基于mRNA技術(shù)疫苗生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查手冊(cè)

—一、目的為指導(dǎo)檢查員對(duì)基于mRNA技術(shù)疫苗（以下簡(jiǎn)稱mRNA疫苗）生產(chǎn)企業(yè)開展生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查，保障mRNA疫苗生產(chǎn)過程穩(wěn)定可控、產(chǎn)品質(zhì)量安全有效，以風(fēng)險(xiǎn)控制為目的，以《中華人民共和國(guó)藥品管理法》《疫苗管理法》及相關(guān)法規(guī)為依據(jù)，制定本檢查手冊(cè)，作為mRNA疫苗生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查基礎(chǔ)性技術(shù)指導(dǎo)文件，提升mRNA疫苗檢查過程中風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別能力。檢查員可參照本手冊(cè)的要求，對(duì)企業(yè)的生產(chǎn)和質(zhì)量管理進(jìn)行檢查。二、適用范圍本手冊(cè)所稱mRNA疫苗系指將外源目的基因序列通過轉(zhuǎn)錄、合成等工藝制備的mRNA通過特定的遞送系統(tǒng)導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞并表達(dá)目的蛋白、刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫學(xué)反應(yīng)，從而使機(jī)體獲得免疫保護(hù)的一種核酸制劑。本手冊(cè)適用于北京市、天津市、河北省內(nèi)mRNA疫苗的GMP檢查，包括從生產(chǎn)用菌毒種管理、原輔材料管理、質(zhì)粒制備、質(zhì)粒貯存及運(yùn)輸、脂質(zhì)體包裹、原液生產(chǎn)、制劑生產(chǎn)、產(chǎn)品質(zhì)量控制、成品入庫(kù)及留樣全過程。三、法規(guī)依據(jù)1.《中華人民共和國(guó)藥品管理法》2.《中華人民共和國(guó)疫苗管理法》3.《中華人民共和國(guó)生物安全法》4.《中華人民共和國(guó)藥品管理法實(shí)施條例》5.《疫苗流通和預(yù)防接種管理?xiàng)l例》6.《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》7.《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》8.《藥品生產(chǎn)監(jiān)督管理辦法》9.《藥品注冊(cè)管理辦法》10.《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其附錄11.《生物制品批簽發(fā)管理辦法》12.《藥品記錄與數(shù)據(jù)管理要求（試行）》13.《藥品召回管理辦法》14.《疫苗生產(chǎn)流通管理規(guī)定》15.《藥品上市后變更管理辦法》16.《疫苗儲(chǔ)存和運(yùn)輸管理規(guī)范》17.《藥品說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》18.《藥品注冊(cè)現(xiàn)場(chǎng)核查管理規(guī)定》19.《藥品不良反應(yīng)報(bào)告和監(jiān)測(cè)管理辦法》20.《藥品生產(chǎn)企業(yè)現(xiàn)場(chǎng)檢查風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定原則》21.《食品藥品監(jiān)管總局國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)疫苗流通監(jiān)管促進(jìn)疫苗供應(yīng)工作的通知》（食藥監(jiān)藥化監(jiān)〔2017〕76號(hào)）22.《國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)疫苗生產(chǎn)企業(yè)派駐檢查工作的通知》（國(guó)藥監(jiān)藥管〔2023〕15號(hào)）23.《河北省藥品上市后變更管理辦法實(shí)施意見（試行）》24.《已上市生物制品藥學(xué)變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》25.《新型冠狀病毒預(yù)防用mRNA疫苗藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》26.《藥品共線生產(chǎn)質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理指南》四、mRNA疫苗工藝概述mRNA疫苗是將外源目的基因序列通過轉(zhuǎn)錄、合成等工藝制備的mRNA通過特定的遞送系統(tǒng)導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞并表達(dá)目的蛋白、刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫學(xué)反應(yīng)，從而使機(jī)體獲得免疫保護(hù)的一種核酸制劑。