分子生物學(xué)知識(shí)點(diǎn)歸納

分子生物學(xué)的一級(jí)構(gòu)造：指分子中核苷酸的排列順序。的二級(jí)構(gòu)造：指兩條單鏈形成的雙螺旋構(gòu)造、三股螺旋構(gòu)造以及四股螺旋構(gòu)造。的三級(jí)構(gòu)造：雙鏈進(jìn)一步扭曲盤(pán)旋形成的超螺旋構(gòu)造。的甲基化：的一級(jí)構(gòu)造中，有一些堿基可以通過(guò)加上一個(gè)甲基而被修飾，稱(chēng)為的甲基化。甲基化修飾在原核生物中多為對(duì)一些酶切位點(diǎn)的修飾，其作用是對(duì)自身產(chǎn)生保護(hù)作用。真核生物中的甲基化則在基因表達(dá)調(diào)控中有重要作用。真核生物中，幾乎所有的甲基化都發(fā)生于二核苷酸序列5’-3’島：基因組中大局部二核苷酸是高度甲基化的,但有些成簇的、穩(wěn)定的非甲基化的小片段,稱(chēng)為島,存在于整個(gè)基因組中?！皑晬u特點(diǎn)是含量高以及大局部二核苷酸缺乏甲基化。雙螺旋構(gòu)造模型要點(diǎn)：是反向平行的互補(bǔ)雙鏈構(gòu)造。雙鏈?zhǔn)怯沂致菪龢?gòu)造。螺旋每旋轉(zhuǎn)一周包含了10對(duì)堿基，螺距為3.4.雙鏈說(shuō)形成的螺旋直徑為2。每個(gè)堿基旋轉(zhuǎn)角度為36度。雙螺旋分子外表存在一個(gè)大溝與一個(gè)小溝，目前認(rèn)為這些溝狀構(gòu)造與蛋白質(zhì)與間的識(shí)別有關(guān)。疏水力與氫鍵維系雙螺旋構(gòu)造的穩(wěn)定。雙鏈構(gòu)造的穩(wěn)定橫向依靠?jī)蓷l鏈互補(bǔ)堿基間的氫鍵維系，縱向則靠堿基平面間的疏水性堆積力維持。核小體的組成：染色質(zhì)的根本組成單位被稱(chēng)為核小體，由與5種組蛋白H12A23與H4共同構(gòu)成。各兩分子的2A23與H4共同構(gòu)成八聚體的核心組蛋白，雙螺旋纏繞在這一核心上形成核小體的核心顆粒。核小體的核心顆粒之間再由與組蛋白H1構(gòu)成的連接區(qū)連接起來(lái)形成串珠樣構(gòu)造。順?lè)醋印病常河蓸?gòu)造基因轉(zhuǎn)錄生成的序列亦稱(chēng)為順?lè)醋印雾樂(lè)醋印病常赫婧松锏囊粋€(gè)構(gòu)造基因與相應(yīng)的調(diào)控區(qū)組成一個(gè)完整的基因，即一個(gè)表達(dá)單位，轉(zhuǎn)錄物為一個(gè)單順?lè)醋?。從一條只能翻譯出一條多肽鏈。10．多順?lè)醋?):原核生物具有操縱子構(gòu)造，幾個(gè)構(gòu)造基因轉(zhuǎn)錄在一條鏈上，因而轉(zhuǎn)錄物為多順?lè)醋?。每個(gè)順?lè)醋臃謩e翻譯出各自的蛋白質(zhì)。11．原核生物構(gòu)造的特點(diǎn):(1)原核生物往往是多順?lè)醋拥?，即每分子帶有幾種蛋白質(zhì)的遺傳信息?！?〕5‘端無(wú)帽子構(gòu)造，3‘端無(wú)多聚A尾?！?〕一般沒(méi)有修飾堿基。12．真核生物構(gòu)造的特點(diǎn)：〔1〕5‘端有帽子構(gòu)造。即7－甲基鳥(niǎo)嘌呤－三磷酸鳥(niǎo)苷m7。〔2〕3‘端大多數(shù)帶有多聚腺苷酸尾巴。〔3〕分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化?！?〕分子中有編碼區(qū)與非編碼區(qū)。14．的構(gòu)造特點(diǎn)〔1〕是單鏈小分子?！?〕含有很多稀有堿基?！?〕的5‘端總是磷酸化，5’末端核苷酸往往是.〔4〕的3‘端是－序列。是氨基酸的結(jié)合部位?！?〕的二級(jí)構(gòu)造形狀類(lèi)似于三葉草，含二氫尿嘧啶環(huán)〔D環(huán)〕、T環(huán)與反密碼子環(huán)?！?〕的三級(jí)構(gòu)造是倒L型。D環(huán)與T環(huán)在L的拐角上。15．〔1〕是細(xì)胞內(nèi)含量最豐富的，它們與核糖體蛋白共同構(gòu)成核糖體，后者是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所?！?〕核糖體與一般都用沉降系數(shù)S表示大小。原核生物核糖體的沉降系數(shù)為70S，由50S與30S兩個(gè)大小亞基組成，30S小亞基含有16與21種蛋白質(zhì)。50S大亞基含有23S與5以及34種蛋白質(zhì)。真核生物沉降系數(shù)為80S，由大小亞基組成。40S小亞基含有18與30多種蛋白質(zhì)。60含有5S、5.8S與28以及大約45種蛋白質(zhì)。16．核酶〔〕：某些分子能催化自身或其他分子進(jìn)展化學(xué)反響，即具有酶樣的催化活性，這類(lèi)具有催化活力的稱(chēng)為核酶。核酶分為3類(lèi)：(1)異體催化的剪切型?！?〕自體催化的剪切型〔3〕內(nèi)含子的自我剪切型。17．核內(nèi)不均一〔〕：真核生物轉(zhuǎn)錄生成的前體即為。這類(lèi)前體必須經(jīng)過(guò)一系列的加工處理才能變成成熟的。加工過(guò)程的主要環(huán)節(jié)包括：〔1〕5‘端加帽〔2〕3’18．:是一種單鏈小分子，廣泛存在于真核生物中，是一組不編碼蛋白質(zhì)的短序列，其特點(diǎn)就是高度的保守性、時(shí)序性與組織特異性。研究說(shuō)明可能決定組織與細(xì)胞的功能特異性，也可能參與了復(fù)雜的基因調(diào)控，對(duì)組織的發(fā)育起重要作用。19．：小干擾。是人工合成的短的雙鏈，它可抑制細(xì)胞內(nèi)特定基因的表達(dá)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄后基因失活。是的重要工具。20．反義：堿基序列正好與有意義互補(bǔ)的稱(chēng)為反義。這類(lèi)也是單鏈，可與配對(duì)形成雙鏈，最終抑制作為模板進(jìn)展翻譯，這是反義主要的調(diào)控功能。21．順式作用元件〔〕：真核生物基因中的調(diào)控序列被稱(chēng)為順式作用元件,包括：?jiǎn)?dòng)子與上游啟動(dòng)子元件，增強(qiáng)子，反響元件，(A)加尾信號(hào)。22．增強(qiáng)子〔〕：是一段短的序列，其中含有多個(gè)作用元件，可以特異性與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄活性。增強(qiáng)子可以位于基因的任何位置，增強(qiáng)子的功能與其位置與方向無(wú)關(guān)。23．基因：是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位，是指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或序列信息及表達(dá)這些信息所必需的全部核苷酸序列。一個(gè)基因不僅僅包括編碼蛋白質(zhì)肽鏈或的核酸序列，還包括保證轉(zhuǎn)錄所必需的調(diào)控序列及位于編碼區(qū)5‘端上游的非編碼序列，內(nèi)含子與位于編碼區(qū)3’24．基因組：泛指一個(gè)細(xì)胞或病毒的全部遺傳信息。在真核生物體中，基因組是指一套完整單倍體與線(xiàn)粒體的全部序列，既包括編碼序列，也包括非編碼序列。25．病毒基因組包括：?jiǎn)捂溦?，單鏈?fù)股，雙鏈，雙鏈與單鏈正股。26．冠狀病毒屬于：?jiǎn)捂溦刹《?。逆轉(zhuǎn)錄病毒屬于：?jiǎn)捂溦刹《尽?7．逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組包括三個(gè)構(gòu)造基因：、與。分別編碼：核心蛋白、逆轉(zhuǎn)錄酶與膜蛋白。28．操縱子〔〕:是指數(shù)個(gè)功能上相關(guān)聯(lián)的構(gòu)造基因串聯(lián)在一起，構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游的調(diào)控區(qū)〔包括啟動(dòng)子與操縱序列〕與下游的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)所構(gòu)成的基因表達(dá)單位，所轉(zhuǎn)錄的為多順?lè)醋印?9．質(zhì)粒：是存在于細(xì)菌染色體之外的、具有自主復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈分子。30．質(zhì)粒的不相容性：具有一樣復(fù)制起始位點(diǎn)與分配區(qū)的兩種質(zhì)粒不能共存于一個(gè)宿主菌，這種現(xiàn)象稱(chēng)為質(zhì)粒的不相容性。31．轉(zhuǎn)座因子：既可移動(dòng)的基因成分，是指能在一個(gè)分子內(nèi)部或兩個(gè)分子之間移動(dòng)的片段。原核生物的轉(zhuǎn)座因子包括：插入序列、轉(zhuǎn)座子與噬菌體。32．插入序列:是一類(lèi)較小的沒(méi)有表型效應(yīng)的轉(zhuǎn)座因子，由一個(gè)轉(zhuǎn)位酶基因及兩側(cè)的反向重復(fù)序列組成。33．轉(zhuǎn)座子：是一類(lèi)較大的可移動(dòng)成分，除有關(guān)轉(zhuǎn)座的基因外，至少帶有一個(gè)與轉(zhuǎn)座作用無(wú)關(guān)的并決定宿主菌遺傳性狀的基因。