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DB12Technicalregulationofdetectionfortomatoyellowleafcurlviruscarriedbyseedsandseedlingsofsolanumfruitvegetables天津市市場(chǎng)監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王勇、高葦、張春祥、楊利娟、劉曉琳、霍建飛、1茄果類蔬菜種苗番茄黃化曲葉病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程虱以持久方式傳播，又被稱為粉虱傳雙生病毒，是一類具有孿生顆粒形態(tài)的植物DNA病毒，廣泛分布于種苗傳播病害seedling-borne4.1儀器4.2.1總體要求24.2.3商用植物DNA提取試劑盒或DN4.2.4裂解緩沖液4.2.6凝膠電泳試劑瓊脂糖，TAEBuffer，核酸染料GoLdeMasterMix。5測(cè)試程序5.1檢測(cè)樣品于1萬株，如果該批種苗標(biāo)記或能明顯地看出該批種苗在形態(tài)或文件記錄上有異質(zhì)性的證據(jù)時(shí)，應(yīng)拒絕5.2檢測(cè)方法病毒DNA的提取可以采用商用植物DNA提取試劑盒或DNA提取試劑，按照提取步驟和方法進(jìn)行，或者），）；）；3對(duì)種苗組織DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，目的擴(kuò)增片段為543bp，可對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物雙向測(cè)序，與GenBank中TYLCV和GenBank中相關(guān)序列進(jìn)行序列相似性比對(duì)分析，以驗(yàn)6結(jié)果判定7樣品保存茄果類蔬菜種苗樣品可以其植株、幼嫩組織或DNA的形式保存，該樣品需經(jīng)登記后保存。番茄黃化4番茄黃化曲葉病毒（TomatoYeLLowLeafCurLVirus）簡(jiǎn)稱TYLCV或TY，隸屬雙生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花葉病毒屬（Beg5——TYLCV-R：5’-CCAATAAGGCGTAAGCGTGTAGAC-3’。2xTaqMasterMix12.5μL，正向和反向引物（10μmo擴(kuò)增后取2μLPCR反應(yīng)產(chǎn)物在1%的瓊脂糖凝膠電泳后，置凝膠成像儀下觀察DNA特異性條帶。TY擴(kuò)增出543bp目的片段，而對(duì)于其他的模板DNA則不能擴(kuò)增出相應(yīng)的片段。由此，可以根據(jù)特異543bp注：M，DL2000DNAmar

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