CAR-T細胞療法面臨的挑戰(zhàn)與應對策略

CAR-T細胞療法面臨的挑戰(zhàn)與應對策略北京義翹神州科技股份有限公司目錄CAR-T細胞治療研究進展1綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案3CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)2義翹神州23CAR-T細胞治療研究進展義翹神州doi:10.1038/nrc.2016.97.CAR-T細胞治療的流程ChimericAntigenReceptorT-CellImmunotherapy即為CAR-T療法，嵌合抗原受體T細胞免疫療法doi:10.1002/cam4.5551.Epub2022Dec30.全球已上市9款CAR-T產(chǎn)品4義翹神州CAR-T細胞治療研究進展全球市場情況全球CAR-T細胞療法市場的歷史及預測市場規(guī)模（2017年至2030年）國內(nèi)市場規(guī)模：據(jù)Frost&Sullivan預測，2030年國內(nèi)CAR-T市場將達到約289億元數(shù)據(jù)來源：Frost&Sullivan預測，光大證券研究所自2017年CAR-T產(chǎn)品首次獲批上市以來，全球CAR-T細胞治療市場迅速擴大全球已上市CAR-T產(chǎn)品歷年銷售總額5CAR-T細胞治療研究進展義翹神州6義翹神州1015Studiesfoundfor:CAR-TCELL全球臨床研究情況CAR-T細胞治療研究進展7義翹神州CAR-T細胞治療研究進展doi:10.1186/s13045-023-01492-8.研發(fā)布局情況國內(nèi)實體瘤靶點臨床階段CAR-T產(chǎn)品8義翹神州CAR-T細胞治療研究進展企業(yè)候選管線靶點適應癥臨床進展科濟藥業(yè)CT041Claudin18.2胃癌/食管胃結合部腺癌2/3期CT011GPC3肝細胞癌1期原啟生物Ori-C101GPC3肝細胞癌1期博生吉TAA06B7-H3神經(jīng)母細胞瘤1期重慶精準C-4-29CD70腎細胞癌1期斯丹賽GCC19CART鳥苷酸環(huán)化酶2C結直腸癌1期（美）重慶精準C-13-60CEA結直腸癌、胃癌和食管癌IND通過藍盾生物LD013間皮素卵巢癌IND通過拓新天成TX103（未公開）泛癌種實體瘤IND通過傳奇生物LB2102DLL3小細胞肺癌IND通過（美）科棋藥業(yè)KQ-L6（未公開）TM4SF1表達陽性的復發(fā)/難治性晚期實體瘤22.9申報IND凱地醫(yī)療KD-025MLG3DL肝癌、直結腸癌、膠質(zhì)癌等實體癌22.12申報IND上海細胞治療集團--間皮素惡性間皮瘤22.12申報IND易慕峰IMC002Claudin18.2晚期消化系統(tǒng)腫瘤23.1申報IND目錄CAR-T細胞治療研究進展1綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案3CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)2義翹神州910義翹神州CAR-T療法的局限性CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)doi:10.1002/cam4.5551.Epub2022Dec30.11義翹神州doi:10.1038/s41408-021-00469-5.CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)CAR結構的更新迭代12義翹神州doi:10.1186/s40364-022-00417-w.CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)CAR的可優(yōu)化結構胞外結構胞內(nèi)結構13CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)義翹神州自體CAR-T商業(yè)化中面臨的挑戰(zhàn)個性化定制導致制備和檢測的周期長，無法立即進行治療患者T細胞質(zhì)量不同，制備失敗的風險很大，批間差異和質(zhì)控難度也增加難以大批量制備所需細胞費用高昂，產(chǎn)能利用率和病毒載體安全性以及有效性問題doi:10.1016/j.jconrel.2019.12.047.14義翹神州通用型CAR-T的研究從健康志愿者獲取T細胞并進行基因編輯敲除相關基因以及轉(zhuǎn)入CAR基因后制成的CAR-T細胞，最主要的優(yōu)勢在于不需要從患者體內(nèi)獲取T細胞進行定制，而是可以做到現(xiàn)貨供應，可立即用于臨床治療并方便開展多次回輸，節(jié)約時間和治療花費。doi:10.3389/fimmu.2021.640082CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)15義翹神州

