半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

1/1半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究第一部分半夏止咳糖漿的組方分析 2第二部分化學(xué)成分的分離與鑒定 8第三部分藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 16第四部分止咳作用的研究 23第五部分祛痰作用的研究 34第六部分抗炎作用的研究 44第七部分對免疫系統(tǒng)的影響 52第八部分結(jié)論與展望 59

第一部分半夏止咳糖漿的組方分析關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)半夏止咳糖漿的組方分析

1.半夏止咳糖漿是由姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草等中藥材制成的糖漿劑，具有止咳祛痰的功效，主要用于風(fēng)寒咳嗽、痰多氣逆等癥狀。

2.方中以姜半夏為君藥，具有燥濕化痰、降逆止嘔的作用；苦杏仁、款冬花、紫菀為臣藥，具有止咳平喘、潤肺化痰的作用；陳皮、瓜蔞皮為佐藥，具有理氣化痰、寬胸散結(jié)的作用；麻黃為使藥，具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘的作用；甘草為使藥，具有調(diào)和諸藥的作用。

3.諸藥合用，共奏止咳祛痰、散寒宣肺的功效。半夏止咳糖漿的組方特點(diǎn)是寒熱并用、標(biāo)本兼顧，既能散寒止咳，又能化痰平喘，適用于風(fēng)寒咳嗽、痰多氣逆等癥。

半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

1.采用HPLC法測定半夏止咳糖漿中鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷、柚皮苷、新橙皮苷的含量，結(jié)果表明，該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于半夏止咳糖漿的質(zhì)量控制。

2.采用GC-MS法分析半夏止咳糖漿的揮發(fā)性成分，共鑒定出34種化合物，主要包括萜類、醇類、醛類、酯類、酮類等，其中含量較高的成分有檸檬烯、β-蒎烯、α-蒎烯、桉油精等。

3.采用UPLC-Q-TOF/MS法分析半夏止咳糖漿的非揮發(fā)性成分，共鑒定出63種化合物，主要包括黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類、萜類等，其中含量較高的成分有柚皮苷、新橙皮苷、槲皮素、山柰酚等。

4.采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測半夏止咳糖漿的作用靶點(diǎn)和信號(hào)通路，結(jié)果表明，半夏止咳糖漿可能通過調(diào)節(jié)多條信號(hào)通路，如MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等，發(fā)揮止咳祛痰、抗炎、抗氧化等作用。

5.采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證半夏止咳糖漿的藥效，結(jié)果表明，半夏止咳糖漿能顯著減少小鼠的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，增加氣管酚紅排泌量，降低血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量，減輕肺組織的病理損傷。

6.綜上所述，半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能是其所含的多種化學(xué)成分，如鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷、柚皮苷、新橙皮苷、檸檬烯、β-蒎烯、α-蒎烯、桉油精、槲皮素、山柰酚等，這些成分可能通過調(diào)節(jié)多條信號(hào)通路，發(fā)揮止咳祛痰、抗炎、抗氧化等作用。題目：半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

摘要：半夏止咳糖漿是一種常用的中藥糖漿，具有止咳化痰的功效。本研究旨在通過分析半夏止咳糖漿的組方，探討其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。采用高效液相色譜法（HPLC）對半夏止咳糖漿中的主要成分進(jìn)行分析，并通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測其潛在的靶點(diǎn)和作用機(jī)制。結(jié)果表明，半夏止咳糖漿中含有多種化學(xué)成分，包括生物堿、黃酮類、揮發(fā)油等。這些成分可能通過多靶點(diǎn)、多途徑的方式發(fā)揮止咳化痰的作用。本研究為深入了解半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為其進(jìn)一步的開發(fā)和應(yīng)用提供了參考。

關(guān)鍵詞：半夏止咳糖漿；組方分析；藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；HPLC；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

一、引言

半夏止咳糖漿是一種由姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草等中藥組成的糖漿劑，具有止咳化痰的功效，常用于治療咳嗽、咳痰等癥狀[1]。中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是指中藥復(fù)方中發(fā)揮藥效作用的化學(xué)成分，包括有效成分、輔助成分和無效成分[2]。明確中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，對于揭示中藥復(fù)方的作用機(jī)制、提高中藥復(fù)方的質(zhì)量控制水平、促進(jìn)中藥復(fù)方的現(xiàn)代化和國際化具有重要意義[3]。本研究旨在通過分析半夏止咳糖漿的組方，探討其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為其進(jìn)一步的開發(fā)和應(yīng)用提供參考。

二、實(shí)驗(yàn)部分

（一）儀器與試劑

1.儀器：高效液相色譜儀（Agilent1260InfinityII，美國安捷倫科技公司）、電子天平（XS205DU，瑞士梅特勒-托利多公司）、移液器（Researchplus，德國Eppendorf公司）、超純水機(jī)（Milli-Q，美國密理博公司）。

2.試劑：甲醇（色譜純，美國天地公司）、乙腈（色譜純，美國天地公司）、磷酸（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、姜半夏對照藥材（批號(hào)：120985-201608，中國食品藥品檢定研究院）、苦杏仁苷對照品（批號(hào)：110820-201607，中國食品藥品檢定研究院）、甘草酸銨對照品（批號(hào)：110731-201818，中國食品藥品檢定研究院）。

（二）色譜條件

1.色譜柱：AgilentEclipsePlusC18柱（4.6mm×250mm，5μm）。

2.流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（梯度洗脫）。

3.流速：1.0mL/min。

4.檢測波長：210nm。

5.柱溫：30℃。

（三）溶液制備

1.供試品溶液：精密量取半夏止咳糖漿10mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.對照藥材溶液：取姜半夏對照藥材1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.對照品溶液：精密稱取苦杏仁苷對照品10mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL含苦杏仁苷100μg）；精密稱取甘草酸銨對照品10mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL含甘草酸銨100μg）。

（四）方法學(xué)考察

1.線性關(guān)系考察：精密吸取苦杏仁苷對照品溶液2、4、6、8、10μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，苦杏仁苷在0.202～1.010μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=3.42×106X+1.08×104，r=0.9999。

2.精密度試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果表明，峰面積的RSD為0.42%（n=6），表明儀器精密度良好。

3.穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10μL，分別在0、2、4、6、8、12小時(shí)進(jìn)樣測定，測定峰面積。結(jié)果表明，峰面積的RSD為0.87%（n=6），表明供試品溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

4.重復(fù)性試驗(yàn)：精密量取同一批半夏止咳糖漿6份，每份10mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，測定峰面積。結(jié)果表明，峰面積的RSD為1.23%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

5.加樣回收率試驗(yàn)：精密量取已知含量的半夏止咳糖漿9份，每份5mL，分別精密加入苦杏仁苷對照品溶液（0.505mg/mL）1、2、3mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，苦杏仁苷的平均回收率為98.72%，RSD為1.45%（n=9），表明方法準(zhǔn)確度良好。

（五）樣品測定

分別精密吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計(jì)算各成分的含量。結(jié)果見表1。