34．?dāng)嗔鸦颍赫婧松锏臉?gòu)造基因，由假設(shè)干個(gè)編碼區(qū)與非編碼區(qū)互相間隔而又連續(xù)鑲嵌而成，去除編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)這些基因稱(chēng)為斷裂基因。35．:核內(nèi)小，分子中尿嘧啶含量最豐富。與核內(nèi)蛋白質(zhì)組成小分子核糖核蛋白體，作為剪接的場(chǎng)所。36．啟動(dòng)子：能夠被聚合酶識(shí)別并結(jié)合并起始轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列。典型的啟動(dòng)子包括盒，盒與盒。37．反響元件：一些信息分子的受體被細(xì)胞外信息分子激活后，能與特異的序列結(jié)合，調(diào)控基因的表達(dá)。這些特異的序列實(shí)際上也是順式元件，由于能介導(dǎo)基因?qū)?xì)胞外的某種信號(hào)產(chǎn)生反響，被稱(chēng)為反響元件。38．基因家族：指核苷酸序列或編碼產(chǎn)物的構(gòu)造具有一定程度同源性的一組基因。39．端粒重復(fù)序列：。微衛(wèi)星常見(jiàn)重復(fù)單位()與〔〕。40．衛(wèi)星：是出現(xiàn)在非編碼區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列。其特點(diǎn)是具有固定的重復(fù)序列，該重復(fù)單位首尾相連形成重復(fù)序列片段，通常存在于間隔與內(nèi)含子中。衛(wèi)星可分為大衛(wèi)星、小衛(wèi)星與微衛(wèi)星。41．端粒：以線(xiàn)性染色體形式存在的真核基因組的末端都有一種特殊的構(gòu)造，端粒。該構(gòu)造是一段序列與蛋白質(zhì)形成的一種復(fù)合體，僅在真核細(xì)胞染色體末端存在。端粒的功能主要有：保護(hù)線(xiàn)性的完整復(fù)制，保護(hù)染色體末端及決定細(xì)胞的壽命等。42．家族：序列中有限制性?xún)?nèi)切酶的酶切位點(diǎn)。重復(fù)單位是300.屬短散在核元件，為靈長(zhǎng)類(lèi)基因組所特有。43．假基因：是指與某些有功能的基因構(gòu)造相似，但不能表達(dá)基因產(chǎn)物的基因。44．人類(lèi)基因組的四張圖譜：遺傳圖、物理圖、序列圖與轉(zhuǎn)錄圖。遺傳圖指基因或標(biāo)記在染色體上以遺傳距離表示的相對(duì)位置。物理圖指基因或標(biāo)記間的實(shí)際距離。序列圖指人類(lèi)基因組的全部核苷酸序列，也是最詳盡的物理圖。轉(zhuǎn)錄圖指基因圖譜。45．端粒酶：由三局部組成，端粒，端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶，端粒酶協(xié)同蛋白。端粒酶兼有提供模版與催化逆轉(zhuǎn)錄酶的功能。端粒酶通過(guò)一種爬行模型的機(jī)制維持染色體的完整。46.半保存復(fù)制：子代細(xì)胞的，一股單鏈從親代完整的承受過(guò)來(lái)，另一股單鏈則完全重新合成，兩個(gè)子細(xì)胞的都與親代堿基序列一致，這種復(fù)制方式稱(chēng)為半保存復(fù)制。47.半不連續(xù)復(fù)制：順著解鏈方向生成的子鏈，復(fù)制是連續(xù)進(jìn)展的，這股鏈稱(chēng)為領(lǐng)頭鏈。另一股鏈因?yàn)閺?fù)制方向與解鏈方向相反，不能順著解鏈方向連續(xù)延長(zhǎng)，必須等模板鏈解開(kāi)至足夠長(zhǎng)度，然后從5’48.岡崎片段：隨從鏈的復(fù)制由于與解鏈方向相反，必須待母鏈解開(kāi)足夠長(zhǎng)度后才開(kāi)場(chǎng)生成引物接著延長(zhǎng)。復(fù)制中形成的不連續(xù)復(fù)制片斷就是岡崎片段。49.滾環(huán)復(fù)制：是某些低等生物或染色體外的的復(fù)制形式。環(huán)狀外環(huán)翻開(kāi)，伸出環(huán)外作母鏈復(fù)制，內(nèi)環(huán)不翻開(kāi)一邊滾動(dòng)一邊復(fù)制。最后，一個(gè)雙鏈環(huán)就滾動(dòng)復(fù)制成兩個(gè)雙鏈環(huán)。50.二聚體：在紫外線(xiàn)照射下，相鄰的兩個(gè)分子上的嘧啶堿基之間共價(jià)結(jié)合而成的。51.著色性干皮?。菏怯捎趽p傷修復(fù)有缺陷而造成的一種遺傳性疾病，患者有較高的皮膚癌發(fā)病傾向。對(duì)該病的研究，發(fā)現(xiàn)了一些與切除損傷部位有關(guān)的蛋白質(zhì)，稱(chēng)為蛋白。52.切除修復(fù)：損傷修復(fù)的一種方式。通過(guò)切除損傷部位，剩下的空隙由I催化聚合而填補(bǔ)，最后由連接酶結(jié)合裂隙。切除損傷在原核生物需蛋白類(lèi)，真核生物需蛋白類(lèi)。53.光修復(fù)：生物體內(nèi)有一種光修復(fù)酶，被光激活后能利用光所提供的能量使紫外線(xiàn)照射引起的嘧啶二聚體分開(kāi)，恢復(fù)原來(lái)的非聚合狀態(tài)，稱(chēng)為光修復(fù)。54.損傷的修復(fù)類(lèi)型：光修復(fù)、切除修復(fù)、重組修復(fù)與修復(fù)。55.重組修復(fù)時(shí)，蛋白被激活，使得蛋白被水解。56.突變的分子改變類(lèi)型：〔1〕錯(cuò)配分子上的堿基配對(duì)又稱(chēng)點(diǎn)突變。(2)缺失，插入與框移：缺失與插入都可以導(dǎo)致框移突變?？蛞仆蛔兪侵溉?lián)體密碼的閱讀方式改變，造成蛋白質(zhì)氨基酸排列順序發(fā)生改變，其后果是翻譯出的蛋白質(zhì)可能完全不同?！?〕重排：分子中較大片斷的交換，稱(chēng)為重組或重排。57.點(diǎn)突變分為：轉(zhuǎn)換與顛換。轉(zhuǎn)換是指由一種嘧啶變成另一種嘧啶，或一種嘌呤變成另一種嘌呤。顛換是指由嘧啶變成嘌呤，或由嘌呤換為嘧啶。58.突變的意義：(1)突變是進(jìn)化、分化的分子根底。(2)只有基因型改變的突變。(3)致死性的突變。(4)突變是某些疾病的發(fā)病根底。59.D－環(huán)復(fù)制：是線(xiàn)粒體的復(fù)制形式。復(fù)制時(shí)需合成引物。為雙鏈，第一個(gè)引物以?xún)?nèi)環(huán)為模板延伸。至第二個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)時(shí)，又合成另一個(gè)反向引物，以外環(huán)為模板進(jìn)展反向的延伸，最后完成兩個(gè)雙鏈環(huán)狀的復(fù)制。60.逆轉(zhuǎn)錄酶有三種活性：(1)指導(dǎo)的聚合酶活性。(2)指導(dǎo)的聚合酶活性。(3)酶H〔〕活性。61.復(fù)制：是指某些病毒在宿主細(xì)胞中以自身為模板，以宿主細(xì)胞中的4種為原料，按5’-3’62.逆轉(zhuǎn)錄：是指以為模板，利用宿主細(xì)胞中4種為原料，按5’-3’63.逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制過(guò)程：〔1〕逆轉(zhuǎn)錄酶以為模板，催化聚合生成互補(bǔ)鏈，產(chǎn)物是雜化雙鏈。〔2〕雜化雙鏈中的被逆轉(zhuǎn)錄酶中有酶活性的組分如水解.(3)利用單鏈為模板，由逆轉(zhuǎn)錄病毒催化合成第2條互補(bǔ)鏈。64.片斷具有：聚合酶活性與3’-5’65.－I的功能：對(duì)復(fù)制中的錯(cuò)誤進(jìn)展較讀，對(duì)復(fù)制與修復(fù)中出現(xiàn)的空隙進(jìn)展填補(bǔ)。66.復(fù)制的保真性依賴(lài)的機(jī)制：〔1〕遵守嚴(yán)格的堿基配對(duì)規(guī)律?！?〕聚合酶在復(fù)制延長(zhǎng)中對(duì)堿基的選擇功能?！?〕復(fù)制出錯(cuò)時(shí)有即時(shí)的較讀功能。67.引發(fā)體：解螺旋酶，蛋白，引物酶與起始復(fù)制區(qū)域組成。68.拓?fù)洚悩?gòu)酶作用：〔1〕拓?fù)涿窱切斷雙鏈中的一股，使解鏈旋轉(zhuǎn)中不致打結(jié)，適當(dāng)時(shí)候又把切口封閉，使變?yōu)樗沙跔顟B(tài)。反響不需?！?〕拓?fù)涿冈跓o(wú)時(shí)，切斷處于正超螺旋的分子雙鏈某一部位，斷端通過(guò)切口使超螺旋松弛；在利用功能的情況下，松弛狀態(tài)的又進(jìn)入負(fù)超螺旋狀態(tài)，斷端在同一酶催化下連接恢復(fù)。69．復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的異同：相似之處：〔1〕都是酶促的核苷酸聚合反響?！?〕都以為模板?！?〕都需依賴(lài)的聚合酶?！?〕聚合過(guò)程中都是核苷酸之間形成磷酸二酯鍵?！?〕都從5‘-3’方向延伸聚核苷酸鏈?！?〕都遵從堿基配對(duì)規(guī)律。區(qū)別：〔1〕模板。復(fù)制：兩股鏈均復(fù)制。轉(zhuǎn)錄：不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)錄?！?〕原料。復(fù)制：。轉(zhuǎn)錄：。〔3〕酶。復(fù)制：聚合酶。轉(zhuǎn)錄：聚合酶。〔4〕產(chǎn)物。復(fù)制：子代雙鏈〔半保存復(fù)制〕。轉(zhuǎn)錄：,,.〔5〕堿基配對(duì)。復(fù)制：，。