輸血技術(shù)規(guī)范化課件

輸血技術(shù)規(guī)范化臨床輸血實驗技術(shù)

規(guī)范化

輸血技術(shù)規(guī)范化

一、臨床輸血實驗技術(shù)，為什么要規(guī)范化?《醫(yī)療機構(gòu)臨床用血管理辦法(試行)》:

第10條：醫(yī)療機構(gòu)的醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當嚴格執(zhí)行《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》；

第21條：違反本辦法規(guī)定的…..給予行政處罰….情節(jié)嚴重，構(gòu)成犯罪的，依法追究刑事責(zé)任血庫實驗技術(shù)規(guī)范化，就是逐條執(zhí)行《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》達到：

1、安全、有效、科學(xué)、合理、輸血2、依法自我保護輸血技術(shù)規(guī)范化二、臨床輸血前試驗，包擴那些項目?

按《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》規(guī)定(后面簡稱《規(guī)范》)，包擴三個項目:1、血型檢定：ABO，Rh(D)2、抗體篩查3、配血

這也是醫(yī)院輸血科的主要工作，

至少占醫(yī)院輸血科工作的2/3時間輸血技術(shù)規(guī)范化

三、ABO定型《規(guī)范》第14條：配血試驗的標本必須是輸血前3天之內(nèi)的

《規(guī)范》第15條：復(fù)查受血者和供血者ABO血型（正，反定型）……正確無誤時可進行交叉配血輸血技術(shù)規(guī)范化1、標本采集（1）3天之內(nèi)（2）采錯患者（換床、同名……）（3）送檢途中差錯，操作血樣差錯，結(jié)果記錄差錯（4）避免大量輸液處采樣(5)送檢單必須注明：①年齡(老、幼抗原弱?)；②原發(fā)病(自身抗體，蛋白紊亂，緡錢狀，感染類B擾?)③輸液情況(大量輸液，高分子藥物，代血漿干擾?)（6）抗凝血分離紅細胞，干管血分離血清

只采干管，分離的紅細胞可能有凝集塊，干擾正定型

只采抗凝管，血漿纖維蛋白可能析出，干擾反定型輸血技術(shù)規(guī)范化

“三天內(nèi)標本配血”:從那天算起?配血當天算不算?預(yù)約備血、配血后幾天輸血有效?發(fā)生醫(yī)療糾紛，關(guān)鍵時就憑此決定成敗從嚴:(配血當天算起，預(yù)約備血只限次日有效)，發(fā)生醫(yī)療糾紛時便于自我保護

用三天前標本配血，發(fā)生反應(yīng),病人告狀，本與配血無關(guān)，不是血型不合引起，仍然輸官司，因為法官不研討學(xué)術(shù)，只搬條文輸血技術(shù)規(guī)范化討論1用3天內(nèi)標本配血，可以減少輸血反應(yīng)，或無效輸血因為：回憶反應(yīng)，3天抗體就會迅速升高,例：某患者A，RhD+(血型：DCcee，不帶E抗原)，曾經(jīng)因輸血或妊娠接觸過RhE(+)紅細胞，被免疫，產(chǎn)生抗E抗體，時間久，抗-E效價降至1，但記憶淋巴細胞已記住RhE抗原

1月1日配血，供者選擇A，RhD+(帶E抗原)，交叉配血，因為患者抗-E效價很低，也“相合”于是輸血患者接受此血后，已被E抗原致敏的記憶淋巴細胞產(chǎn)生回憶反應(yīng)，抗-E快速升高，1月4日抗-E效價升到81月5日再輸血，如果用三天前標本(1日配血標本,抗-E效價1)，與A，RhD+(帶E抗原)供者配血，仍然相合，輸血后Hb就會不升高(因此時患者體內(nèi)抗E效價8)，甚至發(fā)生輸血反應(yīng)

1月5日再輸血，如果用三天內(nèi)標本(4日標本，抗-E效價8)配血，就會發(fā)現(xiàn)和A，RhD+(帶E抗原)供者配血不合，只有和不帶E抗原的供者血才配合，選擇配血相合不帶E抗原的血輸注，Hb就會升高,避免輸血反應(yīng)輸血技術(shù)規(guī)范化討論2

名字多為兩字,同姓同名者多(如王偉,李強,張華…)；床位周轉(zhuǎn)快；聘用制護士經(jīng)常換人；護工送標本→采錯血樣，送錯血樣討論3

輸液處采血樣，ABO抗體被稀釋，正反定型不合輸血技術(shù)規(guī)范化2、定型試劑（1）ABO定型試劑質(zhì)控→每周?每月?每批購進時？

①外觀②效價：抗-A≥128，抗-B≥64(128?)

