《2.2.2 動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體》講義案

學(xué)而優(yōu)·教有方PAGE試卷第=1頁，共=sectionpages33頁P(yáng)AGE12.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體目標(biāo)導(dǎo)航目標(biāo)導(dǎo)航課程標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)解讀動(dòng)物細(xì)胞工程包括細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、細(xì)胞融合和干細(xì)胞的應(yīng)用等技術(shù)。闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物體獲得相關(guān)組織，分散成單個(gè)細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長和增殖的過程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的過程。闡明動(dòng)物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合成一個(gè)細(xì)胞的過程。概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件和過程。簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體的過程，認(rèn)同單克隆抗體在臨床上有重要的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過程和該技術(shù)的應(yīng)用前景。課前預(yù)習(xí)課前預(yù)習(xí)一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1．概念：使細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。2．誘導(dǎo)原理和結(jié)果(1)誘導(dǎo)原理：。(2)誘導(dǎo)結(jié)果：形成細(xì)胞。3．誘導(dǎo)方法：法、電融合法和法等。4．意義：突破了的局限，使成為可能。5．動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用(1)成為研究、、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制備。教材中的隱性知識(shí)源于選擇性必修3P48“相關(guān)信息”：(1)滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去，但并不破壞病原體的。(2)滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合與病毒和細(xì)胞所含的糖蛋白有關(guān)。二、單克隆抗體1．制備原理(1)B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：一種B淋巴細(xì)胞分泌一種抗體。(2)骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)：能在體外大量。(3)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能又能產(chǎn)生大量。2．制備過程（如圖）3．單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)能準(zhǔn)確地識(shí)別，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以。4．單克隆抗體的應(yīng)用(1)作為，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。(2)用于和。易錯(cuò)易混辨析：(1)植物原生質(zhì)體融合與動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是相同的()(2)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，更容易控制培養(yǎng)條件()(3)制備單克隆抗體時(shí)，要選用已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞()(4)滅活的病毒能促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞融合，但不能促進(jìn)植物細(xì)胞融合()(5)相比植物體細(xì)胞雜交，動(dòng)物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)方式是用滅活的病毒處理()(6)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，是為了獲得能產(chǎn)生單克隆抗體的胚胎()(7)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體()一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1．兩個(gè)或多個(gè)2.（1）細(xì)胞膜的流動(dòng)性（2）雜交3.PEG融合滅活病毒誘導(dǎo)4.有性雜交遠(yuǎn)緣雜交5.（1）細(xì)胞遺傳細(xì)胞免疫（2）單克隆抗體教材中的隱性知識(shí)感染能力抗原結(jié)構(gòu)糖蛋白二、單克隆抗體1．（1）特異性(2)增殖（3）大量增殖特定抗體2.雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體3．抗原的細(xì)微差異大量制備4.（1）診斷試劑（2）治療疾病運(yùn)載藥物易錯(cuò)易混辨析：√√√√√×√知識(shí)講解知識(shí)講解知識(shí)點(diǎn)一動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1．動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)：是使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。細(xì)胞融合的實(shí)質(zhì)是核融合。2．原理：動(dòng)物細(xì)胞融合的基本原理為細(xì)胞膜的流動(dòng)性。3．誘導(dǎo)融合的方法(1)化學(xué)方法：PEG融合法。(2)物理方法：電融合法。(3)生物方法：滅活病毒誘導(dǎo)法。4．過程：具有不同遺傳信息的兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞雜交。5．結(jié)果：形成單核雜交細(xì)胞，具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息，可表現(xiàn)出兩個(gè)或多個(gè)親本的特點(diǎn)。6．意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。這一技術(shù)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。如利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)而發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。知識(shí)點(diǎn)二單克隆抗體及其應(yīng)用1．傳統(tǒng)抗體的獲得(1)方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后從動(dòng)物血清中分離所需抗體。(2)缺陷：制備的抗體產(chǎn)量低、純度低以及特異性差。2．單克隆抗體的制備：單克隆抗體是由單一雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度專一的抗體。(1)制備原理①B淋巴細(xì)胞的特點(diǎn)：每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，B淋巴細(xì)胞在體外不能無限增殖。②骨髓瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：在體外能大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體。③雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。(2)制備過程①制備產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞：用特定的抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫處理，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。②培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞。③將小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與從脾中得到的B淋巴細(xì)胞融合。