金銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程DB41-T 2188-2021

ICS65.020.01

CCSB30

41

河南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB41/T2188—2021

金銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

2021-10-19發(fā)布2022-01-18實(shí)施

河南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB41/T2188—2021

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4設(shè)施設(shè)備...........................................................................1

5組織培養(yǎng)...........................................................................2

6溫室馴化...........................................................................3

附錄A（資料性）培養(yǎng)基成分...........................................................4

I

DB41/T2188—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：河南科技學(xué)院、封丘縣金銀花產(chǎn)業(yè)協(xié)會(huì)、安陽市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心、河南

大學(xué)、新鄉(xiāng)市正源農(nóng)業(yè)科技有限公司、封丘縣爾玉中藥材有限公司。

本文件主要起草人：李勇超、楊靖、趙元增、王廣軍、王秀平、宋琳琳、李明亮、孫海燕、趙航、

李正晗、姚自動(dòng)、王峰。

II

DB41/T2188—2021

金銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了金銀花組織培養(yǎng)育苗的術(shù)語和定義、設(shè)施設(shè)備、組織培養(yǎng)和溫室馴化。

本文件適用于金銀花組織培養(yǎng)育苗。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

金銀花

忍冬科植物忍冬（LonicerajaponicaThunb.）。

3.2

組織培養(yǎng)

在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體，在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，

使其再生新植株的過程和技術(shù)。

3.3

外植體

用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體。

3.4

初代培養(yǎng)

在組織培養(yǎng)過程中,最初建立的外植體無菌培養(yǎng)階段。

3.5

繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)獲得的莖段或愈傷組織，通過分離切割接種在新的培養(yǎng)基中，從而獲得大量無菌幼苗的

培養(yǎng)階段。

4設(shè)施設(shè)備

4.1組織培養(yǎng)設(shè)施設(shè)備

4.1.1基本要求

組織培養(yǎng)室選址應(yīng)環(huán)境清潔，遠(yuǎn)離微粒和煙霧等污染源，水電供應(yīng)充足，交通運(yùn)輸便利。

1

DB41/T2188—2021

組織培養(yǎng)室包括洗滌室、滅菌室、培養(yǎng)基配制室、緩沖室、無菌接種室和無菌培養(yǎng)室等。

4.1.2洗滌室設(shè)備

配備自動(dòng)或半自動(dòng)洗瓶機(jī)、水槽、收納箱、量瓶架等。

4.1.3滅菌室設(shè)備

配備高壓蒸汽滅菌鍋、器械消毒器、紫外線燈、烘干箱、微孔過濾器等。

4.1.4培養(yǎng)基配制室設(shè)備

配備電子天平（0.0001g,0.01g）、酸度計(jì)、微波爐、冰箱等。

4.1.5緩沖室設(shè)備

配備衣帽柜、風(fēng)淋裝置等。

4.1.6無菌接種室設(shè)備

配備超凈工作臺(tái)、器械消毒器、酒精燈等。

4.1.7無菌培養(yǎng)室設(shè)備

配備培養(yǎng)架、紫外燈、臭氧發(fā)生器、空氣加濕器、除濕機(jī)、時(shí)控裝置等。

4.2溫室馴化設(shè)施設(shè)備

日光溫室，配備溫濕度調(diào)節(jié)裝置、光照控制裝置、灌溉設(shè)備、栽培床、穴盤等。

5組織培養(yǎng)

5.1外植體取材與滅菌

5.1.1外植體取材

選取生長健壯、無病蟲害的金銀花當(dāng)年生嫩枝，截取長度為0.5cm～3cm的芽段，每個(gè)芽段包含1～

3個(gè)腋芽。

5.1.2外植體處理

將截取的芽段置于1%中性洗滌劑中浸泡10min，再用自來水沖洗30min。

5.1.3外植體滅菌

在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將處理過的芽段置于無菌培養(yǎng)瓶中，加入2.5%次氯酸鈉（按有效氯計(jì)）溶液浸泡

20min，再用滅菌蒸餾水沖洗4次，以獲得無菌的外植體用于接種。

5.2培養(yǎng)基成分

芽段初代培養(yǎng)與繼代培養(yǎng)所需培養(yǎng)基成分見附錄A，培養(yǎng)基pH5.8。

5.3外植體的接種

將經(jīng)過滅菌的芽段置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，無菌接種。

2

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5.4初代培養(yǎng)

外植體接種于300mL～650mL培養(yǎng)瓶中，每瓶分裝培養(yǎng)基高度1.0cm～1.5cm，每10mL培養(yǎng)基接

種1個(gè)芽段。置于無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)20d～30d。

培養(yǎng)室設(shè)置光照強(qiáng)度2000lx～3000lx，光照時(shí)間14h/d，濕度60%，溫度25℃±2℃。

5.5繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)獲得的不定芽分割成1cm3的不定芽塊，按5.4的方法接種培養(yǎng)，擴(kuò)繁獲得大量的不定芽

塊。

5.6生根培養(yǎng)

從繼代培養(yǎng)獲得的不定芽塊中分離高度≥2cm的健壯不定芽，按5.4的方法接種培養(yǎng)，其中光照強(qiáng)

度設(shè)置為3000lx。獲得根芽齊全的金銀花無菌幼苗。

6溫室馴化

6.1將根芽齊全的無菌幼苗帶瓶轉(zhuǎn)移至溫室中，日光鍛煉5d～7d，然后開瓶鍛煉3d～5d，及時(shí)加水

保濕。

6.2將鍛煉好的幼苗從培養(yǎng)瓶中取出，用自來水沖洗根部10min，洗凈根系附著的培養(yǎng)基，置于適宜濃

度的農(nóng)用殺菌劑中，浸泡處理，然后定植于珍珠巖基質(zhì)的穴盤中，噴水保濕。

3

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A

A

附錄A

（資料性）

培養(yǎng)基成分

金銀花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分見表A.1。

表A.1金銀花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分表

初代培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基

培養(yǎng)基成分

mg/Lmg/Lmg/L

硝酸銨NH4NO316501650825

硝酸鉀KNO319001900950

磷酸二氫鉀KH2PO417017085

七水硫酸鎂MgSO4?7H2O370370185

二水氯化鈣CaCl2?2H2O440440220

四水硫酸錳MnSO4?4H2O22.322.322.3

硼酸H3BO36.26.26.2

無機(jī)成分

七水硫酸鋅ZnSO4?7H2O8.68.68.6

碘化鉀KI0.830.830.83

二水鉬酸鈉Na2MoO4?2H2O0.250.250.25

五水硫酸銅CuSO4?5H2O0.0250.0250.025

六水氯化鈷CoCl2?6H2O0.0250.0250.025

乙二胺四乙酸二鈉Na2EDTA?2H2O37.337.337.3

七水硫酸亞鐵FeSO4?7H2O27.827.827.8

肌醇Myo-inositol100100100

鹽酸硫胺素ThiamineHCl0.10.10.1

維生素

鹽酸吡哆醇PyridoxineHCl0.50.50.5

煙酸NicotinicAcid0.50.50.5

氨基酸甘氨酸Glycine222

萘乙酸NAA0.10.050

植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)六芐基腺嘌呤6-BA1.01.00.1

吲哚丁酸IBA001.5

活性炭ActiveCarbon300000

附加物蔗糖Sucrose300003000030000

瓊脂Agar400040004000

4

DB41/T2188—2021

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件....................................