材料的處理6.1室內(nèi)人工接種材料的處理應(yīng)將接種后剩余的接種體、調(diào)查后的稻苗作滅菌處理。7DBXX/TXXXX—XXXX6.2田間自然誘發(fā)病圃材料的處理應(yīng)將調(diào)查后的稻株進(jìn)行無害化處理。7匯總報告格式7.1試驗概況概述試驗?zāi)康?、鑒定材料、鑒定方法與評價標(biāo)準(zhǔn)、栽培管理、鑒定單位與主要技術(shù)人員、鑒定日期等基本情況。7.2結(jié)果與分析7.2.1根據(jù)感病對照品種監(jiān)測結(jié)果闡明該批次(年度)抗性鑒定結(jié)果的有效性，再列出相應(yīng)的數(shù)據(jù)表，簡要分析評價各參試品種（系）的抗性表現(xiàn)。最后按照高抗、抗、中抗、中感、感和高感等6個類型對參試水稻品種（系）的稻瘟病抗性做出定性評價。7.2.2省級品種抗性鑒定試驗須符合鑒定年限的要求。年度間抗性綜合評價出現(xiàn)差異且都有效的情況下，以抗性差的結(jié)果作為綜合評價最終結(jié)果。7.2.3水稻稻瘟病抗性鑒定與評價結(jié)果匯總格式見附錄B表B.1。8DBXX/TXXXX—XX