④用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選：在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有雜交瘤細(xì)胞才能生長。⑤克隆化培養(yǎng)和抗體檢測：對(duì)上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。⑥將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。⑦提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體。(3)比較制備單克隆抗體過程中的兩次篩選項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有未融合的細(xì)胞從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細(xì)胞有很多種，形成的雜交瘤細(xì)胞也有很多種篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長用多孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群篩選目的得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞(4)優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備。(5)單克隆抗體的應(yīng)用①作為診斷試劑：它在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮著重要的作用：具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)②用于治療疾病和運(yùn)載藥物：單獨(dú)使用時(shí)可直接用于癌癥和其他疾病的治療；抗體——藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。課后拓展課后拓展拓展動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指在一定的條件下將兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞融合為一個(gè)細(xì)胞的過程，融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動(dòng)，電刺激）。某些病毒如：仙臺(tái)病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白，可介導(dǎo)病毒同宿主細(xì)胞融合，也可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞的融合，因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合。化學(xué)和物理方法可造成膜脂分子排列的改變，去掉作用因素之后，質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)，在恢復(fù)過程中便可誘導(dǎo)相接觸的細(xì)胞發(fā)生融合。動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途是制備單克隆抗體。單克隆抗體的制備單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。在制備單抗過程中，要進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的篩選。在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細(xì)胞，只有少數(shù)是分泌特異性單克隆抗體的細(xì)胞。因此，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后，再及時(shí)進(jìn)行凍存。單克隆抗體的大量制備主要采用體外培養(yǎng)法和動(dòng)物體內(nèi)誘生法。克隆化的細(xì)胞在體外進(jìn)行大量培養(yǎng)，離心去除細(xì)胞及其碎片，收集上清液，而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細(xì)胞濃度，且每天要換培養(yǎng)液。而體內(nèi)雜交瘤細(xì)胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細(xì)胞具有從親代淋巴細(xì)胞得來的腫瘤細(xì)胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠（無胸腺的裸鼠），雜交瘤細(xì)胞就開始無限地繁殖，直至宿主死亡。約1-2周，可見產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的小鼠腹部膨大，用注射器抽取腹水，即可獲得大量的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體。背誦筆記背誦筆記筆記一：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。2.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。3.誘導(dǎo)融合方法：PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法。4.動(dòng)物細(xì)胞融合的過程包括細(xì)胞膜融合、細(xì)胞質(zhì)融合和細(xì)胞核融合。其中細(xì)胞膜融合是細(xì)胞融合的先導(dǎo)，在細(xì)胞膜融合中體現(xiàn)出細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，細(xì)胞融合的實(shí)質(zhì)是核融合。動(dòng)物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞核融合為一個(gè)細(xì)胞核。如下圖(以滅活的病毒誘導(dǎo)為例)：5.意義：突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。6.應(yīng)用：(1)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制備單克隆抗體。7.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較：比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的增殖融合前處理先除去細(xì)胞壁先使細(xì)胞分散開使用的酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶誘導(dǎo)手段物理法：電融合法、離心法化學(xué)法：PEG融合法除物理法和化學(xué)法外，也可用滅活的病毒誘導(dǎo)過程結(jié)果雜種植株雜交細(xì)胞應(yīng)用培育植物新品種主要用于制備單克隆抗體意義克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，打破了生殖隔離，擴(kuò)展了雜交的親本組合筆記二：單克隆抗體及其應(yīng)用1.傳統(tǒng)抗體的獲得：（1）方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后從動(dòng)物血清中分離所需抗體。（2）缺陷：產(chǎn)量低、純度低、特異性差。2.單克隆抗體的制備原理：(1)B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：一種B淋巴細(xì)胞分泌一種特異性抗體。(2)骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)：能在體外大量增殖。(3)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能無限增殖又能產(chǎn)生大量特定抗體。3.單克隆抗體的制備過程：4.單克隆抗體制備過程中的兩次篩選的比較：項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有未融合的細(xì)胞從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細(xì)胞有很多種，形成的雜交瘤細(xì)胞也有很多種篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群篩選目的得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞5.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：（1）能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異；（2）與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合；（3）可以大量制備。6.單克隆抗體的應(yīng)用：(1)作為診斷試劑，如定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾??；（2）運(yùn)載藥物，如ADC；（3）治療疾病。課后自測課后自測1．甲型流感病毒核蛋白單克隆抗體可有效治療甲流。下列關(guān)于其制備過程的敘述，正確的是（