③親和力3min＞1mm2

④特異性(Oc，Ac，Bc，A2Bc檢測)；

⑤抗篩陰性；⑥無冷凝集素；

⑦脫纖維完全；

⑧補體滅活；

⑨無細菌污染；

⑩國際統(tǒng)一染色:抗-AB紅，抗-A蘭，抗-B黃（2）反定型細胞

3-5個?隨機同型?洗滌后混合?濃度？無溶血？……輸血技術(shù)規(guī)范化討論1

批文：目前“生物制品規(guī)程”只有抗-A，抗-B標準，只對抗-A、抗-B審批。

其它：包括抗-AB、抗-D、抗球蛋白、ABO反定型細胞、抗體篩選細胞/鑒定細胞…均無國家標準，或只有“行業(yè)標準”。

“批號”?

“生產(chǎn)號”?輸血技術(shù)規(guī)范化討論2ABO定型操作不規(guī)范化:不用抗-A、B，不用Oc→漏檢ABO亞型

1.正定型→抗-A、B的作用

①提示ABO亞型(抗-A、B凝集強弱與抗-A或抗-B差別大)；②大量樣本試驗時漏加抗-A，或抗-B；③驗證抗-A，或抗-B2.反定型→Oc的作用

①可能發(fā)現(xiàn)孟買型(正定型O，反定型因血清含抗-H，凝集Oc)；②可能提示不規(guī)則抗體輸血技術(shù)規(guī)范化討論3

①ABO亞型不少于1%(A2中國0.68%，白人10-20%)②各單位常規(guī)中很少發(fā)現(xiàn)ABO亞型,只能解釋為多數(shù)ABO亞型(未用抗-A，B；無經(jīng)驗)皆漏檢，誤定O型③ABO亞型：因其抗原弱，患者接受Oc或少量O型全血，不會發(fā)生明顯的輸血反應(yīng)，但可能發(fā)生一定程度的無效輸血；從學(xué)術(shù)角度上不能認為血型檢定完全正確④ABO亞型：可能有抗體，如：A2可能有抗-A1,誤定“A”，輸A型紅細胞,可能發(fā)生輸血反應(yīng)，或無效輸血；A2型如果有抗-A1必須輸

A2型紅細胞輸血技術(shù)規(guī)范化3、定型操作

以基層常用的試管法為例分析（微柱凝膠法等按廠家說明）：（1）血清1滴/2滴（50~100μL）？….不要隨意，態(tài)度嚴謹

（2）正定型紅細胞洗滌；（3）反定型用血清，不用血漿（4）先加血清，后加細胞…大批樣本操作時,防止漏加血清（5）室溫(22-25℃)輸血技術(shù)規(guī)范化（6）離心：需要統(tǒng)一離心力，不是只統(tǒng)一離心速度和時間；

目前我國基層，離心機不可能統(tǒng)一型號不同規(guī)格離心機，力距不同，統(tǒng)一離心轉(zhuǎn)速和時間，沒有統(tǒng)一離心力，結(jié)果難以互相比較方法①：以貝索或日本久保田血清學(xué)專用離心機為統(tǒng)一:離心法看結(jié)果的離心力為1000g，15秒，離心半徑8cm1000=11.2x8(rpm/1000)2Rpm=3000轉(zhuǎn)/分鐘如果某臺離心機的離心半徑15cm，離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心力則約為1500g輸血技術(shù)規(guī)范化不同大小/離心半徑的離心機，統(tǒng)一離心力的簡便方法：標化：抗A(效價256)0.01ml+NS0.49ml0.1ml+5%RBC0.1ml→3000rpm

