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文檔簡介
ICS65.020.01
CCSB30
41
河南省地方標(biāo)準(zhǔn)
DB41/T2188—2021
金銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程
2021-10-19發(fā)布2022-01-18實施
河南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布
DB41/T2188—2021
目次
前言.................................................................................II
1范圍...............................................................................1
2規(guī)范性引用文件.....................................................................1
3術(shù)語和定義.........................................................................1
4設(shè)施設(shè)備...........................................................................1
5組織培養(yǎng)...........................................................................2
6溫室馴化...........................................................................3
附錄A(資料性)培養(yǎng)基成分...........................................................4
I
DB41/T2188—2021
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定
起草。
本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。
本文件起草單位:河南科技學(xué)院、封丘縣金銀花產(chǎn)業(yè)協(xié)會、安陽市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心、河南
大學(xué)、新鄉(xiāng)市正源農(nóng)業(yè)科技有限公司、封丘縣爾玉中藥材有限公司。
本文件主要起草人:李勇超、楊靖、趙元增、王廣軍、王秀平、宋琳琳、李明亮、孫海燕、趙航、
李正晗、姚自動、王峰。
II
DB41/T2188—2021
金銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程
1范圍
本文件規(guī)定了金銀花組織培養(yǎng)育苗的術(shù)語和定義、設(shè)施設(shè)備、組織培養(yǎng)和溫室馴化。
本文件適用于金銀花組織培養(yǎng)育苗。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,
僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本
文件。
LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
3.1
金銀花
忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)。
3.2
組織培養(yǎng)
在無菌條件下,將離體的植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體,在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中,
使其再生新植株的過程和技術(shù)。
3.3
外植體
用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體。
3.4
初代培養(yǎng)
在組織培養(yǎng)過程中,最初建立的外植體無菌培養(yǎng)階段。
3.5
繼代培養(yǎng)
將初代培養(yǎng)獲得的莖段或愈傷組織,通過分離切割接種在新的培養(yǎng)基中,從而獲得大量無菌幼苗的
培養(yǎng)階段。
4設(shè)施設(shè)備
4.1組織培養(yǎng)設(shè)施設(shè)備
4.1.1基本要求
組織培養(yǎng)室選址應(yīng)環(huán)境清潔,遠(yuǎn)離微粒和煙霧等污染源,水電供應(yīng)充足,交通運輸便利。
1
DB41/T2188—2021
組織培養(yǎng)室包括洗滌室、滅菌室、培養(yǎng)基配制室、緩沖室、無菌接種室和無菌培養(yǎng)室等。
4.1.2洗滌室設(shè)備
配備自動或半自動洗瓶機(jī)、水槽、收納箱、量瓶架等。
4.1.3滅菌室設(shè)備
配備高壓蒸汽滅菌鍋、器械消毒器、紫外線燈、烘干箱、微孔過濾器等。
4.1.4培養(yǎng)基配制室設(shè)備
配備電子天平(0.0001g,0.01g)、酸度計、微波爐、冰箱等。