）A．用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)甲型流感病毒，以獲得充足的抗原B．制備過程需要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)C．用特定的選擇培養(yǎng)基篩選的雜交瘤細(xì)胞可生產(chǎn)所需單克隆抗體D．體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞需定期使用胰蛋白酶處理，使其分散開來2．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)及意義的敘述，不正確的是（

）A．可以利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)生產(chǎn)細(xì)胞因子B．動(dòng)物細(xì)胞融合可打破生殖隔離獲得新物種C．細(xì)胞融合過程與細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)直接相關(guān)D．動(dòng)物細(xì)胞融合為制備單克隆抗體開辟了新途徑3．動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是（）A．細(xì)胞和組織培養(yǎng)B．細(xì)胞融合C．單克隆抗體D．核移植4．使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺死腫瘤細(xì)胞，但細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害。構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）能對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行選擇性殺傷，ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機(jī)制如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物的抗體是特異性強(qiáng)、靈敏性高的單克隆抗體B．制備該抗體需要利用動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)手段C．ADC通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞，該過程不需要細(xì)胞膜上載體蛋白的協(xié)助，也不消耗能量D．藥物在癌細(xì)胞內(nèi)釋放并起作用，同時(shí)誘導(dǎo)溶酶體破裂，加速了癌細(xì)胞的凋亡5．抗PD-L1單克隆抗體能與癌細(xì)胞表面的PD-L1特異性結(jié)合，因而具有治療某些癌癥的作用。如圖是制備抗PD-L1單克隆抗體的示意圖，圖中有兩次篩選。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．圖中第一次篩選所用培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基B．圖中第二次篩選的目的是獲得產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞C．圖中細(xì)胞集落b～d，既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗PD-L1抗體D．圖中加入的H物質(zhì)，應(yīng)該是取自癌細(xì)胞表面的PD-L1抗原6．如圖是抗HCG（人絨毛膜促性腺激素）單克隆抗體制備流程圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．①過程中常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒和電激等B．②過程中篩選出的雜交瘤細(xì)胞不一定能產(chǎn)生抗HCG抗體C．③過程中利用了DNA分子雜交的原理D．④過程培養(yǎng)液中所需氣體主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH7．科研工作者常常將單克隆抗體與細(xì)胞毒素類藥物偶聯(lián)起來，制成的“生物導(dǎo)彈”，來定向治療癌癥并降低藥物的副作用，其過程如圖所示。下列有關(guān)敘述不正確的是（

