DB21T-梨白粉病抗性鑒定技術規(guī)程

PAGE8PAGE9DB21遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布××××-××-××實施××××-DB21遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布××××-××-××實施××××-××-××發(fā)布梨白粉病抗性鑒定技術規(guī)程DB××××—××××21/T1769—2009遼寧省地方標準ICS65.020.20B31備案號前??言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由遼寧省農業(yè)農村廳提出并歸口。本文件起草單位：中國農業(yè)科學院果樹研究所。本文件主要起草人：張艷杰、姜淑苓、王斐、歐春青、馬力、齊力永、王晨。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復審。歸口管理部門聯(lián)系方式：遼寧省農業(yè)農村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號），聯(lián)系電話文件起草單位聯(lián)系方式：中國農業(yè)科學院果樹研究所（遼寧省興城市興海南街98號），聯(lián)系電話梨白粉病抗性鑒定技術規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了梨白粉病抗性鑒定的技術方法和評價標準。本文件適用于梨樹白粉病抗性的鑒定評價。2術語和定義下列術語和定義適用于本文件。2.1抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。2.2抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術方法鑒定植物對特定病害的抵抗水平。2.3抗病性評價evaluationofresistance根據(jù)采用的技術標準判別寄主植物對特定病害反應程度和抵抗水平的描述。2.4病情級別diseaseratingscale人為定量植物個體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。2.5病情指數(shù)diseaseindex（DI）通過對植物個體發(fā)病程度(病情級別)數(shù)值的計算所獲得群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。2.6接種體inoculum用于接種以引起寄主病害的病原物或病原物的一部分。2.7人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體置于植物體適當部位并使之發(fā)病的過程。2.8接種懸浮液inoculumsuspension用于接種的含有定量接種體的液體。2.9梨白粉病Pearpowderymildew由梨球針殼（Phyllactiniapyri）和白叉絲單囊殼（Podosphaeraleucotricha）所引起的梨樹葉背產生白色粉斑，嚴重時白粉可覆蓋樹梢?嫩芽、葉柄等部位且葉背布滿白粉癥狀的梨樹病害?其中梨球針殼（Phyllactiniapyri）為我國主要的梨白粉病病原物?3接種體制備3.1病原物的采集采集具有典型梨白粉病病斑，而無其它病斑，且?guī)в行迈r白粉孢子堆的梨樹病葉，用干凈毛刷將病斑上的分生孢子刷于無菌水中，獲得分離物，經(jīng)形態(tài)學鑒定(參見附錄A)確認為梨白粉病病原物后，直接用于接種或擴繁備用。3.2病原物的保存與繁殖采用活體植株保存法：采用毛刷接種法或分生孢子懸浮液噴霧接種法將病原物接種于盆栽感病品種葉片，接種后將其置于白天溫度25℃、夜晚20℃，12h光周期的培養(yǎng)室或溫室內培養(yǎng)。保存并擴繁病原物。3.3接種懸浮液配置待保存并擴繁病原物的病葉上長出新鮮孢子后，用干凈毛刷將孢子刷取于無菌水中，按體積比為0.01‰的標準向無菌水中加入吐溫20，攪拌均勻后即得分生孢子懸浮液，用血球計數(shù)板計數(shù)分生孢子數(shù)稀釋至約1×105分生孢子/mL。病原物分生孢子懸浮液從制備到接種應限制在3h以內。4抗性鑒定4.1田間抗性鑒定4.1.1鑒定環(huán)境條件要求選擇梨白粉病自然發(fā)病環(huán)境適宜地區(qū)進行田間鑒定，應為平地或緩坡地，土壤肥沃，具備排灌條件，周邊設隔離區(qū)，無大規(guī)模梨樹生產園，防止病害傳播干擾鑒定結果。4.1.2鑒定材料要求根據(jù)當?shù)刈匀粭l件，選擇適宜的砧木類型對梨種質資源等鑒定材料進行嫁接；每份待鑒定材料保存3株以上；株行距1m~3m×3m~4m，保證樹體通風透光；按標準生產園要求進行管理，鑒定前一年對植株進行合理的修剪促發(fā)新梢，樹齡基本一致。