細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案

細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案1概述:為了符合2010版GMP的要求，為了確保生產(chǎn)檢驗(yàn)出符合預(yù)定用途和注冊要求的產(chǎn)品，確保產(chǎn)品質(zhì)量合格。保證用藥安全。確認(rèn)檢查方法的科學(xué)持續(xù)穩(wěn)定可靠適用性理想。本方案對注射用水細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證。2驗(yàn)證目的:為確保注射用水細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法的專屬性、靈敏度在本實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性保證檢測結(jié)果科學(xué)準(zhǔn)確可靠，特制定此方案對注射用水細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證。3驗(yàn)證方式:結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，按照2010版藥典附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法檢查。由合格的檢驗(yàn)人員對同一批供試品進(jìn)行檢查同一操作方法同一批供試品檢查重復(fù)檢查3次記錄檢查結(jié)果對比，看檢查結(jié)果是否符合要求，重復(fù)性穩(wěn)定性是否符合要求。4驗(yàn)證范圍:適用于注射用水細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證，按照2010版藥典附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法檢查項(xiàng)下要求逐一進(jìn)行。5驗(yàn)證結(jié)果的評價(jià):根據(jù)藥典合格標(biāo)準(zhǔn)來驗(yàn)證確認(rèn)，確認(rèn)檢查方法檢查結(jié)果的重現(xiàn)性穩(wěn)定性是否符合要求。適用性是否理想。6驗(yàn)證機(jī)構(gòu)組成6.1驗(yàn)證委員會(huì)根據(jù)驗(yàn)證工作需要，常設(shè)驗(yàn)證委員會(huì)，負(fù)責(zé)所有驗(yàn)證工作的領(lǐng)導(dǎo)和組織，負(fù)責(zé)審批驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報(bào)告、發(fā)放驗(yàn)證證書。驗(yàn)證委員會(huì)針對每一個(gè)具體驗(yàn)證項(xiàng)目成立專門的驗(yàn)證小組，負(fù)責(zé)該驗(yàn)證項(xiàng)目的驗(yàn)證方案起草，實(shí)施、組織與協(xié)調(diào)，負(fù)責(zé)驗(yàn)證結(jié)果記錄與評定，負(fù)責(zé)完成驗(yàn)證報(bào)告。6.2驗(yàn)證委員會(huì)組成:姓名部門及職務(wù)驗(yàn)證委員會(huì)中職務(wù)驗(yàn)證工作中職責(zé)6.4職責(zé):6.4.1驗(yàn)證委員會(huì):6.4.1.1負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審批。6.4.1.2負(fù)責(zé)驗(yàn)證的總協(xié)調(diào)工作，以保證本驗(yàn)證方案順利實(shí)施。6.4.1.3負(fù)責(zé)驗(yàn)證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核。6.4.1.4負(fù)責(zé)發(fā)放驗(yàn)證證書。6.4.2驗(yàn)證小組:6.4.2.1負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的制定和實(shí)施。6.4.2.2負(fù)責(zé)驗(yàn)證工作的組織與協(xié)調(diào)。6.4.2.3負(fù)責(zé)驗(yàn)證數(shù)據(jù)的收集和結(jié)果評定。6.4.2.4負(fù)責(zé)完成驗(yàn)證報(bào)告。7文件準(zhǔn)備和培訓(xùn)7.1所需文件已準(zhǔn)備齊全。7.2培訓(xùn):在確認(rèn)實(shí)施前，依據(jù)驗(yàn)證小組通過的方案，對參加驗(yàn)證人員培訓(xùn)，明確分工。培訓(xùn)記錄:培訓(xùn)內(nèi)容日期培訓(xùn)人接受培訓(xùn)人注射用水細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證方案8驗(yàn)證進(jìn)度計(jì)劃8.1驗(yàn)證小組提出完整的驗(yàn)證計(jì)劃，經(jīng)驗(yàn)證委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施，整個(gè)驗(yàn)證活動(dòng)分以下幾個(gè)階段完成。:從年月日至年月日;培訓(xùn)注射用水細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證:從年月日至年月日;9驗(yàn)證依據(jù)參考文獻(xiàn)培訓(xùn)內(nèi)容日期培訓(xùn)人接受培訓(xùn)人注射用水細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證方案9.1根據(jù)2010版藥典附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法、附錄XVIIIA中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則驗(yàn)證方案的編寫、實(shí)施、結(jié)果的評價(jià)。