轉(zhuǎn)錄：，，。.70．真核生物聚合酶轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物與對(duì)鵝膏蕈堿的反響?！?〕I：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：45對(duì)鵝膏蕈堿的反響：耐受?！?〕：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：對(duì)鵝膏蕈堿的反響:極敏感?！?〕：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：5,，.對(duì)鵝膏蕈堿的反響：中度敏感。71.轉(zhuǎn)錄：以一條鏈為模板，以四種為原料，在指導(dǎo)的聚合酶作用下，按照堿基互補(bǔ)原則〔 〕合成鏈的過(guò)程。72.不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)錄：轉(zhuǎn)錄時(shí)因?yàn)椤?〕分子雙鏈一股鏈用作模板指引轉(zhuǎn)錄，另一股鏈不轉(zhuǎn)錄。〔2〕模板鏈并非總是在同一條鏈上。故稱(chēng)為不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)錄。73.原核生物聚合酶組成：由四種亞基組成α2ββ‘σ五聚體的蛋白質(zhì)。其中α2ββ’亞基稱(chēng)為核心酶。σ因子識(shí)別起始點(diǎn)。α決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄。β起催化作用。β’起結(jié)合模板〔開(kāi)鏈〕作用。74．操縱子：轉(zhuǎn)錄是不連續(xù)、分區(qū)段進(jìn)展的。每一轉(zhuǎn)錄區(qū)段可視為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，稱(chēng)為操縱子。操縱子包括假設(shè)干個(gè)構(gòu)造基因及其上游的調(diào)控序列。調(diào)控序列中的啟動(dòng)子是聚合酶結(jié)合模板的部位，也是控制轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵部位。75．電子顯微鏡下觀察到的羽毛狀的圖形說(shuō)明：在同一模板上，有多個(gè)轉(zhuǎn)錄同時(shí)在進(jìn)展。在鏈上觀察到的小黑點(diǎn)是多聚核蛋白體。轉(zhuǎn)錄與翻譯都在高效率的進(jìn)展。76．轉(zhuǎn)錄空泡：由酶形成的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物。77．依賴(lài)ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止：ρ因子是由一樣亞基組成的六聚體，它是原核生物轉(zhuǎn)錄終止因子。可結(jié)合轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物3‘端的多聚C特殊序列，還有酶與解螺旋酶活性。ρ因子與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物3‘端的多聚C結(jié)合后，ρ因子與聚合酶都發(fā)生構(gòu)象改變，從而使聚合酶停頓，解螺旋酶活性使與雜化雙鏈拆離，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中釋放。78．非依賴(lài)ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止：鏈延長(zhǎng)至終止區(qū)時(shí)，轉(zhuǎn)錄出的堿基序列隨即形成莖－環(huán)構(gòu)造。這種二級(jí)構(gòu)造是阻止轉(zhuǎn)錄繼續(xù)向下游推進(jìn)的關(guān)鍵。其機(jī)制有兩方面：一是莖環(huán)構(gòu)造在分子形成可能改變聚合酶的構(gòu)象。由于酶構(gòu)象的改變導(dǎo)致酶－模板結(jié)合方式的改變，可使酶不再向下游移動(dòng)，于是轉(zhuǎn)錄停頓。其二，轉(zhuǎn)錄復(fù)合物〔酶－〕上有局部的雜化雙鏈。分子與分子都要形成自己的雙鏈，雜化鏈形成的時(shí)機(jī)不大，本來(lái)不穩(wěn)定的雜化鏈更不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)錄復(fù)合物趨于解體。接著一串寡聚U是使鏈從模板脫落的促進(jìn)因素，因?yàn)樗械膲A基配對(duì)中以U與A的配對(duì)最不穩(wěn)定。79．的功能：：〔結(jié)合蛋白〕結(jié)合盒?！草o助因子〕輔助結(jié)合。：穩(wěn)定復(fù)合物。：促進(jìn)結(jié)合及作為其他因子結(jié)合的橋梁。:解螺旋酶:蛋白激酶活性。80．轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物〔〕：是真核生物轉(zhuǎn)錄因子之間先互相識(shí)別結(jié)合，然后以復(fù)合體的形式與聚合酶一同結(jié)合于轉(zhuǎn)錄起始前的區(qū)域而成。81．真核生物轉(zhuǎn)錄終止及加尾修飾真核生物轉(zhuǎn)錄終止后，緊接著發(fā)生加尾修飾。過(guò)程如下:在模板鏈上轉(zhuǎn)錄終止點(diǎn)上游約百個(gè)或上千個(gè)核苷酸處常有一組共同的序列。此序列后接著相當(dāng)多的序列。這些序列稱(chēng)為轉(zhuǎn)錄終止的修飾點(diǎn)。轉(zhuǎn)錄越過(guò)修飾點(diǎn)后，在修飾點(diǎn)被切斷，隨即參加A尾及帽子構(gòu)造。下游的雖然繼續(xù)轉(zhuǎn)錄，但很快被酶降解。因此有理由相信，帽子構(gòu)造是保護(hù)免受降解的，因?yàn)樾揎楛c(diǎn)以后的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無(wú)帽子構(gòu)造。82．外顯子：在斷裂基因及其初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上出現(xiàn)，并表達(dá)為成熟的核酸序列。83．內(nèi)含子：隔斷基因的線(xiàn)性表達(dá)而在剪接過(guò)程中被除去的核酸序列。84．人類(lèi)最龐大的一個(gè)基因是：抗肌萎縮蛋白基因。85．剪接體：是由與結(jié)合，使內(nèi)含子形成套索并拉近上下游外顯子距離的復(fù)合體。剪接體是剪接的場(chǎng)所。剪接過(guò)程的化學(xué)反響稱(chēng)為二次轉(zhuǎn)酯反響。86．編輯：通過(guò)對(duì)中的加工，使遺傳信息在水平上發(fā)生改變。87．的轉(zhuǎn)錄后加工：〔1〕前體的剪接。先由核酸內(nèi)切酶進(jìn)展催化進(jìn)展剪切反響，再由連接酶將外顯子連接起來(lái)?！?〕加上3‘端?！?〕化學(xué)修飾。包括：甲基化反響，使某些嘌呤變成甲基嘌呤。復(fù)原反響，使某些尿嘧啶復(fù)原成雙氫尿嘧啶〔〕。轉(zhuǎn)位反響，尿嘧啶核苷轉(zhuǎn)變?yōu)榧倌蜞奏ず塑铡拨怠?。脫氨反響，某些腺苷酸脫氨成為次黃嘌呤核苷酸〔I〕。88．的轉(zhuǎn)錄后加工〔1〕前體的剪接。45經(jīng)剪接后，分出屬于小亞基的18S－，余下的局部再剪接成5.8S,28S。成熟后，就在核仁上裝配，與核蛋白體蛋白質(zhì)一起形成核蛋白體，輸出胞漿。〔2〕化學(xué)修飾.主要是甲基化反響。89.開(kāi)放閱讀框架〔〕：從5‘端起始密碼子到3’90．遺傳密碼的特點(diǎn)：〔1〕連續(xù)性。編碼蛋白質(zhì)氨基酸序列的各個(gè)三聯(lián)體密碼連續(xù)閱讀。〔2〕簡(jiǎn)并性。除甲硫氨酸與色氨酸外，其他氨基酸都有2個(gè)或多個(gè)密碼子為之編碼，密碼子中第三位堿基是可以不同的，這稱(chēng)為密碼子的簡(jiǎn)并性。〔3〕通用性。蛋白質(zhì)生物合成的整套密碼，從原核生物到人類(lèi)都通用。〔4〕擺動(dòng)性。反密碼與密碼之間不嚴(yán)格遵守常見(jiàn)的堿基配對(duì)規(guī)律，尤其是密碼子的第三位堿基對(duì)反密碼子的第一位堿基，即使不嚴(yán)格配對(duì)也能識(shí)別配對(duì)，這種現(xiàn)象稱(chēng)為擺動(dòng)配對(duì)。91．原核生物翻譯起始復(fù)合物形成：〔1〕核蛋白體亞基別離。核蛋白體大小亞基別離。13與小亞基結(jié)合，促進(jìn)大小亞基別離。〔2〕在小亞基定位結(jié)合。原核生物在小亞基定位涉及兩種機(jī)制。其一，在各種原核起始上游約8－13核苷酸部位，存在4－9個(gè)核苷酸的一致序列，富含嘌呤堿基如，稱(chēng)為序列。而原核小亞基16S－的3‘端有一段富含嘧啶的段序列如，通過(guò)與序列堿基配對(duì)使與小亞基結(jié)合。序列又稱(chēng)核蛋白體結(jié)合位點(diǎn)〔〕。其二，上緊接序列后的小核苷酸序列可被核蛋白體小亞基蛋白1識(shí)別結(jié)合。〔3〕起始氨基酰－的結(jié)合。起始與結(jié)合的2一起，識(shí)別結(jié)合對(duì)應(yīng)小亞基P位的起始密碼，起始時(shí)A位被1占據(jù)，不與任何氨基酰－結(jié)合?！?