秒101520306090……1＋1+1+1+2+2+

取結(jié)果為1+的最長離心時間，即標化為30秒

盡量采用

血型血清學(xué)專用離心機貝索離心機

長春博德輸血技術(shù)規(guī)范化

BASO微電腦控制血庫標準化離心機是專門為輸血科及血庫離心試驗的要求設(shè)計的。與凝聚胺介質(zhì)試劑配套使用，用于交叉配血試驗，血型鑒定及不規(guī)則抗體的篩查。其主要特點有：1、

計時準確：采用“有效離心時間”，當轉(zhuǎn)速達到標定轉(zhuǎn)速時，才開始倒計時，達到有效離心時間（讀秒為0時）自動停機，定時采用有效離心時間數(shù)字顯示，故可保證血庫離心試驗結(jié)果的準確。

2、絕對離心力與相對離心力轉(zhuǎn)換功能：可讓使用者任意讀出絕對離心力（轉(zhuǎn)/分）或相對離心力（g）以方便使用者正確選擇實驗條件，保證實驗的準確性。

3、微電腦控制，可預(yù)設(shè)10－20組工作狀況，機內(nèi)已預(yù)設(shè)三種常用工作狀況。輸血技術(shù)規(guī)范化凝集積分

4＋12一大塊

3＋10幾大塊，游離<1/22＋8小塊，游離1/21＋5小塊，游離>1/2

±鏡下

W＋2

VW＋－0無凝集

MF少量大塊，大量游離輸血技術(shù)規(guī)范化討論1

實驗操作手法：看鏡子中，看尾部不斷傾斜試管，上快下慢討論2

積分:有時很重要，反應(yīng)親合力效價不反應(yīng)親合力，

親合力提示抗血清質(zhì)量，抗體臨床意義….輸血技術(shù)規(guī)范化效價與積分/親合力的解釋稀釋1/21/41/81/161/321/641/1281/256甲血清4+4+4+4+3+2+1+--乙血清2+2+1+1+1+1+1+--甲、乙兩份血清效價都是128稀釋倍數(shù)1/128，效價是稀釋倍數(shù)的倒數(shù)，效價128注意:效價不要寫為1/128，1:128甲積分：12x4+10+8+5=71；乙積分8x2+5x5=41甲凝集紅細胞強度比乙大，速度比乙快單從效價看不出甲，乙兩份血清的區(qū)別結(jié)合積分才看出甲，乙有區(qū)別判定抗血清質(zhì)量，應(yīng)當用效價和積分兩個指標輸血技術(shù)規(guī)范化討論3MF：混合凝集,

常見于：ABO亞型輸異型血/溶血性輸血反應(yīng)

提示：有兩株細胞，或樣本中的細胞不均一討論4溶血：判定陽性(試劑抗血清補體未完全滅活)討論5

不同書上，凝集判斷表/標準有差異，但無原則出入輸血技術(shù)規(guī)范化4、ABO定型記錄討論1、不能只記結(jié)果；記各種試劑凝集強度(記錄0，不記-/+)2、記錄試劑廠家、批號3、正、反定型兩人(或兩部門)分別作、核對4、書寫規(guī)范：抗-A，抗A血清；淘汰“A型血清”5、特殊樣本：抗-A1，抗-H，血型物質(zhì)，吸收放散，家系….抗－AB抗－A抗－BOcAcBc結(jié)果3＋3＋0002＋A輸血技術(shù)規(guī)范化四、Rh定型《規(guī)范》第15條：常規(guī)檢查患者Rh（D)血型（急診搶救患者緊急輸血時，Rh（D）檢查可除外），正確無誤時可進行交叉配血輸血技術(shù)規(guī)范化

RhD抗原分5種：①增強D；②正常D；③弱D(Du)；④極弱D(Del)；⑤部份D

初篩Rh血型→IgM抗-D，鹽水法→只能查出增強D，正常D，其它都漏檢(誤定為Rh陰性)，必須排除弱D和極弱D，因為他們的紅細胞上有少量D抗原，他們的紅細胞輸給“真正”

