敗醬復(fù)方對(duì)混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治療作用

1/1敗醬復(fù)方對(duì)混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治療作用敗醬復(fù)方對(duì)混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治療作用【關(guān)鍵詞】敗醬摘要：

目的：

研究敗醬復(fù)方對(duì)混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治療作用，并初步探討其作用機(jī)制。

方法：

采用混合菌液注入劃傷的子宮內(nèi)造成大鼠慢性盆腔炎，將60只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為6組：

假手術(shù)組、模型組、陽性藥組和敗醬復(fù)方高、中、低劑量組，每組10只，造模后2d開始ig給藥，連續(xù)21d。

檢測血液流變學(xué)、免疫學(xué)指標(biāo)及病理學(xué)形態(tài)。

結(jié)果：

模型組大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積顯著升高，脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)、血清IL2降低，IL6升高；敗醬復(fù)方(ig,1.5、30、60g#12539;kg-1#12539;d-1)可不同程度改善上述指標(biāo)；組織形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)敗醬復(fù)方給藥組大鼠慢性盆腔炎病理改變明顯減輕。

結(jié)論：

敗醬復(fù)方對(duì)混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎有顯著的治療作用，其作用機(jī)制可能與改善血液循環(huán)和調(diào)節(jié)免疫功能有關(guān)。

關(guān)鍵詞：

敗醬復(fù)方；慢性盆腔炎；血液流變學(xué)；免疫學(xué)；病理形態(tài)學(xué)慢性盆腔炎(chronicpelvicinflammatorydisease,CPID)是婦科常見多發(fā)病，目前西醫(yī)療法以抗生素和皮質(zhì)激素為主，對(duì)于改善癥狀有一定的療效，但有許多不良反應(yīng)，且很難消除病因［1］。

中醫(yī)常采用活血化瘀、清熱利濕、溫經(jīng)散寒和理氣止痛等方法，往往有較好的療效。

敗醬復(fù)方是結(jié)合中醫(yī)理論研制的復(fù)方中藥制劑，多年臨床實(shí)踐表明，該藥對(duì)診斷明確的慢性盆腔炎患者有較好的療效，但作用機(jī)制尚不明確。

本實(shí)驗(yàn)采用混合菌液致大鼠慢性盆腔炎模型，觀察該復(fù)方對(duì)慢性盆腔炎的治療作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了探討。

1實(shí)驗(yàn)材料11動(dòng)物和儀器雌性Wistar大鼠60只，8周齡，體重20020g，由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)SYXK(鄂)2004004。

StatFax2100酶聯(lián)免疫檢測儀為美國Awareness公司產(chǎn)品，YDAIV(A)型全自動(dòng)血液粘度儀為北京宏潤達(dá)公司產(chǎn)品，超凈工作臺(tái)為蘇州凈化公司產(chǎn)品。

12藥品、試劑及菌種敗醬復(fù)方由敗醬草、連翹、苦參、赤芍、黃柏、丹參、蒲公英和甘草等組成，上述藥物由中國科學(xué)院武漢植物研究所江明喜研究員鑒定。

用適量冷水浸泡30分鐘，武火急煎10分鐘，再用文火慢煎20分鐘即可，由武漢大學(xué)藥物非臨床研究中心制備。

婦科千金片，規(guī)格為032g/片，含生藥34g/片，湖南株洲制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)200407077。

高效植物凝集素(PHA)為暨南大學(xué)暨東生物工程研究所產(chǎn)品；IL2、IL6試劑盒由深圳晶美生物試劑有限公司提供；四甲基偶氮唑鹽(MTT)購自Sigma公司；RPMI1640培養(yǎng)液和小牛血清購自GIBCO公司。

菌種：

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌由武漢大學(xué)中南醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床分離并保種，以2∶1∶1的比例溶于無菌生理鹽水配成濃度為3109ml-1的混合細(xì)菌懸液。

2結(jié)果21模型的建立［2］用03%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠(50mg#12539;kg-1)，無菌條件下于大鼠下腹部正中切口0.8~1cm，暴露并固定子宮，用注射器機(jī)械損傷子宮內(nèi)膜組織，注入0.2ml混合細(xì)菌懸液至子宮雙側(cè)內(nèi)，縫合切口，恢復(fù)飲水，正常清潔飼養(yǎng)。

假手術(shù)組操作基本同模型組，但子宮內(nèi)未注射混合菌液。

22分組及給藥將60只大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，于造模后2d開始ig給藥，連續(xù)21天。

