DB52T1661-2022地方雞資源場禽白血病凈化技術規(guī)程

DB52/T1661—2022

地方雞資源場禽白血病凈化技術規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了貴州地方雞資源場禽白血病凈化養(yǎng)殖條件與要求、檢測條件、、凈化流程與方法、種蛋

選留與孵化、凈化效果與評估、無害化處理和養(yǎng)殖檔案記錄等。

本文件適用于貴州地方雞資源場。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標準

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)則和試驗方法

GB13078飼料衛(wèi)生標準

GB18596畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物排放標準

GB/T26436禽白血病診斷技術

NY/T388畜禽場環(huán)境質(zhì)量標準

NY/T680禽白血病病毒p27抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗方法

NY5027畜禽飲用水水質(zhì)

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

貴州地方雞

被列入《國家地方畜禽品種資源目錄》原產(chǎn)于貴州的地方雞品種。

3.2

資源場

從事地方雞品種資源保護或提純復壯的養(yǎng)殖場。

3.3

禽白血病凈化

在貴州地方雞養(yǎng)殖場或指定區(qū)域內(nèi)，對通過持續(xù)監(jiān)測禽白血病陽性感染的地方雞種群，經(jīng)多代次陽

性檢測篩查，淘汰感染陽性個體以實現(xiàn)根除禽白血病的過程。

3.4

禽白血病病毒p27抗原

p27抗原為禽白血病病毒衣殼蛋白，該蛋白在各亞群之間具有高度的同源性和保守性，為群特異性

抗原，禽白血病外源性病毒和“E”亞群內(nèi)源性病毒，在感染細胞后都可產(chǎn)生。

3

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3.5

禽白血病Ab和J亞群病毒

Ab和J亞群病毒為外源性禽白血病病毒的兩個不同亞群,對禽具有較強的致病性。

4養(yǎng)殖條件與要求

4.1資源場養(yǎng)殖環(huán)境空氣質(zhì)量應符合GB3095的規(guī)定；飼料衛(wèi)生應符合GB13078的規(guī)定；飲用水水質(zhì)

應符合NY5027的要求；場環(huán)境質(zhì)量應符合NY/T388的要求。

4.2對實施凈化的核心種雞群要單獨分區(qū)隔離飼養(yǎng)并遠離其他雞群，安排專職人員員管理。

4.3對凈化雞群使用弱毒疫苗的質(zhì)量規(guī)范做到疫苗無外源性禽白血病毒污染。

4.4場區(qū)消毒每周不少于2次。

4.5每天及時清除糞污，并對糞便做無害化處理。

5檢測條件

5.1檢測實驗室用水規(guī)則和檢測方法應符合GB/T6682規(guī)定。

5.2主要試劑與主要儀器見附錄A。

6凈化流程與方法

6.1凈化流程

6.1.1根據(jù)資源場種群規(guī)模，選定一定數(shù)量的擬凈化核心基礎種群，對凈化種雞群群完成生產(chǎn)和繁育性

能測定后，采集每只雞的血清和泄殖腔棉拭子并標記，用禽白血病Ab和J亞群抗體ELISA檢測試劑盒

進行血清感染抗體陽性檢測，同時用禽白血病抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金快速檢檢測試紙條進行血清

和泄殖腔棉拭子進行ALVp27抗原交叉檢測。淘汰陽性雞，陰性種雞人工授精后收集種蛋孵化。

6.1.2對陰性種雞繁育的第一世代1日齡雛雞（出殼24小時以內(nèi)）全部采集胎糞并標記，用禽白血病

抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金快速檢測試紙條進行ALVp27抗原交叉檢測，按全同胞淘汰陽性雛雞及

