櫻桃無病毒苗木繁育技術(shù)規(guī)范DB41-T 873-2013

DB41

河南省地方標準

DB41/T873—2013

櫻桃無病毒苗木繁育技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationforpropagatiomofvirus-freeseedingofcherry

2013-12-25發(fā)布2014-02-25實施

河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB41/T873—2013

前言

本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標準由中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所提出。

本標準由河南省林業(yè)標準化技術(shù)委員會歸口。

本標準起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所。

本標準主要起草人：趙改榮、李明、劉聰利、黃貞光、李玉紅。

I

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櫻桃無病毒苗木繁育技術(shù)規(guī)范

本標準規(guī)定了櫻桃無病毒苗木繁育技術(shù)的術(shù)語和定義、無病毒原種圃和母本圃的建立、無病毒苗木

繁育、病毒檢測及監(jiān)測、苗木出圃。

本標準適用于櫻桃無病毒苗木的繁育。

1規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB5040柑橘苗木產(chǎn)地檢疫規(guī)程

GB/T12943蘋果無病毒母本樹和苗木檢疫規(guī)程

NY/T328蘋果無病毒苗木繁育規(guī)程

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標準。

2.1

櫻桃無病毒苗木

不攜帶李矮縮病毒(Prunedwarfvirus,PDV)、李屬壞死環(huán)斑病毒(Prunusnecroticringspotvirus,

PNRSV)、櫻桃小果病毒（Littlecherryvirus,LChV）、櫻桃綠環(huán)斑駁病毒（Cherrygreenringmottlevirus,

CGRMV）、櫻桃病毒A(CherryvirusA,CVA)、櫻桃壞死銹斑病毒(Cherrynecroticrustymottlevirus,

CNRMV)、蘋果褪綠葉斑病毒(Applechloroticleafspotvirus,ACLSV)的櫻桃苗木。

2.2

櫻桃無病毒原種

經(jīng)有資質(zhì)的專業(yè)機構(gòu)檢測，確定不攜帶本標準規(guī)定病毒的原始植株。

2.3

櫻桃無病毒母本圃

用于提供櫻桃無病毒枝條、種子等繁殖材料的圃地。

3無病毒原種圃的建立

3.1脫毒材料母株要求

選取已經(jīng)進入盛果期，經(jīng)3年以上觀察，品種純正、生長健壯、外觀無異常的植株作為待脫毒材料。

3.2脫毒

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莖尖培養(yǎng)脫毒法參見附錄A，熱處理脫毒法參見附錄B。待脫毒材料可直接經(jīng)過病毒檢測，篩選無

病毒材料。

3.3無病毒原種的確定

應經(jīng)有資質(zhì)的檢測機構(gòu)檢測認證，確定不帶上述7種病毒后，即可作為無病毒原種進行保存。

3.4無病毒原種保存

原種保存圃與普通果園或苗圃應相距100m以上、搭建300目紗網(wǎng)網(wǎng)室，封閉覆蓋全圃，出入口設(shè)