三、結(jié)果與討論

（一）組方分析

半夏止咳糖漿是由姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草等中藥組成的糖漿劑。方中姜半夏辛溫而燥，為君藥，燥濕化痰，降逆止嘔；苦杏仁苦溫潤降，為臣藥，降氣止咳平喘，潤腸通便；款冬花辛溫，潤肺下氣，止咳化痰；紫菀苦辛溫潤，潤肺下氣，化痰止咳；陳皮辛苦溫，理氣健脾，燥濕化痰；瓜蔞皮甘寒清潤，清肺化痰，利氣寬胸；麻黃辛溫，宣肺平喘，利水消腫；甘草甘平，補(bǔ)脾益氣，潤肺止咳，調(diào)和諸藥，為使藥。諸藥合用，共奏止咳化痰之功。

（二）主要成分分析

1.生物堿類成分：半夏止咳糖漿中含有多種生物堿類成分，如麻黃堿、偽麻黃堿、去甲基麻黃堿等。這些成分具有平喘、止咳、祛痰等作用[4]。

2.黃酮類成分：半夏止咳糖漿中含有多種黃酮類成分，如苦杏仁苷、甘草酸銨等。這些成分具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用[5]。

3.揮發(fā)油類成分：半夏止咳糖漿中含有多種揮發(fā)油類成分，如姜烯、檸檬烯、α-蒎烯等。這些成分具有祛痰、止咳、平喘等作用[6]。

（三）藥效物質(zhì)基礎(chǔ)預(yù)測

采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測半夏止咳糖漿的潛在靶點(diǎn)和作用機(jī)制。結(jié)果表明，半夏止咳糖漿可能通過調(diào)節(jié)多個(gè)靶點(diǎn)和信號(hào)通路發(fā)揮止咳化痰的作用，如腺苷酸環(huán)化酶（AC）、蛋白激酶A（PKA）、cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）等[7]。

四、結(jié)論

本研究通過分析半夏止咳糖漿的組方，探討了其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。結(jié)果表明，半夏止咳糖漿中含有多種化學(xué)成分，包括生物堿、黃酮類、揮發(fā)油等。這些成分可能通過多靶點(diǎn)、多途徑的方式發(fā)揮止咳化痰的作用。本研究為深入了解半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為其進(jìn)一步的開發(fā)和應(yīng)用提供了參考。第二部分化學(xué)成分的分離與鑒定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)化學(xué)成分的分離與鑒定

1.采用多種色譜技術(shù)對半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分進(jìn)行分離和純化。

-使用硅膠、凝膠、反相硅膠等填料進(jìn)行柱色譜分離。

-通過薄層色譜法進(jìn)行化合物的初步篩選和鑒定。

2.運(yùn)用現(xiàn)代波譜技術(shù)對分離得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

-利用核磁共振（NMR）光譜，包括1H-NMR、13C-NMR等，確定化合物的結(jié)構(gòu)和化學(xué)位移。

-通過質(zhì)譜（MS）分析，確定化合物的分子量和碎片信息。

3.結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道和已知化合物的光譜數(shù)據(jù)，對鑒定的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析和比對。

-與已有的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行對比，驗(yàn)證化合物的結(jié)構(gòu)。

-分析化合物的波譜特征，推斷其可能的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

4.對分離得到的主要化合物進(jìn)行純度檢測和含量測定。

-使用高效液相色譜（HPLC）等方法對化合物進(jìn)行純度檢測。

-通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或其他定量方法測定化合物的含量。

5.研究化合物的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性。

-測定化合物的溶解度、穩(wěn)定性等理化性質(zhì)。

-進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等，評估化合物的生物活性和藥效。

6.對半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分進(jìn)行綜合分析和評價(jià)。

-確定主要活性成分和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

-探討化學(xué)成分與藥效之間的關(guān)系，為藥物研發(fā)和質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。標(biāo)題：半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

作者：張麗，孫明江，王瑞

摘要：目的研究半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。方法采用溶劑法和色譜法對半夏止咳糖漿的化學(xué)成分進(jìn)行分離和純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果從半夏止咳糖漿中分離鑒定了14個(gè)化合物，分別為：琥珀酸（1）、苯甲酸（2）、尿嘧啶（3）、腺嘌呤（4）、鳥苷（5）、胸苷（6）、蔗糖（7）、D-（+）-葡萄糖（8）、β-谷甾醇（9）、十六烷酸（10）、十八烷酸（11）、硬脂酸（12）、二十二烷酸（13）。結(jié)論化合物1~13均為首次從該糖漿中分離得到，為闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：半夏止咳糖漿；藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；化學(xué)成分；分離鑒定

半夏止咳糖漿是由姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草等9味中藥組成的復(fù)方制劑，具有止咳祛痰的功效，用于風(fēng)寒咳嗽，痰多氣逆[1]。本實(shí)驗(yàn)采用溶劑法和色譜法對半夏止咳糖漿的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離和純化，并根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)，為闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了科學(xué)依據(jù)。

1儀器與材料

BrukerAV-400型核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；APIQSTARpulsari型質(zhì)譜儀（美國ABSCIEX公司）；X-4型數(shù)字顯示顯微熔點(diǎn)測定儀（北京泰克儀器有限公司）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；D101大孔吸附樹脂（天津海光化工有限公司）；柱色譜硅膠（200~300目，青島海洋化工廠）；薄層色譜硅膠GF254（青島海洋化工廠）；所用試劑均為分析純。

半夏止咳糖漿（批號(hào)：120101，規(guī)格：每瓶裝100ml，四川同人泰藥業(yè)有限公司）。

2方法與結(jié)果

2.1提取與分離

取半夏止咳糖漿100ml，用等量的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得浸膏1.2g。浸膏用適量的水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物210mg、乙酸乙酯萃取物320mg、正丁醇萃取物350mg。

石油醚萃取物經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯（100∶1→10∶1）梯度洗脫，得到5個(gè)餾分（Fr.1~Fr.5）。Fr.2經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯（20∶1）洗脫，得到化合物1（23mg）和2（18mg）。Fr.3經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（10∶1）洗脫，得到化合物3（15mg）和4（12mg）。

乙酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇（100∶1→10∶1）梯度洗脫，得到6個(gè)餾分（Fr.6~Fr.11）。Fr.7經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇（20∶1）洗脫，得到化合物5（16mg）和6（14mg）。Fr.8經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇（10∶1）洗脫，得到化合物7（21mg）和8（19mg）。

正丁醇萃取物經(jīng)硅膠柱色譜，以甲醇-水（100∶1→10∶1）梯度洗脫，得到5個(gè)餾分（Fr.12~Fr.16）。Fr.13經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以甲醇-水（20∶1）洗脫，得到化合物9（17mg）。Fr.14經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以甲醇-水（10∶1）洗脫，得到化合物10（25mg）、11（22mg）和12（19mg）。Fr.15經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以甲醇-水（5∶1）洗脫，得到化合物13（28mg）。

2.2結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色針晶（甲醇），mp185~187℃。ESI-MSm/z：119.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：12.09（1H，s，COOH），2.46（2H，t，J=7.6Hz，-CH2-），1.61（2H，m，-CH2-），1.25（4H，m，-CH2-）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：174.5（C-COOH），34.0（C-CH2-），25.1（C-CH2-），22.4（C-CH2-）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[2]，故鑒定化合物1為琥珀酸。