doi:10.3389/fimmu.2021.640082異體移植細胞攻擊宿主細胞引發(fā)移植物抗宿主?。℅vHD）：敲掉TCR的α或β一條鏈的恒定結構域，消除TCR來避免GVHD宿主抗移植物反應（HVG）阻礙異體細胞在體內(nèi)擴增，療效較差：敲除β2-微球蛋白，阻止HLA-I表達，可以阻止宿主T細胞將治療用CRA-T細胞識別為外來細胞，以此來避免免疫排斥反應基因編輯安全性檢測的手段：雜質(zhì)殘留，編輯效率提升、脫靶情況預測分析通用型CAR-T的限制CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)16義翹神州CAR-T的發(fā)展方向預期發(fā)現(xiàn)新靶點，或者使用雙靶點：血液疾病、實體瘤等優(yōu)化CAR結構，增加CAR-T細胞的存活時間，提高CAR-T細胞療效，降低回輸后的不良反應阻斷免疫檢查點、共表達增強細胞功能的細胞因子使用多種來源的細胞制備通用型CAR-T細胞：健康供者、iPSC誘導等溶瘤病毒、RNA疫苗其他免疫細胞等聯(lián)合使用目錄CAR-T細胞治療研究進展1綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案3CAR-T細胞療法的機遇與挑戰(zhàn)2義翹神州17助力CAR-T開發(fā)全流程CAR開發(fā)scFv/VHH開發(fā)抗體人源化高通量抗體生產(chǎn)檢測用細胞株構建T細胞激活CD3抗體CD28抗體慢病毒包裝293培養(yǎng)基及補料液核酸酶核酸酶殘留檢測試劑盒細胞庫檢測CAR-T細胞制備擴增GMP級細胞因子細胞凋亡檢測試劑盒流式抗體靶點蛋白細胞因子ELISA試劑盒18綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案義翹神州CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增雜交瘤技術平臺噬菌體展示技術平臺單B細胞技術平臺19義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案20抗體人源化義翹神州鼠源VHH人-鼠嵌合抗體VHH-Fc人源化抗體高親和力抗體人源化親和力成熟抗體人源化服務流程：抗體序列CDR確認抗體建模摸索人源抗體模板關鍵氨基酸確認CDR移植抗體建模比對回復突變抗體表達親和力檢測綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增SPR是制藥行業(yè)的“金標準”，被收錄進《2020版中國藥典》BLI是全球增長最快的非標記（label-free）檢測技術scFv親和力檢測21義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增EffectofhumanCD28antibodyonstimulatingIL-2secretionofCD4Tcellsco-activatedwithCD3antibody.

AntiCD28antibody：GMP-11524-H001

EffectofHumanCD3antibodyontheproliferationandIFN-gammasecretionofCD4+Tcell.

AntiCD3antibody：GMP-10977-H00122T細胞激活抗體產(chǎn)品信息靶點貨號純度（SEC-HPLC）內(nèi)毒素含量（EU/mg）HumanCD3(humanizedOKT3)GMP-10977-H001>95%<0.5HumanCD28GMP-11524-H001>95%<0.5義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增慢病毒包裝是CAR-T制備過程中的關鍵環(huán)節(jié)慢病毒滴度是決定CAR轉(zhuǎn)染陽性率的關鍵因素慢病毒懸浮包裝培養(yǎng)系統(tǒng)組成：培養(yǎng)基：無血清懸浮培養(yǎng)基（Cat：M293TII，M293CD1）轉(zhuǎn)染試劑：陽離子聚合物（Cat：STF02）補料液：培養(yǎng)基添加液（Cat：M293-SUPI）23義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案241.3.2工藝相關雜質(zhì)生產(chǎn)若使用了腫瘤細胞系（如Hela細胞）、致瘤細胞系，或攜帶有致癌基因、病毒來源序列的細胞（如HEK293T細胞），在確保無完整活細胞殘留的同時，需對DNA的殘留量和殘留片段大小進行控制，合理擬定標準限度。如有可能，建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi)，DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。慢病毒包裝過程中核酸殘留去除至關重要義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增非限制核酸酶DNA/RNA超高的活性應用場景廣泛使用量低，不易殘留慢病毒下游工藝微濾澄清0.45μm核酸酶處理超濾濃縮精純層析超濾濃縮除菌0.22μmGMP級核酸酶（cat：GMP-SSNP01）25義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增中文名稱全能核酸酶貨號GMP-SSNP01CASNo.9025-65-4DMF

NO.35798提供劑型液體（甘油）/液體（無甘油）提供規(guī)格50kU/500kU/5000kU儲存條件-20℃--80℃成分2kU/μl工程細胞Escherichiacoli(E.coli)存儲液配方20mMTris,20mMNaCl,2mmMgCl2pH:8.0酶單位在標準反應體系內(nèi)30分鐘內(nèi)使OD260改變1.0的酶量核酸酶推薦使用條件核酸酶產(chǎn)品信息26義翹神州ConditionOptimal*Effective**Mg2+1-2mM1-10mMpH8.0-9.55.5-9.5Temperature37℃0-50℃Dithiothreitol(DTT)0-200mM>200mMMonovalentcation0-100mM0-400mMConcentration(Na+,etc.)PO43-0mM0-50mMTween200-0.8%0.80%Brij350-0.8%>0.8%綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增不同品牌核酸酶ELISA試劑盒檢測SuperNuclease含量不同品牌核酸酶ELISA試劑盒變性前后Benzonase?endonuclease核酸酶含量穩(wěn)定性準確性專屬性KIT-SSNP01

測定范圍46.87-3000pg/mL

準確性標準品回收率：80%-120%

精密度CV(<15%)

靈敏度11.72pg/mL可以準確檢測出：Supernuclease核酸酶Benzonase?