）

A．經(jīng)①形成的細(xì)胞都能無限增殖并產(chǎn)生相應(yīng)抗體B．②過程需要篩選并克隆單個(gè)雜交瘤細(xì)胞C．未與單克隆抗體偶聯(lián)的細(xì)胞毒素等藥物沒有選擇殺傷癌細(xì)胞的功能D．抗癌細(xì)胞的單克隆抗體的靶向作用使③過程具有高度特異性8．阿霉素是一種抗腫瘤藥物，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)機(jī)體其他細(xì)胞造成傷害，將阿霉素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的抗體利用接頭連接制成抗體——藥物偶聯(lián)物（ADC）。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．阿霉素有副作用，正常情況下不能大量、長期使用B．ADC中的特異性抗體是殺死腫瘤細(xì)胞的有效成分C．接頭既要保持穩(wěn)定，又不能影響抗體與阿霉素的功能D．利用同位素標(biāo)記的特異性抗體，可用于定位診斷腫瘤9．下圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質(zhì)和A細(xì)胞的名稱分別為（

）A．抗體、T淋巴細(xì)胞 B．抗原、T淋巴細(xì)胞C．抗體、B淋巴細(xì)胞 D．抗原、B淋巴細(xì)胞10．下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述正確的是（）A．在植物細(xì)胞工程中通常用Ca2＋處理植物細(xì)胞，以增大細(xì)胞壁的通透性B．用以治療癌癥的“生物導(dǎo)彈”就是以單克隆抗體作抗癌藥物定向殺死癌細(xì)胞C．誘導(dǎo)兩種植物細(xì)胞的原生質(zhì)體融合，所獲得的融合細(xì)胞都具有雙親的遺傳特性D．單克隆抗體雖特異性強(qiáng)，但也不能與位于靶細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合11．細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是具有一定的流動(dòng)性，下列實(shí)例不能反映該特點(diǎn)的是（）A．人的B淋巴細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞的融合B．吞噬細(xì)胞吞噬病菌C．核糖體合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核D．變形蟲伸出偽足12．某同學(xué)在學(xué)習(xí)“細(xì)胞工程”時(shí)，列表比較了動(dòng)植物細(xì)胞工程的有關(guān)內(nèi)容，你認(rèn)為有幾處是不正確的（）

植物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和單克隆抗體的制備特殊處理機(jī)械法去除細(xì)胞壁胰蛋白酶處理，制成細(xì)胞懸液融合方法物理方法、化學(xué)方法物理方法、化學(xué)方法、生物方法典型應(yīng)用人工種子、雜種植株單克隆抗體的制備培養(yǎng)液區(qū)別生長素和細(xì)胞分裂素影響脫分化和再分化動(dòng)物血清（血漿）不可缺少A．1 B．2 C．3 D．413．制備單克隆抗體時(shí)需要經(jīng)過兩次篩選，第一次篩選需要用HAT培養(yǎng)基，已知哺乳動(dòng)物細(xì)胞可通過D途徑和S途徑合成DNA，而小鼠的骨髓瘤細(xì)胞只能通過D途徑合成DNA．其中進(jìn)行D途徑合成時(shí)葉酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑。第二次篩選需要用96孔培養(yǎng)板進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．HAT培養(yǎng)基中要加入葉酸從而把雜交瘤細(xì)胞篩選出來B．在HAT培養(yǎng)基中雜交瘤細(xì)胞可通過D途徑和S途徑合成DNA因此可以大量增殖C．用96孔培養(yǎng)板克隆化培養(yǎng)時(shí)要用培養(yǎng)液對(duì)第一次篩選所得的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行充分稀釋以保證分配到每個(gè)孔中的細(xì)胞數(shù)不超過1個(gè)D．克隆化培養(yǎng)后需要向每個(gè)孔中加入相應(yīng)抗體從而進(jìn)行抗體檢測，呈陽性反應(yīng)的孔中的細(xì)胞即為能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞14．除雜交瘤單克隆技術(shù)之外，制備單克隆抗體的常用方法還包括單個(gè)B細(xì)胞抗體技術(shù)，可通過下圖所示的技術(shù)流程制備抗體用于治療人類疾病。下列說法錯(cuò)誤的是（

）

A．上述技術(shù)可一定程度避免機(jī)體對(duì)傳統(tǒng)鼠源單克隆抗體的免疫反應(yīng)B．選用單個(gè)B淋巴細(xì)胞是為了最終獲得純度較高的抗體C．應(yīng)在95%空氣加5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)D．將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞前需要用鈣離子處理受體細(xì)胞15．精準(zhǔn)爆破腫瘤細(xì)胞的“生物導(dǎo)彈”——ADC（抗體偶聯(lián)藥物）能對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行選擇性殺傷，該物質(zhì)由抗體（導(dǎo)彈體）、藥物（核彈頭）和接頭三部分組成，ADC的作用機(jī)制如圖。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．ADC的制備過程運(yùn)用了細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合技術(shù)B．制備ADC中的抗體需要經(jīng)過兩次篩選C．ADC能精準(zhǔn)地識(shí)別腫瘤細(xì)胞，進(jìn)入癌細(xì)胞需要消耗ATPD．癌細(xì)胞的凋亡是由于溶酶體中水解酶的水解作用16．動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)就是。17．用作診斷試劑的原理：。18．動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)就是使或動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的具有原來或細(xì)胞的。19．動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用（1）細(xì)胞融合技術(shù)成為研究、、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。（2）利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來的，為制備開辟了新途徑。20．單克隆抗體制備過程中，第二次篩選的目的是，方法是。

