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34Technicalregulationsforvirus-eliminatedtissuecultureseedlingpropagationofpomegranateI安徽省紅瑪瑙石榴科技有限公司、安徽省質(zhì)量和1石榴脫毒苗木繁育技術規(guī)程GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合石榴組培tissuecultureofpomegra4環(huán)境要求24.1準備室用于藥品和培養(yǎng)基配置、器具洗滌及滅菌等，面積≥15m2，溫度為20℃~28℃。4.2緩沖室用于室外與接種室或培養(yǎng)室的隔離緩沖區(qū)間，應具備換衣區(qū)、風淋區(qū)，面積≥24.3接種室月進行1次甲醛熏蒸消殺滅菌處理；室內(nèi)溫度21℃~26℃,相對濕度50%～70%。4.4培養(yǎng)室用于組培苗的培養(yǎng)，面積≤50m2，方便隔離和消殺；培養(yǎng)室要求嚴格無菌，應具備培養(yǎng)架，室內(nèi)消殺滅菌處理；培養(yǎng)室環(huán)境相對濕度70%～8Lux；暗培養(yǎng)8h，22℃~26℃。4.5煉苗室應具有自動噴霧或加濕設施，溫度22℃~28℃、相對濕度50%～70%、光照1000Lu4.6移栽溫室應具有遮光設施，遮陽率25%～50%、溫度15℃~25℃、相對濕度50%～70%、自然光照，光照過5組培技術5.1技術路線組培技術路線：外植體選取→莖尖接種→擴繁培養(yǎng)→生根培養(yǎng)→病毒檢測→煉苗5.2組培流程5.2.1外植體選取5.2.2培養(yǎng)基配置35.2.3接種5.2.4擴繁用組培苗作為外植體，切去增生愈傷后，接種于擴繁培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25d5.2.5生根剪取擴繁苗1.0cm～1.5cm的不定芽莖段作為外植體，接種于生根培養(yǎng)基中，插入深度0.25cm~5.2.6煉苗5.2.7移栽——石榴花葉病毒（PoMv,Pomegranatemosaicvirus）；——李壞死環(huán)斑病毒石榴花葉株系（PNRSV,Prunusnecroticringspotvirus,pomegranate4采用隨機取樣法，抽取移栽苗木進行病毒檢測。以1千株為基數(shù)（＜1千株的，以1千株計算），1推薦使用反轉錄——聚合酶鏈式反應檢測法（RT-PCCTGTACCACACTGAAAATATATGTTCTTGATAACATATTTTCAGTGTCC移栽苗木檢測，其帶有檢測對象的病毒株允7.3.1合格苗木以綜合控制條件、根幅、地徑和苗高確定，達不到要求的為不合格苗木，合格

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