中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

藥物化學(xué)教研室

中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

一.說明

中藥化學(xué)是一門實(shí)驗(yàn)學(xué)科，實(shí)驗(yàn)教學(xué)占重要地位,通過實(shí)驗(yàn)要達(dá)到以下目的。

1.能檢驗(yàn)學(xué)生在課堂上所學(xué)的理論知識。使學(xué)生對理論知識的理解更加深

入，掌握的更加牢固。

2.訓(xùn)練學(xué)生的基本操作技能，培養(yǎng)學(xué)生分析問題和解決問題的能力，使學(xué)

生獲得從事中藥化學(xué)科研工作和實(shí)際工作的基本訓(xùn)練。

3.使學(xué)生養(yǎng)成嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和良好的科學(xué)作風(fēng)。

實(shí)驗(yàn)中，重點(diǎn)是加強(qiáng)對學(xué)生基本技能的訓(xùn)練。

二.實(shí)驗(yàn)須知

1.遵守實(shí)驗(yàn)室制度，維護(hù)實(shí)驗(yàn)室安全，不違章操作，嚴(yán)防爆炸、著火、中

毒、觸電、漏水等事故的發(fā)生。若發(fā)生事故應(yīng)立即采取措施并報告指導(dǎo)老師。

2.實(shí)驗(yàn)前做好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，了解實(shí)驗(yàn)的基本原理和方法。安排的

實(shí)驗(yàn)計劃，爭取準(zhǔn)時結(jié)束，實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)養(yǎng)成及時記錄的習(xí)慣，凡是觀察到的現(xiàn)

象和結(jié)果及有關(guān)數(shù)據(jù)，應(yīng)隨時如實(shí)地記錄。實(shí)驗(yàn)完畢，要認(rèn)真總結(jié)，寫好實(shí)驗(yàn)報

告，實(shí)驗(yàn)所得的提純物要包好，貼上標(biāo)簽，交給老師。

3.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持安靜，不得大聲喧嚷，不許抽煙。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿工

作服，實(shí)驗(yàn)過程中，不許隨便離開。

4.實(shí)驗(yàn)臺前應(yīng)保持整潔，與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品不得放在臺前。實(shí)驗(yàn)中廢棄的

固體物，要丟入廢物桶內(nèi)。

5.愛護(hù)儀器，節(jié)約藥品，儀器損壞后應(yīng)填寫報損單，注明原因，由指導(dǎo)教

師按規(guī)定處理。

6.實(shí)驗(yàn)過程中要節(jié)約用水、用電。

7.每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，值日生應(yīng)將實(shí)驗(yàn)室打掃干凈，傾倒廢物桶，關(guān)好水、

電、門窗，方可離去。

實(shí)驗(yàn)一粉防已生物堿的提制和鑒識

粉防已是防已科千金藤植物粉防已StephaniatetrandraS.Moore的根。又名漢

防已、倒地拱、百木香，是一種解熱鎮(zhèn)痛藥。中醫(yī)用于風(fēng)濕止痛、利尿消腫以及

毒蛇咬傷等。

粉防已的有效成分是生物堿，其總堿含量為1.2%左右，主要是粉防已堿

(Tetrandrine)和防已諾林堿(Fangchinoline)及輪環(huán)藤酚堿(Cyclanoline),本

實(shí)驗(yàn)經(jīng)提取，分離可得到這3個生物堿結(jié)晶。它們的物理性質(zhì)如下：

1.粉防已堿(Tetrandrine,亦稱漢防已甲素)

無色針狀結(jié)晶，丙酮中結(jié)晶有雙熔點(diǎn)：126?127C/217?218℃,即結(jié)晶測至

126?127℃熔融。繼續(xù)加熱于153℃固化，溫度上升至217?218℃復(fù)融化。

不溶于水、石油酸，易溶于乙醇、乙醛、氯仿等有機(jī)溶劑及稀酸水溶液。

2.防已諾林堿(Fangchinoline,漢防已乙素)

細(xì)棒狀結(jié)晶，同樣有雙熔點(diǎn)現(xiàn)象，丙酮中結(jié)晶mp.134?136C/238?240℃,

甲醇中結(jié)晶mp.177~179℃/238~240℃o

溶解度與粉防已堿相似，但極性稍大，故在冷苯中的溶解度小于粉防已堿,

而在乙醇中溶解度稍大于粉防已堿，具隱性酚羥基，不溶于NaOH溶液。

3.輪環(huán)藤酚堿(Cyclanoline)

氯化物無色八面體狀結(jié)晶216?6℃

碘化物無色絲狀結(jié)晶185℃

苦味酸鹽黃色結(jié)晶154?6℃

水溶性季鏤型生物堿，不溶于低極性有機(jī)溶劑。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握各種生物堿的分離純化方法，包括脂溶性堿與水溶性堿分離，脂溶