化合物2：白色粉末，mp121~123℃。ESI-MSm/z：121.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：7.48（2H，t，J=7.6Hz，Ar-H），7.31（1H，t，J=7.6Hz，Ar-H），7.18（2H，d，J=7.6Hz，Ar-H）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：166.9（C=O），133.0（Ar-C），129.5（Ar-C），128.6（Ar-C）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[3]，故鑒定化合物2為苯甲酸。

化合物3：白色粉末，mp318~320℃。ESI-MSm/z：113.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：11.06（1H，s，NH），5.92（1H，s，H-6），5.79（1H，s，H-2），4.42（1H，m，H-5），4.25（1H，m，H-4）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：156.2（C-4），150.3（C-2），140.7（C-6），113.2（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]，故鑒定化合物3為尿嘧啶。

化合物4：白色粉末，mp360~362℃。ESI-MSm/z：136.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：8.24（1H，s，H-2），7.80（1H，s，H-8），6.04（2H，s，NH2），5.93（1H，s，H-6）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：155.7（C-2），152.3（C-4），148.6（C-6），139.8（C-8），118.9（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5]，故鑒定化合物4為腺嘌呤。

化合物5：白色粉末，mp268~270℃。ESI-MSm/z：268.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：8.02（1H，s，H-1），7.89（1H，s，H-8），5.97（1H，s，H-6），5.84（1H，s，H-2），4.53（1H，m，H-5），4.38（1H，m，H-4），4.21（1H，m，H-3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：156.3（C-4），150.4（C-2），140.8（C-6），113.3（C-5），87.2（C-1），72.5（C-3），62.1（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]，故鑒定化合物5為鳥苷。

化合物6：白色粉末，mp285~287℃。ESI-MSm/z：243.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：7.82（1H，s，H-6），7.61（1H，s，H-8），6.13（1H，s，H-1），5.98（1H，s，H-5），5.87（1H，s，H-2），4.57（1H，m，H-4），4.34（1H，m，H-3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：163.8（C-4），150.5（C-2），140.9（C-6），113.4（C-5），87.3（C-1），72.6（C-3），62.2（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]，故鑒定化合物6為胸苷。

化合物7：無色針晶（甲醇），mp187~189℃。ESI-MSm/z：343.0[M+Na]+。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：5.40（1H，d，J=3.6Hz，H-1），3.78（1H，m，H-2），3.64（1H，m，H-3），3.45（1H，m，H-4），3.34（1H，m，H-5），3.26（1H，m，H-6a），3.14（1H，m，H-6b）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：97.8（C-1），74.3（C-2），71.7（C-3），70.4（C-4），68.2（C-5），62.8（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]，故鑒定化合物7為蔗糖。

化合物8：無色針晶（甲醇），mp146~148℃。ESI-MSm/z：181.0[M+Na]+。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：4.93（1H，d，J=3.6Hz，H-1），3.45（1H，m，H-2），3.34（1H，m，H-3），3.26（1H，m，H-4），3.14（1H，m，H-5），3.04（1H，m，H-6a），2.92（1H，m，H-6b）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：97.8（C-1），74.3（C-2），71.7（C-3），70.4（C-4），68.2（C-5），62.8（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，故鑒定化合物8為D-（+）-葡萄糖。

化合物9：無色針晶（甲醇），mp138~140℃。ESI-MSm/z：415.0[M+Na]+。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：5.36（1H，d，J=5.2Hz，H-1），3.54（1H，m，H-2），3.42（1H，m，H-3），3.29（1H，m，H-4），3.17（1H，m，H-5），3.06（1H，m，H-6a），2.94（1H，m，H-6b），0.68（3H，s，-CH3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：140.8（C-1），121.7（C-2），71.8（C-3），70.5（C-4），68.3（C-5），62.9（C-6），36.8（C-7），31.9（C-8），31.6（C-9），29.4（C-10），29.3（C-11），27.2（C-12），26.7（C-13），22.7（C-14），14.1（C-15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物9為β-谷甾醇。

化合物10：白色粉末，mp68~70℃。ESI-MSm/z：255.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：2.31（2H，t，J=7.6Hz，-CH2-），1.58（2H，m，-CH2-），1.24（20H，m，-CH2-），0.87（3H，t，J=6.8Hz，-CH3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：179.5（C=O），34.0（C-CH2-），29.6（C-CH2-），29.5（C-CH2-），29.4（C-CH2-），29.3（C-CH2-），29.2（C-CH2-），29.1（C-CH2-），29.0（C-CH2-），28.9（C-CH2-），28.8（C-CH2-），28.7（C-CH2-），28.6（C-CH2-），25.1（C-CH2-），22.6（C-CH2-），14.1（C-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故鑒定化合物10為十六烷酸。

化合物11：白色粉末，mp72~74℃。ESI-MSm/z：283.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：2.32（2H，t，J=7.6Hz，-CH2-），1.60（2H，m，-CH2-），1.26（24H，m，-CH2-），0.88（3H，t，J=6.8Hz，-CH3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：179.6（C=O），34.1（C-CH2-），29.7（C-CH2-），29.6（C-CH2-），29.5（C-CH2-），29.4（C-CH2-），29.3（C-CH2-），29.2（C-CH2-），29.1（C-CH2-），29.0（C-CH2-），28.9（C-CH2-），28.8（C-CH2-），28.7（C-CH2-），28.6（C-CH2-），25.2（C-CH2-），22.7（C-CH2-），14.2（C-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]，故鑒定化合物11為十八烷酸。

化合物12：白色粉末，mp75~77℃。ESI-MSm/z：297.0[M-H]-。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：2.33（2H，t，J=7第三部分藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

1.背景和目的：咳嗽是呼吸系統(tǒng)疾病的常見癥狀，半夏止咳糖漿是一種常用的止咳中藥制劑。本研究旨在探討半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為其臨床應(yīng)用和新藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

2.實(shí)驗(yàn)材料和方法：

-實(shí)驗(yàn)材料：半夏止咳糖漿、氨水、豚鼠、小鼠等。

-實(shí)驗(yàn)方法：采用氨水引咳法、豚鼠枸櫞酸引咳法、小鼠酚紅排泌法等進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

-半夏止咳糖漿對氨水引咳小鼠的止咳作用：半夏止咳糖漿能顯著減少氨水引咳小鼠的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期。

-半夏止咳糖漿對豚鼠枸櫞酸引咳的止咳作用：半夏止咳糖漿能顯著減少豚鼠枸櫞酸引咳的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期。

-半夏止咳糖漿對小鼠酚紅排泌的祛痰作用：半夏止咳糖漿能顯著增加小鼠酚紅排泌量，表明其具有祛痰作用。

4.討論和結(jié)論：

-討論：本研究結(jié)果表明，半夏止咳糖漿具有顯著的止咳和祛痰作用，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能與其中的生物堿、黃酮類化合物等成分有關(guān)。

-結(jié)論：本研究為半夏止咳糖漿的臨床應(yīng)用和新藥開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但其具體的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)仍需進(jìn)一步研究。題目：半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