敗醬復(fù)方低、中、高劑量組分別ig敗醬復(fù)方15、30、60g#12539;kg-1#12539;d-1；陽性藥組ig婦科千金片2.8g#12539;kg-1#12539;d-1；假手術(shù)組及模型組ig等體積生理鹽水，各組給藥容積均為15ml#12539;kg-1。

23觀察指標(biāo)及測定方法231血液流變學(xué)指標(biāo)末次給藥12小時(shí)后，各組大鼠麻醉后頸總動(dòng)脈抽血測定全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積。

232免疫學(xué)指標(biāo)①IL2和IL6測定取大鼠肝素抗凝血，離心分離血漿，按試劑盒說明書采用雙抗體夾心法測定IL2和IL6濃度。

②脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)測定于給藥30d后，無菌條件下取脾，按文獻(xiàn)［3］方法，用RPMI1640培養(yǎng)液制作單細(xì)胞懸液，并用TrisNH4Cl破壞紅細(xì)胞，鏡檢活細(xì)胞數(shù)gt;90%后，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為2106#12539;L-1，將細(xì)胞加入16孔培養(yǎng)板中，每樣品2孔，每孔1ml，其中一孔加入細(xì)胞周期分裂素(PHA，5mg#12539;L-1)，另一孔作對(duì)照。

置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)68h后，將細(xì)胞移入40孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液100l，并加入5%MTT溶液10l，繼續(xù)培養(yǎng)4h，每孔加100l酸性異丙醇充分混勻，終止反應(yīng)，用酶聯(lián)免疫檢測儀作比色測定，計(jì)算脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)(脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)=加PHA淋巴細(xì)胞OD值／未加PHA淋巴細(xì)胞OD值)。

233子宮病理形態(tài)學(xué)觀察取大鼠雙側(cè)子宮稱重后，先肉眼觀察其炎癥反應(yīng)及周圍粘連情況，然后將子宮置10%福爾馬林溶液中固定，切片，HE染色，于光學(xué)顯微鏡下鏡檢，攝片。

病理觀察指標(biāo)及積分標(biāo)準(zhǔn)為：

①宮腔粘連閉塞或擴(kuò)張：

-無病變；+lt;1/3病變；++1/3~2/3病變；+++2/3以上病變。

②腔壁結(jié)構(gòu)病變：

-各層結(jié)構(gòu)正常；+粘膜固有層腺體結(jié)構(gòu)消失；++肌層與粘膜層分界不清；+++分層結(jié)構(gòu)不清。

③上皮細(xì)胞變性壞死：

-單柱狀上皮；+上皮細(xì)胞扁平或脫落lt;1/3；++上皮細(xì)胞扁平或脫落1/3~2/3病變；+++全層上皮細(xì)胞變性壞死。

④慢性炎細(xì)胞浸潤：

-無慢性炎細(xì)胞浸潤；+小數(shù)散在或灶性且僅在粘膜固有層內(nèi)；++散在或灶性但深入肌層；+++多數(shù)散在或?qū)訝罱櫜⒗奂叭珜印?/p>

⑤內(nèi)膜充血水腫：

-無內(nèi)膜充血水腫；+固有膜輕微充血水腫；++明顯充血水腫；+++全層充血水腫。

24數(shù)據(jù)處理資料以均值標(biāo)準(zhǔn)差(3實(shí)驗(yàn)結(jié)果31對(duì)血液流變學(xué)指標(biāo)的影響由表1可見，模型組與假手術(shù)組比較全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積均顯著升高；敗醬復(fù)方給藥組全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積有顯著改善。

表1敗醬復(fù)方對(duì)血液流變學(xué)各指標(biāo)的影響(略）注：

與假手術(shù)組相比，*Plt;0.01；與模型組比較，#Plt;0.05,Plt;0.01。

32對(duì)免疫學(xué)指標(biāo)的影響由表2可見，敗醬復(fù)方高、中、低劑量組脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)和血清IL2明顯升高，IL6顯著降低。

表2敗醬復(fù)方對(duì)免疫學(xué)指標(biāo)的影響(略）注：

與假手術(shù)組相比，*Plt;0.01；與模型組比較#Plt;0.05,Plt;0.01。

33對(duì)大鼠慢性盆腔炎組織形態(tài)學(xué)的影響假手術(shù)組：

肉眼觀察子宮顏色、硬度正常，漿膜面未見腫脹、充血。

鏡下宮壁各層結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)膜表面上皮偶見輕度增生，腺體未見明顯病變，間質(zhì)無炎癥反應(yīng)。

