檢驗(yàn)科體液總蛋白測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號(hào)：JYK-3-SH-041版本/修訂號(hào)：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第1頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-0141、體液總蛋白測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：腦脊液與尿總量蛋白(CSF)，臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備：尿樣：采用尿樣品隨機(jī)收集或收集24小時(shí)。腦脊液：采用腰椎穿刺。要嚴(yán)格掌握禁忌證、凡疑有顱內(nèi)壓升高者必須做眼底檢查，如有明顯視乳頭水腫或有腦疝先兆者，禁忌穿刺。凡病人處于休克、衷竭或?yàn)l危狀態(tài)以及局部皮膚有炎癥、顱后窩有占位性病變或伴有腦干癥狀者均禁忌穿刺。2.2樣本準(zhǔn)備：腦脊液由臨床醫(yī)師進(jìn)行腰椎穿刺采集，必要時(shí)可從小腦延腦池或側(cè)腦室穿刺獲得。穿刺后應(yīng)由醫(yī)師用壓力測(cè)定，正常人腦脊液壓力臥位為0.78-1.76kpa(80-180mmH2O)，兒童為0.4-1.0kpa(40-100mmH2O)。任何病變使腦組織體積或腦脊液量增加時(shí)，腦脊液壓力均可升高。待壓力測(cè)定后將腦脊液分別收集于3個(gè)無菌試管中，第一管作細(xì)菌培養(yǎng)，第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查。每管收集1-2毫升。腦脊液標(biāo)本必須立即送驗(yàn)及時(shí)檢查，放置過外將影響檢驗(yàn)結(jié)果，是細(xì)胞破壞、變性、或細(xì)胞包裹于纖維蛋白凝塊中，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)降低、分類不準(zhǔn)確等。存放中的腦脊液葡萄糖會(huì)分解，使之含量降低；細(xì)菌自溶或殘廢可影響細(xì)菌檢出率等。2.3抗凝劑：不使用抗凝劑。2.4標(biāo)本處理：2.4.1尿樣品隨機(jī)收集或收集24小時(shí)。儲(chǔ)存在2-8℃或冰凍穩(wěn)定至測(cè)定前。2.4.2腦脊液樣品中不能有溶血。儲(chǔ)存在2-8℃可穩(wěn)定數(shù)天。3方法原理連苯三酚紅與鉬酸結(jié)合形成紅色復(fù)合物，在467nm有最大吸收。當(dāng)這個(gè)復(fù)合物在酸性條件下與蛋白結(jié)合形成藍(lán)紫色復(fù)合物，在598nm有最大吸收。通過在600nm檢測(cè)生成物的吸光度，可以測(cè)量出樣本中總蛋白的含量。4試劑及其他用品組成溶液濃度連苯三酚紅緩沖液2.4mg/dlPH=2.5鉬酸鈉0.96mg/dl表面活性劑5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品：利德曼專用配套定標(biāo)液。5.2校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：線性模式，1個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。5.3校準(zhǔn)周期：校準(zhǔn)間隔時(shí)間不限，試劑換批號(hào)使用時(shí)或質(zhì)控結(jié)果超過規(guī)定的2SD范圍，需要定標(biāo)。5.4校準(zhǔn)液重建方法：校準(zhǔn)液即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用自配未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：分裝冰凍質(zhì)控血清，復(fù)溶即用，無需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測(cè)定：在每星期一或更換試劑時(shí)測(cè)質(zhì)控血清一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí)糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測(cè)。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動(dòng)生化分析儀器。8標(biāo)本檢測(cè)步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測(cè)定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。9主要分析參數(shù)參見說明書。10結(jié)果計(jì)算A標(biāo)準(zhǔn)c＝ΧCOA標(biāo)準(zhǔn)AA測(cè)定A標(biāo)準(zhǔn)尿總蛋白（mg）：c＝ΧCOΧVdlA標(biāo)準(zhǔn)式中：c——測(cè)定蛋白濃度，mg/dL；A測(cè)定——標(biāo)本管吸光度；A標(biāo)準(zhǔn)——標(biāo)準(zhǔn)管吸光度；CO——校準(zhǔn)液中蛋白濃度，mg/dL；Vdl：二十四小時(shí)尿液體積11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：0～2mg/L，超過此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測(cè)定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV<3.13%，批間CV<4.80%。（使用濃度為80mg/dl以上的標(biāo)本）12.2線性范圍：0～2mg/L。12.3靈敏度：當(dāng)CSF濃度為100mg/dL時(shí)，顯色吸光度A600約為0.384～0.427。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平腦脊液蛋白：0.15-0.45mg/l；尿蛋白：0-150mg/24小時(shí)。隨機(jī)尿液正常值范圍為:0.01～0.14mg/l。14臨床意義14.1尿總蛋白的測(cè)定是鑒別腎病的重要指標(biāo)。尿總蛋白含量升高常見于腎小球滲透性過高、腎小管重吸收不全和蛋白分泌素異常等。14.2腦脊液蛋白和特異蛋白的測(cè)定常用于鑒別血液/腦屏蔽到血漿蛋白中滲透量的增加或鞘內(nèi)的免疫球蛋白分泌素的增加。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)定結(jié)果，審核者對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：審核如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。無威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott生化分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。17.2生化檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操