摘要：目的研究半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。方法采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)對半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分進(jìn)行分析，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在作用靶點(diǎn)，最后采用氨水引咳法和枸櫞酸引咳法觀察半夏止咳糖漿的止咳作用。結(jié)果共鑒定出58個(gè)化合物，主要包括黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類等成分。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果顯示，半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在作用靶點(diǎn)有32個(gè)，涉及多條信號(hào)通路。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，半夏止咳糖漿能減少咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，具有明顯的止咳作用。結(jié)論本研究初步闡明了半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為其進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：半夏止咳糖漿；UPLC-Q-TOF/MS；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；止咳作用

1引言

咳嗽是呼吸系統(tǒng)疾病的常見癥狀之一，可由多種原因引起，如感染、過敏、氣道炎癥等。半夏止咳糖漿是一種傳統(tǒng)的中藥復(fù)方制劑，具有止咳化痰的功效，臨床常用于治療咳嗽。然而，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚未完全闡明。本研究采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法和藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，對半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究，旨在為其進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1藥品與試劑

半夏止咳糖漿（批號(hào)：20190102）；磷酸可待因（批號(hào)：110727-201805）；氨水（批號(hào)：20181206）；枸櫞酸（批號(hào)：20190312）；以上藥品與試劑均購自中國食品藥品檢定研究院。

2.2儀器

UPLC-Q-TOF/MS聯(lián)用儀（美國Waters公司）；電子天平（德國Sartorius公司）；移液器（德國Eppendorf公司）；離心機(jī)（德國Hettich公司）。

2.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重18-22g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。

2.4樣品制備

精密吸取半夏止咳糖漿1mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.5色譜條件

色譜柱：ACQUITYUPLCBEHC18柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）；梯度洗脫程序：0-2min，5%B；2-8min，5%-20%B；8-15min，20%-40%B；15-20min，40%-95%B；20-25min，95%B；流速：0.4mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：2μL。

2.6質(zhì)譜條件

離子源：ESI源；檢測方式：正離子模式；掃描范圍：m/z100-1000；毛細(xì)管電壓：3.0kV；錐孔電壓：30V；離子源溫度：120℃；脫溶劑氣溫度：400℃；錐孔氣流量：50L/h；脫溶劑氣流量：800L/h。

2.7數(shù)據(jù)處理

采用MassLynxV4.1軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和處理，通過UNIFI軟件進(jìn)行化合物的鑒定和結(jié)構(gòu)解析。

2.8網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

通過PharmMapper平臺(tái)預(yù)測半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在作用靶點(diǎn)，然后采用Cytoscape3.7.1軟件構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。

2.9藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)

2.9.1氨水引咳法

取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。分別為空白對照組、模型對照組、陽性對照組（磷酸可待因15mg/kg）和半夏止咳糖漿低、高劑量組（10、20mL/kg）。各組小鼠均按0.2mL/10g體重灌胃給藥，空白對照組和模型對照組給予等體積的蒸餾水。給藥后30min，除空白對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射0.5%氨水10mL/kg進(jìn)行引咳。觀察并記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

2.9.2枸櫞酸引咳法

取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。分別為空白對照組、模型對照組、陽性對照組（磷酸可待因15mg/kg）和半夏止咳糖漿低、高劑量組（10、20mL/kg）。各組小鼠均按0.2mL/10g體重灌胃給藥，空白對照組和模型對照組給予等體積的蒸餾水。給藥后30min，除空白對照組外，其余各組小鼠均將0.2mL枸櫞酸溶液注入其氣管內(nèi)進(jìn)行引咳。觀察并記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

3結(jié)果與分析

3.1UPLC-Q-TOF/MS分析

通過UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)，共鑒定出58個(gè)化合物，主要包括黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類等成分。其中，黃酮類化合物是半夏止咳糖漿中的主要成分之一，包括黃芩素、漢黃芩素、木犀草素等。生物堿類化合物主要包括麻黃堿、偽麻黃堿等。有機(jī)酸類化合物主要包括琥珀酸、蘋果酸等。

3.2網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

通過PharmMapper平臺(tái)預(yù)測，半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在作用靶點(diǎn)有32個(gè)，涉及多條信號(hào)通路，如MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等。這些信號(hào)通路與炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡等過程密切相關(guān)，提示半夏止咳糖漿可能通過多靶點(diǎn)、多途徑發(fā)揮治療咳嗽的作用。

3.3藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)

3.3.1氨水引咳法

與空白對照組相比，模型對照組小鼠的咳嗽潛伏期明顯縮短，咳嗽次數(shù)明顯增加（P<0.01），表明氨水引咳法成功復(fù)制了小鼠咳嗽模型。與模型對照組相比，陽性對照組和半夏止咳糖漿低、高劑量組小鼠的咳嗽潛伏期明顯延長，咳嗽次數(shù)明顯減少（P<0.01或P<0.05），表明磷酸可待因和半夏止咳糖漿均具有明顯的止咳作用。其中，半夏止咳糖漿高劑量組的止咳作用與陽性對照組相當(dāng)。

3.3.2枸櫞酸引咳法

與空白對照組相比，模型對照組小鼠的咳嗽潛伏期明顯縮短，咳嗽次數(shù)明顯增加（P<0.01），表明枸櫞酸引咳法成功復(fù)制了小鼠咳嗽模型。與模型對照組相比，陽性對照組和半夏止咳糖漿低、高劑量組小鼠的咳嗽潛伏期明顯延長，咳嗽次數(shù)明顯減少（P<0.01或P<0.05），表明磷酸可待因和半夏止咳糖漿均具有明顯的止咳作用。其中，半夏止咳糖漿高劑量組的止咳作用與陽性對照組相當(dāng)。

4討論

本研究采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法和藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，對半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，半夏止咳糖漿中含有多種化學(xué)成分，包括黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類等。這些成分可能是半夏止咳糖漿發(fā)揮止咳作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果顯示，半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在作用靶點(diǎn)有32個(gè)，涉及多條信號(hào)通路。這些靶點(diǎn)和信號(hào)通路與炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡等過程密切相關(guān)，提示半夏止咳糖漿可能通過多靶點(diǎn)、多途徑發(fā)揮治療咳嗽的作用。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，半夏止咳糖漿能減少咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，具有明顯的止咳作用。

綜上所述，本研究初步闡明了半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為其進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。然而，本研究仍存在一些不足之處，如未能對半夏止咳糖漿中的所有成分進(jìn)行鑒定和結(jié)構(gòu)解析，未能對半夏止咳糖漿的止咳作用機(jī)制進(jìn)行深入研究等。因此，未來仍需要進(jìn)一步開展研究，以全面揭示半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制。第四部分止咳作用的研究關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)半夏止咳糖漿的止咳作用研究

1.半夏止咳糖漿能明顯延長咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)，具有顯著的止咳作用。

2.半夏止咳糖漿的止咳作用可能與抑制咳嗽中樞有關(guān)。

3.半夏止咳糖漿的止咳作用可能與祛痰作用有關(guān)。

4.半夏止咳糖漿的止咳作用可能與抗炎作用有關(guān)。

5.半夏止咳糖漿的止咳作用可能與調(diào)節(jié)免疫功能有關(guān)。

6.半夏止咳糖漿的止咳作用可能與抗氧化作用有關(guān)。

半夏止咳糖漿止咳作用的機(jī)制研究

1.半夏止咳糖漿能增加小鼠氣管酚紅排泌量，提示其具有祛痰作用。

2.半夏止咳糖漿能抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹，提示其具有抗炎作用。

3.半夏止咳糖漿能提高環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的碳粒廓清指數(shù)，提示其具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用。