10驗(yàn)證內(nèi)容:10.1試藥與試劑:號(hào)試劑/試藥品名批號(hào)/規(guī)格備注試劑細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水確認(rèn)結(jié)果是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn):檢查人:確認(rèn)人:時(shí)間:時(shí)間:10.2儀器設(shè)備:10.2.1精密儀器及需校驗(yàn)的儀器序號(hào)儀器設(shè)備品名編號(hào)/型號(hào)校驗(yàn)時(shí)間有效期電子天平電熱干燥箱恒溫水浴箱水銀溫度計(jì)旋渦混合器確認(rèn)結(jié)果是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)?是?否檢查人:確認(rèn)人:時(shí)間:時(shí)間:10.2.2一般工器具序號(hào)儀器設(shè)備品名編號(hào)/型號(hào)備注移液管凝集管三角瓶試管試管架洗耳球時(shí)鐘75%酒精棉剪刀砂輪確認(rèn)結(jié)果是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)?是?否檢查人:確認(rèn)人:時(shí)間:時(shí)間:10.3注射用水內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證10.3.1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:試驗(yàn)室及人員等條件均滿足內(nèi)毒素試驗(yàn)試驗(yàn)條件。10.3.1.1.玻璃器皿的洗滌將玻璃器皿放入鉻酸洗液或其他熱原滅活劑或清洗液中充分浸泡，然后取出將洗液空干，用自來水將殘留洗液徹底洗凈，再用蒸餾水反復(fù)沖洗三遍以上，空干后放入適宜的密閉金屬容器中或用錫箔紙包好后再放入金屬容器內(nèi)，放置入烤箱。10.3.1.2.除去玻璃器皿表面可能存在的外源性內(nèi)毒素玻璃器皿置烤箱后，將烤箱調(diào)至250?，待烤箱溫度升至設(shè)定的溫度后開始計(jì)時(shí)，干烤至少1小時(shí)。達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，關(guān)斷電源，待烤箱溫度自然降至室溫。在不打開金屬容器的情況下，可在兩天內(nèi)使用;如果玻璃器皿用錫箔紙包裝，在不打開包裝的情況下可在兩周內(nèi)使用，否則須再次干烤除去可能存在的外源性內(nèi)毒素。10.3.2驗(yàn)證內(nèi)容具體驗(yàn)證步驟10.3.2.1.鱟試劑靈敏度復(fù)核方法驗(yàn)證，同一操作方法操作符合三次，記錄結(jié)果看結(jié)果是否穩(wěn)定重復(fù)性是否良好。10.3.2.2.實(shí)驗(yàn)操作10.3.2.2.1.細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上部輕輕劃痕，75%酒精棉球擦拭后啟開，啟開過程中應(yīng)防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。按照標(biāo)準(zhǔn)品說明書，加入規(guī)定量的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解其內(nèi)容物，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，置旋渦混合器上混合15分鐘。然后進(jìn)行稀釋，制備成4個(gè)濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，即2λ、λ、0.5λ、0.25λ(λ為所復(fù)核的鱟試對的標(biāo)示靈敏度)，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30秒鐘。10.3.2.2.2.待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備取規(guī)格為0.1ml/支的鱟試劑18支，輕彈瓶壁，使粉末落入酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。每支加瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%入0.1ml檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。10.3.2.2.3.加樣將已充分溶解的待復(fù)核鱟試劑18支(管)放在試管架上，排成5列，其中4列4支(管)，1列2支(管)。4支(管)4列每列每支分別加入0.1ml的2λ、λ、0.5λ、和0.25λ的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液;另2支(管)加入0.1ml檢查用水(陰性對照)。10.3.2.2.4.加樣結(jié)束后，將鱟試劑用封口膜封口，輕輕振動(dòng)混勻，避免產(chǎn)生氣泡，連同試管架放入37??1?水浴或適宜恒溫器中，試管架保持水平狀態(tài)，保溫60?2分鐘。10.3.2.2.5.