〕核蛋白體大亞基結(jié)合。上述結(jié)合、的小亞基再與核蛋白體大亞基結(jié)合，同時(shí)－2結(jié)合的水解釋能，促使3種釋放，形成由完整核蛋白體、、起始氨基酰－組成的翻譯起始復(fù)合物。此時(shí)，結(jié)合起始密碼的占據(jù)P位，而A位空留，對(duì)應(yīng)上后的下一組三聯(lián)體密碼，準(zhǔn)備相應(yīng)氨基酰－的進(jìn)入。92．肽鏈的延長(zhǎng)?！?〕進(jìn)位。核糖體A位上密碼子所規(guī)定的氨酰－進(jìn)入核糖體A位上稱(chēng)為進(jìn)位。這一過(guò)程需延長(zhǎng)因子－T的參與。延長(zhǎng)因子有三種：1．.功能：協(xié)助氨基酰－進(jìn)入核糖體。與氨基酰－以及結(jié)合形成氨基酰,將氨基酰轉(zhuǎn)運(yùn)到核糖體的A位。2．.功能：促進(jìn)的再生。在參加一輪核糖體循環(huán)后轉(zhuǎn)變?yōu)?，使再轉(zhuǎn)變成，后者可被再利用。3．.功能：促進(jìn)肽酰移位。促進(jìn)肽酰由A位移到P位，促進(jìn)的釋放。(2)成肽。在轉(zhuǎn)肽酶的催化下，P位上的肽?；cA位上的氨基酰基成肽，成肽反響在A位進(jìn)展，卸載的仍在P位?！?〕轉(zhuǎn)位。在轉(zhuǎn)位酶的催化下，新生肽鏈連同從A位移到P位，而卸載的移入E位。A位空留并對(duì)應(yīng)下一組三聯(lián)體密碼。93．終止因子：又稱(chēng)釋放因子〔〕。其功能是識(shí)別上的終止密碼子，終止肽鏈的合成并釋放出肽鏈。原核生物中釋放因子是識(shí)別密碼子及，2能識(shí)別及。3結(jié)合，并能促進(jìn)12與核糖體結(jié)合。94．原核肽鏈終止過(guò)程：肽鏈延長(zhǎng)到終止密碼在核蛋白體A位出現(xiàn)，終止密碼子不能被任何氨基酰識(shí)別進(jìn)位。12進(jìn)入A位，識(shí)別結(jié)合終止密碼。1或2任一釋放因子結(jié)合終止密碼后都可觸發(fā)核蛋白體構(gòu)象改變，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)肽酶轉(zhuǎn)變?yōu)轷ッ富钚?。使新生肽鏈與結(jié)合在P位的間酯鍵水解，將合成的肽鏈釋出。再促使、卸載及從核蛋白體脫離。3有酶活性，能介導(dǎo)12與核蛋白體的相互作用。95．分子伴侶：分子伴侶是細(xì)胞中的一類(lèi)保守蛋白質(zhì)，可識(shí)別肽鏈的非天然構(gòu)象，促進(jìn)各功能域與整體蛋白質(zhì)的正確折疊。細(xì)胞中至少有兩類(lèi)分子伴侶家族：熱休克蛋白與伴侶素。96．蛋白質(zhì)合成后的加工：〔1〕新生肽鏈的折疊?！?〕一級(jí)構(gòu)造的修飾。包括：肽鏈N端的修飾，個(gè)別氨基酸的修飾，多肽鏈的水解修飾?！?〕空間構(gòu)造的修飾。包括：亞基聚合，輔基連接，疏水脂鏈的共價(jià)連接。97．起始因子:(1)1.能促進(jìn)2、3的活化。(2)2.促進(jìn)與30S小亞基結(jié)合的作用，并具有酶活性。(3)3.功能是使30S亞基從不具活性的核糖體釋放，輔助與小亞基結(jié)合，并阻止大小亞基重新聚合。98．信號(hào)假說(shuō)機(jī)制：這一假說(shuō)認(rèn)為，分泌性蛋白初級(jí)產(chǎn)物的端有信號(hào)肽構(gòu)造。在分泌性蛋白合成中，信號(hào)肽一出現(xiàn)，就被信號(hào)肽識(shí)別粒子與其受體對(duì)接蛋白結(jié)合，促使膜通道開(kāi)放，信號(hào)肽帶動(dòng)合成中的蛋白質(zhì)沿通道穿過(guò)膜，信號(hào)肽在沿通道折回膜內(nèi)時(shí)，被位于膜外側(cè)的信號(hào)肽酶切斷，使成熟的蛋白質(zhì)釋放到細(xì)胞外。99．抗生素類(lèi)作用位點(diǎn)：四環(huán)素類(lèi)：作用于核蛋白體小亞基，抑制氨基酰與小亞基結(jié)合。鏈霉素、卡那霉素：作用與核蛋白體小亞基，改變構(gòu)象引起讀碼錯(cuò)誤。氯霉素：作用與核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，阻斷延長(zhǎng)。紅霉素：作用與核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，阻礙轉(zhuǎn)位。放線(xiàn)菌酮：作用與真核核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，阻斷延長(zhǎng)。嘌呤霉素：作用與真核、原核核蛋白體。屬氨基酰類(lèi)似物，進(jìn)位后引起未成熟肽鏈脫落。100．白喉毒素作用機(jī)制：可使真核生物延長(zhǎng)因子2發(fā)生糖基化而失活。干擾素作用機(jī)理：〔1〕誘導(dǎo)特異蛋白激酶活化，該活化的激酶使真核主要的起始因子2磷酸化失活，從而抑制病毒蛋白質(zhì)的合成?！?〕干擾素與雙鏈共同活化2’-5’A合成酶，2101.管家基因：有些基因產(chǎn)物對(duì)生命全過(guò)程都是必不可少的。這類(lèi)基因在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，通常稱(chēng)為管家基因。管家基因的表達(dá)水平受環(huán)境因素影響很小，而是在個(gè)體各個(gè)生長(zhǎng)階段的大多數(shù)、或幾乎全部組織中持續(xù)表達(dá)，或變化很小。這類(lèi)基因表達(dá)稱(chēng)為根本〔或組成性〕基因表達(dá)。102．誘導(dǎo)：可誘導(dǎo)基因在一定環(huán)境中表達(dá)增強(qiáng)的過(guò)程稱(chēng)為誘導(dǎo)。阻遏：可阻遏基因表達(dá)產(chǎn)物水平降低的過(guò)程稱(chēng)為阻遏。103．基因表達(dá)調(diào)控的生物學(xué)意義：〔1〕適應(yīng)環(huán)境、維持生長(zhǎng)與增殖。〔2〕維持個(gè)體發(fā)育與分化。104．原核生物轉(zhuǎn)錄的影響因素：〔1〕啟動(dòng)子。啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)錄的效率與方向?！?〕σ因子。〔3〕阻遏蛋白具有負(fù)調(diào)控作用。〔4〕正調(diào)控蛋白促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。〔5〕倒位蛋白通過(guò)重組倒位而調(diào)節(jié)基因表達(dá)。倒位蛋白是一種位點(diǎn)特異性的重組酶?！?〕聚合酶抑制物可與結(jié)合并抑制轉(zhuǎn)錄?！?〕衰減子。105．衰減子〔〕:細(xì)菌中轉(zhuǎn)錄與翻譯是偶聯(lián)在一起的。這一特點(diǎn)使細(xì)菌中的一些操縱子的特殊序列可以在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中控制轉(zhuǎn)錄水平。這些特殊序列稱(chēng)為衰減子。106．乳糖操縱子〔1〕乳糖操縱子的構(gòu)造：含有Z、Y、A三個(gè)構(gòu)造基因，分別編碼β－半乳糖苷酶、透酶與乙酰基轉(zhuǎn)移酶。此外，含有一個(gè)操縱基因O，一個(gè)啟動(dòng)序列P，一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)與一個(gè)基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，與操縱基因O結(jié)合。啟動(dòng)序列P、操縱序列O與結(jié)合位點(diǎn)組成乳糖操縱子的調(diào)控區(qū)。〔2〕阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)控作用：1．當(dāng)有乳糖存在時(shí)，乳糖通過(guò)β－半乳糖苷酶變?yōu)榘肴樘牵俳?jīng)透酶進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。真正的誘導(dǎo)劑是半乳糖而不是乳糖。乳糖可與阻遏蛋白結(jié)合，導(dǎo)致阻遏蛋白與操縱序列O解離，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。2．當(dāng)沒(méi)有乳糖存在時(shí)，沒(méi)有誘導(dǎo)劑與阻遏蛋白結(jié)合，阻遏蛋白與操縱序列O結(jié)合，發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用，基因不轉(zhuǎn)錄。〔3〕的正性調(diào)控作用：1．當(dāng)沒(méi)有葡萄糖及濃度較高時(shí)，與結(jié)合嚴(yán)密，此時(shí)結(jié)合在結(jié)合位點(diǎn)，刺激轉(zhuǎn)錄活性。2．當(dāng)有葡萄糖存在及濃度較低時(shí)，與結(jié)合受阻，因此操縱子表達(dá)下降。〔4〕協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：1．當(dāng)葡萄糖存在，乳糖存在時(shí)：盡管乳糖作為誘導(dǎo)劑與阻遏蛋白結(jié)合，使阻遏蛋白與操縱序列O解離。