微生物學(xué)檢驗技術(shù) 課件 33-3綜合技能訓(xùn)練：痰液標(biāo)本微生物檢驗

綜合技能實訓(xùn)三痰液標(biāo)本微生物檢驗學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握痰液標(biāo)本的正確采集、運(yùn)送和微生物檢驗程序。2．熟悉下呼吸道感染的常見致病菌。3．了解痰液標(biāo)本中常見致病菌的臨床意義。4．具有正確采集痰液標(biāo)本和進(jìn)行痰培養(yǎng)操作的能力。5．能正確選擇試驗項目對痰培養(yǎng)標(biāo)本進(jìn)行微生物檢驗，能正確判斷和分析試驗結(jié)果并發(fā)出檢驗報告。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗思維導(dǎo)圖綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗一、痰液標(biāo)本常見病原菌綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗1、球菌革蘭陽性：金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、腸球菌、厭氧球菌革蘭陰性：腦膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗2、桿菌革蘭陽性：白喉棒狀桿菌、類白喉棒狀桿菌、結(jié)核分枝桿菌、炭疽芽胞桿菌革蘭陰性：單胞菌、大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、百日咳桿菌、軍團(tuán)菌

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗3、其他白念珠菌、隱球菌、曲霉菌、毛霉菌支原體、衣原體

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗二、檢驗方法與程序綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗痰液標(biāo)本的檢驗操作程序見下圖痰液初步報告肉眼觀察及涂片革蘭染色鏡檢合格標(biāo)本培養(yǎng)前處理不合格標(biāo)本拒收及建議重新采集合格標(biāo)本血平板（5%CO2環(huán)境）巧克力平板（5%CO2環(huán)境）麥康凱/中國藍(lán)平板（需氧環(huán)境）CHROMagar（需氧環(huán)境）菌落觀察涂片革蘭染色鏡檢結(jié)合涂片結(jié)果和培養(yǎng)結(jié)果綜合分析挑取可疑菌落純培養(yǎng)細(xì)菌鑒定、藥敏試驗結(jié)果報告綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗1、痰液標(biāo)本的采集1）自然咳痰法2）小兒取痰法3）特殊器械采集法

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗2、痰液標(biāo)本的運(yùn)送痰液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，室溫保存不能超過2h，可選用運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送和保存標(biāo)本，但也不應(yīng)超過48h

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗3、對不合格痰液標(biāo)本的處理對下列不合格的痰液標(biāo)本應(yīng)拒收：痰液標(biāo)本呈水樣或唾液樣；痰涂片白細(xì)胞<10個/LP，上皮細(xì)胞>25個/LP；標(biāo)本放置時間超過2h；未用指定的無菌容器留取痰液。

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗三、培養(yǎng)及鑒定綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗1、涂片檢查痰涂片進(jìn)行革蘭染色后，在低倍鏡下檢測20～40個視野，觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)量的多少來初步判定標(biāo)本是否合格