觀察并記錄結(jié)果。將試管架從水浴中輕輕取出，避免振動(dòng)，將每管拿出緩緩倒轉(zhuǎn)180?觀察，管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性，記錄為(+);未形成凝膠或凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為(,)。(備注:保溫和拿取試管的過程中應(yīng)避免受到振蕩造成假陰性結(jié)果)10.3.2.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算如最大濃度2λ4管均為陽性，最低濃度0.25λ4管均為陰性，陰性對照為陰性時(shí)實(shí)驗(yàn)為有效，按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的復(fù)核結(jié)果(λc)。λc=lg-1(?X/4)式中x為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值(lg)。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是系列遞減的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液中最后一個(gè)呈陽性結(jié)果的濃度。10.3.2.4結(jié)果判斷10.3.2.4.1判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)λc在0.5λ,2λ(包括0.5λ和2λ)時(shí)判定該批鱟試劑靈敏度復(fù)核合格，可用于干擾實(shí)驗(yàn)和供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以λ(標(biāo)示靈敏度)為該批鱟試劑的靈敏度。10.3.2.5鱟試劑靈敏度復(fù)合試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果如下表:第一次驗(yàn)證結(jié)果如下表:第一次檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)日期檢驗(yàn)依據(jù)室溫試劑名稱:生產(chǎn)單位批號(hào)靈敏度/效價(jià)規(guī)格鱟試劑EU/ml細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品EU/支細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水反應(yīng)結(jié)果保溫時(shí)間(——)內(nèi)毒素濃度EU/ml(稀釋序號(hào)倍數(shù))2λ1234λ12340.5λ12340.25λ1234陰性對1照2結(jié)果計(jì)算λc=lg-1(?X/4)=結(jié)果判斷當(dāng)λc在0.5λ,2λ(包括0.5λ和2λ)時(shí)判定該批鱟試劑靈敏度復(fù)核合格，可用于干擾實(shí)驗(yàn)和供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查同時(shí)可以進(jìn)入下一步驗(yàn)證檢驗(yàn)人員:復(fù)合人員:日期日期確認(rèn)結(jié)果是否符合要是?否?求檢查人:確認(rèn)人:日期:日期:檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)日期檢驗(yàn)依據(jù)室溫試劑名稱:生產(chǎn)單位批號(hào)靈敏度/效價(jià)規(guī)格鱟試劑EU/ml細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品EU/支細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水反應(yīng)結(jié)果保溫時(shí)間(——)內(nèi)毒素濃度EU/ml(稀釋序號(hào)倍數(shù))2λ1234λ12340.5λ12340.25λ1234陰性對1照2結(jié)果計(jì)算λc=lg-1(?X/4)=結(jié)果判斷當(dāng)λc在0.5λ,2λ(包括0.5λ和2λ)時(shí)判定該批鱟試劑靈敏度復(fù)核合格，可用于干擾實(shí)驗(yàn)和供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查同時(shí)可以進(jìn)入下一步驗(yàn)證檢驗(yàn)人員:復(fù)合人員:日期日期確認(rèn)結(jié)果是否符合要是?否?求檢查人:確認(rèn)人:日期:日期:驗(yàn)證結(jié)果如下表:第三次檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)日期檢驗(yàn)依據(jù)室溫試劑名稱:生產(chǎn)單位批號(hào)靈敏度/效價(jià)規(guī)格鱟試劑EU/ml細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品EU/支細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水反應(yīng)結(jié)果保溫時(shí)間(——)內(nèi)毒素濃度EU/ml(稀釋序號(hào)倍數(shù))2λ1234λ12340.5λ12340.25λ1234陰性對1照2結(jié)果計(jì)算λc=lg-1(?X/4)=結(jié)果判斷當(dāng)λc在0.5λ,2λ(包括0.5λ和2λ)時(shí)判定該批鱟試劑靈敏度復(fù)核合格，可用于干擾實(shí)驗(yàn)和供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查同時(shí)可以進(jìn)入下一步驗(yàn)證檢驗(yàn)人員:復(fù)合人員:日期日期確認(rèn)結(jié)果是否符合要是?