但由于濃度較低，與結(jié)合受阻，基因處于關(guān)閉狀態(tài)。2．當(dāng)葡萄糖存在，乳糖不存在時(shí)：此時(shí)無(wú)誘導(dǎo)劑存在，阻遏蛋白與結(jié)合。而且由于葡萄糖的存在，也不能發(fā)揮正性調(diào)控作用，基因處于關(guān)閉狀態(tài)。3．當(dāng)葡萄糖與乳糖都不存在時(shí)：可以發(fā)揮正性調(diào)控作用，但由于沒(méi)有誘導(dǎo)劑，阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控作用使基因仍處于關(guān)閉狀態(tài)。4．當(dāng)葡萄糖不存在，乳糖存在時(shí)：此時(shí)可以發(fā)揮正性調(diào)控作用，阻遏蛋白由于誘導(dǎo)劑的存在而失去復(fù)調(diào)控作用，基因被翻開(kāi)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。107．色氨酸操縱子調(diào)控機(jī)制：(1)當(dāng)細(xì)胞內(nèi)色氨酸增多時(shí)，構(gòu)造基因轉(zhuǎn)錄受到抑制。衰減子轉(zhuǎn)錄物有4段特殊序列。片段1與2，2與3，3與4能配對(duì)形成發(fā)夾構(gòu)造，形成發(fā)夾能力的強(qiáng)弱依次為片段1/2>片段2/3>片段3/4。片段3/4所形成的發(fā)夾構(gòu)造之后緊接著寡尿嘧啶，是不依賴(lài)ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。(2)當(dāng)細(xì)胞內(nèi)有色氨酸存在時(shí)，形成色氨酰－，核糖體編譯可通過(guò)片段1并通過(guò)片段2，核糖體在到達(dá)片段3之前就從脫落。在這種情況下，片段1/2與片段2/3都不能形成發(fā)夾構(gòu)造，只有片段3/4形成發(fā)夾構(gòu)造，即形成轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，從而導(dǎo)致聚合酶作用停頓。(3)當(dāng)細(xì)胞內(nèi)沒(méi)有色氨酸存在時(shí)，色氨酰－缺乏，核糖體停留在兩個(gè)相鄰的色氨酸密碼子的位置上，片段1/2不能形成發(fā)夾構(gòu)造，片段2/3之間形成形成發(fā)夾構(gòu)造，則片段3/4之間就不能形成轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，后面的基因得以轉(zhuǎn)錄。108．序列：起始密碼子前的一段富含嘌呤核苷酸的核糖體結(jié)合位點(diǎn)。109．原核翻譯水平的調(diào)控：〔1〕序列是影響翻譯的重要因素?！?〕的穩(wěn)定性是調(diào)控翻譯的方式之一?！?〕翻譯產(chǎn)物也可以對(duì)相應(yīng)的翻譯進(jìn)展調(diào)控?！?〕小分子可以抑制特定的翻譯。110．真核生物基因表達(dá)在水平的調(diào)控主要通過(guò)以下幾種方式：〔1〕染色質(zhì)喪失。〔2〕基因擴(kuò)增。〔3〕基因重排。〔4〕甲基化。〔5〕染色質(zhì)構(gòu)造可影響基因表達(dá)。111．反式作用因子：真核細(xì)胞內(nèi)有大量的序列特異的結(jié)合蛋白，其中一些蛋白的主要功能是使基因開(kāi)放或關(guān)閉，稱(chēng)為反式作用因子。112．轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物形成的步驟：〔1〕結(jié)合盒。〔2〕－識(shí)別并結(jié)合－復(fù)合物。〔3〕其他轉(zhuǎn)錄因子與－結(jié)合，轉(zhuǎn)錄起始部位的解鏈，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物。113．反式作用因子的特點(diǎn)：〔1〕一般具有三個(gè)功能構(gòu)造域：構(gòu)造域、轉(zhuǎn)錄活性域與結(jié)合其他蛋白的結(jié)合域。〔2〕能識(shí)別并結(jié)合基因調(diào)控區(qū)中的順式作用元件?！?〕對(duì)基因表達(dá)有正性與負(fù)性調(diào)控作用，即激活與阻遏基因的表達(dá)。114．鋅指構(gòu)造：是指在結(jié)合構(gòu)造域中含有較多的半胱氨酸()與組氨酸()的區(qū)域，借肽鏈的彎曲使2個(gè)與2個(gè)或4個(gè)與一個(gè)鋅離子絡(luò)合成的指狀構(gòu)造。115．同源構(gòu)造域：許多反式作用因子結(jié)合的構(gòu)造域中有一段一樣的保守序列。是由60個(gè)左右的氨基酸組成的螺旋－回折－螺旋構(gòu)造的區(qū)域，稱(chēng)為同源構(gòu)造域。116．亮氨酸拉鏈：有些反式作用因子結(jié)合構(gòu)造域中有一段約30個(gè)氨基酸組成的核心序列，每隔6個(gè)氨基酸有規(guī)律的出現(xiàn)1個(gè)亮氨酸殘基，能形成兩性α-螺旋。在螺旋的一側(cè)是排列成行的亮氨酸，具有疏水性，稱(chēng)為亮氨酸拉鏈區(qū)。兩個(gè)亮氨酸拉鏈區(qū)的單體以疏水作用形成亮氨酸拉鏈。117．反式作用因子結(jié)合域的構(gòu)造模式：〔1〕鋅指構(gòu)造?！?〕同源構(gòu)造域?！?〕亮氨酸拉鏈?！?〕螺旋－環(huán)－螺旋構(gòu)造?！?〕堿性α－螺旋。118．轉(zhuǎn)錄活化構(gòu)造域構(gòu)造模型：〔1〕酸性α－螺旋構(gòu)造域〔2〕富含谷氨酰胺構(gòu)造域〔3〕富含脯氨酸構(gòu)造域。119．的選擇性剪接方式〔1〕外顯子選擇方式可保存或局部保存外顯子?！?〕內(nèi)含子選擇方式可刪除或局部刪除內(nèi)含子?！?〕互斥外顯子是指兩個(gè)外顯子不能同時(shí)被保存?！?〕內(nèi)部剪切位點(diǎn)造成內(nèi)含子或外顯子的局部序列被切除或保存。120．翻譯起始的調(diào)控〔1〕阻遏蛋白的調(diào)控作用。〔2〕翻譯起始因子的功能調(diào)控?！?〕5‘對(duì)翻譯的調(diào)控作用。〔4〕非編碼區(qū)長(zhǎng)度對(duì)翻譯的影響。121．翻譯后水平的調(diào)控〔1〕新生肽鏈的水解。〔2〕肽鏈中氨基酸的共價(jià)修飾。〔3〕通過(guò)信號(hào)肽分揀、運(yùn)輸、定位。122.同源重組：是指發(fā)生在同源序列間的重組，它通過(guò)鏈的斷裂與再連接，在兩個(gè)分子同源序列之間進(jìn)展單鏈或雙鏈片段的交換。又稱(chēng)根本重組。123．模型：(1)兩個(gè)同源染色體排列整齊(2)一個(gè)的一條鏈斷裂，并與另一個(gè)對(duì)應(yīng)的鏈連接，形成中間體。(3)通過(guò)分支移動(dòng)產(chǎn)生異源雙鏈。(4)中間體切開(kāi)并修復(fù)，形成兩個(gè)雙鏈重組。即片段重組體與拼接重組體。124．細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移：細(xì)菌中，可以通過(guò)接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)與細(xì)胞融合四種方式，在不同分子間發(fā)生共價(jià)連接，即基因轉(zhuǎn)移。125．接合作用：當(dāng)細(xì)胞或細(xì)菌通過(guò)菌毛相互接觸時(shí)，質(zhì)?？梢詮囊粋€(gè)細(xì)胞〔細(xì)菌〕轉(zhuǎn)移導(dǎo)另一個(gè)細(xì)胞〔細(xì)菌〕，這種類(lèi)型的轉(zhuǎn)移稱(chēng)為接合作用。126．轉(zhuǎn)化作用：通過(guò)自動(dòng)獲取或人為的供應(yīng)外源，使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型，這就是轉(zhuǎn)化作用。127．轉(zhuǎn)導(dǎo)作用：當(dāng)病毒從被感染的細(xì)胞〔供體〕釋放出來(lái)，再次感染另一細(xì)胞〔受體〕時(shí)，發(fā)生在供體細(xì)胞與受體細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)移及基因重組即為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。自然界常見(jiàn)的例子就是噬菌體感染宿主時(shí)伴隨發(fā)生的基因轉(zhuǎn)移。當(dāng)噬菌體感染宿主時(shí)會(huì)有兩種結(jié)局，一是溶菌生長(zhǎng)途徑，二是溶源菌生長(zhǎng)途徑。128．特異位點(diǎn)重組：由整合酶催化，在兩個(gè)序列的特異位點(diǎn)之間發(fā)生的整合稱(chēng)為位點(diǎn)特異的重組。129．重組常用的工具酶1．限制性核酸內(nèi)切酶：識(shí)別特異序列，切割。2．連接酶3．聚合酶I。具有完整的5’-3’聚合，3’-5’外切活性，以及5’-3’外切活性。用枯草桿菌蛋白酶可將聚合酶I裂解成兩個(gè)片段，大片段稱(chēng)為片段。具有5’-3’聚合，片段用途：〔1〕在克隆中，第二股鏈的合成。〔2〕序列分析?！?〕補(bǔ)齊雙鏈的3’〔4〕通過(guò)補(bǔ)齊3’端，使34．逆轉(zhuǎn)錄酶。5．堿性磷酸酶。能去除末端磷酸基。