呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）（CSZ2300334）

受理號：CSZ2300334體外診斷試劑產(chǎn)品注冊技術(shù)審評報告產(chǎn)品中文名稱：呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）產(chǎn)品管理類別：第三類申請人名稱：北京博暉創(chuàng)新生物技術(shù)集團(tuán)股份有限公司國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心目錄基本信息.........................................................................................................3一、申請人名稱.............................................................................................3二、申請人住所.............................................................................................3三、生產(chǎn)地址.................................................................................................3技術(shù)審評概述.................................................................................................4一、產(chǎn)品概述.................................................................................................4二、臨床前研究概述...................................................................................6三、臨床評價概述........................................................................................11四、產(chǎn)品受益風(fēng)險判定................................................................................13綜合評價意見................................................................................................15基本信息一、申請人名稱北京博暉創(chuàng)新生物技術(shù)集團(tuán)股份有限公司二、申請人住所北京市昌平區(qū)生命園路9號院三、生產(chǎn)地址北京市昌平區(qū)生命園路9號院技術(shù)審評概述一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分試劑盒的主要組成成分見下表：組分名稱裝量（X測試/盒）124數(shù)量成分?jǐn)U增反應(yīng)液300μL160μL1管緩沖液、dNTPs、Taq酶、UDG酶、逆轉(zhuǎn)錄酶引物液A100μL45μL1管甲型流感病毒、乙型流感病毒、百日咳鮑特菌和內(nèi)參4個靶標(biāo)的引物和探針試劑盒Ⅰ引物液B100μL45μL1管腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原體和內(nèi)參4個靶標(biāo)的引物和探針CarrierRNA82μL33μL1管CarrierRNA蛋白酶K190μL100μL1管蛋白酶K陽性質(zhì)控品220μL220μL1管含六個目標(biāo)靶點基因的假病毒（質(zhì)粒）和HEK293細(xì)胞陰性質(zhì)控品350μL350μL1管HEK293細(xì)胞磁珠440μL200μL1管磁珠試劑盒Ⅱ潤洗液1mL500μL1管BSA洗脫液1mL500μL1管Tris、EDTA硅油1.2mL1.0mL1管硅油異硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸鈉、二硫蘇裂解液C3mL1.5mL1管糖醇試劑盒Ⅲ異丙醇3mL1.5mL1管異丙醇漂洗液1A3mL1.5mL1管鹽酸胍、異丙醇漂洗液2A3mL1.5mL1管乙醇備注：1.