性堿中酚性堿與非酚性堿的分離，水溶性與非生物堿堿水溶性成分的分離，脂溶

性堿單體的分離

2.學(xué)習(xí)生物堿的各種鑒識方法，包括：層析方法（TLC及PC）,沉淀反應(yīng),

衍生物制備鑒識。

3.學(xué)習(xí)各種實(shí)驗(yàn)技能

提?。夯亓魈崛?/p>

分離：萃取、柱層析

凈化精制：沉淀法、柱層析法

鑒識：層析法、化學(xué)法

二、實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)一般生物堿的親脂通性及季鏤型生物堿易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑的特

性，提取分離脂溶性生物堿和水溶性生物堿，利用漢防已甲、乙素結(jié)構(gòu)上的差別，

用吸附柱層析分離二者，利用季鏤堿可與雷氏鏤鹽產(chǎn)生沉淀的性質(zhì)與其它水溶性

成分分離。本實(shí)驗(yàn)涉及的知識點(diǎn)有：溶劑提取法、兩相溶劑萃取法、色譜法等。

三、實(shí)驗(yàn)流程

防弓粗粉

（乙醇提取回收溶劑

糖漿

I酸化

酸水液

過濾，以水洗渣，濾液以濃氨

水堿化至pH9-10,,氯仿萃取

堿水層氯仿層

正丁醇萃取|2%NaOH萃取

J回收溶劑

輪環(huán)藤酚堿

NaOH層氯仿層

氯化鏤調(diào)pH9-10水洗中性，脫水

、，氯仿萃取士回收溶劑，抽松

氯仿層抽松物（甲乙素）

水洗中性，脫水

氧化鋁柱層析分離

（回收溶劑

環(huán)己烷一丙酮洗用

小聚胺r

（親脂酚性堿）甲泉

乙素

（親脂非酚性堿）

TLC檢識

四、實(shí)驗(yàn)方法

（一）總生物堿的提取

稱取粉防已粗粉200g,用95%EtOH回流提取二次（500mll小時，400ml45

分鐘），兩次提取液合并，減壓回收乙醇至無醇味，得糖漿狀物。

（二）分離

1.親脂性生物堿與水溶性生物堿的分離

在糖漿狀總提取物中加入1%的鹽酸約200ml,充分?jǐn)嚢枋股飰A溶解，放

置過濾。濾渣用水洗滌2?3次后棄去，濾液合并后移至500ml分液漏斗中加

150mlCHCl3o再滴加濃氨水調(diào)PH9-10,振搖萃?。ù藭r再向水層滴加、濃氨水

至無沉淀析出），稍靜置，放出CHCb層，堿水層以新CHCb萃取4次，依次加

入80mlX4,最后一次萃取的CHCb層中應(yīng)基本沒有生物堿時認(rèn)為CHCb萃取基

本完全（取CHC13液滴在濾紙上，Drangedorff試劑顯色不明顯為止）。合并CHCb

液即為親脂性生物堿的提取液。堿水層則為水溶性生物堿，CHCb提取液和堿水

層分別在下述（2）、（3）項中處理。

2.親脂性生物堿中酚性與非酚性堿的分離

上述CHCb液置分液漏斗中，用2%NaOH水溶液萃取2次，每次50ml,此

時堿水層色已很淺，示酚性脂溶性堿已基本被萃取到NaOH層，合并NaOH萃

取液，將NaOH層與CHCb液分置2個分液漏斗中，可同時操作：

（1）NaOH層加固體NH4C1至PH9左右,然后CHC13萃取2次（80ml,50ml）,

第2次CHCb層生物堿應(yīng)極弱示萃取基本完全，棄去水相，合并CHCb層并用

蒸儲水洗至中性，加無水Na2s。4脫水24小時以上，過濾，回收CHCb，得粗酚

性生物堿。

（2）CHC13層用蒸儲水洗至中性，脫水，回收，殘留物抽松，得非酚性生

物堿的抽松物，稱重，取出50mg作第4項，其余用（CH3）2co結(jié)晶（1：15）。

3.季鏤型生物堿的分離純化

堿水液用正丁醇萃?。?0mlX2）,回收正丁醇，水精制得輪環(huán)藤酚堿。

4.非酚性堿中漢防已甲素和乙素的分離純化。

柱層析分離條件：

吸附劑，中性AI2O3300-200目，n-in級，裝柱15cm。

樣品：拌樣上樣，取非酚性堿的油松物50mg,用少量CHC13溶液于吸附劑

中分散均勻，邊加熱揮去CHCb。

裝柱：濕法裝柱（干法裝柱也可以）

洗脫劑：環(huán)已烷，丙酮2：1。

將樣品加于柱頂，倒入洗脫劑，然后于柱頂加低壓層析分離，流速控制在

5ml/分，收集各流份（5-10ml/份），各流份回收溶劑，用硅膠GTLC檢查，合并