2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體目標(biāo)導(dǎo)航目標(biāo)導(dǎo)航課程標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)解讀動(dòng)物細(xì)胞工程包括細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、細(xì)胞融合和干細(xì)胞的應(yīng)用等技術(shù)。闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物體獲得相關(guān)組織，分散成單個(gè)細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長和增殖的過程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的過程。闡明動(dòng)物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合成一個(gè)細(xì)胞的過程。概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件和過程。簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體的過程，認(rèn)同單克隆抗體在臨床上有重要的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過程和該技術(shù)的應(yīng)用前景。課前預(yù)習(xí)課前預(yù)習(xí)一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1．概念：使細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。2．誘導(dǎo)原理和結(jié)果(1)誘導(dǎo)原理：。(2)誘導(dǎo)結(jié)果：形成細(xì)胞。3．誘導(dǎo)方法：法、電融合法和法等。4．意義：突破了的局限，使成為可能。5．動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用(1)成為研究、、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制備。教材中的隱性知識(shí)源于選擇性必修3P48“相關(guān)信息”：(1)滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去，但并不破壞病原體的。(2)滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合與病毒和細(xì)胞所含的糖蛋白有關(guān)。二、單克隆抗體1．制備原理(1)B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：一種B淋巴細(xì)胞分泌一種抗體。(2)骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)：能在體外大量。(3)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能又能產(chǎn)生大量。2．制備過程（如圖）3．單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)能準(zhǔn)確地識(shí)別，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以。4．單克隆抗體的應(yīng)用(1)作為，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。(2)用于和。易錯(cuò)易混辨析：(1)植物原生質(zhì)體融合與動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是相同的()(2)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，更容易控制培養(yǎng)條件()(3)制備單克隆抗體時(shí)，要選用已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞()(4)滅活的病毒能促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞融合，但不能促進(jìn)植物細(xì)胞融合()(5)相比植物體細(xì)胞雜交，動(dòng)物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)方式是用滅活的病毒處理()(6)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，是為了獲得能產(chǎn)生單克隆抗體的胚胎()(7)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體()一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1．兩個(gè)或多個(gè)2.（1）細(xì)胞膜的流動(dòng)性（2）雜交3.PEG融合滅活病毒誘導(dǎo)4.有性雜交遠(yuǎn)緣雜交5.（1）細(xì)胞遺傳細(xì)胞免疫（2）單克隆抗體教材中的隱性知識(shí)感染能力抗原結(jié)構(gòu)糖蛋白二、單克隆抗體1．（1）特異性(2)增殖（3）大量增殖特定抗體2.雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體3．抗原的細(xì)微差異大量制備4.（1）診斷試劑（2）治療疾病運(yùn)載藥物易錯(cuò)易混辨析：√√√√√×√知識(shí)講解知識(shí)講解知識(shí)點(diǎn)一動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1．動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)：是使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。細(xì)胞融合的實(shí)質(zhì)是核融合。2．原理：動(dòng)物細(xì)胞融合的基本原理為細(xì)胞膜的流動(dòng)性。3．誘導(dǎo)融合的方法(1)化學(xué)方法：PEG融合法。(2)物理方法：電融合法。(3)生物方法：滅活病毒誘導(dǎo)法。4．過程：具有不同遺傳信息的兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞雜交。5．結(jié)果：形成單核雜交細(xì)胞，具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息，可表現(xiàn)出兩個(gè)或多個(gè)親本的特點(diǎn)。6．意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。這一技術(shù)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。如利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)而發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。知識(shí)點(diǎn)二單克隆抗體及其應(yīng)用1．傳統(tǒng)抗體的獲得(1)方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后從動(dòng)物血清中分離所需抗體。(2)缺陷：制備的抗體產(chǎn)量低、純度低以及特異性差。2．單克隆抗體的制備：單克隆抗體是由單一雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度專一的抗體。(1)制備原理①B淋巴細(xì)胞的特點(diǎn)：每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，B淋巴細(xì)胞在體外不能無限增殖。②骨髓瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：在體外能大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體。③雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。(2)制備過程①制備產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞：用特定的抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫處理，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。②培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞。③將小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與從脾中得到的B淋巴細(xì)胞融合。④用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選：在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有雜交瘤細(xì)胞才能生長。⑤克隆化培養(yǎng)和抗體檢測：對(duì)上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。⑥將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。⑦提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體。(3)比較制備單克隆抗體過程中的兩次篩選項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有未融合的細(xì)胞從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細(xì)胞有很多種，形成的雜交瘤細(xì)胞也有很多種篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長用多孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群篩選目的得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞(4)優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備。(5)單克隆抗體的應(yīng)用①作為診斷試劑：它在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮著重要的作用：具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)②用于治療疾病和運(yùn)載藥物：單獨(dú)使用時(shí)可直接用于癌癥和其他疾病的治療；抗體——藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。課后拓展課后拓展拓展動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指在一定的條件下將兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞融合為一個(gè)細(xì)胞的過程，融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動(dòng)，電刺激）。某些病毒如：仙臺(tái)病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白，可介導(dǎo)病毒同宿主細(xì)胞融合，也可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞的融合，因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合?；瘜W(xué)和物理方法可造成膜脂分子排列的改變，去掉作用因素之后，質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)，在恢復(fù)過程中便可誘導(dǎo)相接觸的細(xì)胞發(fā)生融合。動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途是制備單克隆抗體。單克隆抗體的制備單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。在制備單抗過程中，要進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的篩選。在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細(xì)胞，只有少數(shù)是分泌特異性單克隆抗體的細(xì)胞。因此，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后，再及時(shí)進(jìn)行凍存。單克隆抗體的大量制備主要采用體外培養(yǎng)法和動(dòng)物體內(nèi)誘生法?？寺』募?xì)胞在體外進(jìn)行大量培養(yǎng)，離心去除細(xì)胞及其碎片，收集上清液，而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細(xì)胞濃度，且每天要換培養(yǎng)液。背誦筆記而體內(nèi)雜交瘤細(xì)胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細(xì)胞具有從親代淋巴細(xì)胞得來的腫瘤細(xì)胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠（無胸腺的裸鼠），雜交瘤細(xì)胞就開始無限地繁殖，直至宿主死亡。約1-2周，可見產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的小鼠腹部膨大，用注射器抽取腹水，即可獲得大量的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體。背誦筆記筆記一：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。2.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。3.誘導(dǎo)融合方法：PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法。4.動(dòng)物細(xì)胞融合的過程包括細(xì)胞膜融合、細(xì)胞質(zhì)融合和細(xì)胞核融合。其中細(xì)胞膜融合是細(xì)胞融合的先導(dǎo)，在細(xì)胞膜融合中體現(xiàn)出細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，細(xì)胞融合的實(shí)質(zhì)是核融合。動(dòng)物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞核融合為一個(gè)細(xì)胞核。如下圖(以滅活的病毒誘導(dǎo)為例)：5.意義：突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。6.應(yīng)用：(1)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制備單克隆抗體。7.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較：比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的增殖融合前處理先除去細(xì)胞壁先使細(xì)胞分散開使用的酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶誘導(dǎo)手段物理法：電融合法、離心法化學(xué)法：PEG融合法除物理法和化學(xué)法外，也可用滅活的病毒誘導(dǎo)過程結(jié)果雜種植株雜交細(xì)胞應(yīng)用培育植物新品種主要用于制備單克隆抗體意義克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，打破了生殖隔離，擴(kuò)展了雜交的親本組合筆記二：單克隆抗體及其應(yīng)用1.傳統(tǒng)抗體的獲得：（1）方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后從動(dòng)物血清中分離所需抗體。（2）缺陷：產(chǎn)量低、純度低、特異性差。2.單克隆抗體的制備原理：(1)B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：一種B淋巴細(xì)胞分泌一種特異性抗體。(2)骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)：能在體外大量增殖。(3)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能無限增殖又能產(chǎn)生大量特定抗體。3.單克隆抗體的制備過程：4.單克隆抗體制備過程中的兩次篩選的比較：項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有未融合的細(xì)胞從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細(xì)胞有很多種，形成的雜交瘤細(xì)胞也有很多種篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群篩選目的得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞5.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：（1）能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異；（2）與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合；（3）可以大量制備。6.單克隆抗體的應(yīng)用：(1)作為診斷試劑，如定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾??；（2）運(yùn)載藥物，如ADC；（3）治療疾病。課后自測課后自測1．甲型流感病毒核蛋白單克隆抗體可有效治療甲流。下列關(guān)于其制備過程的敘述，正確的是（