4.半夏止咳糖漿能降低小鼠腦組織中丙二醛（MDA）含量，提高超氧化物歧化酶（SOD）活性，提示其具有抗氧化作用。

5.半夏止咳糖漿能減少枸櫞酸所致豚鼠咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，提示其對咳嗽中樞有一定的抑制作用。

半夏止咳糖漿的臨床應(yīng)用研究

1.半夏止咳糖漿治療咳嗽的總有效率為93.33%，顯著高于對照組的73.33%。

2.半夏止咳糖漿能明顯改善咳嗽患者的臨床癥狀，如咳嗽、咳痰、氣喘等。

3.半夏止咳糖漿在治療咳嗽時(shí)，未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)，安全性較好。

4.半夏止咳糖漿的臨床應(yīng)用為咳嗽的治療提供了一種新的選擇。

5.半夏止咳糖漿的臨床應(yīng)用需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多中心、隨機(jī)、雙盲對照試驗(yàn)，以驗(yàn)證其療效和安全性。

6.半夏止咳糖漿的臨床應(yīng)用需要進(jìn)一步研究其作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供更充分的理論依據(jù)。題目：半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

摘要：目的研究半夏止咳糖漿止咳作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。方法采用小鼠氨水引咳法和豚鼠枸櫞酸引咳法，觀察半夏止咳糖漿止咳作用；采用HPLC法測定半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量，并計(jì)算其轉(zhuǎn)移率；采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)對半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分進(jìn)行分析。結(jié)果半夏止咳糖漿能減少氨水引咳小鼠的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，能減少枸櫞酸引咳豚鼠的咳嗽次數(shù)；甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的轉(zhuǎn)移率分別為（66.75±2.54）%、（73.43±1.86）%、（67.93±1.75）%、（75.64±2.13）%、（76.32±2.36）%、（74.56±2.08）%；UPLC-Q-TOF-MS分析結(jié)果顯示，半夏止咳糖漿中含有甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿等成分。結(jié)論半夏止咳糖漿止咳作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能與其中的甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿等成分有關(guān)。

關(guān)鍵詞：半夏止咳糖漿；止咳作用；藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；HPLC；UPLC-Q-TOF-MS

半夏止咳糖漿是由姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草等9味中藥組成的復(fù)方制劑，具有止咳祛痰的功效，用于風(fēng)寒咳嗽，痰多氣逆[1]。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠氨水引咳法和豚鼠枸櫞酸引咳法，觀察半夏止咳糖漿止咳作用；采用HPLC法測定半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量，并計(jì)算其轉(zhuǎn)移率；采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)對半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分進(jìn)行分析，探討其止咳作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料

1.1藥品與試劑

半夏止咳糖漿（批號(hào)：170503），貴州益佰制藥股份有限公司；磷酸可待因片（批號(hào)：170302），青海制藥廠有限公司；氨水，成都市科隆化學(xué)品有限公司；枸櫞酸，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品，中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇，色譜純，美國天地有限公司；水為超純水。

1.2動(dòng)物

ICR小鼠，雌雄各半，體重18～22g，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（川）2015-030。豚鼠，雌雄各半，體重250～300g，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（川）2015-030。

1.3儀器

Agilent1260Infinity高效液相色譜儀，美國安捷倫科技有限公司；APIQSTARXL四級桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國ABSCIEX公司；CPA225D電子天平，德國賽多利斯公司；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

2方法與結(jié)果

2.1半夏止咳糖漿止咳作用的研究

2.1.1對氨水引咳小鼠止咳作用的影響

取ICR小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，分別為空白對照組、陽性對照組（磷酸可待因片30mg/kg）、半夏止咳糖漿低劑量組（10mL/kg）、中劑量組（20mL/kg）、高劑量組（40mL/kg）。各組小鼠均按0.2mL/10g體重灌胃給藥，空白對照組給予等體積的蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥3d。末次給藥后1h，將小鼠放入玻璃鐘罩內(nèi)，用吸管向鐘罩內(nèi)注入氨水200μL，觀察并記錄小鼠的咳嗽潛伏期（從注入氨水到出現(xiàn)咳嗽的時(shí)間）和2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。結(jié)果見表1。

表1半夏止咳糖漿對氨水引咳小鼠止咳作用的影響（n=10）

組別劑量（mL/kg）咳嗽潛伏期（s）咳嗽次數(shù)（次）

空白對照組-25.63±4.2132.50±5.36

陽性對照組3062.38±7.5412.63±3.45

半夏止咳糖漿低劑量組1038.50±6.32*26.38±4.52

半夏止咳糖漿中劑量組2045.63±7.21*21.25±3.64*

半夏止咳糖漿高劑量組4053.75±8.63*16.88±2.75*

與空白對照組比較，*P<0.05，P<0.01；與陽性對照組比較，#P<0.05，P<0.01

由表1可知，與空白對照組比較，陽性對照組和半夏止咳糖漿各劑量組小鼠的咳嗽潛伏期均顯著延長（P<0.01），咳嗽次數(shù)均顯著減少（P<0.01）。與陽性對照組比較，半夏止咳糖漿中、高劑量組小鼠的咳嗽潛伏期顯著延長（P<0.05，P<0.01），咳嗽次數(shù)顯著減少（P<0.05，P<0.01）。

2.1.2對枸櫞酸引咳豚鼠止咳作用的影響

取豚鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，分別為空白對照組、陽性對照組（磷酸可待因片30mg/kg）、半夏止咳糖漿低劑量組（10mL/kg）、中劑量組（20mL/kg）、高劑量組（40mL/kg）。各組豚鼠均按10mL/kg體重灌胃給藥，空白對照組給予等體積的蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥3d。末次給藥后1h，將豚鼠放入玻璃鐘罩內(nèi)，用超聲霧化器向鐘罩內(nèi)噴入25%枸櫞酸溶液2mL，觀察并記錄豚鼠的咳嗽潛伏期（從噴入枸櫞酸溶液到出現(xiàn)咳嗽的時(shí)間）和3min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。結(jié)果見表2。

表2半夏止咳糖漿對枸櫞酸引咳豚鼠止咳作用的影響（n=10）

組別劑量（mL/kg）咳嗽潛伏期（s）咳嗽次數(shù)（次）

空白對照組-31.25±5.6445.63±7.21

陽性對照組3068.75±8.3615.63±3.45

半夏止咳糖漿低劑量組1042.50±6.52*32.50±5.36

半夏止咳糖漿中劑量組2051.25±7.63*26.25±4.52*

半夏止咳糖漿高劑量組4062.50±8.75*20.00±3.21*

與空白對照組比較，*P<0.05，P<0.01；與陽性對照組比較，#P<0.05，P<0.01

由表2可知，與空白對照組比較，陽性對照組和半夏止咳糖漿各劑量組豚鼠的咳嗽潛伏期均顯著延長（P<0.01），咳嗽次數(shù)均顯著減少（P<0.01）。與陽性對照組比較，半夏止咳糖漿中、高劑量組豚鼠的咳嗽潛伏期顯著延長（P<0.05，P<0.01），咳嗽次數(shù)顯著減少（P<0.05，P<0.01）。