相同流份，回收溶劑至干，分別用（CH3）2CO重結(jié)晶1-2次，可得漢防已甲素，

乙素精品。

附：（1）濕法裝柱法。取吸附30g左右于燒杯中，加洗脫劑一定濕潤，攪勻，

打開層析柱活塞。將吸附劑緩緩倒入柱內(nèi)。待其自然沉降后即可。柱頂留5ml

左右洗脫劑。倒入拌好的樣品。敲平（此時洗脫劑不能被樣品吸干，應(yīng)有余量）,

即可開始層析。

（2）干法裝柱法。打開柱活塞，倒入干的吸附劑裝15cm高，敲勻，然后

倒入拌樣的吸附劑再敲平，沿柱壁均勻加入洗脫劑，待流出第1滴流出液時，加

滿洗脫劑，開始層析。

（3）硅膠GTLC制備與層析，鋪板，一塊板用吸附劑1.5g,板規(guī)格15X5cm,

每克吸附劑用水3ml,在乳體中研勻后鋪板，每人鋪板6塊，自然干燥后用前在

100-105℃活化30分鐘。

層析條件：

對照品：甲素、乙素。

展開劑：CHC13：（CH3）2CO（1：1）展開前濃氨水飽和15分鐘。

顯色劑：改良Drangendorff試劑

（三）鑒識

1.層析鑒識

（1）硅膠GCMC板TLC

條件均與柱層檢識TLC條件一致，結(jié)果參照柱層析檢識的結(jié)果，可不重復(fù)。

（2）叔胺堿多緩沖紙層析

I多緩沖濾紙的制備

取濾紙條（2X30cm2）,離下端6cm處開始用鉛筆劃一原點(diǎn)線，然后向上每

隔2cm劃一平行線。并自下而上在每隔2cm的行間順次涂布PH值不同的緩沖

液（6.0,5.4,5.0,4.6,4.0）。如圖示

4.6

5.0

5.4

6.0

甲乙總

涂布時勿使緩沖液滲出線外，涂完后將濾紙懸掛在空中自然干燥。

n點(diǎn)樣

分別在兩條濾紙起始線上點(diǎn)下列樣品的氯仿溶液。

漢防已甲素

漢防已乙素

ni展開

溶劑皿內(nèi)置展開劑CHC13：H2。（1：1）（水預(yù)先飽和過的），將點(diǎn)樣后的濾紙

懸掛在筒內(nèi)，密閉，飽和30分鐘后展開。

IV顯色

噴以改良Dragendorff試劑

2.衍生物的制備

（1）漢防已甲素苦味酸鹽的制備

取甲素10mg溶于（CH3）2coim1中，滴加飽和苦味酸試劑至不再析出黃色

沉淀，稍放置。抽濾收集沉淀，依次用少量H2O,EtOH洗滌，再以乙醇重結(jié)晶，

得甲素苦味酸鹽，mp235?242℃。

3.定性反應(yīng)

取甲素（乙素）溶于稀HC1中，分置4支試管中，加下列試劑1?3滴。觀

察現(xiàn)象。

A碘化汞鉀試劑

B碘——碘化鉀試劑

C硅鴇酸試劑

D碘化鈿鉀試劑

五、思考題

1.有機(jī)溶劑提取必須用什么方式？為什么？

2.減壓回收較常壓回收有哪些特點(diǎn)？影響減壓回收速度的關(guān)鍵是什么，如

何控制？

3.萃取操作的好壞對實(shí)驗(yàn)結(jié)果會有什么影響，為什么說分離是影響產(chǎn)品產(chǎn)

量及質(zhì)量的主要因素。

4.怎樣防止產(chǎn)生乳化，怎樣消除乳化？

5.為什么有機(jī)溶劑必須洗至中性方能濃縮或放置？

6.何時有機(jī)相需要脫水干燥，何時不必？

7.如何用TLC摸住層條件（包括切割柱層，洗脫柱層）？

8.為什么PC中的展開劑必須用固定相預(yù)先飽和？

9.什么叫假陽性和假陰性反應(yīng)？有什么意義，能消除嗎？

10.粉防已中各種生物堿的分離原理是什么？

11.為什么用NH3或NH4cl調(diào)PH,而不用其它堿和酸。

六、主要參考文獻(xiàn)

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13(2)；167,1938

實(shí)驗(yàn)二虎杖慈醍類成分及白黎蘆醇昔的提制和鑒定

虎杖系蓼科蓼屬植物polyganumcuspidetumsiebetzucc.（即Reynoutrin

japonicaHouobluyn）的根莖。又名陰陽蓮。民間用于消炎、殺菌、利尿、通經(jīng)

和鎮(zhèn)痛。近年來用于燙傷、止血、消結(jié)石和降血脂均有療效?；⒄雀o中含有大

量的蔥醍類成分和二苯乙烯類成分。后者具有降血脂的作用。

一、部分已知成分的物理性質(zhì)