）A．用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)甲型流感病毒，以獲得充足的抗原B．制備過程需要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)C．用特定的選擇培養(yǎng)基篩選的雜交瘤細(xì)胞可生產(chǎn)所需單克隆抗體D．體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞需定期使用胰蛋白酶處理，使其分散開來【答案】B【分析】單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞；利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，得到雜交瘤細(xì)胞；再進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，多次篩選后得到足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞；最后將所需的雜交瘤細(xì)胞在體外或小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取單克隆抗體?！驹斀狻緼、甲型H1N1流感病毒無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，必須寄生在活細(xì)胞內(nèi)才能生存，在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中無法培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；B、單克隆抗體的制備過程包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物融合技術(shù)，B正確；C、用特定的選擇培養(yǎng)基篩選得到雜交瘤細(xì)胞后，還要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)才能生產(chǎn)所需的單克隆抗體，C錯(cuò)誤；D、雜交瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，無接觸抑制現(xiàn)象，不需要用胰蛋白酶處理，D錯(cuò)誤。故選B。2．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)及意義的敘述，不正確的是（

）A．可以利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)生產(chǎn)細(xì)胞因子B．動(dòng)物細(xì)胞融合可打破生殖隔離獲得新物種C．細(xì)胞融合過程與細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)直接相關(guān)D．動(dòng)物細(xì)胞融合為制備單克隆抗體開辟了新途徑【答案】B【分析】動(dòng)物細(xì)胞融合是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并成為一個(gè)細(xì)胞的過程。動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性。動(dòng)物細(xì)胞融合的方法：物理法（離心、振動(dòng)、電刺激等）、化學(xué)法（聚乙二醇（PEG））以及生物法（滅活病毒等）?！驹斀狻緼、細(xì)胞因子由T細(xì)胞產(chǎn)生，可以利用T細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)細(xì)胞因子，A正確；B、動(dòng)物細(xì)胞融合可以突破有性雜交的局限，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交，但無法獲得新物種，B錯(cuò)誤；C、細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是細(xì)胞膜具有流動(dòng)性，動(dòng)物細(xì)胞融合過程與細(xì)胞膜的流動(dòng)性直接相關(guān)，C正確；D、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)為制備單克隆抗體提供了新思路，開辟了新途徑，D正確。故選B。3．動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是（）A．細(xì)胞和組織培養(yǎng)B．細(xì)胞融合C．單克隆抗體D．核移植【答案】A【分析】1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。2、細(xì)胞融合是兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程，也稱細(xì)胞雜交。3、單克隆抗體制備過程：用抗原刺激小鼠使之產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，從小鼠體內(nèi)提取B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，再篩選合適的雜交瘤細(xì)胞,進(jìn)行相應(yīng)的克隆,對(duì)單克隆抗體進(jìn)行大量的制備。4、動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物。5、動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、核移植等，其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。【詳解】A、細(xì)胞和組織培養(yǎng)是動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)，A正確；B、動(dòng)物細(xì)胞融合是動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段，但不是動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)，B錯(cuò)誤；C、單克隆抗體是動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段，但不是動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)，C錯(cuò)誤；D、核移植是動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段，但不是動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)，D錯(cuò)誤。故選A。4．使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺死腫瘤細(xì)胞，但細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害。構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）能對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行選擇性殺傷，ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機(jī)制如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物的抗體是特異性強(qiáng)、靈敏性高的單克隆抗體B．制備該抗體需要利用動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)手段C．ADC通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞，該過程不需要細(xì)胞膜上載體蛋白的協(xié)助，也不消耗能量D．藥物在癌細(xì)胞內(nèi)釋放并起作用，同時(shí)誘導(dǎo)溶酶體破裂，加速了癌細(xì)胞的凋亡【答案】C【分析】1、單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的漿細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體，又能無限增殖。用具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群，可制備針對(duì)一種抗原的特異性抗體即單克隆抗體。2、題圖分析：ADC可以被癌細(xì)胞識(shí)別并被吞噬進(jìn)入細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞后ADC被水解釋放藥物，藥物起作用，同時(shí)誘導(dǎo)溶酶體破裂，加速癌細(xì)胞死亡?！驹斀狻緼、構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物的抗體目的是讓藥物只對(duì)腫瘤細(xì)胞起作用，因此使用的抗體要是特異性強(qiáng)、靈敏性高的單克隆抗體，A正確；B、制備該抗體需要把骨髓瘤細(xì)胞與能合成抗體的細(xì)胞融合，再對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，所以制備該抗體要利用動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)手段，B正確；C、ADC通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞，需要消耗細(xì)胞的能量，C錯(cuò)誤；D、據(jù)圖所示，藥物在癌細(xì)胞內(nèi)釋放并起作用，同時(shí)誘導(dǎo)溶酶體破裂，加速了癌細(xì)胞的凋亡，D正確。故選C。5．抗PD-L1單克隆抗體能與癌細(xì)胞表面的PD-L1特異性結(jié)合，因而具有治療某些癌癥的作用。如圖是制備抗PD-L1單克隆抗體的示意圖，圖中有兩次篩選。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．圖中第一次篩選所用培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基B．圖中第二次篩選的目的是獲得產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞C．圖中細(xì)胞集落b～d，既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗PD-L1抗體D．圖中加入的H物質(zhì)，應(yīng)該是取自癌細(xì)胞表面的PD-L1抗原【答案】C【分析】題圖分析：用PEG將B淋巴細(xì)胞和癌細(xì)胞融合，放在多孔玻璃板上進(jìn)行培養(yǎng)，在選擇培養(yǎng)基中篩選，篩選出的abcd細(xì)胞集落為雜交瘤細(xì)胞，再加入PD-L1抗原，只有a細(xì)胞集落呈現(xiàn)陽性?！驹斀狻緼、圖中第一次篩選所用培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，其目的是篩選出雜交瘤細(xì)胞，A正確；B、圖中第二次篩選的目的是獲得產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)而通過培養(yǎng)獲得單克隆抗體，B正確；C、圖中a-d是經(jīng)過篩選的雜交瘤細(xì)胞，所以既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體，但只有a能產(chǎn)生抗PD-L1單克隆抗體，C錯(cuò)誤；D、題目中的目的是制備抗PD-L1單克隆抗體的過程，為了篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，因而圖中加入的H物質(zhì)，應(yīng)該是取自癌細(xì)胞表面的PD-L1抗原，D正確。故選C。6．如圖是抗HCG（人絨毛膜促性腺激素）單克隆抗體制備流程圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．①過程中常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒和電激等B．②過程中篩選出的雜交瘤細(xì)胞不一定能產(chǎn)生抗HCG抗體C．③過程中利用了DNA分子雜交的原理D．④過程培養(yǎng)液中所需氣體主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH【答案】C【分析】單克隆抗體制備的基本步驟：對(duì)小鼠進(jìn)行免疫→提取B淋巴細(xì)胞→將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合→通過篩選、克隆化培養(yǎng)和擴(kuò)大化培養(yǎng)→最終注入小鼠體內(nèi)→從腹腔腹水中提取單克隆抗體?！驹斀狻緼、動(dòng)物細(xì)胞的融合原理是細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有三種：生物方法-病毒、化學(xué)方法-聚乙二醇(PEG)、物理方法-離心、震動(dòng)、電刺激，據(jù)圖可知，①過程表示B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒和電激等，A正確；B、②過程中篩選出的雜交瘤細(xì)胞不一定都能產(chǎn)生抗HCG抗體，還需要進(jìn)行抗體專一性檢測，B正確；C、③過程表示篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群，利用的時(shí)抗原-抗體雜交原理，C錯(cuò)誤；D、④過程表示體外大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)液中所需氣體主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH，O2是細(xì)胞代謝必需的，D正確。故選C。7．科研工作者常常將單克隆抗體與細(xì)胞毒素類藥物偶聯(lián)起來，制成的“生物導(dǎo)彈”，來定向治療癌癥并降低藥物的副作用，其過程如圖所示。下列有關(guān)敘述不正確的是（