不同規(guī)格或批次的試劑盒組分不得混用。2.需要但未提供的材料和設(shè)備：200μL微流控儀器配套芯片(貨號：130000102)和槍頭。（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本產(chǎn)品用于定性檢測人咽拭子樣本中的呼吸道病原體，包括甲型流H1N12009H3N2H5N1、H7N9）、乙型流感病毒（系和系）、腺病毒（B組、C組、E組）、呼吸道合胞病毒（A亞型和B亞型）、肺炎支原體和百日咳鮑特菌。本產(chǎn)品可區(qū)分樣本中上述6種病原體，但不區(qū)分同一病原體的具體型別，檢測結(jié)果可用于呼吸道病原體感染的輔助診斷。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格12測試/盒，4測試/（四）產(chǎn)品檢驗原理本試劑盒以待檢測病原體的保守序列為靶序列，設(shè)計特異性擴(kuò)增引物及對目標(biāo)靶點進(jìn)行擴(kuò)增和Ct值判斷樣本的陰陽性。試劑盒設(shè)計了內(nèi)參及外標(biāo)質(zhì)控品（陽性、陰性質(zhì)控品）對檢測（RibonucleasePRNaseP）基因設(shè)計引物探針，通過檢測樣本中內(nèi)參監(jiān)測待測樣本質(zhì)量、提取及熒光過程。試劑盒設(shè)置陰、陽性質(zhì)控品，用于監(jiān)測提取及熒光dUTP/UDG性。本產(chǎn)品依托微流控技術(shù)，在配套芯片（泵液芯片模塊，以下簡稱“芯片”）上實現(xiàn)從樣本到結(jié)果的一站式操作。只需將試劑、試劑架和芯片放入儀器的指定位置，將待測樣本加入芯片的加樣孔中，點擊鼠標(biāo)加載運(yùn)行程序，儀器就可以實現(xiàn)核酸提取純化、PCR、熒光采集及結(jié)果判讀。二、臨床前研究概述（一）主要原材料本產(chǎn)品在制備過程中主要原材料包括CarrierRNA、磁珠、引物、FluAB假病毒、假病毒，AdV假病毒、質(zhì)粒、B.P質(zhì)粒和HEK293CarrierRNAB假病毒、質(zhì)粒、B.P質(zhì)粒為外購，HEK293細(xì)胞為申請人自行生產(chǎn)。申請人對主要原材料進(jìn)行了供應(yīng)商的選擇，通過功能性試驗，篩選出合格供應(yīng)商，制定了各主要原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)檢驗合格。企業(yè)參考品和質(zhì)控品的設(shè)置情況本產(chǎn)品企業(yè)參考品包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品。參考品均采用病原體培養(yǎng)物制備而成。組成如下：20養(yǎng)物組成。陰性參考品：10份，由試劑盒檢測范圍外的病原體培養(yǎng)物組成。精密度參考品：3份，由中強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性濃度水平的病原體培養(yǎng)物組成。低檢測限濃度水平的病原體培養(yǎng)物組成。本試劑盒設(shè)置了陰性質(zhì)控品為細(xì)胞；陽性質(zhì)控品為含六個目標(biāo)靶點基因的假病毒（質(zhì)粒）和HEK293細(xì)胞，用于檢測過程中試劑和儀器的質(zhì)量控制。（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究申請人通過企業(yè)內(nèi)部參考品試驗確定最佳的生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系，包括：核酸提取試劑、PCR擴(kuò)增試劑和質(zhì)控品的配液工序、分裝工序及組裝工序等，同時對蛋白酶K、CarrierRNA、磁珠、裂解液C、漂洗液1A2A擴(kuò)增程序、反應(yīng)體積等反應(yīng)條件進(jìn)行研究，還包括對樣本類型的研究、樣本穩(wěn)定性的研究。（三）分析性能評估精密度、特異性、最低檢出限，包容性等，申請人提交了質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的三批產(chǎn)品在適用機(jī)型上的性能評估資料。1.準(zhǔn)確度在準(zhǔn)確度研究中，申請人采用三批試劑盒對企業(yè)參考品及臨床樣本在所有適用機(jī)型上進(jìn)行準(zhǔn)確度評價。結(jié)果表明檢測企業(yè)參考品陰性符合率為100%100%測結(jié)果總一致率96.08%，陽性符合率為96.34%，陰性符合率為95.00%；與一代測序檢測結(jié)果全部一致。