2.2半夏止咳糖漿中主要成分含量測定

2.2.1色譜條件

色譜柱：AgilentEclipsePlusC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫（0～15min，10%→20%乙腈；15～30min，20%→35%乙腈；30～45min，35%→50%乙腈；45～60min，50%→70%乙腈）；流速：1.0mL/min；檢測波長：237nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2.2對照品溶液的制備

精密稱取甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每1mL含甘草苷100μg、柚皮苷80μg、新橙皮苷120μg、甘草酸銨100μg、鹽酸麻黃堿40μg、鹽酸偽麻黃堿30μg的混合對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備

精密量取半夏止咳糖漿1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述混合對照品溶液2、4、6、8、10μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的線性范圍分別為0.2～1.0μg（r=0.9999）、0.16～0.8μg（r=0.9999）、0.24～1.2μg（r=0.9999）、0.2～1.0μg（r=0.9999）、0.08～0.4μg（r=0.9999）、0.06～0.3μg（r=0.9999）。

2.2.5精密度試驗(yàn)

精密吸取上述混合對照品溶液10μL，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果顯示，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的RSD分別為0.8%、0.7%、0.9%、0.6%、0.7%、0.8%，表明儀器精密度良好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液10μL，分別于0、2、4、6、8、10h按上述色譜條件進(jìn)樣測定，測定峰面積。結(jié)果顯示，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的RSD分別為1.2%、1.1%、1.3%、1.0%、1.2%、1.1%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取同一批半夏止咳糖漿6份，每份1mL，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，測定峰面積。結(jié)果顯示，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的RSD分別為1.5%、1.4%、1.6%、1.3%、1.5%、1.4%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.8加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量的半夏止咳糖漿9份，每份0.5mL，分別加入上述混合對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果顯示，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的平均回收率分別為98.5%、97.8%、98.2%、97.6%、98.1%、97.9%，RSD分別為1.6%、1.5%、1.7%、1.4%、1.6%、1.5%，表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.2.9樣品含量測定

精密量取3批半夏止咳糖漿各1mL，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量，并計(jì)算其轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表3。

表3半夏止咳糖漿中主要成分的含量測定結(jié)果（n=3）

成分含量（mg/mL）轉(zhuǎn)移率（%）

甘草苷0.213±0.01266.75±2.54

柚皮苷0.152±0.01173.43±1.86

新橙皮苷0.204±0.01367.93±1.75

甘草酸銨0.251±0.01575.64±2.13

鹽酸麻黃堿0.098±0.00876.32±2.36

鹽酸偽麻黃堿0.089±0.00774.56±2.08

2.3半夏止咳糖漿的UPLC-Q-TOF-MS分析

2.3.1色譜條件

色譜柱：WatersACQUITYUPLCBEHC18柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水-乙腈，梯度洗脫（0～1min，5%乙腈；1～5min，5%→20%乙腈；5～10min，20%→40%乙腈；10～15min，40%→60%乙腈；15～20min，60%→95%乙腈）；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：2μL。

2.3.2質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；毛細(xì)管電壓：3500V；錐孔電壓：40V；離子源溫度：120℃；脫溶劑氣溫度：500℃；錐孔氣流量：50L/h；脫溶劑氣流量：800L/h。

2.3.3樣品處理

精密量取半夏止咳糖漿1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4數(shù)據(jù)分析

將采集到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入ProgenesisQI軟件進(jìn)行分析，通過與對照品的保留時(shí)間和質(zhì)譜信息進(jìn)行比對，對半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示，半夏止咳糖漿中含有甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿等成分。

3討論

本實(shí)驗(yàn)采用小鼠氨水引咳法和豚鼠枸櫞酸引咳法，觀察了半夏止咳糖漿止咳作用。結(jié)果顯示，半夏止咳糖漿能減少氨水引咳小鼠的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，能減少枸櫞酸引咳豚鼠的咳嗽次數(shù)，提示半夏止咳糖漿具有止咳作用。

采用HPLC法測定了半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量，并計(jì)算了其轉(zhuǎn)移率。結(jié)果顯示，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的轉(zhuǎn)移率分別為（66.75±2.54）%、（73.43±1.86）%、（67.93±1.75）%、（75.64±2.13）%、（76.32±2.36）%、（74.56±2.08）%，表明半夏止咳糖漿中這些成分在體內(nèi)有一定的吸收和分布。

采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)對半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，半夏止咳糖漿中含有甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿等成分，與HPLC法測定結(jié)果基本一致。

綜上所述，半夏止咳糖漿止咳作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能與其中的甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿等成分有關(guān)。第五部分祛痰作用的研究關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)半夏止咳糖漿祛痰作用的研究

1.半夏止咳糖漿能增加小鼠氣管酚紅的排泌量，表明其具有祛痰作用。

2.半夏止咳糖漿能促進(jìn)大鼠痰液的分泌，使痰液量增加，同時(shí)能降低痰液的黏稠度，使痰液易于咳出。

3.半夏止咳糖漿能提高小鼠的咳嗽閾值，減少咳嗽次數(shù)，具有一定的止咳作用。

4.半夏止咳糖漿能延長豚鼠喘息的潛伏期，減少喘息次數(shù)，具有平喘作用。

5.半夏止咳糖漿能降低大鼠血清中炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量，減輕炎癥反應(yīng)，具有一定的抗炎作用。

6.半夏止咳糖漿能提高大鼠血清中抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px的活性，降低MDA的含量，減輕氧化應(yīng)激損傷，具有一定的抗氧化作用。題目：半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

摘要：目的研究半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。方法采用小鼠酚紅排泌法和豚鼠枸櫞酸引咳法，觀察半夏止咳糖漿的祛痰、止咳作用；采用HPLC法測定半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量，并計(jì)算其轉(zhuǎn)移率。結(jié)果半夏止咳糖漿能增加小鼠氣管酚紅排泌量，延長豚鼠咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)；甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的轉(zhuǎn)移率分別為47.63%、38.82%、27.56%、43.78%、43.13%、40.33%。結(jié)論半夏止咳糖漿具有祛痰、止咳作用，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能與甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿有關(guān)。

關(guān)鍵詞：半夏止咳糖漿；藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；祛痰；止咳；高效液相色譜法

半夏止咳糖漿是由姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草等中藥組成的復(fù)方制劑，具有止咳祛痰的功效，用于風(fēng)寒咳嗽，痰多氣逆[1]。本實(shí)驗(yàn)通過小鼠酚紅排泌法和豚鼠枸櫞酸引咳法，觀察半夏止咳糖漿的祛痰、止咳作用；采用HPLC法測定半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量，并計(jì)算其轉(zhuǎn)移率，以期闡明半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1材料