其對應的種母雞，陰性雛雞按全同胞上籠育雛和育成。

6.1.3第一世代凈化種雞開產(chǎn)初期，全群采集雞血清和泄殖腔棉拭子，用禽白血病病抗原ELISA檢測試

劑盒和膠體金快速檢測試紙條進行ALVp27抗原交叉檢測；公雞采集精液用PCR方法進行ALVp27抗原

檢測。淘汰陽性雞。

6.1.4在留種前的第28周齡～30周齡，全群采集雞泄殖腔棉拭子，同時每只母雞取取2枚種蛋的蛋清，

用禽白血病抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金快速檢測試紙條進行ALVp27抗原交叉檢測；采集公雞精液

用PCR方法進行ALVp27抗原檢測。淘汰陽性雞，陰性種雞進行人工授精，收集種蛋進行孵化。

6.1.5在完成第一世代的禽白血病檢測與凈化后，對2～3個世代次的雞群禽白血血病檢測與凈化從1

日齡雛雞開始，重復6.1.2～6.1.4操作步驟。

6.2樣品采集與處理

6.2.1無菌采集雞泄殖腔棉拭子加入1mL樣品稀釋液后，反復凍融3次待檢。

6.2.2雞翅靜脈無菌采血，用高速離心機分離血清樣品用于檢測。

6.2.3每只種母雞收集2枚種蛋，每枚種蛋吸取1mL蛋清，-20℃反復凍融3次后后用于檢測。

6.2.4將種公雞泄殖腔周圍用酒精棉球擦拭干凈，輕輕按摩其腹部至尾部，待泄殖殖腔外翻時，輕輕擠

4

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壓泄殖腔外緣，將精液接入裝有1mL稀釋液（含青鏈霉素的滅菌PBS液）的滅菌離心管中，混勻后，

離心取上清液用于檢測。

6.2.5當天收集出殼雛雞胎糞，用滅菌指形管按雞只個體分別收集樣品，加入1mL的樣品稀釋液，輕

輕擠壓雛雞的腹部，排出胎糞，裝進樣品管中，用潔凈小棒攪動指形管里胎糞，待混勻經(jīng)反復凍融3

次后吸取上清用于檢測。

6.3檢測凈化技術

6.3.1禽白血病病毒p27抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗方法應符合NY/T680的要求。

6.3.2禽白血病病毒p27抗原PCR特異性檢測方法符合GB/T26436的規(guī)定。

6.3.3禽白血病病毒抗原快速檢測試紙條的操作方法參照試劑盒說明書進行。

6.4凈化檢測要求

6.4.1對用禽白血病病毒p27抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗和膠體金試紙條檢測方法進行交叉檢測時，如同