2.精密度精密度研究中，申請人使用三批試劑對陰性臨床樣本2份、臨界陽性臨床樣本9920份臨床樣本進(jìn)行精密20××2密度評價試驗?zāi)Ｐ蜑?×5×5。研究結(jié)果表明產(chǎn)品的重復(fù)性、室內(nèi)精密度、再現(xiàn)性精密度和批間精密度CV均≤，滿足產(chǎn)品技術(shù)要求。3.特異性分析特異性研究包括交叉反應(yīng)研究、競爭性干擾研究和內(nèi)外源干擾研究。在交叉反應(yīng)性能評估中，申請人使用一批試劑對試劑盒檢測范圍內(nèi)6個病原體之間及與檢測范圍內(nèi)病原體有相同基因或基因序列有同43、副流感、副流感、腸道病毒EV71、病毒、人巨細(xì)胞病毒、肺炎衣原體、鼻病毒A30型、人偏肺病毒型、博14肺炎克雷伯菌、卡他莫拉菌、唾液鏈球菌、棒狀桿菌屬、化膿性鏈球菌、星狀諾卡氏菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、檸檬酸桿菌屬、新型隱球酵母、紋帶棒桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌、胺胨羅斯氏菌、煙曲霉、黃曲霉、I奈瑟氏菌屬、肺孢子菌進(jìn)行交叉反應(yīng)評價，結(jié)果表明試劑盒檢測范圍內(nèi)的6個病原體之間沒有交叉反應(yīng)，與檢測范圍內(nèi)病原體有相同基因或基因序列有同源性、呼吸道常見病原體等試劑盒檢測范圍外的43種病原體無交叉反應(yīng)。在競爭性干擾研究中，申請人使用三批試劑對同一反應(yīng)體系內(nèi)不同病原體間的競爭性干擾進(jìn)行評估，根據(jù)臨床上常見的呼吸道病毒混合感染情況，分析同一反應(yīng)體系內(nèi)高濃度病原體對低濃度病原體檢測的影響。結(jié)果表明樣本中存在同一體系內(nèi)的兩種或三種靶標(biāo)時，不會出現(xiàn)內(nèi)部競爭抑制作用。29源性干擾物質(zhì)（包括全血、粘蛋白、鼻和咽喉中用于緩解鼻塞、鼻腔干燥、刺激或哮喘和過敏癥狀的藥物，以及抗生素和抗病毒藥物），使用單陽臨界陽性水平及混合陽臨界陽性水平樣本進(jìn)行檢測。結(jié)果表2.5%（w/v2%106個（v/v50地塞米松、100曲安奈德、布地奈德、10孟魯司特納、50金剛烷胺、7.5利巴韋林、7.5奧司他韋、10左氧氟沙星、10諾氟沙30%500（v/vNaCl1.7薄荷腦、妥布霉素，10鹽酸非索非那定，莫μg/mLμg/mL10μ氟尼縮松、250μ氟替卡松、50g/mL鹽酸組胺、50μ苯佐卡因、100g/mL扎那米韋、100μg/mL帕拉米韋，不會影響試劑盒檢測結(jié)果的判定。50g/mL凍干鼻噴流感減毒疫苗有可能會影響甲型流感病毒和乙型流感病毒檢測結(jié)果，對于使用鼻噴流感減毒疫苗的患者，有可能會出現(xiàn)甲型流感病毒和乙型流感病毒假陽性。4.最低檢出限申請人使用三批試劑對試劑盒檢測范圍內(nèi)病原體亞型的培養(yǎng)物及50株培養(yǎng)物、40出率≥95%時所對應(yīng)的濃度水平確定試劑盒的檢出限，并進(jìn)行最低檢2000拷貝最低檢出限為甲型流感病毒TCID50/mL、乙型流感病毒TCID50/mL、腺病毒0.93TCID50/mL、呼吸道合胞病毒TCID50/mL、百日咳鮑特菌。5.包容性申請人使用三批試劑對具有時間和地理多樣性的3個不同來源共54株臨床樣本進(jìn)行包容性研究，臨床樣本包括309H1N13株、H3N23株、H5N13株、H7N93株、B/Victoria3株、B/Yamagata3株、B.P3Adv1型3株、型3株、型3株、Adv4型3株、型3株、型3株、Adv55型3株、亞型3株、亞型3株、3株。結(jié)果表明試劑盒包容性滿足要求。（四）陽性判斷值研究陽性判斷值的確定：選取來不同地區(qū)有明確診斷信息的400床樣本進(jìn)行研究。分別納入試劑盒檢測范圍內(nèi)的6種單陽樣本及常見混合陽樣本，共273例陽性樣本，陰性樣本例，使用本試劑盒進(jìn)的陽性判斷值均為40。陽性判斷值驗證：選取來自不同地區(qū)有明確診斷信息的200406個病原體的檢測結(jié)果與對比方法的符合率在99%以上，本試劑盒陽性判斷值設(shè)置合理。（五）穩(wěn)定性研究申請人對本產(chǎn)品的效期穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性以及樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，確定了在各種條件下本產(chǎn)品及樣本的有效保存時間。