微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 17項(xiàng)目十七：微生物檢驗(yàn)自動(dòng)化和微型化

項(xiàng)目十七微生物檢驗(yàn)自動(dòng)化和微型化學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握臨床常用微生物自動(dòng)培養(yǎng)系統(tǒng)種類及檢測(cè)原理。1.熟悉微生物數(shù)碼分類原理。2.了解臨床常用自動(dòng)化藥敏試驗(yàn)種類及檢測(cè)原理。3.具有正確自動(dòng)化檢驗(yàn)儀器來檢測(cè)微生物的能力。4．能進(jìn)行臨床常見微生物檢驗(yàn)的自動(dòng)化和微型化操作。思維導(dǎo)圖一、微生物自動(dòng)培養(yǎng)系統(tǒng)（一）自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)

基本原理

（1）放射性物質(zhì)標(biāo)記法

一般采用放射性碳14標(biāo)記法：細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)利用標(biāo)記底物產(chǎn)生含14C的CO2，當(dāng)14C標(biāo)記的CO2量超過界限時(shí)，檢測(cè)器報(bào)告陽性生長(zhǎng)。

（2）二氧化碳感受器

每一血液培養(yǎng)瓶底部都含有Novel顏色感應(yīng)器，當(dāng)血液培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)有微生物生長(zhǎng)釋出之CO2后，感應(yīng)器之酸堿值也跟著改變，從深綠色變?yōu)辄S色，檢測(cè)器報(bào)告陽性。

（3）均質(zhì)熒光技術(shù)

在血培養(yǎng)基內(nèi)含有發(fā)熒光物質(zhì)。微生物生長(zhǎng)代謝過程中產(chǎn)生各種帶電荷的原子團(tuán)，培養(yǎng)瓶發(fā)出的熒光，即可檢測(cè)有細(xì)菌存在。

2．儀器的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑

全自動(dòng)恒溫孵育系統(tǒng)包括恒溫裝置和震蕩培養(yǎng)裝置，儀器培養(yǎng)瓶容量常分為60瓶、120瓶、240瓶等，對(duì)培養(yǎng)瓶進(jìn)行震蕩恒溫培養(yǎng)，溫度常設(shè)為37℃。儀器均配置電腦，在電腦上可設(shè)置培養(yǎng)時(shí)間、溫度等參數(shù)，顯示陽性或陰性瓶所在的位置，及自動(dòng)分析。3．注意事項(xiàng)及結(jié)果報(bào)告制度（1）培養(yǎng)瓶的選擇如果患者未使用抗生素，可選擇一般需氧菌培養(yǎng)瓶，如果已經(jīng)使用抗生素則選用可中和血液中抗生素的培養(yǎng)瓶。如懷疑厭氧菌、L型菌、真菌、分枝桿感染，則選用厭氧菌培養(yǎng)瓶、L型菌培養(yǎng)瓶、真菌培養(yǎng)瓶、分枝桿菌培養(yǎng)瓶。（2）采血時(shí)間對(duì)入院患者中有高熱、寒戰(zhàn)、白細(xì)胞增多或疑有感染者，最好在使用抗生素前采血送檢。住院患者出現(xiàn)發(fā)熱等敗血癥癥狀時(shí)，應(yīng)及時(shí)采血，盡可能在使用抗生素前采血。已使用抗生素的患者最好在下次使用抗生素前采血。（3）采血量采血量一般為血培養(yǎng)瓶中肉湯培養(yǎng)基量的1/4-1/5為宜，成人一般每次采集3-10ml，以8-10ml最佳，小兒一般每次采集1-3ml即可。每天最好采血2-3次，以提高檢出率，并幫助判斷是感染菌或污染菌。（4）采血方法一般多從肘靜脈采血，采集前應(yīng)嚴(yán)格消毒采血部位，采血過程中注意無菌操作，否則易被皮膚表面細(xì)菌污染，導(dǎo)致假陽性。使用真空采血系統(tǒng)，利用配套的一次性使用的無菌采血管，血液因負(fù)壓作用進(jìn)入培養(yǎng)瓶中。（5）標(biāo)本送檢采血后應(yīng)及時(shí)送檢，檢驗(yàn)者收到血培養(yǎng)瓶后應(yīng)盡快上機(jī)。如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將血培養(yǎng)瓶放置室溫保存。（二）自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)