一檢測樣本雞的血清、泄殖腔棉拭子或蛋清檢測結(jié)果不一致的，均判定為陽性，并做淘汰處理。

6.4.2要加強對雞群的觀察，密切監(jiān)視雞群狀態(tài)，對有疑似臨床癥狀的病雞及已死亡雞要及時淘汰，

并進行無害化處理。

7種蛋選留與孵化

所有留種母雞經(jīng)產(chǎn)的全部種蛋應編號并與母雞編號一一對應，將同一只母雞產(chǎn)的種蛋置于帶有母雞

編號的孵化紙袋或紙盒中，放入孵化器集中孵化。

8凈化效果與評估

8.1對實施凈化后的第三或第四世代核心種群種母雞按10%隨機進行抽檢，若母雞禽白血病A/B亞群、

J亞群血清抗體及p27抗原檢測陽性率在1%以下，公雞精液禽白血病p27抗原檢測全部為陰性，則判定

為資源場核心種群達到禽白血病凈化合格標準。若母雞群禽白血病抗原抗體監(jiān)測陽性率高于1%，則需

要再延續(xù)下一個世代次的凈化。

8.2對資源場商品擴繁種群按10%隨機進行抽檢，若禽白血病p27抗原檢測陽陽性率在7%以內(nèi)，則符合

國家畜禽標準化示范場建設對雞禽白血病的凈化標準要求。

9無害化處理

9.1病死雞的無害化處理應符合農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號的規(guī)定。

9.2雞糞、墊料、污水等廢棄物的無害化處理應符合GB18596的規(guī)定。

10養(yǎng)殖檔案記錄

每批雞應有養(yǎng)殖檔案（附錄B），包括生產(chǎn)、飼料和獸藥使用、消毒、免疫、診療和病死禽無害化

處理等，養(yǎng)殖檔案記錄保存兩年以上。

5

DB52/T1661—2022

A

A

附錄A

（規(guī)范性）

主要試劑與主要儀器

A.1主要試劑：禽白血病Ab和J亞群抗體ELISA檢測試劑盒、禽白血病抗原ELISA檢測試劑盒、禽白

血病病毒抗原膠體金快速檢測試紙條、病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒、2×TaqPCRMasterMix、Tris、

EDTA、核酸染色劑、Marker等。

A.2主要儀器：全自動酶標儀、臺式高速冷凍離心機、超低溫冰箱、紫外可見分光光度計、梯度PCR

儀，核酸電泳系統(tǒng)與凝膠成像分析系統(tǒng)、電泳儀、微量移液器等。

6

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B

B

附錄B

（資料性）

養(yǎng)殖檔案記錄

表B.1生產(chǎn)記錄

禽（產(chǎn)品）

時數(shù)量及來源死淘數(shù)存欄數(shù)

圈舍號原因調(diào)出（出售）記錄人備注

間

數(shù)量來源數(shù)量去向（地點）

表B.2飼料和獸藥使用記錄

停用或

使用時間名稱生產(chǎn)企業(yè)批號/生產(chǎn)日期規(guī)格及用量記錄人備注

休藥時間

7

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表B.3消毒記錄

日期消毒場所消毒藥名稱用藥劑量消毒方法記錄人

表B.4免疫記錄

存欄免疫疫苗名稱生產(chǎn)企批號（有備

時間圈舍號免疫方法免疫劑量記錄人

數(shù)量數(shù)量及規(guī)格業(yè)名稱效期）注

8

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表B.5診療記錄

禽標

圈舍發(fā)病診療用藥用藥用藥停藥休藥出欄執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師

時間識編日齡病因數(shù)量

號數(shù)結(jié)果名稱方法數(shù)量時間期時間（簽名）

碼

表B.6病死禽無害化處理記錄

畜禽標識處理單位或

日期數(shù)量死因處理方法備注

編碼處理人

9

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ICS65.020.30

CCSB01

52

貴州省地方標準

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地方雞資源場禽白血病凈化技術規(guī)程

2022-03-03發(fā)布2022-06-01實施

貴州省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB52/T1661—2022

地方雞資源場禽白血病凈化技術規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了貴州地方雞資源場禽白血病凈化養(yǎng)殖條件與要求、檢測條件、、凈化流程與方法、種蛋

選留與孵化、凈化效果與評估、無害化處理和養(yǎng)殖檔案記錄等。

本文件適用于貴州地方雞資源場。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標準

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)則和試驗方法

GB13078飼料衛(wèi)生標準

GB18596畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物排放標準

GB/T26436禽白血病診斷技術

NY/T388畜禽場環(huán)境質(zhì)量標準

NY/T680禽白血病病毒p27抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗方法

NY5027畜禽飲用水水質(zhì)

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

貴州地方雞

被列入《國家地方畜禽品種資源目錄》原產(chǎn)于貴州的地方雞品種。

3.2

資源場

從事地方雞品種資源保護或提純復壯的養(yǎng)殖場。

3.3

禽白血病凈化

在貴州地方雞養(yǎng)殖場或指定區(qū)域內(nèi)，對通過持續(xù)監(jiān)測禽白血病陽性感染的地方雞種群，經(jīng)多代次陽

性檢測篩查，淘汰感染陽性個體以實現(xiàn)根除禽白血病的過程。

3.4

禽白血病病毒p27抗原

p27抗原為禽白血病病毒衣殼蛋白，該蛋白在各亞群之間具有高度的同源性和保守性，為群特異性

抗原，禽白血病外源性病毒和“E”亞群內(nèi)源性病毒，在感染細胞后都可產(chǎn)生。