(高清版)DB43∕T 1367-2017 十字花科蔬菜病毒病綜合防控技術(shù)規(guī)程

ICS65.020B16DB43DB43/T1367—2017RegulationforIntegratedPreventionandControlTechnologyoftheCruciferaeVegetableVirusDiseases2017-12-31發(fā)布2018-03-31實施湖南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I Ⅱ 2規(guī)范性引用文件 本標準按照GB/T1.1—2009給出請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本標準起草單位：湖南省植物保護研究所、山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物十字花科蔬菜病毒病綜合防控技術(shù)規(guī)程本標準適用于大白菜、小白菜、蘿卜、結(jié)球甘藍等十字花科蔬菜病毒病的綜合約型、環(huán)境友好型技術(shù)來控制農(nóng)作物病蟲害的植對特定病原物有特殊反應(yīng)或表現(xiàn)特定癥狀的植物稱為鑒別蘿卜感病后，葉片可呈現(xiàn)花葉、皺縮、泡狀、扭曲、蕨葉，重病株畸形、矮化重時葉片皺縮卷曲或畸形，花葉狀皺縮，整株矮縮，老葉片上出現(xiàn)綠色斑駁。成株發(fā)病后，嫩葉表現(xiàn)濃淡不均斑駁，老葉背面有黑的使用角度開展綜合防控，實現(xiàn)蔬菜生產(chǎn)安全、蔬菜生態(tài)環(huán)境安全和盡量不與十字花科作物鄰作，與早、中甘藍地保持一在田間調(diào)查十字花科病毒病發(fā)生情況時，具附錄A(資料性附錄)十字花科蔬菜作物病毒病癥狀大白菜病毒病在大白菜生長的幼苗期和成株期均可染病，但不同時期受侵染后，發(fā)病程度有所差異，侵染越早，發(fā)病越重。大白菜受病毒病侵染后會表現(xiàn)各種癥狀，幼苗期受害后，會出現(xiàn)沿葉脈褪綠，花葉及皺縮，有的有壞死斑，至成株期還可表現(xiàn)孤丁、抽瘋、不能包心、結(jié)球，葉片扭曲畸形、質(zhì)脆、植株矮化(圖A1)。圖A1大白菜病毒病為害癥狀蘿卜感病后，多呈現(xiàn)各種癥狀(圖A2),葉片出現(xiàn)葉色不均勻，深綠和淺綠相間，花葉，濃綠部分常突起呈皰狀，皺縮，有時畸形，有的顯現(xiàn)為淡綠色至黃綠色花葉，有的葉片扭曲、蕨葉，外圍的老葉變黃，葉面皺縮變形，重病株矮化。圖A2蘿卜病毒病為害癥狀小白菜染病后，從心葉發(fā)病，沿葉脈兩側(cè)產(chǎn)生褪綠，葉片呈黃綠相間的花葉，明脈或葉脈呈半透明狀，嚴重時葉片皺縮卷曲或畸形，花葉狀皺縮，整株矮縮，老葉片上出現(xiàn)壞死斑(圖A3)。圖A3小白菜病毒病為害癥狀5附錄B(規(guī)范性附錄)1.病毒摩擦接種方法將少許感染病毒的病葉，放于研缽，加入適量接種緩沖液，充分研磨。用噴粉器將金剛砂(200~400目)撒到待接種葉的表面(也可直接將金剛砂加在研磨液中),在營養(yǎng)缽內(nèi)插上標簽，注明處理及將植株放于溫室(最好22～25℃)。用緩沖液接種植株作對照。將帶毒葉片用接種緩沖液研磨后，采用2.病毒的保存與測定圖B1CM分離物接種至莧色藜上的癥狀(a):枯斑；接種至心葉煙上的癥狀(b):系統(tǒng)花葉。圖B2TNN分離物接種至心葉煙上的癥狀(a):枯斑；接種至三生煙上的癥狀(b):系統(tǒng)花葉。液，加100μLNLS,70℃溫育10min,不時上下顛倒混勻，冰上放置5min,13000r/min離心10min; 7表B3TuMV、CMN、TMN特異性RT-PCR引物反應(yīng)體系引物引物酶(4)反應(yīng)程序TuMV、CMV、TNN的特異性RT-PCR反應(yīng)程序見表B4表B4TuMV、CN、TM的特異性RT-PCR反應(yīng)程序反應(yīng)程序3.瓊脂糖凝膠電泳1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，取5μL擴增反應(yīng)物與2μLSYBRGreenI染料、3uLIoadingbuffer混勻，點入樣孔內(nèi)。電泳緩沖液1×TAE適量，100V,電泳30min。4.目的片段的克隆與分析電泳結(jié)束后，取出瓊脂糖凝膠，使用Alpha凝膠成像系統(tǒng)觀察并拍照記錄。擴增片段與預(yù)期目標條帶大小一致，則為陽性樣品，表明植物葉片中攜帶該病毒，結(jié)果見附錄圖B3、圖B4、圖B5。圖B3十字花科蔬菜作物攜帶TuMV的檢測8圖B4十字花科蔬菜作物攜帶CMV的檢測圖B5十字花科蔬菜作物攜帶TMV的檢測5.病毒分子生物學(xué)檢測所用試劑如下：異硫氰酸胍將1g月桂酰醇(NLS)溶于10mL水中即得10%NLS溶液。20mM(5)硅溶液將60g二氧化硅溶于500mL水中，靜置24h,倒掉