效期穩(wěn)定性：使用企業(yè)參考品對三批試劑按照技術(shù)要求檢測，分別于試劑盒保存的第0個月、6個月、10個月、12個月、15個月進(jìn)行穩(wěn)定性試驗；檢測結(jié)果均符合技術(shù)要求。因此，試劑盒按照說明書要求可保存12個月，檢測性能穩(wěn)定。此外，申請人對產(chǎn)品的凍融穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性分三、臨床評價概述申請人在首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院和濟(jì)南市兒童醫(yī)院共3家機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗。入組人群為呼吸道感染的患者，樣本類型為咽拭子。針對甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原體核酸檢測，臨床試驗采用試驗體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對，入組病例21502631887驗結(jié)果顯示，陽性符合率為（95CI：95.6%，99.2%），陰性符合率為99.3%（95CI：98.8%，99.6%2121938（98.2%100%率為99.5%95CI：99.1%99.8%）；顯示，陽性符合率為96.4%95CI：93.5%98.0%），陰性符合率為99.7%95CI99.4%，99.9%）；針對呼吸道合胞病毒，納入陽性病例例，陰性病例1926試驗結(jié)果顯示，陽性符合率為99.6%（95CI：，99.9%），陰性符合率為99.2%（95CI：98.7%99.5%1899結(jié)果顯示，陽性符合率為98.8%（95CI：96.5%99.6%），陰性符合率為99.3%95CI：98.8%99.6%）。針對百日咳鮑特菌核酸檢測，臨床試驗采用試驗體外診斷試劑與Sanger測序進(jìn)行比較研究，共入組2150例病例，包括陽性病例352例，陰性病例1798例。試驗結(jié)果顯示，陽性符合率為99.7%95CI：98.4%99.9%99.8%（95CI99.5%99.9%時還進(jìn)行了與百日咳鮑特菌培養(yǎng)鑒定的比較，包括培養(yǎng)陽性病例85810（95CI93.6%99.8%特異度為70.1%（95CI：66.9%73.2%）。針對與培養(yǎng)鑒定不一致的樣本，均結(jié)合Sanger測序進(jìn)行了確認(rèn)。綜上所述，臨床試驗結(jié)果顯示本產(chǎn)品與對比方法的一致性較好，滿足技術(shù)審評要求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險判定本產(chǎn)品根據(jù)YY/T0316-2016醫(yī)療器械風(fēng)險管理對本產(chǎn)品的安全風(fēng)險分析方式，對本產(chǎn)品進(jìn)行風(fēng)險分析。（一）受益評估產(chǎn)品通過對患者咽拭子樣本中的六項呼吸道病原體核酸的定性檢測，一次性獲得多個病原體的檢測結(jié)果，避免重復(fù)采樣可能帶來的痛苦，供臨床診斷參考，為呼吸道感染性疾病的臨床診療提供一種更多的輔助診斷方法，提高診斷效率。（二）風(fēng)險評估申請人對已知危險（源）進(jìn)行風(fēng)險評價，按照風(fēng)險可接受準(zhǔn)則判斷每個危險（源）的風(fēng)險是否達(dá)到可接受水平，對合理可行降低的風(fēng)對具體措施進(jìn)行實施驗證，同時重新對采取措施后的風(fēng)險進(jìn)行估計，確認(rèn)其風(fēng)險水平是否可接受。但為保證用械安全，基于對主要剩余風(fēng)險的規(guī)避，需要在說明書中提示以下信息：1.與預(yù)期用途有關(guān)的風(fēng)險，例如本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，不得單獨作為患者管理的依據(jù)。2.與儲存或運(yùn)輸相關(guān)的風(fēng)險，例如產(chǎn)品儲存條件不達(dá)標(biāo)，產(chǎn)品運(yùn)輸條件不達(dá)標(biāo)。3.與使用有關(guān)的風(fēng)險，例如不合理的樣本采集、處理方法，其他樣本類型或樣本采集、處理方法以及不當(dāng)?shù)膶嶒灢僮骱蛯嶒灜h(huán)境均有管與芯片貼合得緊密無縫，如有松動現(xiàn)象應(yīng)人工安裝緊固后再使用；注管置于儀器上的加熱4.與防護(hù)有關(guān)的風(fēng)險，儀器使用時需關(guān)閉儀器艙門，操作者穿工作服和一次性手套，萬一試劑與皮膚、粘膜接觸，請立即用自來水沖洗。5.