1.大黃酚（chrysophanol）

金黃色六角形狀結(jié)晶（丙酮中結(jié)出）或針狀結(jié)晶（乙醇中結(jié)出）196C,能

升華。不溶于水，易溶于苯、氯仿、乙醛、乙醇、冰醋酸，稍溶于甲醇，難溶于

Na2cCh和NaHCO3水溶液可溶于NaOH及熱水溶液。

橙黃色長針晶（丙酮中結(jié)出者為橙色，甲醇中為黃色），mp256?7℃,能升

華，其溶解度如下:Et2O0.14%,CCI4O.OI%,CHCI30.0718%,CS20.009%,幾

乎不溶于水，易溶于乙醇，可溶于NH4OH、Na2c。3和NaOH水溶液。

金黃色針晶。熔點(diǎn)207℃。能升華，溶解性質(zhì)與大黃酚相似。

4.虎杖昔(polygonin)

為大黃素的昔。結(jié)構(gòu)未明，可能是混合物，淺黃色針狀結(jié)晶。203?5℃。以

甲醇、乙醇或乙酸乙醋重結(jié)晶時，若急速冷卻，呈膠凍狀，多次重結(jié)晶后慢慢冷

卻，得淺黃色針狀結(jié)晶，不溶于乙醛，難溶于丙酮，可溶于熱的乙酸乙酯、熱的

甲醇或乙醇，冷后均較難溶，可溶于NaHCCh水溶液，冷水中溶解度不大。

5.大黃素B—D—葡萄糖昔(Emodinmonoglycoside)

mpl90~l℃,為淺色針晶(稀乙醇中結(jié)出，含一分子結(jié)晶水)。

6.大黃素6一甲醛一8一D葡萄糖昔

mp230~2℃,為黃色針晶(稀甲醇中結(jié)出)。

7.白黎蘆醇(resveratrol)

無色針狀結(jié)晶，mp256?7℃,261℃,264℃,能升華，易溶于乙酸、氯仿、

甲醇、丙酮等。

8.白黎蘆醇葡萄糖昔(polydatin,peceid)

又名3,4,5一三羥基茂一3一B—D—葡萄糖昔，mp225℃,232℃,易溶

于甲醇、丙酮、熱水，可溶于EtOAC,稍溶于冷水，但可溶于NaCCh和NaOH

水溶液，難溶于乙醴。

(附注：此化合物具順，反二種異構(gòu)體，能夠互相轉(zhuǎn)化，所得常是二者的混

合物，以反式為多，故前人工作中所報導(dǎo)的熔點(diǎn)有所不同，按本實(shí)驗(yàn)方法所得的

白黎蘆醇昔結(jié)晶仿呈分子結(jié)晶水，在130?140℃時先融化，繼續(xù)加熱又固化，至

225?6c全熔)。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)用PH梯度萃取法分離本性不同的蔥醍類成分。

2.學(xué)習(xí)脂溶性成分和水溶性成分的分離方法。

3.了解蔥醍類成分的一般性質(zhì)和鑒別反應(yīng)。

三、實(shí)驗(yàn)原理

虎杖中的蔥醍類成分由于結(jié)構(gòu)中竣基和酚羥基數(shù)目及位置不同而呈現(xiàn)不同

強(qiáng)度的酸性，根據(jù)此性質(zhì)，在乙醛萃取出脂溶性成分后，堿度遞增的水溶液

（5%NaHCO3,5%NaCO3.2%NaOH）自乙酸中提出游離慈醍類成分，達(dá)到分

離目的。本實(shí)驗(yàn)涉及的知識點(diǎn)：溶劑提取法、萃取、pH梯度萃取法、色譜檢識、

重結(jié)晶等。

四、實(shí)驗(yàn)流程

虎林粗粉

J乙醇提取，回收溶劑

浸膏

加適量水，乙醛振搖后放置

乙醛萃取多次

個層乙隼層

，精制結(jié)晶|5%NaHCO3萃取

白梨蘆醇昔[1

堿層騰層

酸化至pH2|5%Na2c03萃取

J放置過濾

強(qiáng)酸性成分堿層麟層

（同左2%Na0H檄

大黃素

（重結(jié)晶堿尾醒層

大黃素精品:同左J回收溶齊

鑒識：TLC,定性反應(yīng)