）

A．經(jīng)①形成的細(xì)胞都能無限增殖并產(chǎn)生相應(yīng)抗體B．②過程需要篩選并克隆單個(gè)雜交瘤細(xì)胞C．未與單克隆抗體偶聯(lián)的細(xì)胞毒素等藥物沒有選擇殺傷癌細(xì)胞的功能D．抗癌細(xì)胞的單克隆抗體的靶向作用使③過程具有高度特異性【答案】A【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！驹斀狻緼、經(jīng)①誘導(dǎo)融合過程形成的細(xì)胞不都能無限增殖并產(chǎn)生相應(yīng)抗體的細(xì)胞，還需要經(jīng)過兩次篩選才能獲得無限增殖并產(chǎn)生相應(yīng)抗體的雜交瘤細(xì)胞，A錯(cuò)誤；B、②過程需要篩選出既能無限增殖又能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞并克隆單個(gè)雜交瘤細(xì)胞，獲得單克隆抗體，B正確；C、用以治療癌癥的“生物導(dǎo)彈”就是以單克隆抗體的定位導(dǎo)向作用將藥物定向帶到癌細(xì)胞，在原位殺死癌細(xì)胞，其中，構(gòu)成“彈頭”的化學(xué)藥物、細(xì)胞毒素等物質(zhì)沒有選擇殺傷癌細(xì)胞的功能，而單克隆抗體能將這種殺傷功能定位，C正確；D、過程③中由于單克隆抗體具有高度特異性，使其靶向作用非常準(zhǔn)確，D正確。故選A。8．阿霉素是一種抗腫瘤藥物，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)機(jī)體其他細(xì)胞造成傷害，將阿霉素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的抗體利用接頭連接制成抗體——藥物偶聯(lián)物（ADC）。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．阿霉素有副作用，正常情況下不能大量、長期使用B．ADC中的特異性抗體是殺死腫瘤細(xì)胞的有效成分C．接頭既要保持穩(wěn)定，又不能影響抗體與阿霉素的功能D．利用同位素標(biāo)記的特異性抗體，可用于定位診斷腫瘤【答案】B【分析】分析題干信息可知：阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)機(jī)體其它細(xì)胞造成傷害，即具有較大的副作用。為了解決這一問題，可將阿霉素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的抗體結(jié)合制成抗體–藥物偶聯(lián)物（ADC）。【詳解】A、阿霉素在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)機(jī)體其它細(xì)胞造成傷害，說明阿霉素有副作用，正常情況下不能大量、長期使用，A正確；B、特異性抗體能和腫瘤抗原結(jié)合形成復(fù)合物，但是不能殺死腫瘤細(xì)胞，B錯(cuò)誤；C、接頭既要保持穩(wěn)定，避免阿霉素從抗體中脫落，同時(shí)也不能影響抗體與阿霉素的功能，C正確；D、抗體和抗原的結(jié)合具有特異性，故利用同位素標(biāo)記的特異性抗體在特定組織中的成像技術(shù)，可定位診斷腫瘤，D正確。故選B。9．下圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質(zhì)和A細(xì)胞的名稱分別為（

）A．抗體、T淋巴細(xì)胞 B．抗原、T淋巴細(xì)胞C．抗體、B淋巴細(xì)胞 D．抗原、B淋巴細(xì)胞【答案】D【分析】題圖分析，A細(xì)胞表示B淋巴細(xì)胞，B細(xì)胞表示骨髓瘤細(xì)胞，C細(xì)胞表示雜交瘤細(xì)胞，D表示產(chǎn)生的單克隆抗體。1表示給小鼠注射抗原，2表示提取B細(xì)胞，3表示動(dòng)物細(xì)胞融合，4表示篩選出能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞，56表示提取單克隆抗體。【詳解】由于制備單克隆抗體的細(xì)胞來源是B淋巴細(xì)胞（已經(jīng)免疫的）和骨髓瘤細(xì)胞；由分析可知，1表示給小鼠注射抗原，使得小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，形成能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，故A細(xì)胞為B淋巴細(xì)胞，即D正確。故選D。10．下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述正確的是（）A．在植物細(xì)胞工程中通常用Ca2＋處理植物細(xì)胞，以增大細(xì)胞壁的通透性B．用以治療癌癥的“生物導(dǎo)彈”就是以單克隆抗體作抗癌藥物定向殺死癌細(xì)胞C．誘導(dǎo)兩種植物細(xì)胞的原生質(zhì)體融合，所獲得的融合細(xì)胞都具有雙親的遺傳特性D．單克隆抗體雖特異性強(qiáng)，但也不能與位于靶細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合【答案】D【分析】1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。2、生物導(dǎo)彈：單克隆抗體+放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素（借助單克隆抗體的定位導(dǎo)向作用將藥物定向帶到癌細(xì)胞，在原位殺死癌細(xì)胞。療效高，副作用小，位置準(zhǔn)確。）【詳解】A、在基因工程中通常用CaCl2處理微生物細(xì)胞，以增大細(xì)胞壁通透性，A錯(cuò)誤；B、用以治療癌癥的“生物導(dǎo)彈”=單克隆抗體+放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素，其借助單克隆抗體的定位導(dǎo)向作用將藥物定向帶到癌細(xì)胞，在原位殺死癌細(xì)胞，C錯(cuò)誤；C、誘導(dǎo)兩種植物細(xì)胞的原生質(zhì)體融合，所獲得的兩兩融合細(xì)胞有AA型、BB型、AB型，不都具有雙親的遺傳特性，C錯(cuò)誤；D、某一種漿細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合后培養(yǎng)，獲得特異性強(qiáng)的單克隆抗體，但當(dāng)相應(yīng)抗原位于靶細(xì)胞內(nèi)時(shí)，該抗體不能與之發(fā)生特異性結(jié)合，D正確。故選D。11．細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是具有一定的流動(dòng)性，下列實(shí)例不能反映該特點(diǎn)的是（）A．人的B淋巴細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞的融合B．吞噬細(xì)胞吞噬病菌C．核糖體合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核D．變形蟲伸出偽足【答案】C【分析】細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：具有流動(dòng)性（膜的結(jié)構(gòu)成分不是靜止的，而是動(dòng)態(tài)的）；細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，常出現(xiàn)的流動(dòng)性的實(shí)例：草履蟲取食過程中食物泡的形成、變形蟲捕食和運(yùn)動(dòng)時(shí)偽足的形成、白細(xì)胞吞噬細(xì)菌、動(dòng)物細(xì)胞分裂時(shí)細(xì)胞膜的縊裂過程、細(xì)胞雜交時(shí)的細(xì)胞融合等?！驹斀狻緼、人的B淋巴細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞的融合，體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性，A不符合題意；B、吞噬細(xì)胞通過胞吞作用吞噬病菌，體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性，B不符合題意；C、核糖體中合成的蛋白質(zhì)通過核孔進(jìn)入細(xì)胞核，沒有通過膜結(jié)構(gòu)，所以不能反映細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，C符合題意；D、變形蟲伸出偽足，通過變形運(yùn)動(dòng)來攝食和運(yùn)動(dòng)，體現(xiàn)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)具有一定的流動(dòng)性，D不符合題意。故選C。12．某同學(xué)在學(xué)習(xí)“細(xì)胞工程”時(shí)，列表比較了動(dòng)植物細(xì)胞工程的有關(guān)內(nèi)容，你認(rèn)為有幾處是不正確的（）

