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DB41DB41/T1516—2017犬瘟熱病毒、犬細小病毒二重TaqManMGB實時熒光PCR檢測方法2017-12-06發(fā)布2018-03-06實施河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I疫病預(yù)防控制中心,鶴壁市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心,信陽市動物疫病預(yù)防控制中心,平頂山市動物疫1犬瘟熱病毒、犬細小病毒二重TaqManMGB實時熒光PCR檢測方法本標準規(guī)定了犬瘟熱病毒(CDV)、犬細小病毒(CPV)二重TaqManMGB實時熒光PCR(FQ),),),),)(),2.1.4消化液Ⅰ,TE緩沖液(見附錄A以上試劑常溫保存;消化液Ⅱ(見附錄A陽性對照、),),實時熒光定量PCR儀,高速冷凍離心機(12000×g以上生物安全柜,恒溫水浴鍋,2℃~8℃),2采集的樣品密封后,采用保溫壺或保溫桶加冰密封,盡快運送到實驗室。樣品在2℃~8℃條件下););4.1.44℃條件下12000r/min3上清液,將無菌離心管倒置于吸水紙上,吸干液體,不同無菌離心管應(yīng)在吸4.3.1反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)混合液組成:M-MLV5×Reactionbuffer(含Mg2+),4μL;),),4在質(zhì)量控制標準成立的前提下,樣品Ct值≤29.0,且出現(xiàn)兩條特定的擴增曲線,判定為CDV、CPV5試劑的配制在0.01mol/LPBS液中添加青霉素(2000IU/mL),鏈霉素(2mA.60.01mol/L(pH7.2)的磷酸鹽緩沖液(PB):A.6.2B液(0.2mol/L磷酸氫二鈉水溶液):Na2HPO4?12H2O71.6g,用適量蒸餾A.6.30.01mol/LPBS的配制:A液14mL,B液36mL,加NaCl8.5g,用蒸餾水定容至1000mL;1267犬溫?zé)岵《尽⑷毿〔《径豑aqManMGB實時熒光PCR檢測5'-CCGACTCCAGACAAT5'-ATGCCATTTACTCCA5'-FAM-CTCTGAGCAACA5'-VIC-AGATC

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