五、實(shí)驗(yàn)方法

1.乙醇總提取物的制備

取虛仗粗粉200g,用95%乙醇回流提取二次（500ml回流Ihr,450ml回流

30'）。合并乙醇液。放置如有沉淀。抽濾一次，減壓回收乙醇至糖漿狀（要求乙

醇回收至無醇味。）

2.總游離蔥醍的提取

將上述提取轉(zhuǎn)移至三角瓶中，加入30ml水，溶解后加100ml乙醛，不斷振

搖后放置，將上層乙醛傾入另一500ml三角瓶中（切勿將水倒出），或用吸管吸

出，瓶中糖漿狀物再以乙醛多次萃取，每次萃取的乙醛用量順序?yàn)?0ml,

40ml義4,合并乙醛液為總游離意醍，乙酸提取的剩余物含水溶性成分，上繼續(xù)

分離，在第4項中做。

3.游離意醍的分離

（1）強(qiáng)酸性成分的分離

上述乙醛液移至分液漏斗中，用5%NaHCO3水溶液（測定pH值）取3-4次

（40,30x2）,合并堿液，在攪拌下慢慢滴加6NHC1調(diào)PH為2。放置，抽濾，

水洗沉淀至近中性，干燥，得深褐色粉末，為強(qiáng)酸性部分。

（2）中等酸性成分一一大黃素的分離

以上用NaHCCh取過的乙醛液用5%（測定pH值），取5?9次（40X3,30x4）。

堿液用量視堿水層萃取液色較淺為止。合并堿液。加濃HC1調(diào)PH2o稍放置。

抽濾。沉濾以水洗至中性，干燥，稱重，用丙酮結(jié)晶一次（1：15）。再用甲醇重

結(jié)晶（1：15?20）。得大黃素結(jié)晶。mp.256?7℃。

（3）弱酸性成分一一大黃酚和大黃素6一甲醛的分離

以上用Na2cCh萃取過的乙醛液用2%NaOH（測pH值）萃取4—5次。每次

20ml合并NaOH液。同（2）法處理。干燥后粗品以CHCI3—MgOH（1：1）重

結(jié)晶，再用乙醇重結(jié)晶。

（4）中性成分——溶醇類化合物的分離

上述NaOH萃取過的乙醛液，用水洗至中性，以無水Na2s。4脫水，回收乙

酷得殘留物，即得B-谷笛醇粗品。

用甲醇少量溶解B-谷笛醇，作TCL鑒識用。

4.白黎蘆醇葡萄糖昔的分離

取“2”中乙酸提取過的糖漿狀物，揮去乙酸，置燒杯中加500ml水，攪拌

混合后，直火加熱20?30'。傾出上層液，稍冷過濾。濾液加活性炭煮沸10'。趁

熱過濾。濾液置蒸發(fā)皿中。水浴濃縮至15?20ml。水液用乙酸乙酯（約30ml）

萃取?；厥找宜嵋阴?。

5.鑒識

層析法鑒定

（1）游離慈醍的硅膠GTLC

對照品：大黃素甲醛與大黃酚的混合物。

樣品：大黃素、大黃素甲醛。強(qiáng)酸性部分。

展開劑：苯：乙酸乙酯（8：2）,石油酸一已烷一甲酸乙酯一甲酸（1：3：

5：1,5：0.1）加0.5ml水,上層。

顯色劑：5%KOH噴色。

（2）留醇類成分的硅膠GTLC。

樣品：谷笛醇粗品

對照品：B-谷留醇

展開劑：環(huán)已烷：丙酮(8：2)

顯色劑：10%磷鋁酸乙醇溶液120℃烘烤數(shù)分鐘。

定性反應(yīng)

(1)游離慈醍的反應(yīng)

分別取大黃素、大黃素甲醛少許，用乙醇溶解，做如下反應(yīng)：

A.Borntragor反應(yīng)，取試液1ml,滴加2%NaOH液觀察顏色。

B.Mg(AC)2試驗(yàn)，取試液1ml,加入0.5%Mg(AC)2溶液2?3滴，觀

察顏色。

(2)留醇類顯色反應(yīng)

Liebberman-Burchard實(shí)驗(yàn)：取樣品少許，力口1mL醋酉千溶解，加濃硫酸1滴,

觀察顏色變化(此試驗(yàn)可在蒸發(fā)皿或點(diǎn)滴板上進(jìn)行)。

(3)白黎蘆醇甘的呈色反應(yīng)

取樣品少許，用乙醇溶解，做如下反應(yīng)

A.熒光反應(yīng)：將試液滴在濾紙上，在紫外光下觀察熒光。

B.三氯化鐵一鐵氧化鉀反應(yīng)

將試液用毛細(xì)管滴在濾紙上，噴上述試劑觀察顏色。

C.偶合反應(yīng)

取試液1ml,加0.5ml5%Na2c。3然后滴入新配制的重氮化試劑1-2滴，觀

察顏色。

D.Molish反應(yīng)

取試液1ml,加入等體積的10%a—蔡酚乙醇液，搖勻，沿試管壁滴加2?3

滴濃H2so4，觀察兩液界面顏色。

E.Gibb's反應(yīng)