警示及注意事項：該試劑盒說明書中明確了該試劑盒檢查方法的局限性及使用中的注意事項。綜合評價意見本申報項目為境內(nèi)第三類體外診斷試劑產(chǎn)品注冊。依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》（國務(wù)院令第739號）、《體外診斷試劑注冊與備48規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)對申請人提交的注冊申報資料進(jìn)行系統(tǒng)評價,申報2024年9月6日附件：產(chǎn)品說明書呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（熒光探針法）說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）【包裝規(guī)格】12測試盒，4測試盒【預(yù)期用途】本產(chǎn)品用于定性檢測人咽拭子樣本中的呼吸道病原體，包括甲型流感病毒（季節(jié)性H1N1、新型甲型H1N1流感病毒（H3N2H5N1H7N9）、乙型流感病毒（（B組、CE組）、呼吸道合胞病毒（A亞型和B亞型）、肺炎支原體和百日咳鮑特菌。本產(chǎn)品可區(qū)分樣本中上述6體感染的輔助診斷。Respiratorytractinfection中發(fā)生，大多數(shù)的呼吸道感染是由病毒、衣原體或支原體引起的，這些病原體種類繁多，且引起的臨床癥狀和體征都比較相似，其臨床表現(xiàn)主要為鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃體炎等癥狀，嚴(yán)重的可引起氣管炎、支氣管炎及肺炎等，但不同病原體引起的感染，其治療方法、療效和病程也不盡相同。InfluenzavirusOrthomyxoviridae病毒，根據(jù)核蛋白和基質(zhì)蛋白不同，分為甲（A）、乙（B）、丙（C）、?。―）四型，是引起急性呼吸道傳染病的病原體之一，主要通過空氣中的飛沫、易感者與感染者之間的接觸或與被污染物品的接觸而傳播，一般秋冬季節(jié)是其高發(fā)期。目前感染人的主要是甲型流感病毒（InfluenzaAvirus,FluA）中的H1N1、H3N2H和NInfluenzaBvirus,FluB）中的感的兒童常以嘔吐、腹痛、腹瀉為主要表現(xiàn)。AdenovirusAdv～90nm的雙鏈DNA和引起。呼吸道感染的典型癥狀是咳嗽、鼻塞和咽炎，同時伴有發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛和肌肉痛等癥狀，嚴(yán)重時可引起肺炎。呼吸道合胞病毒（Respiratorysyncytialvirus,RSV），是一種RNA病毒，是引起小兒病毒性肺炎最常見的病原，多見于3歲以下的嬰幼兒，主要癥狀有高熱、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表現(xiàn)為細(xì)支氣管炎及肺RSV分成AB兩個亞型，其主要差異在于病毒外膜表面的F蛋白和G蛋白的抗原性不同。百日咳鮑特菌（BordetellaPertussis,BP）屬于鮑特菌屬，為革蘭氏陰性短小球桿菌。人是百日咳鮑特菌的唯一感染宿主，任何年齡的人都可以感染百日咳，其傳播途徑為飛沫傳播，傳染性極強(qiáng)。典型百日咳的潛伏期2d~21d，一般為7d~10d。百日咳的病程較長，臨床可分為前驅(qū)期、痙咳期和恢復(fù)期。前驅(qū)期約持續(xù)1~22~62~3周，痙咳次數(shù)減少，病情減輕，最終消失。常見并發(fā)癥有肺炎、肺氣腫，百日咳腦病和肺結(jié)核惡化。Mycoplasmapneumoniae,MP伏期～3周，發(fā)病率以青少年最高。臨床癥狀較輕，甚至根本無癥狀，若有也只是頭痛、咽痛、發(fā)熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀，但也有個別死亡報道。目前針對呼吸道病原體的檢測通常是基于對病原體特定的糖類蛋白質(zhì)和核酸基因進(jìn)行檢測。常見的檢測技術(shù)包括：培養(yǎng)法、抗原直接檢測、血清學(xué)抗體檢測和分子診斷等?！緳z驗原理】PCR擴(kuò)增引物及法Ct值判斷樣本的陰陽性。試劑盒設(shè)計了內(nèi)參及外標(biāo)質(zhì)控品（陽性、陰性質(zhì)控品）對檢測過程進(jìn)行質(zhì)量控制。內(nèi)參采用人核糖核酸酶（RibonucleasePRNaseP光PCR過程。陰性質(zhì)控品為HEK293細(xì)胞，陽性質(zhì)控品為含甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒目的基因的假病毒和含百日咳鮑特菌、肺炎支原體目的基因的質(zhì)粒及HEK293細(xì)胞，用于監(jiān)測提取及熒光PCR過程。