Rh陰性病人，病人有被免疫的風(fēng)險；他們接受Rh陽性紅細胞，自己又有被免疫的風(fēng)險部份D→國外用一套(30幾種)針對D抗原不同表位單抗檢查

國內(nèi)只能用不同批號抗-D檢查,假設(shè)它們是針對不同D表位注意:國產(chǎn)抗-D，購自幾個單位，但可能來自同一供者輸血技術(shù)規(guī)范化討論1、常規(guī)Rh(D)定型：用鹽水法，IgM抗-D初篩為Rh(D)陰性者，還需要進一步查/排除:

（1）弱D：IgG抗-D，AHG法

（2）極弱D：人源抗-D，氯仿/三氯乙烯吸收放散法2、弱D，極弱D：漢族中約占1/3

獻血者視為(標記為)D（＋）受血者視為(標記為)D（－）3、抗-D國家尚無審批標準(國產(chǎn)抗-D文號?)輸血技術(shù)規(guī)范化五、抗體篩選

《規(guī)范》第17條：凡遇到下列情況必須按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》有關(guān)規(guī)定作抗體篩選試驗：交叉配血不合時，對有輸血反應(yīng)史，妊娠史或短期內(nèi)需要接受多次輸血者。

稱篩選/還是篩查更準確?

“短期”：2天?3天?....

“多次”：2次?3次?.....

一旦發(fā)生醫(yī)療糾紛，涉及法律責(zé)任問題

作輸血工作，要“滴水不漏”，“未雨綢繆”

輸血技術(shù)規(guī)范化1、什么是抗體篩選?檢查病人(樣本血清)有無不規(guī)則抗體（1）血型抗體，以出現(xiàn)規(guī)律分：

①規(guī)則抗體(ABO抗體,有規(guī)律出現(xiàn))；

②不規(guī)則抗體(ABO亞型抗體，如A2型個體可能含抗A1抗體，弱B型可能含抗B抗體；以及其它非ABO血型系統(tǒng)抗體；它們出現(xiàn)沒有規(guī)律)

（2）血型抗體，以Ig分：①IgM抗體：常見于ABO、P、MN、Lewis血型系統(tǒng)抗體(鹽水法凝集)②IgG抗體：其它血型系統(tǒng)抗體(非鹽水法才凝集)輸血技術(shù)規(guī)范化2、為什么必須做抗體篩選?

（1）《規(guī)范》規(guī)定：①輸血反應(yīng)史，②妊娠史，③配血不合者，

④短期內(nèi)(幾天?)需要多次(2次?)輸血者→必須(!)做抗體篩選

（2）安全輸血(不規(guī)則抗體引起溶血性輸血反應(yīng))

（3）有效輸血(不規(guī)則抗體導(dǎo)致紅細胞無效輸注)輸血技術(shù)規(guī)范化3、怎么做抗體篩選?

病人血清+抗體篩選細胞→非鹽水介質(zhì)試驗(聚凝胺、抗球蛋白、

酶….)

抗體篩選：實際就是在給病人配血時(病人血清+供者細胞)多做1管：“病人血清+篩選細胞配血”

用篩選細胞替代獻血員細胞配血

篩選細胞來源→購買?本地自制?輸血技術(shù)規(guī)范化4、篩選細胞

DCEcePMNSFyaFyb…….1＋－＋－＋＋＋－－＋－……2－＋－＋＋＋－＋－＋－

3++--+-++-++

2-3個(人)細胞,各個血型抗原互補(至少一個細胞陽性，不能全陰性)

討論1

怎么取得篩選細胞?