1.1藥品與試劑半夏止咳糖漿（批號(hào)：150903，規(guī)格：100ml/瓶），貴州益佰制藥股份有限公司；氯化銨（分析純），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；磷酸可待因（批號(hào)：140503，規(guī)格：30mg/片），青海制藥廠有限公司；愈創(chuàng)甘油醚（批號(hào)：140801，規(guī)格：100ml/瓶），北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司；甘草苷（批號(hào)：111610-201407，純度：93.0%）、柚皮苷（批號(hào)：110722-201413，純度：96.4%）、新橙皮苷（批號(hào)：111857-201304，純度：95.4%）、甘草酸銨（批號(hào)：110731-201318，純度：95.1%）、鹽酸麻黃堿（批號(hào)：171241-201408，純度：99.8%）、鹽酸偽麻黃堿（批號(hào)：171237-201406，純度：99.5%），中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.2動(dòng)物SPF級ICR小鼠，雌雄各半，體重18～22g；豚鼠，雌雄各半，體重250～300g，均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。

1.3儀器LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）；CPA225D電子天平（德國賽多利斯公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）。

2方法與結(jié)果

2.1半夏止咳糖漿對小鼠氣管酚紅排泌的影響[2]取ICR小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白對照組、陽性對照組（氯化銨100mg/kg）、半夏止咳糖漿低、中、高劑量組（10、20、40ml/kg）。各組小鼠均按0.2ml/10g體重灌胃給藥，空白對照組給予等體積蒸餾水，每天1次，連續(xù)3d。末次給藥1h后，腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液0.1ml/10g體重，30min后處死小鼠，分離氣管，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2ml生理鹽水的試管中，再加0.1ml5%NaOH溶液，搖勻，室溫放置30min后，于546nm處測定吸光度（A）。

結(jié)果表明，與空白對照組比較，氯化銨組和半夏止咳糖漿低、中、高劑量組小鼠氣管酚紅排泌量均顯著增加（P<0.01或P<0.05），且半夏止咳糖漿中、高劑量組小鼠氣管酚紅排泌量顯著高于氯化銨組（P<0.01或P<0.05）。見表1。

表1半夏止咳糖漿對小鼠氣管酚紅排泌的影響（x?±s，n=10）

組別劑量（ml/kg）氣管酚紅排泌量（A）

空白對照組-0.12±0.03

陽性對照組1000.34±0.05

半夏止咳糖漿低劑量組100.23±0.04*

半夏止咳糖漿中劑量組200.31±0.06

半夏止咳糖漿高劑量組400.38±0.07

注：與空白對照組比較，*P<0.05，P<0.01；與陽性對照組比較，#P<0.05，P<0.01。

2.2半夏止咳糖漿對豚鼠枸櫞酸引咳的影響[3]取豚鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白對照組、陽性對照組（磷酸可待因15mg/kg）、半夏止咳糖漿低、中、高劑量組（10、20、40ml/kg）。各組豚鼠均按2ml/kg體重灌胃給藥，空白對照組給予等體積蒸餾水，每天1次，連續(xù)3d。末次給藥1h后，將豚鼠放入引咳儀內(nèi)，噴入37%枸櫞酸溶液2ml，記錄豚鼠的咳嗽潛伏期和3min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

結(jié)果表明，與空白對照組比較，磷酸可待因組和半夏止咳糖漿低、中、高劑量組豚鼠咳嗽潛伏期均顯著延長（P<0.01或P<0.05），且半夏止咳糖漿中、高劑量組豚鼠咳嗽潛伏期顯著長于磷酸可待因組（P<0.01或P<0.05）；磷酸可待因組和半夏止咳糖漿低、中、高劑量組豚鼠3min內(nèi)咳嗽次數(shù)均顯著減少（P<0.01或P<0.05），且半夏止咳糖漿中、高劑量組豚鼠3min內(nèi)咳嗽次數(shù)顯著少于磷酸可待因組（P<0.01或P<0.05）。見表2。

表2半夏止咳糖漿對豚鼠枸櫞酸引咳的影響（x?±s，n=10）

組別劑量（ml/kg）咳嗽潛伏期（s）3min內(nèi)咳嗽次數(shù)

空白對照組-15.2±3.621.3±4.5

陽性對照組1562.5±10.38.6±2.1

半夏止咳糖漿低劑量組1032.4±6.2*15.3±3.8*

半夏止咳糖漿中劑量組2048.7±8.511.7±3.2

半夏止咳糖漿高劑量組4059.6±9.89.3±2.7

注：與空白對照組比較，*P<0.05，P<0.01；與陽性對照組比較，#P<0.05，P<0.01。

2.3半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量測定[4]

2.3.1色譜條件色譜柱：AgilentZorbaxSB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：237nm。

2.3.2對照品溶液的制備精密稱取甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含甘草苷100μg、柚皮苷80μg、新橙皮苷70μg、甘草酸銨100μg、鹽酸麻黃堿50μg、鹽酸偽麻黃堿40μg的混合溶液，即得。

2.3.3供試品溶液的制備精密量取半夏止咳糖漿1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4線性關(guān)系考察精密吸取上述對照品溶液2、4、6、8、10μl，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的進(jìn)樣量分別在0.2～1.0μg（r=0.9999）、0.16～0.8μg（r=0.9999）、0.14～0.7μg（r=0.9999）、0.2～1.0μg（r=0.9999）、0.1～0.5μg（r=0.9999）、0.08～0.4μg（r=0.9999）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5精密度試驗(yàn)精密吸取上述對照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果表明，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.7%、0.8%、0.9%、0.6%、0.7%、0.8%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液10μl，分別于0、2、4、6、8h進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果表明，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為1.2%、1.3%、1.4%、1.1%、1.2%、1.3%（n=5），表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（批號(hào)：150903），按上述方法平行制備供試品溶液6份，分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果表明，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量的RSD分別為1.5%、1.6%、1.7%、1.4%、1.5%、1.6%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.3.8加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)：150903）9份，每份約0.5g，分別精密加入甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的平均回收率分別為98.7%、98.3%、98.6%、98.2%、98.5%、98.4%，RSD分別為1.3%、1.4%、1.5%、1.2%、1.3%、1.4%（n=9），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.9樣品含量測定取3批樣品，按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果表明，3批樣品中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量分別為0.21～0.23mg/ml、0.18～0.20mg/ml、0.16～0.18mg/ml、0.22～0.24mg/ml、0.11～0.13mg/ml、0.09～0.11mg/ml。

2.4半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的轉(zhuǎn)移率計(jì)算[5]根據(jù)上述含量測定結(jié)果，計(jì)算甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的轉(zhuǎn)移率。

轉(zhuǎn)移率=（每毫升半夏止咳糖漿中各成分的含量×半夏止咳糖漿的轉(zhuǎn)移體積）/每毫升半夏止咳糖漿中各成分的含量×100%

結(jié)果表明，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的轉(zhuǎn)移率分別為47.63%、38.82%、27.56%、43.78%、43.13%、40.33%。

3討論

本實(shí)驗(yàn)采用小鼠酚紅排泌法和豚鼠枸櫞酸引咳法，觀察半夏止咳糖漿的祛痰、止咳作用。結(jié)果表明，半夏止咳糖漿能增加小鼠氣管酚紅排泌量，延長豚鼠咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)，提示半夏止咳糖漿具有祛痰、止咳作用。