由于企業(yè)產(chǎn)品管線差異，產(chǎn)品工藝步驟可能會(huì)有所不同，mRNA疫苗生產(chǎn)一般包括轉(zhuǎn)錄模板質(zhì)粒種子庫(kù)的建立和檢定、原液生產(chǎn)、制劑生產(chǎn)、質(zhì)量檢驗(yàn)等過程。其中，原液生產(chǎn)包括模板生產(chǎn)和mRNA制備，涉及種子復(fù)蘇、擴(kuò)增、規(guī)模培養(yǎng)、菌泥收集、菌泥裂解、澄清過濾、質(zhì)粒純化、質(zhì)粒線性化、模板純化、轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（可能包含加帽及加尾反應(yīng)）和mRNA純化等工序。制劑生產(chǎn)包括mRNA疫苗半成品配制、灌裝（可能包含凍干）和包裝。（一）mRNA疫苗基本工藝簡(jiǎn)介以利用大腸桿菌（E.coli）擴(kuò)增目的基因模板工藝為例，mRNA疫苗生產(chǎn)工藝大致為：1.制備環(huán)狀質(zhì)粒：將含目的DNA序列的質(zhì)粒的菌種復(fù)蘇后，經(jīng)搖瓶，種子罐和發(fā)酵罐擴(kuò)增培養(yǎng)，離心收獲菌泥。將發(fā)酵收獲的菌體，經(jīng)過堿裂解、過濾、凝膠層析去除RNA和宿主殘留蛋白等相對(duì)較小的雜質(zhì)、親和層析去除開環(huán)質(zhì)粒、陰離子交換層析去除內(nèi)毒素、過濾除菌得到環(huán)狀質(zhì)粒中間體。大致步驟舉例如下：圖1：環(huán)狀質(zhì)粒制備流程圖2.制備線性化質(zhì)粒：將環(huán)狀質(zhì)粒中間體經(jīng)過酶切、離子交換層析、超濾濃縮換液、除菌過濾分裝，得線性化質(zhì)粒中間體，最后分裝凍存。大致步驟舉例如下：圖2：線性化質(zhì)粒制備流程圖3.mRNA疫苗原液生產(chǎn)：以線性化質(zhì)粒中間體為模板，經(jīng)IVT反應(yīng)及純化工藝后制得mRNA原液。IVT反應(yīng)體系通常采用含有核苷酸三磷酸底物、聚合酶輔因子、含有多胺和抗氧化劑的pH緩沖液，通過RNA聚合酶催化，以前工序制備的DNA為模板來合成目標(biāo)mRNA。轉(zhuǎn)錄后的mRNA需要經(jīng)過一系列修飾才能構(gòu)成完整分子，在5＇端形成一個(gè)cap結(jié)構(gòu)，在3＇端形成PolyA尾結(jié)構(gòu)。cap結(jié)構(gòu)和PolyA尾結(jié)構(gòu)可以抑制mRNA被降解，同時(shí)增強(qiáng)翻譯效率。在體外轉(zhuǎn)錄過程中可以將合成好的5＇cap結(jié)構(gòu)添加到特定的轉(zhuǎn)錄起始序列，直接轉(zhuǎn)錄出具有天然cap1結(jié)構(gòu)的mRNA。mRNA的加帽工藝有共轉(zhuǎn)錄加帽和轉(zhuǎn)錄后加帽2種選擇。共轉(zhuǎn)錄加帽是通過向IVT反應(yīng)體系中加入7-甲基鳥嘌呤二核苷酸、抗反向帽類似物或三核苷酸帽類似物在反應(yīng)過程中向mRNA的5＇端添加Cap結(jié)構(gòu)。轉(zhuǎn)錄后加帽是在IVT反應(yīng)結(jié)束后使用牛痘加帽酶反應(yīng)體系對(duì)mRNA進(jìn)行加帽。以共轉(zhuǎn)錄加帽為例，大致工藝步驟如下：圖3：原液制備流程圖mRNA疫苗原液生產(chǎn)流程圖4.mRNA疫苗制劑生產(chǎn)mRNA疫苗需要穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)被翻譯成蛋白質(zhì)而發(fā)揮其免疫作用，但mRNA是帶負(fù)電荷的親水性大分子，其自主跨膜能力有限且易被體內(nèi)RNase降解。當(dāng)前有多種方式用于mRNA的遞送，如電穿孔法、魚精蛋白、樹狀聚合物、陽(yáng)離子膠束和納米脂質(zhì)顆粒（LNP）等，其中LNP是目前最熱門的遞送技術(shù)。LNP的制備方法有擠出法、薄膜水化法、高壓均質(zhì)法、微流控技術(shù)等，其中微流控技術(shù)應(yīng)用最為廣泛。LNP在包封時(shí)利用微流控技術(shù)讓含mRNA水相和脂質(zhì)體有機(jī)相按照一定的比例和流速混合，得到LNP-mRNA顆粒。包封后的LNP-mRNA經(jīng)透析濃縮、過濾等步驟去除細(xì)菌、裸mRNA、空載LNP和乙醇等物質(zhì)，再調(diào)節(jié)pH，獲得mRNA制劑原液。mRNA制劑原液按照無菌注射劑產(chǎn)品分裝要求進(jìn)行灌裝，從而得到了用于人體的mRNA疫苗。以LNP-mRNA工藝為例，大致生產(chǎn)步驟如下：圖4：mRNA疫苗制劑生產(chǎn)流程圖（二）mRNA疫苗特點(diǎn)開發(fā)速度快是mRNA疫苗技術(shù)最顯著的優(yōu)勢(shì)。通過研究病原體的基因序列，可以快速地鎖定潛在抗原編碼片段，將其序列融入DNA模板并以此合成相應(yīng)的mRNA后，加以脂質(zhì)納米包封形成疫苗制劑即可遞送至人體。同時(shí)，mRNA技術(shù)具備一定的通用性，理論上可以利用相似過程開發(fā)各類所需要的疫苗。