6．末端轉(zhuǎn)移酶。在3＇羥基末端進(jìn)展同聚物加尾。7．多聚核苷酸激酶。催化多聚核苷酸5’130．限制性核酸內(nèi)切酶：就是識(shí)別的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周?chē)懈铍p鏈的一類(lèi)內(nèi)切酶。131．回文構(gòu)造：大局部類(lèi)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的核苷酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對(duì)稱(chēng)，通常稱(chēng)這種特殊構(gòu)造順序?yàn)榛匚臉?gòu)造。132．C值：基因組的大小常以其含量表示。單倍體基因組中的全部量稱(chēng)為C值。133．作為克隆載體的質(zhì)粒應(yīng)具備：〔1〕分子量相對(duì)較小，能在細(xì)菌中穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)?！?〕具有一個(gè)以上的遺傳標(biāo)志?！?〕具有多個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶的單一切點(diǎn)，便于外源基因的插入。134．常用作克隆的載體：質(zhì)粒、λ噬菌體、M13噬菌體、粘性質(zhì)粒、病毒載體、酵母人工染色體與細(xì)菌人工染色體。135．克?。簯?yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將各種來(lái)源的遺傳物質(zhì)與載體結(jié)合成一具有自我復(fù)制能力的分子――復(fù)制子，繼而通過(guò)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，再進(jìn)展擴(kuò)增、提取獲得大量同一分子，即克隆。又稱(chēng)基因克隆。實(shí)現(xiàn)基因克隆所采用的方法及相關(guān)工作稱(chēng)為基因工程或重組技術(shù)。136．基因克隆的步驟：〔1〕目的基因的獲取。1．化學(xué)合成法。2．基因組文庫(kù)。3．文庫(kù)。4．?！?〕克隆載體的選擇與構(gòu)建?！?〕外源基因與載體的連接。1．粘性末端連接。2．平端連接。3．同聚物加尾連接。4．人工街頭連接?！?〕重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。1．轉(zhuǎn)化：是指將質(zhì)?；蚱渌庠磳?dǎo)入處于感受態(tài)的宿主菌，并使其獲得新的表型的過(guò)程。2．感染：λ噬菌體、粘性質(zhì)粒與真核細(xì)胞病毒為載體的重組分子，在體外包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒，然后才能感染適當(dāng)?shù)募?xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。3．轉(zhuǎn)染：轉(zhuǎn)染是轉(zhuǎn)化與感染兩個(gè)詞構(gòu)成的新詞，指真核細(xì)胞主動(dòng)攝取或被動(dòng)導(dǎo)入外源片段而獲得新的遺傳表型的過(guò)程。常用方法有：電穿孔法、磷酸鈣共沉淀法與脂質(zhì)體融入法等。〔5〕重組體的篩選。1．遺傳學(xué)方法2．免疫學(xué)方法3．核酸雜交法4．技術(shù)5．酶切鑒定〔6〕克隆基因的表達(dá)137．真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法：〔1〕磷酸鈣共沉淀法(2)電穿孔法〔3〕－葡聚糖法〔4〕脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染〔5〕顯微注射法138．重組技術(shù)應(yīng)用〔1〕疾病基因的發(fā)現(xiàn)與克隆〔2〕生物制藥〔3〕基因診斷〔4〕基因治療〔5〕遺傳病的預(yù)防139.細(xì)胞間信息物質(zhì)〔第一信使〕：凡由細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)統(tǒng)稱(chēng)細(xì)胞間信息物質(zhì)。包括：神經(jīng)遞質(zhì)、內(nèi)分泌激素、局部化學(xué)介質(zhì)與氣體信號(hào)。140．細(xì)胞內(nèi)信息物質(zhì)：在細(xì)胞內(nèi)傳遞細(xì)胞調(diào)控信號(hào)的化學(xué)物質(zhì)稱(chēng)為細(xì)胞內(nèi)化學(xué)物質(zhì)。141．第二信使：通常將2+、、、、3、、花生四烯酸及其代謝產(chǎn)物這類(lèi)在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息的小分子化合物稱(chēng)為第二信使。142．第三信使：負(fù)責(zé)細(xì)胞核內(nèi)外信息傳遞的物質(zhì)稱(chēng)為第三信使。是一類(lèi)可與靶基因特異序列結(jié)合的核蛋白，能調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄，因此又稱(chēng)為結(jié)合蛋白。143．膜受體分為：環(huán)狀受體、G蛋白偶聯(lián)受體、單次跨膜α螺旋受體與具有鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶活性的受體。144．胞內(nèi)受體包括四個(gè)區(qū)域：高度可變區(qū)、結(jié)合區(qū)、鉸鏈區(qū)與激素結(jié)合區(qū)。145．受體與配體結(jié)合的特點(diǎn)：高度專(zhuān)一性、高度親與力、可飽與性、可逆性與特定的作用模式。146．膜受體介導(dǎo)的信息轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(1)－蛋白激酶途徑。1．的生成與降解。一些激素如腎上腺素、胰高血糖素等作用于相應(yīng)的受體后，活化相應(yīng)的受體，活化的受體可催化的與交換，導(dǎo)致的α亞基與βγ解離，釋放出αs－，αs－可導(dǎo)致活化，使得轉(zhuǎn)變?yōu)椋?xì)胞內(nèi)濃度升高。在細(xì)胞內(nèi)的濃度除與活性相關(guān)，還與磷酸二酯酶活性有關(guān)。2．的作用機(jī)制。對(duì)細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用是通過(guò)激活依賴(lài)性蛋白激酶系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。是一種由四聚體組成的別構(gòu)酶〔C2R2〕.其中C為催化亞基，R為調(diào)節(jié)亞基。每個(gè)調(diào)節(jié)亞基上有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，催化亞基有催化底物蛋白質(zhì)特定絲/蘇氨酸殘基磷酸化的功能。調(diào)節(jié)亞基與催化亞基結(jié)合時(shí)，呈無(wú)活性狀態(tài)。當(dāng)4分子與兩分子調(diào)節(jié)亞基結(jié)合后，調(diào)節(jié)亞基脫落，游離的催化亞基具有蛋白激酶活性。3．的作用。被激活后，能在存在的情況下使許多蛋白質(zhì)特定的絲/蘇氨酸殘基磷酸化，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的物質(zhì)代謝與基因表達(dá)。對(duì)代謝的調(diào)節(jié)作用：腎上腺素調(diào)節(jié)糖原分解的級(jí)聯(lián)反響。腎上腺素與質(zhì)膜上的受體結(jié)合后，通過(guò)沖動(dòng)型G蛋白使活化，激活生成。后者進(jìn)一步激活，一方面使無(wú)活性的磷酸化酶激酶b磷酸化為有活性的磷酸化酶激酶b，后者能催化磷酸化酶b成為有活性的磷酸化酶a.磷酸化酶a經(jīng)磷蛋白磷酸酶脫去磷酸又轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)活性的磷酸化酶b。磷蛋白磷酸酶活性也受的調(diào)節(jié)。同時(shí)，也使有活性的糖原合酶的特定絲/蘇氨酸殘基磷酸化轉(zhuǎn)變成無(wú)活性。對(duì)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用:在基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)有一類(lèi)應(yīng)答元件〔〕，它可與應(yīng)大元件結(jié)合蛋白〔〕相互作用而調(diào)節(jié)此基因的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)?shù)拇呋瘉喕M(jìn)入細(xì)胞核后，可催化反式作用因子－中特定的絲/蘇氨酸殘基磷酸化。磷酸化的與上的結(jié)合，從而激活受調(diào)控的基因轉(zhuǎn)錄。〔2〕2依賴(lài)性蛋白激酶途徑1．2磷脂依賴(lài)性蛋白激酶途徑3與的生物合成與功能：去甲腎上腺素等激素作用于靶細(xì)胞膜上相應(yīng)的受體后，通過(guò)激活，后者可水解2而生成與3。