植物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和單克隆抗體的制備特殊處理機(jī)械法去除細(xì)胞壁胰蛋白酶處理，制成細(xì)胞懸液融合方法物理方法、化學(xué)方法物理方法、化學(xué)方法、生物方法典型應(yīng)用人工種子、雜種植株單克隆抗體的制備培養(yǎng)液區(qū)別生長素和細(xì)胞分裂素影響脫分化和再分化動(dòng)物血清（血漿）不可缺少A．1 B．2 C．3 D．4【答案】B【分析】植物細(xì)胞工程的技術(shù)手段主要有植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交，其中植物組織培養(yǎng)是植物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)；動(dòng)物細(xì)胞工程的技術(shù)手段主要有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體的制備、胚胎移植和核移植，其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。動(dòng)、植物細(xì)胞工程的原理和技術(shù)手段有相似之點(diǎn)，但也存在不同之處，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過程中注意列表比較?！驹斀狻竣偌夹g(shù)手段：植物細(xì)胞工程的技術(shù)手段有植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交；動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞核移植等技術(shù)，單克隆抗體的制備是動(dòng)物細(xì)胞融合的應(yīng)用，①錯(cuò)誤；②特殊處理：植物體細(xì)胞雜交時(shí)，需要用酶解法（纖維素酶和果膠酶）去除細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要用胰蛋白酶處理制備細(xì)胞懸浮液，②錯(cuò)誤；③融合方法：誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合的方法有物理（離心、振動(dòng)和電激等）和化學(xué)方法（聚乙二醇）；誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有物理、化學(xué)和生物方法（滅活的病毒），③正確；④應(yīng)用：植物細(xì)胞工程技術(shù)可應(yīng)用于制備人工種子、培育雜種植株；動(dòng)物細(xì)胞工程中的動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)可以用于制備單克隆抗體，④正確；⑤培養(yǎng)液：植物細(xì)胞工程中的培養(yǎng)基中需要用生長素和細(xì)胞分裂素以影響愈傷組織的生長和分化；動(dòng)物細(xì)胞工程的培養(yǎng)液中需要加入動(dòng)物血清、血漿等天然成分，⑤正確。故選B。13．制備單克隆抗體時(shí)需要經(jīng)過兩次篩選，第一次篩選需要用HAT培養(yǎng)基，已知哺乳動(dòng)物細(xì)胞可通過D途徑和S途徑合成DNA，而小鼠的骨髓瘤細(xì)胞只能通過D途徑合成DNA．其中進(jìn)行D途徑合成時(shí)葉酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑。第二次篩選需要用96孔培養(yǎng)板進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．HAT培養(yǎng)基中要加入葉酸從而把雜交瘤細(xì)胞篩選出來B．在HAT培養(yǎng)基中雜交瘤細(xì)胞可通過D途徑和S途徑合成DNA因此可以大量增殖C．用96孔培養(yǎng)板克隆化培養(yǎng)時(shí)要用培養(yǎng)液對(duì)第一次篩選所得的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行充分稀釋以保證分配到每個(gè)孔中的細(xì)胞數(shù)不超過1個(gè)D．克隆化培養(yǎng)后需要向每個(gè)孔中加入相應(yīng)抗體從而進(jìn)行抗體檢測，呈陽性反應(yīng)的孔中的細(xì)胞即為能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞【答案】C【分析】1、單克隆抗體的制備：（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。（2）獲得雜交瘤細(xì)胞：①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。2、單克隆抗體的作用：①作為診斷試劑：（最廣泛的用途）具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。②用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥，可制成“生物導(dǎo)彈”。由于單克隆抗體的特異性強(qiáng)，能特異性識(shí)別抗原，因此可以把抗癌細(xì)胞的單克隆抗體跟放射性同位素、藥物等相結(jié)合，制成“生物導(dǎo)彈”，借助單克隆抗體的定位導(dǎo)向作用將藥物定向帶到癌細(xì)胞，在原位殺死癌細(xì)胞，療效高，副作用小，位置準(zhǔn)確?！驹斀狻緼B、進(jìn)行D途徑合成時(shí)葉酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑，所以在HAT培養(yǎng)基中需要添加氨基蝶呤以阻斷D途徑。在HAT培養(yǎng)基上瘤-瘤雜交細(xì)細(xì)胞由于不能合成DNA而無法增殖，B-B雜交細(xì)胞雖然可通過S途徑合成DNA但本身無法增殖，只有雜交瘤細(xì)胞能通過S途徑合成DNA且具有骨髓瘤細(xì)胞的增殖特性而能大量增殖，AB錯(cuò)誤：C、第二次篩選前先要用培養(yǎng)液對(duì)第一次篩選所得的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行充分稀釋以保證分配到每個(gè)孔中的細(xì)胞數(shù)不超過1個(gè)，C正確：D、克隆化培養(yǎng)后應(yīng)向每個(gè)孔中加入相應(yīng)抗原從而進(jìn)行抗體檢測，D錯(cuò)誤。故選C。14．除雜交瘤單克隆技術(shù)之外，制備單克隆抗體的常用方法還包括單個(gè)B細(xì)胞抗體技術(shù)，可通過下圖所示的技術(shù)流程制備抗體用于治療人類疾病。下列說法錯(cuò)誤的是（

）

A．上述技術(shù)可一定程度避免機(jī)體對(duì)傳統(tǒng)鼠源單克隆抗體的免疫反應(yīng)B．選用單個(gè)B淋巴細(xì)胞是為了最終獲得純度較高的抗體C．應(yīng)在95%空氣加5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)D．將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞前需要用鈣離子處理受體細(xì)胞【答案】D【分析】1、基因工程技術(shù)的基本步驟：(1)目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化