TSDAA 0082-2024 加米霉素含量的測(cè)定超高效液相色譜法

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由山東省畜牧協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：山東省飼料獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心、艾美科健（中國(guó)）生物醫(yī)藥有限公司、齊魯晟華制藥有限公司、山東魯抗舍里樂(lè)藥業(yè)有限公司、齊魯動(dòng)物保健品有限公司、山東魯抗舍里樂(lè)藥業(yè)有限公司高新區(qū)分公司、山東久隆恒信藥業(yè)有限公司、山東省蛋雞技術(shù)創(chuàng)新中心。本文件主要起草人：魏秀麗、湯文利、郭玉秋、張如如、郭曉梅、李有志、汪娜、羅俊峰、王瑞萍、劉華陽(yáng)、陳志強(qiáng)、程冉冉、于振洋、李傳溥、張志民。本文件是首次發(fā)布。加米霉素含量的測(cè)定超高效液相色譜法本文件規(guī)定了加米霉素含量的測(cè)定方法-超高效液相色譜法（UPLC）。本文件適用于加米霉素原料中加米霉素含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理加米霉素經(jīng)稀釋后，超高效液相色譜法測(cè)定，依據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T6682一級(jí)水的規(guī)定。5.1乙腈（CH3CN色譜純。5.270%乙腈水溶液：量取700mL乙腈，加水稀釋至1000mL。5.3氨水溶液（0.1:30量取氨水2.0mL，加水稀釋至600mL，無(wú)機(jī)濾膜過(guò)濾。5.4加米霉素對(duì)照品，純度≥95.0％。5.5加米霉素對(duì)照工作液（0.4mg/mL精密稱(chēng)取加米霉素對(duì)照品（5.4）約10mg（準(zhǔn)確至0.01mg置25mL棕色容量瓶中，加70%乙腈水溶液（5.2）溶解并稀釋至刻度，搖勻。現(xiàn)用現(xiàn)配。6儀器設(shè)備6.1超高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。6.2分析天平：精度0.00001g。6.3濾膜：有機(jī)和無(wú)機(jī)，0.22μm。27樣品取樣品100g，混勻，裝入密閉容器中，備用。8試驗(yàn)步驟8.1供試品溶液的制備精密稱(chēng)取供試品約10mg，置25mL棕色量瓶中，加70%乙腈水溶液（5.2）溶解并稀釋至刻度，濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。8.2超高效液相色譜參考條件色譜柱：BEHC18，100mm×2.1mm×1.7μm，或性能相當(dāng)者；流動(dòng)相A：乙腈（5.1）；流動(dòng)相B：氨水溶液（5.3）；等度洗脫流動(dòng)相：A+B=70+30（V1+V2波長(zhǎng)：208nm；流速：0.50mL/min；進(jìn)樣量：1μL；柱溫：35℃;進(jìn)樣室溫度10℃;按加米霉素峰計(jì)算理論塔板數(shù)不低于4000。8.3測(cè)定8.3.1定性加米霉素色譜峰的保留時(shí)間一致，相對(duì)偏差應(yīng)在±2.5%。8.3.2定量取供試品溶液（8.1）和對(duì)照工作液（5.5）注入超高效液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖（見(jiàn)附錄A圖A.1），外標(biāo)法定量。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理供試品溶液中加米霉素含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，數(shù)值以百分?jǐn)?shù)（%）表示，按式（1）計(jì)算：（%）=×××100%…………(1)式中：A樣——供試品溶液中加米霉素的峰面積；m對(duì)——加米霉素對(duì)照品質(zhì)量，單位為克（gP——加米霉素對(duì)照品含量，單位為百分?jǐn)?shù)（%A對(duì)——對(duì)照品溶液中加米霉素的峰面積；m樣——供試品質(zhì)量，單位為克（g）。3測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。在重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的2.0%。4(資料性)