規(guī)?；i場非洲豬瘟環(huán)境樣品監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

1規(guī)?；i場非洲豬瘟環(huán)境樣品監(jiān)測技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了規(guī)?；i場非洲豬瘟環(huán)境監(jiān)測樣品采集的術(shù)語與定義、樣品采集方法、樣品采集要求、檢測方法、處置方案、數(shù)據(jù)的分析整理與記錄留檔。本文件適用于規(guī)?；i場非洲豬瘟環(huán)境樣品監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T17824.1規(guī)模豬場建設(shè)GB/T18648非洲豬瘟診斷技術(shù)GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求NY/T4319-2023洗消中心建設(shè)規(guī)范NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范NY/T1948獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全要求通則NY/T2074無規(guī)定動物疫病區(qū)高致病性禽流感監(jiān)測技術(shù)規(guī)范NY/T4034規(guī)?；i場生物安全風(fēng)險評估規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1監(jiān)測Surveillance通過系統(tǒng)持續(xù)地收集、整理和分析動物衛(wèi)生相關(guān)數(shù)據(jù)和信息，了解規(guī)定動物疫病狀況、發(fā)展趨勢，并為相關(guān)部門采取動物衛(wèi)生措施提供依據(jù)。[來源：NY/T2074-2011]3.2環(huán)境樣品EnvironmentalSample取自生豬養(yǎng)殖場內(nèi)部及場區(qū)外1公里范圍內(nèi)的環(huán)境，擬通過持續(xù)性檢測反映環(huán)境中病毒污染情況的非動物源性樣品。3.3規(guī)模化豬場IntensiveSwineFarm采用現(xiàn)代養(yǎng)殖技術(shù)與設(shè)施設(shè)備，實(shí)行批次化、全進(jìn)全出生產(chǎn)工藝，存欄基礎(chǔ)母豬100頭以上或年出欄商品豬500頭以上的自繁自養(yǎng)場、專業(yè)母豬場、專業(yè)育肥豬場[來源：GB/T17824.1規(guī)模豬場建設(shè)]。3.4預(yù)處理中心PreprocessingCenter2對進(jìn)出畜禽養(yǎng)殖場的人員、物料及食材進(jìn)行集中清洗、消毒的場所。3.5洗消中心DecontaminationCenter對進(jìn)出畜禽養(yǎng)殖場、飼料加工廠、屠宰加工廠及無害化處理廠的車輛及人員進(jìn)行集中清洗、消毒的場所[來源：NY/T4319-2023洗消中心建設(shè)規(guī)范]。4環(huán)境樣品監(jiān)測的目的通過連續(xù)性、科學(xué)性的環(huán)境樣品監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)生物安全漏洞，達(dá)到規(guī)避疫情風(fēng)險的作用。5環(huán)境樣品的采集處理與檢測方法5.1采樣前準(zhǔn)備5.1.1人員準(zhǔn)備采樣人員經(jīng)洗手消毒，穿戴好一次性手套、防護(hù)服、口罩、鞋套，攜帶采樣所需物品。5.1.2物品準(zhǔn)備采樣拭子、裝有PBS的離心管、商品化的環(huán)境采樣紗布、記號筆、剪刀、鑷子、75%酒精棉、密封袋、樣品箱、冰袋等，可根據(jù)實(shí)際需要增減采樣物品。5.2豬場環(huán)境監(jiān)測樣品采集5.2.1環(huán)境樣品的采集原則生產(chǎn)工作中高頻率、易污染的接觸點(diǎn)或區(qū)域、不易清洗或消毒的點(diǎn)或區(qū)域等高風(fēng)險位點(diǎn)是環(huán)境監(jiān)測的重點(diǎn)采樣對象。5.2.2環(huán)境監(jiān)測樣品采集方法根據(jù)不同的采樣位置、采樣對象及空間限制等問題選擇適合的采樣方式：a)紗布采樣法：戴一次性的PE手套，取含有樣品保護(hù)液的專用環(huán)境采樣紗布，用生理鹽水完全浸濕的紗布，在物體表面涂抹3～5次后，將紗布中的水分?jǐn)D入含有1～2ml保護(hù)劑的離心管中；b)拭子采樣法：戴一次性的PE手套，用生理鹽水將無菌采樣拭子頭完全浸濕，在物體表面涂抹3～5次后，將拭子頭折入含有1～2ml的滅菌PBS的離心管中。5.2.3豬場外環(huán)境監(jiān)測樣品采集豬場外環(huán)境監(jiān)測樣品采集按照表1執(zhí)行。3表1豬場外環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測樣品采集份數(shù)及采樣頻率份份份5.2.4豬場內(nèi)部環(huán)境監(jiān)測樣品采集豬場內(nèi)部環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測樣品采集按照表2執(zhí)行。4表2豬場內(nèi)部環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測樣品采集份數(shù)及采樣頻率5.2.5豬舍內(nèi)環(huán)境監(jiān)測樣品采集豬舍內(nèi)部環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測樣品采集按照表3執(zhí)行。表3豬場內(nèi)部環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測樣品采集份數(shù)及采樣頻率55.2.6人車物進(jìn)場采樣監(jiān)測樣品采集人、車、物進(jìn)場采樣監(jiān)測樣品采集按照表4執(zhí)行。表4人車物進(jìn)場采樣監(jiān)測樣品采集份數(shù)及采樣頻率測5.3樣品處理、保存與運(yùn)輸樣品處理、保存及運(yùn)輸，應(yīng)符合NY/T541中的規(guī)定。5.4檢測方法按GB/T18648中的非洲豬瘟病毒實(shí)時熒光PCR檢測方法檢測非洲豬瘟病毒核酸。陽性對照的FAM通道Ct值小于等于30，有明顯指數(shù)增長，呈典型的S型曲線；陰性提取對照及無模板對照FAM通道均無Ct值，無明顯指數(shù)增長期和平臺期判定為實(shí)驗(yàn)成立。否則實(shí)驗(yàn)不成立，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。符合15中的條件，被檢樣品Ct值≤45且出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，則判為ASFV核酸陽性；當(dāng)無Ct值或Ct值≥45，則判為ASFV核酸陰性。6數(shù)據(jù)收集整理分析反饋6對5.2.3—5.2.6中規(guī)定頻率進(jìn)行監(jiān)測，監(jiān)測數(shù)據(jù)應(yīng)按周或按月進(jìn)行收集整理，及時發(fā)現(xiàn)生物安全風(fēng)險點(diǎn)，規(guī)避疫情發(fā)生，對發(fā)現(xiàn)異常監(jiān)測情況應(yīng)及時上報相關(guān)單位。同時應(yīng)按照NY/T4034的規(guī)定，定期對本場生物安全現(xiàn)狀進(jìn)行評估。7廢棄物處理按照本文件采樣方案檢測樣品中如非洲豬瘟病毒核酸出現(xiàn)陽性，及時上報相關(guān)單位，同時按照國家現(xiàn)行非洲豬瘟疫情處置方案處理。采樣中應(yīng)做好場地、物品、操作人員防護(hù)用品等消毒或無害化處理。廢棄物處置應(yīng)符合GB19489和NY/T1948中的規(guī)定。陽性樣品及檢測余樣均按GB19489要求做無害化處理。8記錄留檔檔案應(yīng)包括采樣記錄表、實(shí)驗(yàn)室檢測原始記錄表、檢測報告、樣品處置記錄，其中采樣記錄表中應(yīng)包含