緩沖間。網(wǎng)室內(nèi)土壤隔離覆蓋。定植在花盆中，盆內(nèi)土壤高溫消毒，每個無病毒品種應保存3株以上，

每株編號、掛牌標識，繪制定植圖。加強肥水管理，保證樹勢健壯。

無病毒原種圃常用工具要專用，剪枝剪等修剪工具每株使用前用70%酒精溶液消毒。工作人員進

入無病毒原種圃前更換工作服。

3.5建立檔案

建立櫻桃無病毒原種保存圃檔案。記載品種、砧木的中文名稱、外文名稱、品系、株系；引進單位、

來源、時間，脫毒、病毒檢測的單位、時間及每年的觀察記錄等。

4無病毒母本圃建立

4.1無病毒母本圃圃地選擇

母本圃地應選擇未曾栽植過果樹的地塊。全圃封閉覆蓋300目紗網(wǎng)，與普通果園或苗圃的距離應符

合NY/T328的規(guī)定。

4.2無病毒母本圃設(shè)計規(guī)劃

建圃前按品種采穗圃、砧木采種圃和無性系砧木圃進行區(qū)劃。設(shè)計好排灌系統(tǒng)、道路、建筑物等，

并進行土地平整、土壤改良和土壤消毒。

4.3無病毒母本圃苗木來源

無病毒母本圃所采用的繁殖材料應全部直接來自櫻桃無病毒原種保存圃。準確記載品種、砧木、原

母株株系；脫毒、病毒檢測的單位、時間等。

4.4無病毒母本圃定植

無病毒品種采穗圃和砧木采種圃株行距為1m～2m×2m～4m；無性系砧木圃株行距為0.5m～

1m×2m～3m。按品種成行栽植，同一品種栽植在一起，定植后繪制定植圖，做好標記，不得混雜。

每株母本樹都要賦予唯一的編號。編號由品種名稱、原種圃母株株系編號和本株的編號共同組成。按照

編號給每株母本樹掛牌。

4.5無病毒母本圃管理

4.5.1加強母本圃肥水管理和病蟲害防治，保證樹勢健壯，無早期落葉現(xiàn)象。

4.5.2無病毒無性系砧木圃的樹體，應每年短截更新，其方法與普通無性系砧木母株相同。不允許在

母本圃嫁接。

4.5.3無病毒母本圃常用工具要專用，剪枝剪等修剪工具每株使用前用70%酒精溶液消毒。

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5無病毒苗木繁育

5.1苗圃建立

5.1.1苗圃地選擇

選擇地勢平坦，排灌方便，土壤肥沃，壤土、沙壤土質(zhì)，土壤酸堿度適中，沒有栽植過果樹及果樹

苗木的地方。苗圃與普通果園、苗圃的距離應符合GB5040的規(guī)定，或全圃封閉覆蓋100目防蟲網(wǎng)、

與普通果園及苗圃距離應符合GB/T12943的規(guī)定。

5.1.2苗圃規(guī)劃和建設(shè)

苗圃應劃分為若干小區(qū)。規(guī)劃出實生苗播種區(qū)、無性系砧木繁殖區(qū)、成苗培養(yǎng)區(qū)等。按規(guī)劃設(shè)計出

各級道路、排灌系統(tǒng)，并統(tǒng)籌安排。平整土地，改良土壤，土壤消毒及增施有機肥。

5.2實生砧木苗培育

砧木種子應采自無病毒母本圃。采種后標記其母株編號，并即刻沙藏，秋季或早春播種。播種前施

用殺菌劑和殺蟲劑，進行土壤消毒。播種時按照母株編號分別播種，并繪制各株系分布圖，田間插牌標

記，不得混雜。其他管理同普通苗圃。

5.3無性系砧木苗培育

5.3.1材料來源

無性系砧木繁殖材料，應來自無病毒母本圃。繁殖材料應分別掛牌標記其母株編號，按照品種及母

株編號分別繁殖。繪制各品種及株系分布圖，田間插牌標記，不得混雜。

5.3.2繁殖方法

5.3.2.1壓條、分株繁殖法

從無病毒母本圃植株上直接進行壓條、分株繁殖的砧木自根苗，在苗圃栽植后再埋干壓條繁殖無病

毒砧木苗。

5.3.2.2組織培養(yǎng)法

組織培養(yǎng)方法繁殖砧木苗木，繼代次數(shù)不超過7代。

5.3.2.3扦插繁殖法

用綠枝扦插、硬枝扦插等方法繁殖無病毒砧木。

5.4嫁接

5.4.1接穗采集

接穗應采自無病毒母本圃。采集接穗的枝條生長健壯、芽體飽滿、無落葉、無病害。采集的接穗應

在陰涼處立即剪去葉片。按品種扎成捆，掛牌標記母株編號。接穗存放同普通櫻桃接穗。

5.4.2嫁接

應分品種及不同母株分別嫁接。采用帶木質(zhì)部芽接法嫁接，嫁接位置距地面10cm～20cm處。嫁

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接后應按品種及母株編號分別記載。補接時，應與原來嫁接的接穗來源相同。