同時引入dUTP/UDG防污染系統(tǒng)，以保障檢測過程的準(zhǔn)確性。本產(chǎn)品依托微流控技術(shù)，在配套芯片（泵液芯片模塊，以下簡稱“芯片”）上實現(xiàn)從樣本到結(jié)果的一站式操作。只需將試劑、試劑架和芯片放入儀器的指定位置，將待測樣本加入芯片的加樣孔中，點擊鼠標(biāo)加載運(yùn)行程序，儀器就可以實現(xiàn)核酸提取純化、PCR、熒光采集及結(jié)果判讀?！局饕M成成分】組分名稱X測試盒）124數(shù)量成分?jǐn)U增反應(yīng)液300μL160μL1管緩沖液、dNTPsUDG酶、逆轉(zhuǎn)錄酶引物液A100μL45μL1管內(nèi)參4個靶標(biāo)的引物和探針試劑盒引物液B100μL45μL1管腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原體和內(nèi)參4個靶標(biāo)的引物和探針ⅠCarrier82μL33μL1管Carrier蛋白酶K190μL100μL1管蛋白酶K陽性質(zhì)控品220μL220μL1管HEK293細(xì)胞陰性質(zhì)控品350μL350μL1管HEK293細(xì)胞試劑盒Ⅱ磁珠440μL200μL1管磁珠潤洗液1mL500μL1管BSA洗脫液1mL500μL1管、硅油1.2mL1.0mL1管硅油試劑盒Ⅲ裂解液C3mL1.5mL1管異硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸鈉、二硫蘇糖醇異丙醇3mL1.5mL1管異丙醇漂洗液3mL1.5mL1管鹽酸胍、異丙醇漂洗液3mL1.5mL1管乙醇備注：1.不同規(guī)格或批次的試劑盒組分不得混用。2.需要但未提供的材料和設(shè)備：200μL移液器及配套槍頭，博暉微流控儀器配套芯片(貨號：130000102)和槍頭?！緝Υ鏃l件及有效期】試劑盒I在℃以下保存，試劑盒II在2℃~8℃保存，試劑盒在10℃~30℃保存；試劑盒有效期為12個月。試劑盒I干冰運(yùn)輸，開箱溫度不高于II2℃~8℃運(yùn)輸；試劑盒10℃~30℃運(yùn)輸；運(yùn)輸時間不超過7試劑盒I反復(fù)凍融≤6次。生產(chǎn)日期和使用期限見盒簽或瓶簽。【適用儀器】北京博暉創(chuàng)新生物技術(shù)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)的全自動核酸檢測分析系統(tǒng)（型號BHQ-III），軟件版本號V1?！緲颖疽蟆?.樣本類型咽拭子。2.樣本采集2.1采集器材口咽采集專用無菌拭子，拭子頭材質(zhì)推薦采用尼龍植絨材質(zhì)。拭子桿選擇塑料類材質(zhì)。2.2采樣方法按照常規(guī)咽拭子采集方法進(jìn)行采集，請患者坐下，頭后傾，張大嘴，采樣者用壓舌板固定舌頭，用采樣拭子越過舌根到咽后壁及扁桃體隱窩、側(cè)壁等處擦拭，收集粘膜細(xì)胞，然后輕輕取出拭子，避免觸及舌頭、懸垂體，并迅速放入裝有采樣液的采樣管中，最后在靠近采樣管頂端處折斷并棄去尾部，旋緊管蓋?；虬凑铡秶伊鞲兄行臉?biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》中關(guān)于咽拭子的采集方法進(jìn)行采集。2.3采樣液要求推薦使用：序號保存液名稱裝量生產(chǎn)廠家備案號1病毒采樣試劑盒3.5mL友康生物科技（北京）股份有限公司京械注準(zhǔn)201824002362細(xì)胞保存液3mL寧波海爾施基因科技有限公司浙甬械備20190062號3樣本保存液3mL北京博暉創(chuàng)新生物技術(shù)集團(tuán)股份有限公司京昌械備20200077號3.樣本保存2~848℃保存?zhèn)€月以內(nèi)，-70℃及以下保存24個月以內(nèi)，應(yīng)避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)不超過5【檢驗方法】1.實驗前準(zhǔn)備1.1樣本準(zhǔn)備將采樣管置于渦旋混勻儀上充分渦旋10秒，凍存樣本需提前室溫解凍。1.2儀器和試劑準(zhǔn)備打開全自動核酸檢測分析系統(tǒng)（按照儀器說明書操作）；將試劑盒I和試劑盒管底，然后將各試劑組分置于儀器試劑架上對應(yīng)位置，并放置足夠的合適大小的槍頭。2.實驗操作2.1將混勻的樣本、陰陽性質(zhì)控使用移液器各取，加入芯片加樣孔，然后將芯片裝載到儀器上。2.2PCR-熒光探針法）操作程序。