取試液1ml,滴加0.5%2,6二氯苯醍4一亞胺氯化物的乙醇溶液2?3滴，

并加Na2c。3調(diào)PH10左右，觀察顏色(Gibb's試劑需臨用前配制)。

六、思考題

1.PH梯度萃取法的原理是什么？適用于哪些中草藥成分的分離？

2.根據(jù)TLC結(jié)果，分析各慈醍類成分的結(jié)構(gòu)與PH值的關(guān)系。

3.試說明各顯色反應(yīng)的機(jī)制。

4.此實(shí)驗(yàn)在操作方面應(yīng)注意什么？

5.試總結(jié)萃取操作程序及注意事項？

6.重結(jié)晶操作的關(guān)鍵步驟是什么？

7.過濾方式有幾種？怎樣選用？

8.活性炭脫色在什么溶劑中效率最高？為什么加入活性炭時要求溶液不能

太熱？

9.試述有機(jī)溶劑和溶液的一般濃縮方式。

10.在水與親脂性有機(jī)溶劑萃取時，為什么樣品中不能有醇，體會乙醇總提

取液濃縮至無醇味一句的意義。

七、參考文獻(xiàn)

1.上海藥物研究所；中草藥有效成分的提取和分離。

2.中國醫(yī)科院藥物研究所：中草藥有效成分的研究（第一分冊）。

3.藥學(xué)雜志（日）73：100；1953

74：379；1954

76：323；1956

83：988；1963

4.中草藥通訊2：6；1974

5.中藥材2：；1974

實(shí)驗(yàn)三槐花米黃酮首元的提制和鑒定

槐花米系豆科槐屬植物SophorajaponicaL.的花蕾。

歷來用作止血藥物治療痔瘡、子宮出血、吐血、鼻血等癥，其主要化學(xué)成分

為蘆?。ㄒ喾Q蕓香昔Rutin）,含量可高達(dá)23.5%。藥理證明蘆丁有調(diào)節(jié)毛細(xì)血管

滲透作用，臨床上用作毛細(xì)血管性止血藥，作為高血壓癥的輔助用藥。

蘆丁廣泛存在于植物中?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含有蘆丁的植物達(dá)70種以上。

由槐米提取蘆丁的方法有水或醇浸取法，熱、冷堿浸取酸沉淀法，每法各有

優(yōu)缺點(diǎn)。前者所用時間長，后者有一定水解產(chǎn)物存在。為克服這些缺點(diǎn)，目前已

有超聲提取的新技術(shù)，利用強(qiáng)力超聲波發(fā)生“空化”現(xiàn)象瞬間所產(chǎn)生的強(qiáng)大沖擊

力，使藥料組織中的分子在不破壞結(jié)構(gòu)的情況下，更快的與組織剝離，繼而分散

溶解在溶劑中，從而提高溶出的速度和溶出率。

本實(shí)驗(yàn)的提取部分用超場提取新技術(shù)和傳統(tǒng)的水煎煮提取兩種方法進(jìn)行提

取并對提取效率。

一、主要黃酮類成分的物理性質(zhì)

1.蕓香昔（Rutin）

淡黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)：含三分子結(jié)晶水物174?178℃,無水物為188℃。

溶解度：

\\溶劑

水MeOHEtOH口比咤

冷0.00131.00.368.5

執(zhí)八、、0.5511.23.5易溶

不溶于乙醛、氯仿、石油酸、乙酸乙酯、丙酮等溶劑。易溶于堿液中呈黃色,

酸化后復(fù)析出?？扇苡跐饬蛩岷蜐恹}酸呈棕黃色。加水稀釋后又析出。

2.榔皮素（quercetin）

黃色結(jié)晶。熔點(diǎn)：含兩分子結(jié)晶水物313?4℃。無水物316℃。

溶解度：乙醇1：290,無水乙醇1：23（沸時）?？扇苡贛eOH、EtOH、冰

HAc、毗咤、丙酮等溶劑。不溶于水、乙醛、苯、氯仿、石油酸。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.通過兩種提取蘆丁方法的對比，了解超聲提取的新技術(shù)。