4.1.5緩沖室設(shè)備
配備衣帽柜、風(fēng)淋裝置等。
4.1.6無菌接種室設(shè)備
配備超凈工作臺、器械消毒器、酒精燈等。
4.1.7無菌培養(yǎng)室設(shè)備
配備培養(yǎng)架、紫外燈、臭氧發(fā)生器、空氣加濕器、除濕機(jī)、時控裝置等。
4.2溫室馴化設(shè)施設(shè)備
日光溫室,配備溫濕度調(diào)節(jié)裝置、光照控制裝置、灌溉設(shè)備、栽培床、穴盤等。
5組織培養(yǎng)
5.1外植體取材與滅菌
5.1.1外植體取材
選取生長健壯、無病蟲害的金銀花當(dāng)年生嫩枝,截取長度為0.5cm~3cm的芽段,每個芽段包含1~
3個腋芽。
5.1.2外植體處理
將截取的芽段置于1%中性洗滌劑中浸泡10min,再用自來水沖洗30min。
5.1.3外植體滅菌
在超凈工作臺內(nèi),將處理過的芽段置于無菌培養(yǎng)瓶中,加入2.5%次氯酸鈉(按有效氯計)溶液浸泡
20min,再用滅菌蒸餾水沖洗4次,以獲得無菌的外植體用于接種。
5.2培養(yǎng)基成分
芽段初代培養(yǎng)與繼代培養(yǎng)所需培養(yǎng)基成分見附錄A,培養(yǎng)基pH5.8。
5.3外植體的接種
將經(jīng)過滅菌的芽段置于超凈工作臺內(nèi),無菌接種。
2
DB41/T2188—2021
5.4初代培養(yǎng)
外植體接種于300mL~650mL培養(yǎng)瓶中,每瓶分裝培養(yǎng)基高度1.0cm~1.5cm,每10mL培養(yǎng)基接
種1個芽段。置于無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)20d~30d。
培養(yǎng)室設(shè)置光照強度2000lx~3000lx,光照時間14h/d,濕度60%,溫度25℃±2℃。
5.5繼代培養(yǎng)
將初代培養(yǎng)獲得的不定芽分割成1cm3的不定芽塊,按5.4的方法接種培養(yǎng),擴(kuò)繁獲得大量的不定芽
塊。
5.6生根培養(yǎng)
從繼代培養(yǎng)獲得的不定芽塊中分離高度≥2cm的健壯不定芽,按5.4的方法接種培養(yǎng),其中光照強
度設(shè)置為3000lx。獲得根芽齊全的金銀花無菌幼苗。
6溫室馴化
6.1將根芽齊全的無菌幼苗帶瓶轉(zhuǎn)移至溫室中,日光鍛煉5d~7d,然后開瓶鍛煉3d~5d,及時加水
保濕。
6.2將鍛煉好的幼苗從培養(yǎng)瓶中取出,用自來水沖洗根部10min,洗凈根系附著的培養(yǎng)基,置于適宜濃
度的農(nóng)用殺菌劑中,浸泡處理,然后定植于珍珠巖基質(zhì)的穴盤中,噴水保濕。
3
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A
A
附錄A
(資料性)
培養(yǎng)基成分
金銀花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分見表A.1。
表A.1金銀花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分表
初代培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基
培養(yǎng)基成分
mg/Lmg/Lmg/L
硝酸銨NH4NO316501650825
硝酸鉀KNO319001900950
磷酸二氫鉀KH2PO417017085
七水硫酸鎂MgSO4?7H2O370370185
二水氯化鈣CaCl2?2H2O440440220
四水硫酸錳MnSO4?4H2O22.322.322.3
硼酸H3BO36.26.26.2
無機(jī)成分
七水硫酸鋅ZnSO4?7H2O8.68.68.6
碘化鉀KI0.830.830.83
二水鉬酸鈉Na2MoO4?2H2O0.250.250.25
五水硫酸銅CuSO4?5H2O0.0250.0250.025
六水氯化鈷CoCl2?6H2O0.0250.0250.025
乙二胺四乙酸二鈉Na2EDTA?2H2O37.337.337.3
七水硫酸亞鐵FeSO4?7H2O27.827.827.8
肌醇Myo-inositol100100100
鹽酸硫胺素ThiamineHCl0.10.10.1
維生素
鹽酸吡哆醇PyridoxineHCl0.50.50.5
煙酸NicotinicAcid0.50.50.5
氨基酸甘氨酸Glycine222
萘乙酸NAA0.10.050
植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)六芐基腺嘌呤6-BA1.01.00.1
吲哚丁酸IBA001.5
活性炭ActiveCarbon300000
附加物蔗糖Sucrose300003000030000
瓊脂Agar400040004000
4
DB41/T2188—2021
目次
前言.................................................................................II
1范圍...............................................................................1
2規(guī)范性引用文件....................................
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