基層開展→到上海血液中心購買商品篩選細胞?價格?效期？運輸？針對本地區(qū)Ab分布？本地血站制備，符合政策!輸血技術(shù)規(guī)范化討論2

選購篩選細胞，分析質(zhì)量→檢出抗體?漏檢抗體?覆蓋本地區(qū)常見抗體？純合子?XX篩選細胞3個，漏檢抗－S、抗－Dia、

抗－Fyb…

格局表中不互補，全陰性者，對應(yīng)抗體漏檢；

格局表中未列者可能漏檢討論3

不規(guī)則抗體有地區(qū)多態(tài)性，民族多態(tài)性→課題：調(diào)查本地區(qū)不規(guī)則抗體分布特點(頻率、特異性分布、

效價、Ig類別…..)，確定選擇購買篩選細胞的標準討論4

記錄篩選細胞格局，分析結(jié)果的可靠性輸血技術(shù)規(guī)范化討論5(1)如果篩選細胞由二個人的細胞組成,

可以等量混合試驗(只作1管，簡化操作)；(2)如果篩選細胞由三個人的細胞組成，必須分開作，作3管

因為:某抗原可能不是3個人的細胞全陽性,而是1個陽性2個陰性；3個人的細胞混合使用，就可能被“稀釋沖淡”，漏檢對應(yīng)的抗體輸血技術(shù)規(guī)范化討論6

分析結(jié)果時注意（1）如果病人間接抗球蛋白試驗陽性(如AIHA)，抗篩陽性沒有意義因為血清中的自身抗體可能干擾抗篩，產(chǎn)生假陽性

（2）①抗篩陽性，判定有不規(guī)則抗體；

②抗篩陰性，不能判定沒有不規(guī)則抗體因為可能有不規(guī)則抗體，篩選細胞沒針對某種抗體的抗原

（3）ABO亞型抗體一律漏檢，因為抗篩細胞是O型記?。嚎购Y+：排除自身抗體才能判定有不規(guī)則抗體

抗篩-：不能完全肯定沒有不規(guī)則抗體輸血技術(shù)規(guī)范化附錄抗體鑒定：用一組（9個?10個?）已知各血型抗原，并“合理搭配”（有陽性，有陰性）的抗體鑒定“譜細胞”(panelcells)來檢測結(jié)果分析：⑴陰性排陽性；

⑵如為患者樣本，檢查無對應(yīng)抗原；⑶如果“陰性排陽性”后留下幾種抗體：①用吸收放散證實，②另外用一套不同格局的譜細胞試驗，③樣本的紅細胞對應(yīng)抗原排除法；⑷某抗原+/-格局1/9，或9/1，P＞1/20→P＞0.05，檢查對應(yīng)抗體的結(jié)果不可靠輸血技術(shù)規(guī)范化輸血技術(shù)規(guī)范化DCEceJKaJKbMN…鹽水AHG1+++++--+--+2+++++++++-+3++--+++++--4+-++-++++-+5--++-+++--+6-+-+++++---7-++++---+-+8++-+++-++--9++--+++-+--10++--+++++--輸血技術(shù)規(guī)范化輸血技術(shù)規(guī)范化輸血技術(shù)規(guī)范化輸血技術(shù)規(guī)范化六、交叉配血《規(guī)范》第14條：配血試驗的血標本必須是輸血前3天之內(nèi)的；第18條：兩人值班時，交叉配血試驗由兩人互相核對，一人值班時，操作完畢后，自己復(fù)核，并填寫配血試驗結(jié)果第27條：血液發(fā)出后,血樣保存2-6℃至少7天

輸血技術(shù)規(guī)范化

配血試驗要采用兩種方法：鹽水介質(zhì)法，非鹽水介質(zhì)法(聚凝胺，抗球蛋白，微柱凝膠)說明：聚凝胺法第一步，就包括了鹽水介質(zhì)法

因為：1、《規(guī)范》第34條：

….交叉配血試驗(包括鹽水相和非鹽水相試驗)

2、只用鹽水法，只能檢查出IgM抗體，IgG抗體會漏檢輸血技術(shù)規(guī)范化輸血前實驗報告內(nèi)容/格式

1、血型:ABO、RhD(急診搶救可以不報告)2、不規(guī)則抗體篩選+/0

注意：手寫

“陽性/陰性”不規(guī)范3、（1）張三(患者)血清，與李四(供者)紅細胞配血（2）聚凝胺試驗/抗球蛋白試驗/酶試驗/配血卡