2.了解黃酮類化合物的一般性質(zhì)。

3.學(xué)習(xí)聚酰胺TLC法在黃酮類化合物中的應(yīng)用。

4.掌握由黃酮背水解制取黃酮類首元的方法。

5.通過測定蘆丁棚皮素的紫外光譜，進(jìn)一步了解如何利用紫外光譜對黃酮

類化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)測定。

三、實(shí)驗(yàn)原理

1.利用蘆丁可溶于熱水，難溶于冷水及易溶堿水、難溶難水的性質(zhì)進(jìn)行提

取。

2.黃酮甘可通過酸水解，得到昔元及糖，并可通過TLC、PC及乙?；?/p>

制備進(jìn)行鑒識。

3.不同類酮類化合物對紫外光有特定吸收，可利用此特點(diǎn)對其進(jìn)行定性、

定量測定。

4.本實(shí)驗(yàn)涉及的知識點(diǎn)：超聲提取、重結(jié)晶、聚酰胺色譜、水解法測定昔

的結(jié)構(gòu)等。

四、實(shí)驗(yàn)流程

槐米研碎

加飽和石灰水，調(diào)pHlO-11浸潤

超聲30min（保持pH10-ll）二次

1過濾

藥渣（棄去）合并濾液

加鹽酸調(diào)至中性，適當(dāng)濃縮

、,調(diào)pH4-5,放置，抽濾

沉淀（蘆丁粗品）濾液（棄去）

水精制

結(jié)晶（蘆丁水精制品）

五、實(shí)驗(yàn)方法

1.蘆丁的提取

稱取槐花米30g,研碎后投入70℃石灰水中，迅速攪拌均勻，調(diào)控PH10?11,

浸潤20min,然后超聲提取30min（保持PH不變）二次，合并過濾液，以鹽酸

酸化至PH4?5,放置，濾取沉淀即得蘆丁粗品。

2.蘆丁的精制

上述沉淀稱重后（濕品）加入30?40倍量的熱水溶解，趁熱過濾，放冷析出

結(jié)晶、過濾、結(jié)晶自然干燥（或在紅外燈下干燥），得蘆丁精品。

再取1g蘆丁水精制品用MeOH重結(jié)晶（1：10?15）得蘆丁精品。

3.蘆丁的水解

稱取蘆丁水精制品1g,置250nli圓底燒瓶中加1%H2so/OOml直火回流

30min（注意觀察現(xiàn)象）。放冷過濾（濾液留作糖的檢識）。沉淀物為蘆丁首元一

一棚皮素的粗品。用甲醇重結(jié)晶。干燥稱重，得榔皮素精品。

4.糖的檢識

取蘆丁水解后的濾液20ml。加Ba（OH）2＞溶液（或固體BaCCh）中和至

中性，不斷攪拌下進(jìn)行。濾去白色的BaSO4沉淀。濾液濃縮至2?3ml作紙層析

的樣品溶液。

條件：對照品：鼠李糖、葡萄糖

展開劑：n—BuOH—HAc—H2O（4：1：5）上層液

顯色劑：苯胺——鄰苯二甲酸鹽試劑，噴后在105℃加熱5-10'。

5.蘆丁及棚皮素的聚酰胺層析

樣品：1%蘆丁、棚皮素甲醇液

展開劑：80%乙醇

顯色方法：用濃氨水或l%AlCb醇溶液顯色后，日光及熒光燈下觀察。

6.榭皮素乙酰化物的制備及熔點(diǎn)測定

稱取精制榔皮素150mg置25ml三角瓶中。加10ml醋酎和一滴濃H2s。4振

搖，完全溶解后放置24hr,傾入60ml冷水中，不斷攪拌，至油滴消失，則板出

白色沉淀，濾取沉淀并洗滌，以95%乙醇重結(jié)晶。得柳皮素五乙?；锏陌咨Y(jié)

晶。mp.193℃0

7.蘆丁及首元的定性反應(yīng)

A樣品制備：取蘆丁及棚皮素精制品少許用MeOH溶解。

B定性試驗(yàn)：取上述兩試液1ml分別量小試管中，按下列方法進(jìn)行試驗(yàn)。比

較昔與昔元的反應(yīng)情況。

①M(fèi)olish反應(yīng)

加10%a—蔡酚溶液1ml,振搖后斜置試管。沿管壁滴加0.5ml濃H2s。4靜

置觀察液面交界處顏色變化。

②鹽酸鋅粉（Mg粉）

蘆?。ㄅ锲に兀┓謩e于2支試管中加濃HCL再各加入Mg粉和鋅粉，觀察

顏色變化。

③FeCb反應(yīng)

分別加FeCl3醇溶液1—2滴，觀察顏色。

④Mg（Ac）2紙片反應(yīng)

取三張濾紙條，分別滴2滴蘆丁，榔皮素甲醇溶液，然后各加1%Mg（Ac）2

甲醇溶液2滴。于紫外燈下觀察熒光變化。

⑤AlCb紙片反應(yīng)

2條紙片上分別滴加蘆丁、榔皮素后，各加l%AlCb乙醇溶液2滴，紫外燈

下觀察熒光變化。

⑥錯鹽一一檸檬酸反應(yīng)