否?求檢查人:確認(rèn)人:日期:日期:10.3.2.5.1鱟試劑靈敏度復(fù)合試驗(yàn)三次驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果評價(jià)如下表:驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果一次二次三次結(jié)果計(jì)算λc=λc=λc=結(jié)論確認(rèn)結(jié)果是否符合要求:是?否?檢查人;確認(rèn)人:日期:日期10.3.3干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn):同法操作檢查三次試驗(yàn)記錄試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對比。目的:初步確定供試品的最大不干擾濃度或最小稀釋倍數(shù)為正式干擾試驗(yàn)提供依據(jù)。是檢驗(yàn)在某一濃度下的供試品對于鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)有無干擾作用。使用的供試品溶液應(yīng)為未檢驗(yàn)出內(nèi)毒素且不超過所使用的鱟試劑的最大有效稀釋倍數(shù)的溶液。10.3.3.1將內(nèi)毒素檢查陰性的供試品進(jìn)行一系列倍數(shù)稀釋，但最大的的稀釋倍數(shù)不得超過MVD=CL/λ(λ為現(xiàn)在市面最高靈敏度，這里選公司能買到的最高靈敏度)10.3.3.2使用鱟試劑對每一稀釋倍數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)。每一稀釋倍數(shù)下做2只供試品管和2只供試品陽性對照(即用該濃度的供試品稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成2λ濃度)。另取2只加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水做為陰性對照，2只加入2λ濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為陽性對照。供試品陽性對照溶液的制備舉例制備稀釋4倍的供試品陽性對照液方法，取0.3ml濃度為4.0λEU/ml的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液+0.3ml稀釋倍數(shù)為2的供試品稀釋液----制得0.6ml含2λEU/ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋倍數(shù)為4的供試品稀釋液。保溫(60min)?2min后觀察，并記錄結(jié)果。10.3.3.3當(dāng)陰性對照為陰性陽性對照為陽性時(shí)試驗(yàn)有效。當(dāng)系列濃度中出現(xiàn)供試品溶液2管為陰性，供試品陽性對照2管為陽性時(shí)。認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，此稀釋倍數(shù)即為最小不干擾倍數(shù)，即可選擇該稀釋倍數(shù)進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。當(dāng)系列濃度中所有濃度的供試品管都不為陰性，或供試品陽性對照管不為陽性時(shí)，說明該供試品對內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)村子啊存在干擾，則應(yīng)對供試品進(jìn)行更大倍數(shù)的稀釋(不得超過MVD，)或者通過其他方式排出干擾。為確保所選則的處理方法能不有效的排出干擾且不會(huì)是內(nèi)毒素失去活性，要使用預(yù)先添加了標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素在經(jīng)過處理的供試品溶液進(jìn)行干擾試驗(yàn)。當(dāng)供試品的內(nèi)毒素限值單位為,,,,,或,,,,時(shí)。應(yīng)將做小不干擾稀釋倍數(shù)換算成最大不干濃度(即該稀釋倍數(shù)下溶液的濃度)以,,,,,或,,,,表示。10.3.3.,這里干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)用注射用水來檢查試驗(yàn)。注射用水限值為含內(nèi)毒素量不得過0.125EU。按,,,,,,,λ計(jì)算出靈敏度為0.03EU/ml下的MVD值將供試品溶液稀釋一系列進(jìn)行檢驗(yàn)，用靈敏度為0.25EU/ml的鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果如下表:第一次稀釋倍數(shù)原液倍倍倍觀察供試品溶液+或--觀察供試品陽性對照+或--第二次稀釋倍數(shù)觀察供試品溶液+或--觀察供試品陽性對照+或--觀察供試品溶液+或--觀察供試品陽性對照+或--結(jié)論確認(rèn)結(jié)果是否符合要求:是?否?檢查人;確認(rèn)人:日期:日期結(jié)論確認(rèn)結(jié)果是否符合要求:是?否?10.3.4干擾試驗(yàn):目的是檢驗(yàn)?zāi)骋粷舛认碌墓┰嚻穼τ邝c試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)物干擾作用。