5.5苗圃管理

加強土肥水管理與病蟲害防治，保持苗木健壯生長、無早期落葉現(xiàn)象。

6病毒檢測及監(jiān)測

6.1病毒檢測方法

6.1.1木本指示植物檢測法

李矮縮病毒、李屬壞死環(huán)斑病毒、櫻桃小果病毒、櫻桃綠環(huán)斑駁病毒、櫻桃壞死銹斑病毒、蘋果褪

綠葉斑病毒可以采用木本指示植物檢測法進行檢測，操作步驟參見附錄C。

6.1.2酶聯(lián)免疫吸附檢測法

能獲得抗血清的櫻桃病毒可以采用A蛋白酶聯(lián)免疫吸附法（PAS-ELISA）進行檢測，操作步驟參

見附錄D。

6.1.3反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應檢測法

李矮縮病毒、李屬壞死環(huán)斑病毒、櫻桃小果病毒、櫻桃綠環(huán)斑駁病毒、櫻桃病毒A、櫻桃壞死銹斑

病毒、蘋果褪綠葉斑病毒均可以采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應檢測法(RT-PCR)方法進行檢測，操作步驟

參見附錄E。

6.2無病毒原種的監(jiān)測

無病毒原種圃的每株樹，經(jīng)常進行田間目測（參見附錄F），每年經(jīng)國家有資質(zhì)的病毒檢測單位進

行一次病毒檢測，發(fā)現(xiàn)攜帶病毒植株，應連同容器立即清除。

6.3無病毒母本圃的監(jiān)測

在生長期，應每月對無病毒母本圃植株的表現(xiàn)癥狀進行全面的觀察（參見附錄F），發(fā)現(xiàn)異常立即

檢測。每2年對每株母本樹進行一次病毒檢測。發(fā)現(xiàn)帶毒植株立即清除，并進行局部土壤消毒。

6.4無病毒苗木監(jiān)測

7.4.1每年在生長季節(jié)對無病毒苗木進行兩次全面觀察，發(fā)現(xiàn)有病毒癥狀（參見附錄F），立即拔除

帶毒植株及相鄰植株。

7.4.2每年苗木出圃前，應進行1次病毒檢測，1‰抽檢，隨機取樣。若檢測出病毒，根據(jù)編號進行追

溯，對其母本樹進行檢測。若母本樹帶毒，應將帶毒母本樹繁殖的所有苗木及相鄰苗木銷毀或按普通苗

木處理；若母本樹不帶毒，將攜帶病毒苗木及相鄰苗木銷毀，或按普通苗木處理。

7苗木出圃

7.1苗木出圃時間

宜在苗木停止生長、葉片開始脫落至翌年春季萌芽前出圃。土壤上凍時不要挖苗。

7.2苗木檢疫

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挖苗前，應到縣、區(qū)植物檢疫站進行檢疫，并辦理檢疫證書。

7.3挖苗

在挖苗前一天把即將落葉的苗木葉片全部抹除（帶葉栽植除外）。苗木主要根系要挖齊全，盡量減

少根系和苗干受傷。苗木挖好后，應及時分級、扎捆、掛標簽和假植。

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A

附錄A

（資料性附錄）

微莖尖培養(yǎng)法脫毒技術(shù)