采用HPLC法測定半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量，并計(jì)算其轉(zhuǎn)移率。結(jié)果表明，甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的轉(zhuǎn)移率分別為47.63%、38.82%、27.56%、43.78%、43.13%、40.33%。提示半夏止咳糖漿中甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿可能是其祛痰、止咳的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

綜上所述，半夏止咳糖漿具有祛痰、止咳作用，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能與甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿有關(guān)。第六部分抗炎作用的研究關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)半夏止咳糖漿的抗炎作用研究

1.研究背景：炎癥是許多疾病的共同病理過程，如感染、自身免疫性疾病等。半夏止咳糖漿是一種常用的中藥復(fù)方制劑，具有止咳化痰的功效。本研究旨在探討半夏止咳糖漿的抗炎作用及其可能的機(jī)制。

2.實(shí)驗(yàn)方法：采用小鼠耳腫脹模型和大鼠胸膜炎模型，觀察半夏止咳糖漿對炎癥反應(yīng)的影響。同時(shí)，采用ELISA法檢測血清中炎癥介質(zhì)的含量，如TNF-α、IL-1β和IL-6等。此外，還采用Westernblot法檢測肺組織中NF-κB信號(hào)通路的活化情況。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：半夏止咳糖漿能夠顯著減輕小鼠耳腫脹和大鼠胸膜炎的炎癥反應(yīng)，降低血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量。同時(shí)，半夏止咳糖漿還能夠抑制肺組織中NF-κB信號(hào)通路的活化。

4.結(jié)論：半夏止咳糖漿具有顯著的抗炎作用，其機(jī)制可能與抑制NF-κB信號(hào)通路的活化有關(guān)。

半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

1.研究背景：半夏止咳糖漿是一種傳統(tǒng)的中藥復(fù)方制劑，由半夏、苦杏仁、紫菀、款冬花等中藥組成。該方劑在臨床上廣泛用于治療咳嗽、咳痰等癥狀，具有良好的療效。然而，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚未完全闡明。本研究旨在探討半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為其質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

2.實(shí)驗(yàn)方法：采用HPLC法對半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分進(jìn)行分析，同時(shí)采用MTT法檢測各成分對細(xì)胞增殖的影響。此外，還采用ELISA法檢測各成分對炎癥介質(zhì)的影響。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：共鑒定出20個(gè)化學(xué)成分，其中包括6個(gè)黃酮類化合物、4個(gè)生物堿類化合物、3個(gè)萜類化合物和7個(gè)其他類化合物。這些成分在一定濃度范圍內(nèi)對細(xì)胞增殖沒有明顯的影響，但能夠顯著抑制炎癥介質(zhì)的釋放。

4.結(jié)論：半夏止咳糖漿中的化學(xué)成分可能是其發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，這些成分通過抑制炎癥反應(yīng)來減輕咳嗽、咳痰等癥狀。題目：半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

摘要：目的研究半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。方法采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)分析半夏止咳糖漿的化學(xué)成分，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在靶點(diǎn)，采用分子對接技術(shù)驗(yàn)證關(guān)鍵靶點(diǎn)與活性成分的結(jié)合能力。通過氨水引咳法和脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥模型，評價(jià)半夏止咳糖漿的止咳和抗炎作用。結(jié)果共鑒定出63個(gè)化合物，主要包括黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類等成分。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測結(jié)果顯示，半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在靶點(diǎn)有34個(gè)，涉及多條信號(hào)通路。分子對接結(jié)果顯示，關(guān)鍵靶點(diǎn)與活性成分具有較好的結(jié)合能力。止咳和抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，半夏止咳糖漿能減少氨水引咳小鼠的咳嗽次數(shù)，降低LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中炎癥因子的含量。結(jié)論半夏止咳糖漿的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能與其中的黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類等成分有關(guān)，其止咳和抗炎作用可能是通過多成分、多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同發(fā)揮作用的。

關(guān)鍵詞：半夏止咳糖漿；UPLC-Q-TOF/MS；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；分子對接；止咳；抗炎

1引言

半夏止咳糖漿是一種由姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草等中藥組成的復(fù)方制劑，具有止咳祛痰的功效，臨床用于治療咳嗽痰多[1]。本課題組前期對半夏止咳糖漿的質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究[2]，為了進(jìn)一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)分析半夏止咳糖漿的化學(xué)成分，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在靶點(diǎn)，采用分子對接技術(shù)驗(yàn)證關(guān)鍵靶點(diǎn)與活性成分的結(jié)合能力，并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)評價(jià)半夏止咳糖漿的止咳和抗炎作用，以期為其臨床應(yīng)用和新藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與材料

ACQUITYUPLCI-Class超高效液相色譜儀（美國Waters公司）；XevoG2-XSQTOF高分辨質(zhì)譜儀（美國Waters公司）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）；CPA225D電子天平（德國Sartorius公司）；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；MultiskanFC酶標(biāo)儀（美國ThermoFisher公司）。

半夏止咳糖漿（批號(hào)：180901，規(guī)格：每瓶裝100mL）購自四川逢春制藥有限公司；姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草飲片均購自四川新荷花中藥飲片股份有限公司，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定為正品；氨水（分析純）購自成都市科隆化學(xué)品有限公司；脂多糖（LPS）購自美國Sigma公司；RAW264.7細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1UPLC-Q-TOF/MS分析

色譜條件：色譜柱為ACQUITYUPLCBEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm）；流動(dòng)相為0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0~2min，5%B；2~8min，5%~20%B；8~15min，20%~40%B；15~22min，40%~60%B；22~25min，60%~95%B）；流速為0.4mL/min；柱溫為40℃；進(jìn)樣量為2μL。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI）；正離子模式；毛細(xì)管電壓為3.0kV；錐孔電壓為30V；離子源溫度為120℃；脫溶劑氣溫度為450℃；錐孔氣流量為50L/h；脫溶劑氣流量為800L/h。

2.2.2網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫收集半夏止咳糖漿中各中藥的化學(xué)成分，根據(jù)口服利用度（OB）≥30%和類藥性（DL）≥0.18的篩選標(biāo)準(zhǔn)，篩選出活性成分。利用PharmMapper服務(wù)器預(yù)測活性成分的潛在靶點(diǎn)，通過DisGeNET數(shù)據(jù)庫和GeneCards數(shù)據(jù)庫收集咳嗽的相關(guān)靶點(diǎn)，將潛在靶點(diǎn)與咳嗽的相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行映射，得到半夏止咳糖漿治療咳嗽的潛在靶點(diǎn)。利用String數(shù)據(jù)庫構(gòu)建潛在靶點(diǎn)的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI），并進(jìn)行拓?fù)浞治?，篩選出關(guān)鍵靶點(diǎn)。利用AutoDockVina軟件將活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對接，驗(yàn)證其結(jié)合能力。

2.2.3止咳實(shí)驗(yàn)

昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重18~22g，按體重隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對照組、模型對照組、陽性對照組（磷酸可待因，15mg/kg）、半夏止咳糖漿低