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34DB34/T3987—2021禽白血病病毒細(xì)胞培養(yǎng)分離檢測技術(shù)規(guī)程Technicalregulationsforcellculture,isolationanddetectionofavianleukemiavirus2021-09-03發(fā)布2021-10-03實施安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I1NY/T680禽白血病病毒P27抗原酶聯(lián)免疫吸附4.1.1血液的采集2采集的雞抗凝血樣品應(yīng)保存在4℃環(huán)境下，采集的雞血液樣品應(yīng)盡快處理并接種DF-1細(xì)胞，保存4.2.1公雞精液的采集取生長狀態(tài)良好的DF-1細(xì)胞，常規(guī)傳代消化，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個細(xì)胞/m中，吸取100μL血漿接種到DF-1細(xì)胞培養(yǎng)孔中，另設(shè)陰陽性對照孔，樣品孔做好標(biāo)記3將接種樣品后的細(xì)胞板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)孔中液體，用200μL滅應(yīng)盡可能延長細(xì)胞維持培養(yǎng)的時間，以利于ALV在細(xì)胞上的增殖。在24孔培養(yǎng)板靠邊的樣品孔中多8.1酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方4A.3磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01mol5

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