多數(shù)自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)可檢測(cè)血液中的分枝桿菌，目前針對(duì)分枝桿菌有專門的自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)，可對(duì)各類標(biāo)本中的分枝桿菌進(jìn)行培養(yǎng)及檢測(cè)，原理基本同自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)，配套專門的培養(yǎng)瓶。一般將各類標(biāo)本直接送檢，檢驗(yàn)者收到標(biāo)本后，如為清亮的穿刺液標(biāo)本，可直接注入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放入儀器自動(dòng)培養(yǎng)并檢測(cè)。如為痰液等其他含有雜菌或細(xì)胞的標(biāo)本，應(yīng)先進(jìn)行消化、中和等處理后再注入培養(yǎng)瓶，否則會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果。二、微生物鑒定的自動(dòng)化與微型化二、微生物鑒定的自動(dòng)化和微型化（一）微生物數(shù)碼分類原理1．?dāng)?shù)據(jù)庫(kù)由許多細(xì)菌條目組成，每個(gè)條目代表一個(gè)細(xì)菌種或一個(gè)細(xì)菌生物型。2．編碼將細(xì)菌生化反應(yīng)模式轉(zhuǎn)換成數(shù)學(xué)模式，可把生化反應(yīng)結(jié)果快速轉(zhuǎn)錄成數(shù)字（編碼），經(jīng)查閱編碼檢索本或電腦分析系統(tǒng)又可將數(shù)字轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的細(xì)菌名稱。3．查碼在編碼檢索本內(nèi)尋找數(shù)碼信息：如菌名，鑒定結(jié)果的評(píng)價(jià)，生化結(jié)果，陽性百分率，必須增加的補(bǔ)充試驗(yàn)項(xiàng)目，指出注意要點(diǎn)等。/basis沙雷氏菌屬4．解釋

如果一個(gè)編碼只對(duì)應(yīng)一種細(xì)菌，無論幾率大小，為該種細(xì)菌的可能性(ID%)均為99.99%。如果一個(gè)編碼對(duì)應(yīng)兩種或兩種以上種類的細(xì)菌，應(yīng)計(jì)算每種細(xì)菌出現(xiàn)的幾率所占的百分比ID%。如ID%≥99%，為該種菌的可能性非常大；如ID%≥90%，為該種菌的可能性較大；如ID%≥80%，為該種菌的可能性也較大，但需做補(bǔ)充試驗(yàn)進(jìn)一步確證；如ID%<80%，則一般無法準(zhǔn)確區(qū)分菌種，必須增加多個(gè)補(bǔ)充試驗(yàn)才可得出準(zhǔn)確結(jié)果。（二）微生物自動(dòng)鑒定儀器的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑數(shù)碼分類鑒定系統(tǒng)的組成由鑒定卡、添加試劑及檢索工具配套形成的完整的微生物鑒定體系。（1）鑒定卡常用的生化反應(yīng)有：①發(fā)酵試驗(yàn)；②同化試驗(yàn)；③同化或發(fā)酵抑制試驗(yàn)；④酶試驗(yàn)；⑤其他傳統(tǒng)的生化反應(yīng)。（2）添加試劑：有些試驗(yàn)經(jīng)孵育后需添加試劑才能呈現(xiàn)顏色變化。添加的試劑有配套試劑盒或單種試劑。（3）檢索工具：檢索工具可由電腦自動(dòng)處理并報(bào)告。三、微生物藥敏試驗(yàn)的自動(dòng)化與微型化三、微生物藥敏試驗(yàn)的自動(dòng)化和微型化（一）原理:自動(dòng)化藥敏試驗(yàn)使用藥敏試驗(yàn)卡進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)質(zhì)就是微型化的肉湯稀釋試驗(yàn)。根據(jù)不同的藥物對(duì)不同菌種最低抑菌濃度（minimalinhibitoryconcentration,MIC）的不同，每一種藥物一般選用3種或以上不同藥物濃度，每一藥敏試驗(yàn)卡（板）可同時(shí)檢測(cè)約20種抗生素的藥敏試驗(yàn)結(jié)果。藥敏試驗(yàn)檢測(cè)原理有：光電比濁法測(cè)定細(xì)菌濃度、熒光標(biāo)記法測(cè)定熒光強(qiáng)度的變化、氧化還原指示劑檢測(cè)細(xì)菌生長(zhǎng)代謝產(chǎn)物等方法。經(jīng)數(shù)小時(shí)孵育后，每隔一定時(shí)間自動(dòng)測(cè)定每一藥敏試驗(yàn)孔中細(xì)菌生長(zhǎng)情況，與細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)照孔的結(jié)果進(jìn)行比較計(jì)算出生長(zhǎng)率。將藥敏試驗(yàn)卡中各測(cè)定孔的生長(zhǎng)率在數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比較分析，可得到最低抑菌濃度MIC值，常參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，判斷最終結(jié)果為敏感(S)、中度敏感(MS)和耐藥(R)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行解讀。（二）儀器的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑

微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)大多與藥敏試驗(yàn)系統(tǒng)組合在一起，藥敏試驗(yàn)系統(tǒng)常配備計(jì)算