核酸提取程序運(yùn)行基本過程如下所示，所有試劑組分加液過程均由儀器自動完成。加樣槍分180μL裂解液到試劑池12測試：3044測試：122）和蛋白酶（12461CarrierRNA管，并混合20K10μL和Carrier5.5μL）到芯片試劑池，然后泵液到樣本池細(xì)胞裂解與核酸提取純化加樣槍分配30μL磁珠到試劑池，然后泵液到樣本池加樣槍分配170μL異丙醇到試劑池，然后泵液到樣本池儀器自動進(jìn)行磁珠捕獲核酸提取加樣槍分配80μL漂洗液到試劑池，然后進(jìn)行漂洗加樣槍分配80μL漂洗液到試劑池，然后進(jìn)行漂洗加樣槍分配60μL潤洗液到洗脫池，然后進(jìn)行溝道漂洗洗脫核酸加樣槍分配60μL洗脫液到洗脫池，然后進(jìn)行核酸洗脫加樣槍分別吸取一定量的擴(kuò)增反應(yīng)液（測試：；4測試：56.3）加入到引物液A管和引物液B管，并混勻，形成擴(kuò)增反應(yīng)液A和擴(kuò)增反應(yīng)液BPCR試劑混合進(jìn)樣PCR管1和PCR管2中分別加入擴(kuò)增反應(yīng)液A和擴(kuò)增反應(yīng)液B，各13.5（其中包含擴(kuò)增反應(yīng)液7.5μL和引物6μL）通過氣泵向PCR管1和PCR管2中分別泵入等量的核酸16.5μLPCR管1和PCR管2用硅油30μL密封PCR擴(kuò)增程序如下所示：溫度時間循環(huán)數(shù)55℃195℃30s195℃10s58℃（熒光采集）30s452.3實驗結(jié)束，將試劑管架上試劑瓶和芯片卸載，清潔儀器工作臺?！娟栃耘袛嘀怠筷栃耘袛嘀低ㄟ^對臨床陰性和陽性樣本的檢測數(shù)據(jù)采用受試者工作特征曲線（receiveroperatingcharacteristiccurveROCCt為陽性；相反，則判斷該病原體檢測為陰性。本試劑盒各病原體及內(nèi)參Ct值的陽性判斷值為。本試劑盒的判讀軟件中已經(jīng)整合了各病原體的陽性判斷值，檢測結(jié)果由軟件進(jìn)行判讀。【檢驗結(jié)果的解釋】1.樣本檢測結(jié)果樣本的檢測結(jié)果由軟件判讀，結(jié)果顯示在“檢測信息”窗口中。例如，甲型流感病毒陽性樣本的檢測結(jié)果顯示為“甲型流感病毒陽性，乙型流感病毒陰性，百日咳鮑特菌陰性，腺病毒陰性，呼吸道合胞病毒陰性，肺炎支原體陰性，內(nèi)參陽性”。陰性樣本的檢測結(jié)果顯示為“甲型流感病毒陰性，乙型流感病毒陰性，百日咳鮑特菌陰性，腺病毒陰性，呼吸道合胞病毒陰性，肺炎支原體陰性，內(nèi)參陽性”。無效的檢測結(jié)果顯示為“甲型流感病毒陰性，乙型流感病毒陰性，百日咳鮑特菌陰性，腺病毒陰性，呼吸道合胞病毒陰性，肺炎支原體陰性，內(nèi)參陰性”。檢測無效的樣本應(yīng)查找原因并重復(fù)檢測該樣本，若檢測結(jié)果還是無效，建議重新采集樣本后繼續(xù)檢測。檢測通道對應(yīng)靶標(biāo)引物液A引物液BAdvROXRSVCY5內(nèi)參1）陰性樣本的判讀各個病原體靶標(biāo)陰性（Ct值大于，或無），引物液A、引物液B中內(nèi)參陽性（Ct40），結(jié)果判定為陰性；若各個病原體靶標(biāo)陰性（Ct值大于，或無CtA、引物液B中內(nèi)參僅1或2個都是陰性，則判定為檢測結(jié)果無效，需查找原因并重新檢測或重新采樣后檢測。陰性樣本結(jié)果示例如下：陰性結(jié)果1引物液A引物液B－－＋＋ROX－－CY5－－軟件顯示各個病原體陰性，內(nèi)參陽性，檢測結(jié)果：陰性陰性結(jié)果2引物液A引物液B－－＋－ROX－－CY5－－軟件顯示各個病原體陰性，內(nèi)參異常，檢測結(jié)果：無效2）陽性樣本的判讀引物液ABAB中內(nèi)參僅1則判為檢測結(jié)果無效，需查找原因并重新檢測或重新采樣后檢測。陽性樣本結(jié)果示例如下：陽性結(jié)果1引物液A引物液B－－＋＋ROX＋－CY5－－軟件顯示對應(yīng)病原體陽性，內(nèi)參陽性，檢測結(jié)果：乙型流感病毒陽性陽性結(jié)果2引物液A引物液B－－＋－ROX＋－CY5－－軟件顯示對應(yīng)病原體陽性，內(nèi)參異常，檢測結(jié)果：無效陽性結(jié)果3引物液A引物液B－－＋－ROX－＋CY5－－軟件顯示病毒陽性陽性結(jié)果4引物液A引物液B－－－－ROX＋＋CY5－－軟件顯示毒、呼吸道合胞病毒陽性2.質(zhì)量控制（1）陽性質(zhì)控品：結(jié)果為甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、百日咳鮑特菌及肺炎支原體陽性、內(nèi)參陽性。各病原體Ct值介于25-35，內(nèi)參Ct值介于24-33之間。（2Ct＞或NoCtCt值介于之間。