A.1早春，從預選的植株上隨機切取剛萌動變綠尚未展葉的飽滿芽，或3～5月剪取抽生的嫩莖尖，去

葉后作為外植體。

A.2用洗滌劑水浸3min后，流水沖洗10min，轉(zhuǎn)入超凈工作臺上，70%酒精浸泡6s，2%次氯酸鈉滅

菌10min～20min，無菌水沖洗3次。

A.3解剖鏡放置在超凈臺上，用棉球蘸消毒酒精擦拭手及臺面，點燃酒精燈，將大小鑷子灼燒消毒。

將鋪有無菌濾紙的無菌培養(yǎng)皿放置在解剖鏡臺上，用鑷子取出A.1切取的材料，利用解剖針在解剖鏡下

剝除其外部葉原基，切取1.0mm以下莖尖分生組織(帶1～2片葉原基)，用無菌濾紙吸干水。

A.4將外植體接種于接種培養(yǎng)基（表A.1、表A.2）上，25℃恒溫培養(yǎng)，每天光照2000lx～3000lx

14h，黑暗10h，誘導叢生芽。

表A.1MS培養(yǎng)基配方

單位為毫克/升

類型成分濃度

硝酸鉀KNO31900

硝酸銨NH4NO31650

大量元素

磷酸二氫鉀KH2PO4170

硫酸鎂MgSO4·7H2O370

氯化鈣CaCl2·2H2O440

乙二胺四乙酸二鈉Na2·EDTA·2H2O37.3

鐵鹽硫酸亞鐵FeSO4·7H2O27.8

碘化鉀KI0.83

硼酸H3BO36.2

硫酸錳MnSO4·4H2O22.3

微量元素

硫酸鋅ZnSO4·7H2O8.6

鉬酸鈉Na2MoO4·2H2O0.25

硫酸銅CuSO4·5H2O0.025

氯化鈷CoCl2·6H2O0.025

肌醇100

甘氨酸2

有機成分鹽酸硫胺素VB10.1

鹽酸吡哆醇VB60.5

煙酸0.5

蔗糖30000

其他水解乳蛋白200

瓊脂6000

注：pH值5.8。

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表A.2櫻桃砧木（ZY-1）培養(yǎng)基

單位為毫克/升

種類基本培養(yǎng)基BAIBANAA

接種培養(yǎng)基MS0.30.1-

繼代培養(yǎng)基MS0.40.4-

生根培養(yǎng)基1/2MS(大量元素減半)--0.5

A.5叢生芽生長到1cm～3cm高時，重復A.3，切取0.3mm以下莖尖分生組織，接種在接種培養(yǎng)基

上進行培養(yǎng)，誘導叢生芽。

A.6將叢生芽或帶1～2個芽的莖端轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，2～3周后，取苗高2cm以上的新梢轉(zhuǎn)移

到生根培養(yǎng)基上，弱光處理5d后，轉(zhuǎn)入光下誘導生根。

A.7將試管苗移栽于溫室，成活后檢測。

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BA

附錄B

（資料性附錄）

熱處理法脫毒技術(shù)