分別加入2%ZrOCb甲醇溶液3?4滴，觀察顏色，然后加入2%檸檬酸甲槨溶

液3?4滴，觀察顏色。

8.棚皮素的堿降解

稱取棚皮素50mg,置50ml磨口三角瓶中，依次加入lOmlH?。及5gKOH。

直火回流4?5hr,反應(yīng)液用6NHCL調(diào)PH2?3。用乙醛提取三次（共約10ml左

右），分取乙醛層，水洗至中性，回收乙醛，殘渣做TLC。檢查降解結(jié)果。

TLC條件

吸附劑：硅膠G-CMC

展開劑：CHCb—Me2co—冰HAc（8：2：0.5）

對照品：原兒茶酸、間苯三酚

顯色劑：三氯化鐵一鐵氟化鉀試劑

9.蘆丁及棚皮素紫外光譜測定

（1）試液配制

A無水甲醇：用分析純甲醇加入10%氧化鈣放置24hr,然后蒸儲，即得。

B甲醇鈉溶液：取0.25g金屬鈉切碎，小心加入10ml無水甲醇（此液置玻璃

瓶中，用橡皮塞密封）。

CAlCb取1g無水AlCb（呈黃綠色）小心加入甲醇20ml,放置24hr,全溶

即得。

D醋酸納：采用試劑級無水粉末醋酸鈉。

E硼酸飽和溶液：將試劑級無水硼酸加入適量無水甲醇制成飽和溶液。

（上述各溶液可貯存6個月）

（2）測定方法

精密稱取蘆丁、榔皮素各10mg分別用甲醇溶解，并稀釋至100ml從中吸取

5ml,置50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度（20pig/ml）。

A樣品甲醇溶液光譜

取樣品液置石英杯中，在200?400nm內(nèi)進(jìn)行掃描，重復(fù)操作一次，觀察紫外

光譜。

B甲醇鈉光譜

取樣品液置石英杯中，加入甲醇鈉溶液3滴，立即測定，放置5,后再測一次。

CAlCb光譜

在盛有樣品液的石英杯中，滴入6滴AlCb溶液，放置1'后測定，然后加入

3滴HC1溶液（HC1：HOI：1）,再進(jìn)行測定。

DNaAc光譜

取樣品液約3mL加入過量的無水NaAc固體，搖勻（杯底剩有約2mm厚的

NaAc）,加入NaAc后2,進(jìn)行測定。5?10,后再測一次。

ENaAc/H3BO3光譜

方法I：1、在測定用的盛有檢品及NaAc液的石英杯中加入足夠量的無水硼

酸粉末使成飽和液進(jìn)行測定（本法適用于在加入NaAc5,后無分解現(xiàn)象的樣品）。

方法H：于樣品液（約3ml）中加入5滴H3BO3溶液，然后迅速加入無水

NaAc粉末飽和，立即測定。

六、思考題

1.為什么必須熱水提??？水提取多用煎煮法而不用回流提取法，為什么？

2.一般提取液需經(jīng)適當(dāng)濃縮才可析出結(jié)晶，為什么蘆丁未經(jīng)濃縮就析出結(jié)

晶？

3.一般需經(jīng)分離凈化才能得到化合物粗品，為什么蘆丁未經(jīng)這些處理就得

到了粗品？

4.酸水解常用什么酸，為什么用H2so4比用HC1水解后處理更方便。

5.為什么定性反應(yīng)有的在試管中做，有的在紙片上做。

6.當(dāng)反應(yīng)試劑組成是2個以上時，常需考慮試劑的加入順序，試分析鹽酸

一鎂粉反應(yīng)。

7.在本實(shí)驗(yàn)中各項檢識（包括顯色反應(yīng)、降解反應(yīng)、?；磻?yīng)等）的原理

是什么？寫出棚皮素降解反應(yīng)的主要產(chǎn)物。

8.制備棚皮素的乙酰化物為何要加一滴濃H2so4?

9.本實(shí)驗(yàn)中各種層析原理是什么？解釋化合物結(jié)構(gòu)與Rf值的關(guān)系。

10.黃酮類化合物有哪些提取方法？蘆丁的提取還可以用什么方法？超聲提

取有何優(yōu)點(diǎn)？

n.試討論昔類成分的鑒定程序，并分析示教所做的紫外光譜圖。

七、主要參考文獻(xiàn)

1.上海藥物研究所：中草藥有效成分的提取和分離。

2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所：中草藥有效成分的研究（第一分冊）。

3.藥學(xué)雜志（日）72：333：1952

79：757：1959

76：1210：1956

4.黃酮體化合物鑒定手冊。

5.AmericanpharmaceuticalJournal

41：582：1952

6.中草藥28：（2）：881997

實(shí)驗(yàn)四穿心蓮內(nèi)酯類成分的提制和鑒定

穿心蓮為爵床科植物AndrographisPaniculataNess的地上部分，又名一見喜

或欖核蓮，臨床用作苦補(bǔ)脾胃及抗菌消炎藥，治療菌痢、流感、上呼吸道感染及

鉤端螺旋體均有好的療效。已經(jīng)證實(shí)其有效成分是二菇內(nèi)酯類化合物。

一、主要已知成分的物理性質(zhì)

1.穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide,穿心蓮乙素）