試驗(yàn)重復(fù)三次。10.3.4.1.操作方法:10.3.4.1.1.制備內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)對照溶液取1支細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成4個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液即2λ、λ、0.5λ、0.25λ(方法同10.3.2.2.1)。10.3.4.1.2制備含內(nèi)毒素的供試品溶液:將供試品稀釋至預(yù)實(shí)驗(yàn)中確定的不干擾稀釋倍數(shù)，λ、λ、0.5λ、再用此稀釋液將10.3.3.1.1中的同支細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成4個(gè)濃度即20.25λ的含內(nèi)毒素的供試品溶液。這里以注射用水來進(jìn)行試驗(yàn)10.3.4.1.3鱟試劑的準(zhǔn)備:取規(guī)格為0.1ml/支的鱟試劑36支，輕彈壁使粉末落入瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。每支加入0.1ml檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。10.3.4.1.4加樣將準(zhǔn)備好的鱟試劑取其中18支(管)放在試管架上，排成5列，4列4支(管)，1列2支(管)。其中的4支4列每列每支分別加入0.1ml的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，另一列2支(管)加入0.1ml檢查用水作為陰性對照。將另外18支(管)鱟試劑放在試管架上，排成5列，4列4支(管)，1列2支(管)。其中的4支4列每列每支分別加入0.1ml的含2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的內(nèi)毒素的供試品溶液，另一列2支(管)加入0.1ml供試品溶液作為樣品陰性對照。加樣結(jié)束后，用封口膜封口，輕輕振動(dòng)混勻，避免產(chǎn)生氣泡，連同試管架放入37?1?水浴或適宜恒溫器中，保溫60?2分鐘后，觀察并記錄結(jié)果。10.3.4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算如兩組最大濃度2.0λ均為陽性，最低濃度0.25λ均為陰性，陰性對照,管均為陰性時(shí)，按下式計(jì)算用檢查用水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(Es)和用供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(Et).Es=lg-1(?Xs/4)Et=lg-1(?Xt/4)Xs、Xt分別為用檢查用水和供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值(lg)。10.3.4.3結(jié)果判斷10.3.4.3.1.判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)Es在0.5λ,2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)時(shí)，且Et在0.5Es,2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾實(shí)驗(yàn)，可在該濃度下對此供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。當(dāng)Et不在0.5Es,2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下干擾實(shí)驗(yàn)。10.3.4.3.2.判斷結(jié)果:10.3.4.4干擾試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果如下表:干擾試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果第一次檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)日期檢驗(yàn)依據(jù)室溫試劑名稱:生產(chǎn)單位:批號(hào):靈敏度/效規(guī)格價(jià)鱟試劑EU/ml細(xì)菌內(nèi)毒EU/支素標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒EU/ml素檢查用水反應(yīng)結(jié)果保溫時(shí)間(,)序號(hào)內(nèi)毒素標(biāo)結(jié)果陰性內(nèi)毒素的結(jié)果陰性準(zhǔn)溶液打(—)陽供試品溶打(—)陽性打(+)液性打(+)加入內(nèi)毒2λ1素標(biāo)準(zhǔn)品2濃度EU/ml3與供試品4內(nèi)毒素溶λ1液(稀釋倍2數(shù))340.5λ12340.25λ1234陰性對照12-1結(jié)果計(jì)算Es=lg(?Xs/4)=-1Et=lg(?Xt/4)=結(jié)果判斷當(dāng)Es在0.5λ,2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)時(shí)，且Et在0.5Es,2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾實(shí)驗(yàn)，可在該濃度下對此供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。