B.1櫻桃品種盆栽苗脫毒

將盆栽苗放入人工氣候室，光照強度10000lx以上，32℃起始溫度下預培養(yǎng)3d后，黑暗溫度恒

定32℃，白晝溫度每天增加1℃，達到37℃時，保持在白晝37℃16h/d、黑暗32℃8h/d、濕

度60%～80%條件下，變溫熱處理18d。剪取新梢頂部0.5cm～1.0cm，嫁接到無病毒砧木上，成活后

檢測。

B.2櫻桃砧木試管苗脫毒

選擇繼代培養(yǎng)4～5代增殖能力強的無性系，熱處理方法參見B.1變溫處理18d后，剝?nèi)?.4mm

大小莖尖進行組織培養(yǎng)和繼代擴繁，并進行檢測。

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CB

附錄C

（資料性附錄）

木本指示植物溫室檢測法

C.1早春取無病毒砧木苗，栽植于直徑15cm、高25cm的花盆中，花盆中的基質(zhì)經(jīng)過高溫消毒，置

于溫室內(nèi)，溫室溫度白天20℃～28℃，夜間9℃～15℃。

C.29月份或翌年春季砧木發(fā)芽期，從待檢株上剪取接穗，并對待檢株進行編號和記錄，寫好標牌，

綁縛在待檢接穗上。

C.3從指示植物母本樹上剪取接穗。

C.4采用二重芽接法，先把待檢接穗的芽片嫁接在砧木基部，每株嫁接1個芽。同時削取指示植物的

芽片嫁接在待檢芽的上方，兩芽相距1.0cm～2.0cm。每個待檢樣品重復嫁接4盆～5盆，掛好標牌。

嫁接后，溫室溫度控制在18℃～26℃，同時注意防治害蟲和控制萌蘗生長。

C.5春季苗木發(fā)芽前，在指示植物接芽的上方約1.0cm～1.5cm處剪砧。及時除萌，保證待檢芽和指

示植物芽萌發(fā)，并用摘心的方法控制待檢芽的生長。

C.6從5月中下旬開始至9月末，定期觀察指示植物的癥狀表現(xiàn)，做好觀察記錄，根據(jù)指示植物的癥

狀參照表C.1，鑒定帶毒狀況。

表C.1六種櫻桃病毒在木本指示植物上的主要癥狀

病毒種類指示植物主要癥狀

李矮縮病毒白普賢、GF305、愛爾伯特（Elberta）、樹勢衰弱，簇葉、葉黃化、花葉、褪綠壞死環(huán)斑、

shirofugen、kwanzan葉細長、畸形

李屬壞死環(huán)斑病毒白普賢、GF305、shirofugen、kwanzan壞死葉斑，脫落形成穿孔，流膠，接芽壞死

櫻桃小果病毒拉姆伯特（Lambert)、塞姆（Sam）、凱葉片邊緣微卷，發(fā)病葉片在夏末和秋季變?yōu)榧t色或

彌柯斯（cannidex）青銅色，果實著色不完全，斑點，個小，畸形

櫻桃綠環(huán)斑駁病毒白普賢、shirofugen、kwanzan葉片黃化、次脈周圍暗色斑駁

櫻桃壞死銹斑病毒塞姆（Sam）褐色壞死葉斑，銹狀褪綠葉斑

蘋果褪綠葉斑病毒GF305、愛爾伯特（Elberta）葉片出現(xiàn)褪綠斑點，葉小，植株矮化，長勢弱

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DC

附錄D

（資料性附錄）

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

D.1溶液配制（均用蒸餾水）

D.1.1包被緩沖液（pH9.6100mL）

Na2CO30.159g

NaHCO30.294g

D.1.2提取緩沖液（0.05mol/LpH8.2Tris-HCl緩沖液100mL）

0.2mol/LTris25mL

0.1mol/LHCl22.5mL

蒸餾水補足100mL

D.1.3洗滌緩沖液（PBSTpH7.41000mL）

NaCl8.0g

NaH2PO4·12H2O2.9g

K2HPO40.2g

KCl0.2g

NaN30.2g

Tween-200.5mL

D.1.4抗原提取緩沖液

PBST+2%聚乙烯吡咯烷酮+0.2%卵蛋白(或牛血清蛋白BSA)

D.1.5底物緩沖液（pH5.0100mL）

檸檬酸1.019g

NaH2PO4·12H2O8.689g

D.1.6酶底物

10mL底物緩沖液+4mg鄰苯二胺

D.1.7終止液（2mol/LH2SO4100mL）

36%濃硫酸11.2mL

D.2A蛋白酶聯(lián)免疫吸附法（PAS-ELISA）

D.2.1包被A蛋白：用包被緩沖液稀釋A蛋白純品，檢測工作濃度為1μg/mL～5μg/mL，酶聯(lián)反應

板每孔100μL，37℃保溫2h，倒掉孔中液體后，用PBST洗板3～4次，每次靜置3min～5min。

D.2.2加第一抗體：用PBST稀釋抗體至工作濃度，每孔加100μL，保溫和沖洗方法同D.2.1。

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D.2.3加抗原樣品，取櫻桃嫩葉或一年生休眠枝條內(nèi)皮層，每克樣品加入5mL抗原提取液，研磨后