4.1.3田間接種鑒定材料樹體生長良好，且具有足夠數(shù)量鑒定枝條時進行田間抗性鑒定，接種選擇田間生長1個月內沒有病葉的枝條上的葉片。接種采用噴霧接種法，田間接種最好在陰天或傍晚進行，把備好的分生孢子液噴霧接種到待鑒定枝條葉片正反面至淋濕程度，套硫酸紙袋，每袋放2個濕棉球保濕，48h后去袋并標記，每份材料接10個~15個枝條，每株調查葉片數(shù)至少100片。鑒定材料在接種前后不能噴施任何殺菌劑。4.2室內抗性鑒定4.2.1鑒定室條件要求人工接種鑒定室應具備人工調節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。4.2.2室內盆栽接種選擇適宜的砧木類型對梨種質資源鑒定材料進行嫁接，嫁接苗木定植于盆中，定植后將盆栽移至人工接種鑒定室，接種室環(huán)境為白天溫度25℃、夜晚20℃，12h光周期，50%濕度。待新梢接近停長后，采用噴霧接種法，進行接種，接種后無需套袋處理。每種材料調查葉片數(shù)至少30片。接種后繼續(xù)在鑒定室中80%濕度培養(yǎng)，48h后濕度調至50%。4.2.3室內離體接種剪取鑒定材料的越冬后休眠枝，將下端剪除1cm，露出新茬，插在3cm深的清水中進行水培，3d~5d更換一次清水。待新葉展開后，采用噴霧接種法進行接種，接種后無需套袋處理。每個重復調查葉片數(shù)至少30片。置于白天溫度25℃、夜晚20℃、12h光周期、90%濕度的人工鑒定室培養(yǎng)，48h后濕度調至50%。剪取鑒定材料健康即將停長的枝條，去除下部10cm葉片，剪除下部莖段0.5cm，露出新茬，插在3cm深的清水中進行水培，3d~5d更換一次清水。采用噴霧接種法進行接種，接種后無需套袋處理。每種材料調查葉片數(shù)至少30片。置于白天溫度25℃、夜晚20℃、12h光周期、90%濕度的人工鑒定室培養(yǎng)，48h后濕度調至50%。4.3感病對照品種的選擇鑒定所用感病對照品種采用蘋果梨、早酥梨等高感品種。5病情調查5.1調查時間病情調查于接種后30d~40d病情基本穩(wěn)定后進行。5.2調查方法調查每份材料所有接種葉片發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，記載葉片病情級別，計算出病情指數(shù)(DI）。重復3次，計算平均值。病情指數(shù)（DI）計算公式如下：病情指數(shù)（DI）=［Σ（各級病葉數(shù)×相應級別）÷（調查總葉數(shù)×發(fā)病最高級別代表值）］×1005.3病情分級每片葉的發(fā)病情況按病斑占葉面積的百分率分級記錄。分級標準見表1。表1梨白粉病病情分級標準病情級別癥狀描述0無病斑1病斑面積占葉片面積的5%以下2病斑面積占葉片面積的5%以上，15%及以下3病斑面積占葉片面積的15%以上，30%及以下4病斑面積占葉片面積的30%以上，45%及以下5病斑面積占葉片面積的45%以上，65%及以下6病斑面積占葉片面積的65%以上，85%及以下7病斑面積占葉片面積的85%以上6抗性評價6.1鑒定有效性判別當感病對照品種表現(xiàn)高感時（DI≥50），該批次鑒定結果視為有效。6.2抗病評價標準根據(jù)病情指數(shù)確定待鑒定材料對白粉病的抗性，劃分標準見表2。表2梨白粉病抗性評價標準病情指數(shù)（DI）抗性評價DI=0免疫0<DI≤5高抗5<DI≤25抗病25<DI≤50感病50<DI≤100高感7抗性鑒定評價的記載按照鑒定樣品編號，對樣品名稱、樣品來源、調查的病情級別、病情指數(shù)和抗性評價結果分別進行登記，梨白粉病抗性鑒定記載表格見表3。表3梨白粉病抗性評價記載表格樣品編號樣品名稱樣品來源病情級別病情指數(shù)抗性評價0級1級2級3級4級5級6級7級1.鑒定地點：2.鑒定方式：3.病原菌制備時間：4.接種時間：5.調查時間：6.調查人：7.記載人：鑒定技術負責人（簽字）：附錄A（資料性附錄）梨白粉病病原菌及危害癥狀A.1學名梨球針殼Phyllactiniapyri(Cast.)HommaA.2田間癥狀梨樹白粉病可為害梨樹葉片、樹梢、嫩芽、花蕾、花柄和花瓣，甚至果實等，主要為害葉片。葉部白粉病的癥狀比較常見，初期在葉片背面產生圓形或不規(guī)則形、大小不一、數(shù)量不等的白色粉狀斑，白粉層稀疏；隨著病情加重，病斑連接成片，并逐漸擴大至全葉，使葉片背面布滿了白色粉狀物，白粉層逐漸變厚；后期病斑上逐漸形成很多黃褐色小顆粒（閉囊殼），最后小顆粒變?yōu)楹谏?。白粉病嚴重時，病葉失綠甚至萎縮、變褐枯死或脫落，造成過早落葉，降低樹勢。A.3形態(tài)描述菌絲體多葉背生，常存留或稍有消失，有時形成斑塊；子囊果聚生間或散生，扁球形至凸透鏡形，直徑124mm~250mm(平均184.5mm)，多為165μm~209μm；附屬絲5根~18根，多為6根~9根，長135μm~375μm，為子囊果直徑的0.8倍~2.3倍，多為1.0倍~1.6倍，無隔膜，透明；子囊5個~34個，多為9個~20個，各種形狀，多為橢圓形或長卵形，有