生成后仍留在質(zhì)膜上，在磷脂酰絲氨酸與2+的配合下激活。3生成后，從膜中擴(kuò)散到胞漿中與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與肌漿網(wǎng)上的受體結(jié)合，促進(jìn)這些鈣儲(chǔ)存庫(kù)內(nèi)2+的釋放，2+能與胞漿內(nèi)的結(jié)合并聚集到質(zhì)膜，在與膜磷脂共同誘導(dǎo)下，被激活。的生理功能：對(duì)代謝的調(diào)節(jié)作用與對(duì)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。2．2鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性途徑鈣調(diào)蛋白為鈣結(jié)合蛋白，人體的有4個(gè)2+結(jié)合位點(diǎn)，這些位點(diǎn)被占滿(mǎn)后其構(gòu)象發(fā)生改變。當(dāng)胞漿內(nèi)2+濃度高到10-2時(shí)，2+與結(jié)合。2+－底物譜很廣，可以磷酸化許多蛋白質(zhì)的絲/蘇氨酸殘基，使之激活或失活。2+－既可以激活腺苷酸環(huán)化酶又可以激活磷酸二酯酶，使它既加速的生成又加速的講解，使信息迅速傳到細(xì)胞內(nèi)，又迅速消失。2+－在細(xì)胞的信號(hào)傳遞中也起著重要作用。〔3〕蛋白激酶系統(tǒng)由在鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的催化下生成，經(jīng)磷酸二酯酶催化而降解。心鈉素〔〕與靶細(xì)胞膜上具有鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶活性的受體結(jié)合后，能激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，后者催化轉(zhuǎn)變?yōu)?。能激活依?lài)性蛋白激酶G〔〕，催化有關(guān)蛋白絲/蘇氨酸殘基磷酸化，產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，即松弛血管平滑肌與增加尿鈉，還可以降低血壓?！?〕酪氨酸蛋白激酶體系1．受體型途徑：受體與配體結(jié)合后，發(fā)生自身磷酸化與磷酸化2與。磷酸化的受體與2－復(fù)合物結(jié)合，進(jìn)而激活蛋白。蛋白又稱(chēng)小G蛋白，性質(zhì)類(lèi)似與G蛋白中的Gα亞基，它的活性與其結(jié)合或直接有關(guān)，與結(jié)合時(shí)無(wú)活性，與結(jié)合而活化?；罨牡鞍卓蛇M(jìn)一步活化蛋白。蛋白具有絲/蘇氨酸蛋白激酶活性，它可進(jìn)一步激活有絲分裂原激活蛋白激酶〔〕系統(tǒng)。系統(tǒng)包括、、，更具廣泛的催化活性，它既能催化絲/蘇氨酸殘基又能催化酪氨酸殘基磷酸化，故是具雙重催化活性的蛋白激酶。除調(diào)節(jié)花生四烯酸代謝與細(xì)胞微管形成外，更重要的是可催化細(xì)胞核內(nèi)許多反式作用因子的絲/蘇氨酸殘基磷酸化，導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄或關(guān)閉。受體型活化后還可通過(guò)激活，多種磷脂酶等發(fā)揮調(diào)控基因的作用。2．途徑一局部生長(zhǎng)因子與大局部細(xì)胞因子可借助細(xì)胞內(nèi)非受體型酪氨酸蛋白激酶完成信息傳導(dǎo)。再通過(guò)激活影響基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。〔5〕核因子κB途徑主要涉及機(jī)體的防御反響、組織損傷與應(yīng)激、細(xì)胞分化與凋亡以及腫瘤生長(zhǎng)抑制過(guò)程的信息傳遞?！?〕β途徑調(diào)節(jié)增殖、分化、遷移與凋亡等多種細(xì)胞反響。147.雙脫氧鏈終止法測(cè)序的根本原理：與模版互補(bǔ)結(jié)合的引物在聚合酶〔通常是聚合酶I的大片段或T7聚合酶〕作用下發(fā)生互補(bǔ)鏈的延伸反響，反響體系中的2’-3’-雙脫氧鏈核苷三磷酸()與底物脫氧核苷三磷酸()競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合與延伸互補(bǔ)鏈末端，造成延伸終止。由于產(chǎn)生一系列分別終止于A、G、T、C位置的不同大小的末端，應(yīng)用高分辨率聚丙烯酰胺凝膠電泳可分辨僅相差一個(gè)核苷酸的20－500堿基的片段，結(jié)合放射自顯影技術(shù)，便可直接讀出模板的待測(cè)序列。148．化學(xué)裂解法測(cè)序原理：采用化學(xué)試劑處理末端放射性標(biāo)記的單鏈片段，造成堿基非特異性切割，由此產(chǎn)生一組具不同長(zhǎng)度的鏈的反響混合物，經(jīng)凝膠電泳按分子大小別離與放射自顯影，直接讀出待測(cè)的核苷酸順序。149．大片段序列測(cè)定的策略：隨機(jī)法、嵌套缺失法、引物延伸法。150．核酸分子雜交：是指具有互補(bǔ)序列的兩條核酸單鏈在一定條件下按堿基配對(duì)原則形成雙鏈的過(guò)程。151．核酸分子雜交的原理：具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定條件下〔適宜的溫度及離子強(qiáng)度〕堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過(guò)程中，核酸分子經(jīng)歷了變性與復(fù)性的變化，以及復(fù)性過(guò)程中各分子間鍵的形成與斷裂等。雜交的雙方是待測(cè)核酸序列與核酸序列。在雜交體系中的核酸序列稱(chēng)作探針，探針通常用于進(jìn)展核素或非核素標(biāo)記。152．變性：在物理或化學(xué)因素作用下，，可以導(dǎo)致兩條鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中所有的共價(jià)鍵不受影響，稱(chēng)為變性。153．導(dǎo)致變性的方法：熱變性、酸堿變性、化學(xué)試劑變性。153.值：雙鏈變性一半所需要的溫度稱(chēng)作的溶解溫度。154．復(fù)性：兩條互補(bǔ)的單鏈分子在變性條件除去后能重新按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則以氫鍵相連形成雙鏈分子，這一過(guò)程稱(chēng)為復(fù)性。155．影響雜交的因素：1．核酸分子的濃度與長(zhǎng)度2．溫度3．離子強(qiáng)度4．雜交液中的甲酰胺5．核酸分子的復(fù)雜性6．非特異性雜交反響156．(熒光原位雜交)：是一種非放射性原位雜交方法，用特殊熒光標(biāo)記核酸探針，可在染色體、細(xì)胞與組織切片上進(jìn)展雜交，能夠非常有效地檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)是否存在特定的或序列。157．步驟：1．待測(cè)核酸樣品的制備。包括制備待測(cè)與的限制酶消化。2．待測(cè)樣品的電泳別離。3．凝膠中核酸的變性。4．轉(zhuǎn)膜。常用的轉(zhuǎn)膜方法：毛細(xì)管虹吸印跡法、電轉(zhuǎn)印法、真空轉(zhuǎn)移法。5．探針的制備6．雜交。必須先進(jìn)展預(yù)雜交。7．雜交結(jié)果的檢測(cè)。158：預(yù)雜交：能夠結(jié)合片段的膜同樣能夠結(jié)合探針，在進(jìn)展雜交前必須將膜上所有能與結(jié)合的位點(diǎn)全部封閉，這就是預(yù)雜交的目的。159．：是指與的雜交，將電泳別離的待測(cè)片段轉(zhuǎn)印并結(jié)合與一定的固相支持物上，然后用標(biāo)記的探針檢測(cè)待測(cè)的一種方法。160．:是指將待測(cè)樣品經(jīng)電泳別離后轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)展固－液相雜交，檢測(cè)〔主要是〕的方法。161．斑點(diǎn)印跡：將或變性后直接點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上或尼龍膜上，用于基因組中特定基因及其表達(dá)的定性及定量研究，稱(chēng)為斑點(diǎn)印跡〔〕.162.原位雜交：核酸保持在細(xì)胞或組織切片中，經(jīng)適當(dāng)方法處理細(xì)胞或組織后，將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)展雜交，稱(chēng)為原位雜交。163．原位雜交的步驟：1．組織或細(xì)胞的固定2．組織細(xì)胞雜交前的預(yù)處理。一般用去垢劑〔X－100、〕或蛋白酶消化。3．探針的選擇與標(biāo)記4．雜交5．雜交結(jié)果檢測(cè)164．液相雜交：是指待測(cè)核酸分子與核酸探針都存在與雜交液中，堿基互補(bǔ)的單鏈核酸分子在液體中配對(duì)形成雜交分子，常用的液相雜交有酶保護(hù)分析法、核酸酶S1保護(hù)分析法。165．酶保護(hù)分析法：是利用與1能專(zhuān)一性降解單鏈而雙鏈則受到保護(hù)的特點(diǎn)，用放射性標(biāo)記的探針與待檢進(jìn)展液相雜交，使互補(bǔ)序列探針與待測(cè)形成雜交體。