8000r/min離心10min，取上清液，每孔加100μL，每樣品2孔，每個微孔板需同時設(shè)陽性、陰性和空

白對照。4℃冰箱過夜，沖洗方法同D.2.1。第一次沖洗液不得溢出。

D.2.4加第二抗體：用PBST稀釋抗體至工作濃度，每孔加100μL，保溫和沖洗方法同D.2.1。

D.2.5加酶標A蛋白：市售辣根過氧化物酶標A蛋白用PBST稀釋至工作濃度，每孔加100μL，保溫

和沖洗方法同D.2.1。

D.2.6加底物：每孔加100μL，黑暗中室溫放置15min～30min顯色。

D.2.7終止反應：每孔加25μL2mol/LH2SO4終止反應。

D.2.8目測比色后，用酶標光度計測定讀數(shù)，波長492nm，OD值大于2倍陰性對照值（即P/N>2）

可判為陽性。

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ED

附錄E

（資料性附錄）

反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測法

E.1十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)溶液配制

2%CTAB（W/V），4%PVP（W/V），100mmol·L-1Tris-HCl（pH8.0），25mmol·L-1EDTA（pH8.0），

5mol·L-1NaCl，混合滅菌121℃15min，滅菌后加入體積分數(shù)2%的2-巰基乙醇。

E.2CTAB法提取總RNA

E.2.1取100mg～200mg櫻桃新鮮嫩葉，研缽中加液氮研磨成粉末狀，迅速轉(zhuǎn)入1.5mLEppendorf

管中，加入600μL的提取緩沖液，混勻，4℃，12000r/min，離心15min。

E.2.2小心吸取上清液，加入等體積的酚：氯仿：異戊醇(25：24：l)溶液，混勻，4℃，12000r/min，

離心15min。

E.2.3小心吸取上清液，加入等體積的氯仿：異戊醇(24：l)溶液，混勻，4℃，12000r/min，離心10

min，重復l次～2次，以蛋白層不出現(xiàn)為止。

E.2.4取水相，加入2.5倍體積的無水乙醇和0.1倍體積的3mol/LNaAc(pH5.3)，混勻，-20℃放置3

h，4℃，12000r/min，離心15min。棄去上清液，用70%無水乙醇洗滌，沉淀2次。

E.2.5室溫下干燥5min后，溶于30μL～50μLTE或DEPC處理純水中，-20℃或-70℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

E.3反轉(zhuǎn)錄合成cDNA

E.3.1DNAaseI消化

為了去除RNA樣品中可能存在的基因組污染，向離心管中加入0.5μL～1μLRRI（RNA酶抑制劑）、

1μLDNAaseI、2μL10×DNAaseIBuffer和16μLRNA，用槍頭混勻后37℃溫浴30min，75℃5min，

離心2min后置于冰上冷卻。1.5%瓊脂糖膠檢測RNA質(zhì)量，分光光度計檢測RNA濃度。

E.3.2反轉(zhuǎn)錄

取上述RNA0.1μg～5μg、0.2μg/μL隨機六聚體引物（或特異性引物）1μL，加適量DEPC-ddH2O

至12μL，70℃溫浴5min后置于冰上冷卻，依次加入20U/μLRNA酶抑制劑1μL、10mmol/LdNTP2

μL、5×反轉(zhuǎn)錄緩沖液4μL，25℃溫浴5min，加入200U/μL反轉(zhuǎn)錄酶1μL，42℃溫浴1h，70℃10

min，終止反應，離心，-20℃保存，即為cDNA模板，稀釋8倍后用于PCR擴增。

E.4PCR擴增

0.2mLPCR管中依次加入下列成分：cDNA模板2μL，病毒特異性引物及內(nèi)參基因RPII正反向引

-1

物（10μM，引物序列參見表E.1）各1μL，dNTPs（2.5μM）2μL，10×PCRbuffer2μL，MgCl（22.5mmol·L）

-1

1.6μL，Taq酶（5U·μL）0.2μL，加ddH2O補足20μL體系。按照以下程序進行擴增：94℃5min；

94℃50s，60℃（可根據(jù)引物退火溫度作適當調(diào)整）50s，72℃1min，35個循環(huán)；72℃10min；

4℃保存60min。

E.5結(jié)果判定

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檢測時以陽性植株為陽性對照，無病毒組培苗及ddH2O為陰性對照，以內(nèi)參基因RPII檢驗實驗操