核酸酶核酸酶殘留檢測試劑盒27義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增生物安全細胞庫檢測28義翹神州1.2生產(chǎn)輔助細胞根據(jù)用途或功能，生產(chǎn)輔助細胞可能為病毒包裝細胞、滋養(yǎng)細胞（Feeder

cells）等，生產(chǎn)輔助細胞，應符合來源和培養(yǎng)傳代歷史清除、安全性風險可控、進行細胞庫分級管理（如適用）、檢驗結果合格的基因原則。綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增29義翹神州國內(nèi)外對于細胞治療藥物中關鍵原材料的選擇有明確法規(guī)要求藥品級＞GMP級＞RUO級國內(nèi)/外法規(guī)名稱國內(nèi)《細胞治療產(chǎn)品研究與評價指導原則（試行）》-2017年《生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制》--中國藥典三部-2020年《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范-細胞治療產(chǎn)品附錄》-2022年《免疫細胞治療產(chǎn)品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》-2022年國外USP<92>用于細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)的生長因子和細胞因子USP<1043>用于細胞、基因與組織工程產(chǎn)品的輔助材料/指導性通則EP5.2.12用于細胞和基因治療藥物產(chǎn)品生產(chǎn)的生物來源的原料ISO/TS20399-1:2018生物技術-細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的輔料綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增質(zhì)量保證管理體系人員及培訓管理體系廠房設施、設備管理體系原材料及供應商管理體系文件和記錄管理體系所有文件和記錄均經(jīng)過QA審核或批準GMP級質(zhì)量管理體系符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》體系符合ISO9001:2015和ISO13485:2016體系FDADMF備案質(zhì)量控制體系符合《中國藥典》2020年版三部通則符合USP<1043>AncillaryMaterialsForCell,Gene,andTissue-engineeredProducts產(chǎn)品安全性檢測體系細菌內(nèi)毒素＜5-10EU/mg宿主蛋白殘留檢測＜0.5μg/mg（500ppm）宿主DNA殘留檢測＜100pg/mg支原體檢測無菌檢測外源病毒檢測異常毒性檢測30文件齊全更規(guī)范更安全更穩(wěn)定義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案提供配套的產(chǎn)品手冊制劑形式：液體有效期原材料分類說明產(chǎn)品原產(chǎn)地說明TSE/BSE聲明穩(wěn)定性數(shù)據(jù)營業(yè)執(zhí)照質(zhì)量管理體系認證證書產(chǎn)品質(zhì)量標準產(chǎn)品檢驗報告書REACH聲明MSDS…31申報無憂！義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案32更規(guī)范更安全更穩(wěn)定文件齊全義翹神州提供高品質(zhì)的GMP級細胞因子靶點貨號內(nèi)毒素支原體檢測無菌檢測宿主DNA殘留IL-2GMP-11848-HNAE<0.005EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-7GMP-11821-HNAE<0.01EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-15GMP-10360-HNAE<0.01EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-21GMP-10584-HNAE<0.005EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mg義翹神州活細胞比例細胞群或亞群比例目的細胞比例CAR-T細胞陽性率檢測JurkatHela33細胞凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品列表產(chǎn)品名稱貨號AnnexinV-FITC/7-ADD凋亡檢測試劑盒APK10448-FAnnexinV-PE/7-ADD凋亡檢測試劑盒APK10448-P與國外品牌對比，準確區(qū)分凋亡早、晚期細胞義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增活細胞比例細胞群或亞群比例目的細胞比例使用CD4抗體（Cat：10400-MM08F）和CD8抗體（Cat：10980-MM28-F）通過流式細胞術檢測人外周血淋巴細胞表面CD4和CD8分子的表達。流式抗體檢測CAR-T細胞群及亞群比例34義翹神州綜合性CAR-T細胞療法開發(fā)解決方案CAR-T細胞陽性率檢測CAR開發(fā)T細胞分離、活化慢病毒包裝CAR-T細胞制備、擴增活細胞比例細胞群或亞群比例目的細胞比例靶蛋白預標記熒光素基團簡化檢測流程，節(jié)約時間減少非特異熒光標記蛋白01分子量小，幾乎不影響蛋白活性鏈霉親和素-生物素高特異結合高親和力、高靈敏度生物素標記蛋白02可用熒光標記二抗進行檢測具有高靈敏度可能會引起非特異非標記蛋白03CA