此法用于定量、末端定位及確定內(nèi)含子在相應(yīng)基因中的位置等。的根本程序：1．制備待測(cè)2．探針的標(biāo)記3．雜交4．除去單鏈5．電泳分析166．探針的種類(lèi)：探針、基因組探針、寡核苷酸探針、探針167．標(biāo)記物：〔1〕核素標(biāo)記物：32P、35S等，以32P最常用?！?〕非核素標(biāo)記物：半抗原、配體、熒光素、化學(xué)發(fā)光探針。168．標(biāo)記方法：缺口平移法、隨機(jī)引物法、法、末端標(biāo)記法169．探針的純化方法：乙醇沉淀法、50柱層析法、微柱離心法170．缺口平移法原理：利用適當(dāng)濃度的在雙鏈上隨即切割單鏈，造成單鏈切口。切口處產(chǎn)生一個(gè)5’端與一個(gè)3’端，3’端即可作為引物，在聚合酶I的5’-3’聚合酶活性催化下，以互補(bǔ)的單鏈為模版，依次將結(jié)合到切口的3’端，合成新的單鏈；同時(shí)聚合酶I的5’-3’核酸外切酶活性在切口處將舊鏈從5’逐步切除，新合成鏈不斷延伸，從而使原分子上的局部核苷酸殘基被標(biāo)記的核苷酸所取代。171．隨機(jī)引物法原理：隨機(jī)引物是人工合成的長(zhǎng)度為6個(gè)核苷酸殘基的寡聚核苷酸片段的混合物，它們的順序是根據(jù)計(jì)算機(jī)分析了生物基因組六核苷酸排列的多種可能性而設(shè)計(jì)的。對(duì)于任意一個(gè)用作探針的片段，隨機(jī)引物混合物都有一些核苷酸片段與之結(jié)合，起到合成引物的作用。將這些隨機(jī)引物與變性后的單鏈結(jié)合，然后以此結(jié)合的隨機(jī)引物為引物，以變性后的單鏈為模版，在酶的催化下，以四種〔其中一種為標(biāo)記物標(biāo)記的探針〕為底物，合成與探針互補(bǔ)的且?guī)в袠?biāo)記物的探針。172．的原理：是一種體外擴(kuò)增的技術(shù)，根本原理是：作為引物的一對(duì)寡核苷酸與模板同源序列按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則形成局部雙鏈，然后在聚合酶作用下引導(dǎo)新鏈的合成，一般經(jīng)25－30個(gè)變性、退火、延伸的循環(huán)，可以獲得特異性產(chǎn)物。反響體系包括：耐熱的聚合酶、化學(xué)合成的寡核苷酸引物、4種、適宜的緩沖液體系、模板。173．引物設(shè)計(jì)的原則：1．引物長(zhǎng)度一般為15－30個(gè)核苷酸2．兩個(gè)引物之間不應(yīng)該存在互補(bǔ)序列3．引物本身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列4．引物與非特異性擴(kuò)增區(qū)序列的同源性不應(yīng)超過(guò)70％，引物的3’端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)外不應(yīng)有互補(bǔ)序列5．引物的5’端最多可以游離10幾個(gè)堿基而不影響反響的進(jìn)展6．引物堿基組成應(yīng)隨機(jī)分布，應(yīng)防止嘌呤或嘧啶的堆積，特別是引物的3’端不應(yīng)有連續(xù)3個(gè)G與C。7．引物的3’端一定要與模版配對(duì)。174．到達(dá)平臺(tái)期所需循環(huán)次數(shù)取決于：樣品模版的拷貝數(shù)、的擴(kuò)增效率以及聚合酶的種類(lèi)與活性，以及非特異性產(chǎn)物的競(jìng)爭(zhēng)。到達(dá)平臺(tái)期前，一般要進(jìn)展25次以上的循環(huán)。175．反響考前須知：1．隔離不同操作區(qū)，包括樣品制備區(qū)、操作區(qū)與反響產(chǎn)物分析區(qū)2．嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作3．設(shè)立實(shí)驗(yàn)對(duì)照：陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、試劑對(duì)照176．筑巢：先用一對(duì)外側(cè)引物擴(kuò)增含目的基因的大片段，再用一對(duì)內(nèi)側(cè)引物以大片段為模板擴(kuò)增獲取目的基因。筑巢可以提高的效率與特異性。177．多重：是在一次反響中參加多對(duì)引物，同時(shí)擴(kuò)增一份樣品中不同序列的過(guò)程。由于每對(duì)引物擴(kuò)增區(qū)位于模板的不同部位，因而擴(kuò)增片段長(zhǎng)短不同。由此檢測(cè)是否存在某些基因片段的缺失或突變。178．共享引物：是利用3條引物擴(kuò)增兩種不同的序列，其中一條引物與兩種待擴(kuò)序列都互補(bǔ)，它與另兩條引物分別組成兩對(duì)引物。這種方法常用于細(xì)菌學(xué)鑒定，確定同一種屬細(xì)菌的不同種類(lèi)。179．原位:以組織固定處理細(xì)胞內(nèi)的或?yàn)榘行蛄校M(jìn)展反響的過(guò)程，稱(chēng)為原位。原位不需從組織細(xì)胞中別離模板或。原位成為靶基因序列的細(xì)胞定位、組織分布與靶基因表達(dá)檢測(cè)的重要手段。180．－：是將的反轉(zhuǎn)錄反響與反響聯(lián)合應(yīng)用的一種技術(shù)。首先用為模板，在反轉(zhuǎn)錄酶作用下合成，再以為模版通過(guò)反響來(lái)擴(kuò)增目的基因。是目前從組織或細(xì)胞中獲得目的基因以及對(duì)序列的進(jìn)展定性定量分析的最有效方法之一。181．實(shí)時(shí)〔〕:的根本原理是引入了熒光標(biāo)記分子，使得在反響中產(chǎn)生的熒光信號(hào)與產(chǎn)物量成正比，對(duì)每一反響時(shí)刻的熒光信號(hào)進(jìn)展實(shí)時(shí)分析，計(jì)算出模版的含量。探針的5’端有一個(gè)熒光報(bào)告分子，3’端有一個(gè)熒光淬滅分子。沒(méi)有擴(kuò)增反響時(shí)，探針保持完整，無(wú)熒光信號(hào)釋放。隨著的進(jìn)展，聚合酶在鏈延伸過(guò)程中遇到與模板結(jié)合的熒光探針，其5’-3’外切核酸酶就會(huì)將該探針逐步切斷，報(bào)告熒光基團(tuán)一旦與淬滅基團(tuán)別離，便產(chǎn)生熒光信號(hào)。后者被熒光檢測(cè)系統(tǒng)接收，用于數(shù)據(jù)分析。182．基因組文庫(kù)的構(gòu)建：基因組文庫(kù)是指包含某一個(gè)生物細(xì)胞全部基因組序列的克隆群體，它以片段的形式貯存著某一生物的全部基因組信息。基因組文庫(kù)的構(gòu)建過(guò)程：將純化的細(xì)胞基因組用適當(dāng)?shù)南拗菩詢(xún)?nèi)切酶消化，獲得一定大小的片段，將這些片段克隆到噬菌體載體中，從而獲得一群含有不同片段的噬菌體，這就是基因組文庫(kù)。183．文庫(kù)及構(gòu)建：文庫(kù)是包含某一組織細(xì)胞在一定條件下所表達(dá)的全部經(jīng)反轉(zhuǎn)錄而合成的序列的克隆群體，它以片段的形式貯存著該組織細(xì)胞的基因表達(dá)信息。文庫(kù)的構(gòu)建：將組織細(xì)胞中的經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄合成從，后者被克隆進(jìn)入質(zhì)?；蚴删w載體，轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞后可獲得克隆群體。184.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：是指用人工方法將外源基因?qū)牖蛘系交蚪M內(nèi)，并能穩(wěn)定傳代的一類(lèi)動(dòng)物。185．導(dǎo)入基因的主要方式：顯微注射法、胚胎干細(xì)胞法、逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法。186．基因打靶的必備條件：胚胎干細(xì)胞、打靶載體187．打靶載體的篩選標(biāo)志：〔新霉素〕陽(yáng)性篩選標(biāo)志；陰性篩選標(biāo)志。188．基因敲除的根本程序：1．打靶載體的構(gòu)建2．打靶載體導(dǎo)入細(xì)胞3．基因敲除細(xì)胞注射入胚泡4．胚泡植入假孕小鼠的子宮中5．嵌合體的雜交育種189．構(gòu)建打靶載體的根本過(guò)程1．獲得目的基因的同源片段，將此片段克隆到一般的質(zhì)粒載體中2．從重組質(zhì)粒中切除目的基因的大局部同源序列，只留局部序列在線(xiàn)性質(zhì)粒載體的兩端3．將基因克隆到帶有目的基因同源順序的線(xiàn)性質(zhì)粒中，使之位于殘留目的基因同源順序的中間4．在目的基因同源順序的外側(cè)線(xiàn)性化重組質(zhì)粒載體，將基因克隆到此線(xiàn)性載體中190．芯片技術(shù)：是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物外表，然后與標(biāo)記的樣品雜交，通過(guò)對(duì)雜交信號(hào)的檢測(cè)分析，即可得出樣品的遺傳信息〔基因序列及表達(dá)的信息〕。由于常用計(jì)算機(jī)硅芯片作為固相支持物，所以稱(chēng)為芯片。191．芯片可分為：原位合成芯片與微集