作的準確性。采用1.5%瓊脂糖電泳分析PCR產(chǎn)物，觀察到與陽性對照相同的目的條帶的樣品為陽性，

帶毒性；與陰性對照ddH2O一樣，未觀察到目的條帶的樣品為陰性，無病毒；與陰性對照無病毒組培

苗一樣，觀察到內(nèi)參基因RPII條帶，但未觀察到目的條帶的樣品為陰性，無病毒。

表E.1七種病毒及內(nèi)參基因RT-PCR檢測特異性引物序列

病毒種類引物引物序列片段長度

PNRSV-FACGCGCAAAAGTGTCGAAATCTAAA

449bp

PNRSVPNRSV-RTGGTCCCACTCAGAGCTCAACAAAG

PDV-FTAGTGCAGGTTAACCAAAAGGAT

172bp

PDVPDV-RATGGATGGGATGGATAAAATAGT

LChV2-FTCCGAATAGTCAGTTCAAAG

337bp

LChV2LChV2-RAATAGCCCTCATAAATCTCC

CGRMV-FCCTCATTCACATAGCTTAGGTTT

958bp

CGRMVCGRMV-RACTTTAGCTTCGCCCCGTG

CNRSV-FTCCCACCTCAAGTCCTAGCAG

584bp

CNRSVCNRSV-RTGAACTTGGCCAGTTCTGCC

ACLSV-FTTCATGGAAAGACAGGGGCAA

309bp

ACLSVACLSV-RAAGTCTACAGGCTATTTATTATAAGTCTAA

CVA-FAGCCAGAAGGTATCATGCCAG

556bp

CVACVA-RATGACATGCCTGCTGGGAG

RPII-FTGAAGCATACACCTATGATGATGAAG

195bp

內(nèi)參基因RPIIRPII-RCTTTGACAGCACCAGTAGATTCC

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DB41/T873—2013

FE

附錄F

（資料性附錄）

病毒病樹體表現(xiàn)癥狀

F.1李矮縮病毒（Prunedwarfvirus,PDV）常見的危害癥狀

可引起櫻桃枝干從上向下干枯，出現(xiàn)簇葉、葉黃化、花葉、葉細長、畸形等，病葉也會產(chǎn)生褪綠壞

死環(huán)斑，有時與PNRSV的癥狀相似。

F.2李屬壞死環(huán)斑病毒（Prunusnecroticringspotvirus,PNRSV）常見的危害癥狀

葉片上出現(xiàn)黃綠色至綠色環(huán)斑、褪綠斑、壞死斑，環(huán)斑內(nèi)部組織壞死脫落形成穿孔，孔洞邊緣退綠

并微微突起。有時產(chǎn)生碎葉、帶狀葉、粗花葉、耳突等。

F.3櫻桃小果病毒（Littlecherryvirus,LChV）常見的危害癥狀

典型癥狀有葉片邊緣輕微卷曲，發(fā)病葉片在夏末和秋季變?yōu)榧t色或青銅色，侵染果實會使果實不能

完全成熟，著色不完全，產(chǎn)生斑點，果實小，畸形，收獲時期果實只有正常果實的1/2至1/3大小。受

影響的果實呈現(xiàn)暗紅色，三角狀，口味下降，果實成熟過晚等癥狀。

F.4櫻桃綠環(huán)斑駁病毒（Cherrygreenringmottlevirus,CGRMV）常見的危害癥狀

感染酸櫻桃導致葉片黃化、次脈周圍暗色斑駁等癥狀，在甜櫻桃及其他李屬作物上為潛隱性病毒，

侵染后通常無癥狀。

F5櫻桃病毒A(CherryvirusA,CVA)常見的危害癥狀

是典型的潛隱性病毒，不能直接從植物器官的為害癥狀進行識別，與其他病毒混合侵染后會加重危

害，嚴重影響產(chǎn)量，葉片畸形、細長等。

F6櫻桃壞死銹斑病毒(Cherrynecroticrustymottlevirus,CNRMV)常見的危害癥狀

葉片出現(xiàn)褐色壞死斑、銹狀褪綠斑。

F7蘋果褪綠葉斑病毒(Applechloroticleafspotvirus,ACLSV)常見的危害癥狀

為潛隱性病毒，被侵染的植株開始無明顯癥狀，2年～3年后出現(xiàn)葉片褪綠、砧穗嫁接不親和、枝

條稀疏、生長衰退等癥狀。夏季環(huán)斑處壞死并形成穿孔，葉片支離破碎，直至脫落。某些品種果實縫合

線處有裂口，可溶性固形物含量降低，果實品質(zhì)下降。

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DB41/T873—2013

前言

本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標準由中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所提出。

本標準由河南省林業(yè)標準化技術(shù)委員會歸口。

本標準起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所。

本標準主要起草人：趙改榮、李明、劉聰利、黃貞光、李玉紅。

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