小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察

實(shí)驗(yàn)八：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察

【課前預(yù)習(xí)】實(shí)驗(yàn)前給小鼠腹腔注射臺(tái)盼蘭淀粉肉湯的目的是什么？實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^對(duì)小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活動(dòng)的觀察，加深理解細(xì)胞吞噬作用的過程及其意義。掌握小鼠腹腔注射給藥和頸椎脫臼處死方法。觀察機(jī)體的非特異性免疫現(xiàn)象。熟悉細(xì)胞吞噬作用的基本過程細(xì)胞吞噬作用原來是單細(xì)胞動(dòng)物攝取營養(yǎng)物質(zhì)的方式，也是原始防御作用。隨著動(dòng)物界的進(jìn)化，在高等動(dòng)物中，則發(fā)展生成大小兩類吞噬細(xì)胞(即巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞)，專司吞噬作用，成為非特異免疫功能的重要組成部分。巨噬細(xì)胞由骨髓干細(xì)胞分化生成，然后進(jìn)入血液到達(dá)各組織內(nèi)，并進(jìn)一步分化為各種巨噬細(xì)胞。當(dāng)病原微生物或其它異物侵入機(jī)體時(shí)，能招引巨噬細(xì)胞，而巨噬細(xì)胞又有趨化性，能響應(yīng)招引因子的招引，產(chǎn)生活躍的變形運(yùn)動(dòng)，主動(dòng)向病原體和異物移行，在接觸到病原體或異物時(shí)，即‘伸出偽足，將之包圍并內(nèi)吞人胞質(zhì)，形成吞噬體，繼而細(xì)胞質(zhì)中的初級(jí)溶酶體與吞噬泡發(fā)生融合，形成吞噬性溶酶體，通過其中水解酶等作用下，將病原體殺死，消化分解，最后將不能消化的殘?jiān)懦黾?xì)胞外。在機(jī)體的免疫過程中，巨噬細(xì)胞承擔(dān)著噬菌、殺菌、清除體內(nèi)被損傷和衰老的細(xì)胞，以及傳遞抗原信息，巨噬細(xì)胞將捕獲的抗原進(jìn)行加工處理后，把降解的抗原信息傳遞給T、B淋巴細(xì)胞。巨噬細(xì)胞又是天然殺傷細(xì)胞（NKCell)的激活劑，而且對(duì)B淋巴細(xì)胞的激活、增殖和分化具有調(diào)節(jié)作用。3241【實(shí)驗(yàn)用品】儀器設(shè)備：顯微鏡、注射器、注射針頭、吸管、試管架、解剖刀、解剖鑷、載玻片、蓋玻片、記號(hào)筆材料：小白鼠、1%雞紅細(xì)胞懸液試劑：6%的淀粉肉湯（含臺(tái)盼藍(lán)），0.9%生理鹽水在實(shí)驗(yàn)前一天，給小白鼠腹腔注射5％雞紅細(xì)胞lml/只。注射時(shí)，先用右手抓住鼠尾提起，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳和頭頸皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，用左手的無名指和小指按住尾巴與后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后l／2處的一側(cè)注射。進(jìn)針勿過深，否則易損害肝及血管等，造成出血致死。腹腔注射1％雞紅細(xì)胞懸液lml，輕按小白鼠腹部，使懸液分散。01約20分鐘后，用頸椎脫臼法處死小鼠(右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指與食指同時(shí)向下按住鼠頭，使脊髓與腦髓間斷開致鼠死亡)。02將小鼠置于解剖盤中，剪開腹部，把內(nèi)臟推向一側(cè)，用不裝針頭的注射器或吸管吸取腹腔液。03每人取一張干凈載玻片，滴一滴腹腔液，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。吸取的腹腔液與Hank’s液1：1混合，并且滴數(shù)滴于載玻片上，37OC溫育30分鐘。01玻片取出，用生理鹽水沖洗，吹干，甲醇固定5分鐘。02Gimasa染液染色，干燥后油鏡觀察。03【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】在高倍鏡下可見有許多較大的圓形和形狀不規(guī)則的巨噬細(xì)胞，因未染色細(xì)胞核不易見到，其胞質(zhì)中含有數(shù)量不等的蘭色圓形小顆粒（即吞入的含臺(tái)盼蘭的淀粉肉湯所形成）；還可見少量黃色橢圓形有明顯細(xì)胞核的雞紅細(xì)胞，慢慢移動(dòng)玻片標(biāo)本，仔細(xì)觀察視野中的巨噬細(xì)胞表面，有的紅細(xì)胞已部分被吞入；有的巨噬細(xì)胞內(nèi)已吞入了一個(gè)或多個(gè)紅細(xì)胞形成吞噬泡。雞紅細(xì)胞巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞后的巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)示教照片

吞噬雞紅細(xì)胞后的巨噬細(xì)胞