當(dāng)Et不在0.5Es,2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下干擾實(shí)驗(yàn)。檢驗(yàn)人員:復(fù)合人員:日期日期確認(rèn)結(jié)果是否符合要求是?否?檢查人;確認(rèn)人:日期日期:干擾試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果第二次檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)日期檢驗(yàn)依據(jù)室溫試劑名稱:生產(chǎn)單位:批號(hào):靈敏度/效規(guī)格價(jià)鱟試劑EU/ml細(xì)菌內(nèi)毒EU/支素標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒EU/ml素檢查用水反應(yīng)結(jié)果保溫時(shí)間(,)序號(hào)內(nèi)毒素標(biāo)結(jié)果陰性內(nèi)毒素的結(jié)果陰性準(zhǔn)溶液打(—)陽供試品溶打(—)陽性打(+)液性打(+)加入內(nèi)毒2λ1素標(biāo)準(zhǔn)品2濃度EU/ml3與供試品4內(nèi)毒素溶λ1液(稀釋倍2數(shù))340.5λ12340.25λ1234陰性對照12-1結(jié)果計(jì)算Es=lg(?Xs/4)=-1Et=lg(?Xt/4)=結(jié)果判斷當(dāng)Es在0.5λ,2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)時(shí)，且Et在0.5Es,2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾實(shí)驗(yàn)，可在該濃度下對此供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。當(dāng)Et不在0.5Es,2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下干擾實(shí)驗(yàn)。檢驗(yàn)人員:復(fù)合人員:日期日期確認(rèn)結(jié)果是否符合要求是?否?檢查人;確認(rèn)人:日期日期:干擾試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果第三次檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)日期檢驗(yàn)依據(jù)室溫試劑名稱:生產(chǎn)單位:批號(hào):靈敏度/效規(guī)格價(jià)鱟試劑EU/ml細(xì)菌內(nèi)毒EU/支素標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)菌內(nèi)毒EU/ml素檢查用水反應(yīng)結(jié)果保溫時(shí)間(,)序號(hào)內(nèi)毒素標(biāo)結(jié)果陰性內(nèi)毒素的結(jié)果陰性準(zhǔn)溶液打(—)陽供試品溶打(—)陽性打(+)液性打(+)加入內(nèi)毒2λ1素標(biāo)準(zhǔn)品2濃度EU/ml3與供試品4內(nèi)毒素溶λ1液(稀釋倍2數(shù))340.5λ12340.25λ1234陰性對照12-1結(jié)果計(jì)算Es=lg(?Xs/4)=-1Et=lg(?Xt/4)=結(jié)果判斷當(dāng)Es在0.5λ,2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)時(shí)，且Et在0.5Es,2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾實(shí)驗(yàn)，可在該濃度下對此供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。當(dāng)Et不在0.5Es,2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下干擾實(shí)驗(yàn)。檢驗(yàn)人員:復(fù)合人員:日期日期確認(rèn)結(jié)果是否符合要求是?否?檢查人;確認(rèn)人:日期日期:(NC)，2支加入0.1ml供試品陽性對照溶液作為供試品陽性對照管(PPC)。10.3.4.5.4將試管中溶液輕輕混勻后，用封口膜封閉管口，垂直放入37??1?水浴或適宜恒溫器中，保溫60?2分鐘。保溫和取放試管過程應(yīng)避免受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。10.3.4.5.5結(jié)果判斷10.3.4.5.6判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)陽性對照都為陽性、供試品陽性對照都為陽性且陰性對照都為陰性時(shí)，實(shí)驗(yàn)有效。若供試品2管均為陰性，認(rèn)為該供試品符合規(guī)定;如供試品2管均為陽性，應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定;如2管中1管為陽性，1管為陰性，按上述方法另取4支供試品管復(fù)試，4管中如有1管為陽性，即認(rèn)為不符合規(guī)定。若第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)供試品的稀釋倍數(shù)小于MVD而結(jié)果出現(xiàn)2管均為陽性或2管中1管為陽性時(shí)，按同樣方法復(fù)試，復(fù)試時(shí)要