（3）以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進(jìn)行?！緳z驗方法的局限性】1.本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。臨床診斷和治療需要結(jié)合臨床癥狀、病史、其他實驗室檢測指標(biāo)等綜合考慮。2.檢測靶序列的變異（擴(kuò)增引物位置的變異、探針位置的變異）會導(dǎo)致假陰性結(jié)果。3.4.樣本中病毒滴度過低、核酸降解等均有可能導(dǎo)致無效檢測或假陰性結(jié)果；5.未經(jīng)驗證的其它干擾因素，如未經(jīng)驗證的其他干擾物或抑制因子等會導(dǎo)致假陰性結(jié)果。6.接種減毒活疫苗的患者可能會導(dǎo)致檢測試劑檢測結(jié)果呈陽性。7.待檢核酸序列可能長時間出現(xiàn)在體內(nèi)，而與病毒活性無關(guān)。核酸檢測陽性并不一定意味著目前感染了相應(yīng)病毒或其為臨床癥狀的致病因子。【產(chǎn)品性能指標(biāo)】1.本試劑盒檢測第二代甲乙型流感病毒核酸檢測試劑國家參考品，均符合要求。2.檢測限：序號病原體拷貝濃度滴度濃度序號病原體拷貝濃度滴度濃度1FluA2000Copies/mL3.20TCID/mL4Adv2000Copies/mL0.93TCID/mL2FluB2000Copies/mL7.66TCID/mL5RSV2000Copies/mL0.82TCID/mL3B.P2000Copies/mL107.48CFU/mL6M.P2000Copies/mL3.陽性陰性符合率：檢測企業(yè)陽性參考品20份（RTI-PC01~20）、陰性參考品份（RTI-NC01~10），符合率均為100%。4.分析特異性：本試劑盒與以下病原體無交叉反應(yīng)。副流感1副流感2副流感3副流感41.0E5TCID50/mL1.0E5TCID50/mL1.0E5TCID50/mL1.0E5TCID50/mL腸道病毒EV71EB病毒人巨細(xì)胞病毒肺炎衣原體1.0E5TCID50/mL1.0E6copies/mL1.0E5TCID50/mL1.0E5TCID50/mL鼻病毒A30型人偏肺病毒A2型博卡病毒流感嗜血桿菌1.0E5TCID50/mL1.0E5TCID50/mL1.0E7copies/mL1.0E6cfu/mL金黃色葡萄球菌肺炎鏈球菌14型白念珠菌嗜肺軍團(tuán)菌1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL干乳酸桿菌副百日咳博德特氏菌表皮葡萄球菌肺炎克雷伯菌1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL卡他莫拉菌唾液鏈球菌棒狀桿菌屬化膿性鏈球菌1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL星狀諾卡氏菌黏質(zhì)沙雷氏菌檸檬酸桿菌屬新型隱球酵母1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL大腸埃希氏菌鮑曼不動桿菌綠膿假單胞菌洋蔥伯克霍爾德氏菌1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL紋帶棒桿菌嗜麥芽窄食單胞菌胺胨羅斯氏菌煙曲霉1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL黃曲霉腦膜炎奈瑟菌口腔鏈球菌單純皰疹病毒I型1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL1.0E6TCID50/mL水痘帶狀皰疹病毒腦膜炎奈瑟菌肺孢子菌1.0E5TCID50/mL1.0E6cfu/mL1.0E6cfu/mL5.鼻腔干燥、刺激或哮喘和過敏癥狀的藥物，以及抗生素和抗病毒藥物等）種，使用單陽臨界陽性水平及混合陽性臨界水平樣本進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，內(nèi)源物質(zhì)2.5%（w/v）粘蛋白、2%全血及高濃度人106/mL15%v/v50mg/L地塞米松、100mg/mL曲安奈德、320mg/L布地奈德、10mg/mL孟魯司特納、50mg/L金剛烷胺、7.5mg/L利巴韋林、7.5mg/L奧司他韋、10mg/mL左氧氟沙星、10mg/mL諾氟沙星、30%漱口水、500mg/L莫匹羅星、1%（v/vNaCl1.7mg/mL薄荷腦、100mg/L妥布霉素，10mg/mL鹽酸非索非那定，150mg/L莫米松，100μg/mL苯福林、250μg/mL倍氯美松、10μg/mL氟尼縮松、0μg/mL氟替卡松、50μg/mL鹽酸組胺、50μg/mL苯