分級白細(xì)胞（個）/LP上皮細(xì)胞（個）/LPA>25<10B>2510～25C>25>25C10～25>25E<10>25痰標(biāo)本鏡下分類注：A、B標(biāo)本適合培養(yǎng)，C、D、E為不合格標(biāo)本，應(yīng)重新留取標(biāo)本綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗1、涂片檢查一般細(xì)菌涂片檢查：取痰液的膿性或帶血部分制成均勻薄片，進(jìn)行革蘭染色鏡檢，根據(jù)染色性、形態(tài)及排列初步報告。結(jié)核桿菌檢查：取干酪樣或膿性部分的痰液制成厚涂片，抗酸染色后鏡檢，根據(jù)所見結(jié)果報告找到抗酸桿菌或未找到抗酸桿菌。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗1、涂片檢查放線菌及諾卡菌檢查：將痰液用生理鹽水反復(fù)洗滌數(shù)次，如含血液則加蒸餾水溶解紅細(xì)胞，挑取黃色顆粒（硫磺樣顆粒）或不透明的著色斑點(diǎn)，覆以蓋玻片并輕輕壓之，高倍鏡下觀察其結(jié)構(gòu)，若查見革蘭陽性的分枝菌絲、中間部分的菌絲為革蘭陽性、四周放射的末端為革蘭陰性，可報告疑似放線菌；如若見形態(tài)與放線菌相似，但菌絲末端不膨大，加做抗酸染色，呈弱陽性，可報告疑似諾卡菌。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗2、分離培養(yǎng)與鑒定痰培養(yǎng)的前處理痰液的洗凈：將痰加入15～20ml無菌生理鹽水的試管中，振蕩5～10s后靜置，用接種環(huán)將沉淀于管底的膿痰片沾出，放入另一試管內(nèi)，以同樣的方法反復(fù)洗滌3次，將洗滌后痰片接種在培養(yǎng)基上，主要是洗去痰中的正常菌群痰液的均質(zhì)化：向痰液內(nèi)加入等量pH7.6的1％胰酶溶液，置37℃水浴90min，即可使痰液均質(zhì)化而對細(xì)菌培養(yǎng)無影響，此外還可以選用玻璃研磨。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗2、分離培養(yǎng)與鑒定普通細(xì)菌培養(yǎng)：將處理后的痰接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、中國藍(lán)/麥康凱瓊脂平板上，分別放入普通和CO2環(huán)境，35℃培養(yǎng)18～24h后觀察菌落特征。若平板上有細(xì)菌生長，辨別是病原菌還是條件致病菌，是一種菌還是多種菌。若平板上僅有正常菌群生長，則繼續(xù)培養(yǎng)24h再觀察，必要時培養(yǎng)至72h。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗2、分離培養(yǎng)與鑒定嗜肺軍團(tuán)菌培養(yǎng)：將均質(zhì)化的標(biāo)本接種于血瓊脂、巧克力瓊脂和BCYE瓊脂平板上，置35℃，5％～10％CO2環(huán)境中培養(yǎng)。若在上述培養(yǎng)基中24h內(nèi)有細(xì)菌生長，則此菌不是軍團(tuán)菌。如在BCYE平板上48h后生長，而血瓊脂平板和巧克力平板上不生長，此菌可能是軍團(tuán)菌，應(yīng)進(jìn)一步鑒定。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗2、分離培養(yǎng)與鑒定白喉棒狀桿菌培養(yǎng)：將處理好的痰液或假膜接種于呂氏血清斜面、血瓊脂平板和亞碲酸鉀瓊脂平板上，經(jīng)35℃培養(yǎng)16～48h后，分別觀察各種培養(yǎng)基上的菌落特征，如見到典型菌落，經(jīng)形態(tài)學(xué)檢查和生化試驗、毒力試驗證實后報告。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗四、結(jié)果報告綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗1、涂片鏡檢報告革蘭染色：如見到排列成葡萄狀的革蘭陽性球菌，可報告“找到革蘭陽性球菌，形似葡萄球菌”；如見到瓜子仁或矛頭狀、尖端相背成雙排列、有明顯莢膜的革蘭陽性球菌，可報告“找到革蘭陽性雙球菌，形似肺炎鏈球菌”；如見到許多雙球狀、單個排列的革蘭陰性球菌，可報告為“找到革蘭陰性球菌，形似卡他莫拉菌”；如見到革蘭陰性桿菌短肥形且有明顯莢膜，可報告“找到革蘭陰性桿菌，形似肺炎克雷伯菌”；如見到不易識別的細(xì)菌，則報告“找到革蘭×性球（桿）菌”。抗酸染色：見到抗酸陽性桿菌，報告“找到抗酸桿菌”，而不能報告“找到結(jié)核分枝桿菌”。

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗1、涂片鏡檢報告如見到中央部分菌絲為革蘭陽性，而四周放射的末梢菌絲為革蘭陰性，抗酸染色為陰性，可報告“找到革蘭陽性桿菌、疑似放線菌”；如革蘭染色反應(yīng)與放線菌相同，抗酸染色為弱陽性，可報告“找到革蘭陽性桿菌、疑似諾卡菌”。對臨床有特殊要求的標(biāo)本，根據(jù)要求做相應(yīng)染色，根據(jù)鏡下所見報告結(jié)果。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗2、鑒定與藥敏分離培養(yǎng)得到致病菌后，挑取可疑菌落，選擇合適的鑒定卡片，制成適合的麥?zhǔn)暇簼舛?，立即進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥物敏感性試驗。查見病原菌或條件致病菌報告菌名和藥敏結(jié)果，并記錄細(xì)菌數(shù)量，半定量計數(shù)見下表。區(qū)別定植菌或病原菌，應(yīng)結(jié)合患者臨床狀況及診斷進(jìn)行分析。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗2、鑒定與藥敏

分級劃線區(qū)菌落數(shù)量第1區(qū)第2區(qū)第3區(qū)少見（+）<10少量（++）>10<5中等（+++）>10>5<5多量（++++）>10>5>5痰標(biāo)本在平板上的菌落量化指標(biāo)綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗五、臨床意義綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗上呼吸道感染是最常見的呼吸道感染癥，金黃色葡萄球菌、A群鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌以及某些革蘭陰性桿菌等是最常見的病原體。急性細(xì)菌性鼻炎、鼻前庭炎、鼻腔膿腫、鼻中隔膿腫等多由金黃色葡萄球菌、A群鏈球菌和銅綠假單胞菌常引起；慢性鼻竇炎多為需氧菌和厭氧菌混合感染；猩紅熱、風(fēng)濕熱及急性咽炎患者咽拭子?？蓹z出A群鏈球菌。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗下呼吸道感染最常見的疾病是細(xì)菌性肺炎。肺炎鏈球菌是主要病原菌，由流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、革蘭陰性桿菌及軍團(tuán)菌所致肺炎也應(yīng)引起人們的重視。醫(yī)院獲得性肺炎的病原體50%以上是革蘭陰性桿菌，一些條件致病菌和