模型組：

肉眼觀察大部分子宮顏色暗紅，漿膜面明顯腫脹、充血，子宮重量增加，部分動(dòng)物盆腔粘連。

鏡下大鼠子宮粘連閉塞或擴(kuò)張，子宮壁完全被破壞、壞死，已失去原有正常形態(tài)，結(jié)構(gòu)紊亂，模糊不清，代之以多量成纖維細(xì)胞增生，以及炎性細(xì)胞浸潤，以中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤為主；粘膜上皮細(xì)胞部分變性壞死脫落，各層組織壞死，形成無結(jié)構(gòu)形態(tài)；子宮腺體上皮壞死。

敗醬復(fù)方組：

子宮腫脹、充血等有不同程度減輕，少數(shù)子宮腺體腔閉塞，固有膜、肌層有輕度的炎性細(xì)胞浸潤，中、高劑量組成纖維細(xì)胞增生不明顯，其形態(tài)結(jié)構(gòu)較接近正常。

陽性藥組：

子宮腫脹、充血也有減輕，宮壁各層結(jié)構(gòu)尚清晰。

鏡下可見炎癥細(xì)胞浸潤及子宮內(nèi)膜腺上皮一定程度增生，成纖維細(xì)胞增生不明顯，個(gè)別動(dòng)物子宮內(nèi)膜炎癥明顯。

表3敗醬復(fù)方對(duì)混合菌液引起的慢性盆腔炎大鼠子宮病理變化的影響(略)注：

與假手術(shù)組相比，*Plt;0.01；與模型組比較#Plt;0.05,Plt;0.01。

4討論對(duì)于慢性盆腔炎動(dòng)物模型的建立，國內(nèi)學(xué)者［4］較早采用化學(xué)性燒傷致炎的方法造成大鼠子宮內(nèi)膜粘連模型，但它在感染方式、傳播途徑和病變特點(diǎn)上與人盆腔炎有較大的差別。

所以，我們根據(jù)文獻(xiàn)［2］采用混合菌液加機(jī)械損傷的方法造成更貼近于人類盆腔炎的病理模型，觀察了敗醬復(fù)方的治療作用。

結(jié)果顯示，敗醬復(fù)方給藥組子宮病變較模型組明顯減輕，表明敗醬復(fù)方對(duì)混合菌液所致慢性盆腔炎有明顯的治療作用。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢性盆腔炎病機(jī)主要為瘀、熱、濕三者蓄積胞宮，導(dǎo)致沖任氣血運(yùn)行不暢，為此我們選擇了血液流變學(xué)指標(biāo)進(jìn)行藥物療效的觀察。

結(jié)果顯示，模型組大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積顯著升高，敗醬復(fù)方可不同程度改善上述指標(biāo)。

這可能是由于本方中含有丹參、赤芍、蒲公英、連翹等活血化瘀成份，可改善慢性盆腔炎大鼠的血液循環(huán)，有利于炎癥細(xì)胞的吸收及子宮內(nèi)膜的修復(fù)。

文獻(xiàn)還報(bào)道，敗醬草能增強(qiáng)網(wǎng)狀細(xì)胞和白細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)抗體形成及提高血清溶菌酶的水平，從而達(dá)到抗菌消炎的目的［5］。

IL2是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中最重要的細(xì)胞因子之一，可通過促進(jìn)B細(xì)胞分裂、增殖以及NK細(xì)胞的活性作用，提高機(jī)體的免疫功能［6］。

IL6與其受體系統(tǒng)結(jié)合可促使分化成熟的B細(xì)胞分泌抗體，促進(jìn)TC、TD細(xì)胞增殖分化等生物學(xué)效應(yīng)，過量IL6的產(chǎn)生，會(huì)導(dǎo)致過于劇烈的免疫反應(yīng)，對(duì)機(jī)體造成損害［7］。

本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠腺淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)、血清IL2降低，IL6升高，敗醬復(fù)方各劑量組均可明顯提高脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)、升高IL2，降低IL6，表明慢性盆腔炎的發(fā)病與機(jī)體免疫功能低下或紊亂有關(guān)。

增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫功能，使紊亂的免疫功能恢復(fù)正?？赡苁菙♂u復(fù)方的作用機(jī)制之一。

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