此外，mRNA疫苗還具有以下特點(diǎn)：（1）能導(dǎo)入細(xì)胞，在體內(nèi)表達(dá)相應(yīng)的抗原蛋白，減少了體外蛋白表達(dá)、純化過程；（2）能夠刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生體液免疫和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答，發(fā)揮相應(yīng)的免疫預(yù)防和/或免疫治療作用；（3）其遞送系統(tǒng)具有類似佐劑的部分特性，能夠通過刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生多種細(xì)胞因子等方式增強(qiáng)機(jī)體免疫反應(yīng)能力或改變免疫應(yīng)答類型；（4）由于mRNA的降解是通過細(xì)胞正常代謝完成，降低了因感染或整合誘發(fā)基因突變的潛在風(fēng)險(xiǎn)。盡管mRNA疫苗具有多重優(yōu)勢(shì)，但尚存在諸多風(fēng)險(xiǎn)因素，如mRNA本身具有的潛在免疫原性、遞送系統(tǒng)（如脂質(zhì)納米顆粒）的穩(wěn)定性、納米劑型安全性及所使用陽(yáng)離子聚合物/脂質(zhì)體安全性、遞送靶向性及遞送效力等問題，都會(huì)影響疫苗的有效性、安全性和質(zhì)量可控性，也是我們?cè)谏a(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查中需要重點(diǎn)關(guān)注的問題。五、mRNA疫苗生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查要點(diǎn)（一）機(jī)構(gòu)與人員企業(yè)應(yīng)當(dāng)建立與藥品生產(chǎn)相適應(yīng)的管理機(jī)構(gòu)，并配備足夠的、符合要求的人員，為實(shí)現(xiàn)質(zhì)量目標(biāo)提供必要的基礎(chǔ)條件。檢查要點(diǎn)包括但不限于：1.機(jī)構(gòu)設(shè)置和人員配備、培訓(xùn)情況：所有人員應(yīng)當(dāng)明確并理解自己的職責(zé)，熟悉與其職責(zé)相關(guān)的要求，并接受必要的培訓(xùn)，培訓(xùn)與所生產(chǎn)品種工藝及崗位操作是否具有針對(duì)性，培訓(xùn)的內(nèi)容能否與崗位的要求相適應(yīng)；2.疫苗生產(chǎn)企業(yè)關(guān)鍵人員的資質(zhì)和實(shí)際履行職責(zé)情況：生產(chǎn)管理負(fù)責(zé)人、質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人和質(zhì)量受權(quán)人是否具有相應(yīng)的專業(yè)知識(shí)（微生物學(xué)、生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、生物制品學(xué)等），是否能夠在生產(chǎn)、質(zhì)量管理中履行職責(zé)；3.關(guān)鍵崗位操作人員如無菌操作崗位操作和記錄的規(guī)范性情況，關(guān)鍵崗位人員轉(zhuǎn)崗程序和培訓(xùn)情況。（二）廠房、設(shè)施與設(shè)備廠房和設(shè)備的設(shè)計(jì)、布局、維護(hù)等需符合既定用途，應(yīng)當(dāng)能夠最大限度地避免污染、交叉污染、混淆和差錯(cuò)，便于清潔、操作和維護(hù)。檢查要點(diǎn)包括但不限于：1.原液生產(chǎn)廠房設(shè)置能否避免污染與交叉污染：生產(chǎn)環(huán)境的空氣潔凈度級(jí)別是否與生產(chǎn)操作相適應(yīng)，生產(chǎn)過程應(yīng)采取密閉系統(tǒng)操作，如不可避免時(shí)應(yīng)采取措施防止微生物、病毒、粒子的擴(kuò)散及污染；其菌種復(fù)蘇、擴(kuò)增、培養(yǎng)、純化過程應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)生物安全法》《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》及生物制品附錄相關(guān)要求；2.共線生產(chǎn)管理應(yīng)符合《中國(guó)藥典》《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其附錄中的相關(guān)規(guī)定。（1）由于生物制品的復(fù)雜性，對(duì)于共線生產(chǎn)品種應(yīng)進(jìn)行充分的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，評(píng)估內(nèi)容應(yīng)包括人流和物流、微生物控制、活性物質(zhì)的理化特性、工藝特點(diǎn)、清潔工藝、環(huán)境監(jiān)測(cè)、控制策略、殘留成分限度檢測(cè)能力等；（2）關(guān)注防止交叉污染的措施（例如采用階段式生產(chǎn)、封閉系統(tǒng)、直接接觸產(chǎn)品的生產(chǎn)工具按品種專用、一次性使用系統(tǒng)等）；如使用傳統(tǒng)的生產(chǎn)系統(tǒng)進(jìn)行多產(chǎn)品共線生產(chǎn)，應(yīng)使用經(jīng)驗(yàn)證的密閉設(shè)備、空間消毒、表面消毒、在線清潔和滅菌及氣流保護(hù)等措施，避免產(chǎn)品的交叉污染；（3）如涉及相同類型產(chǎn)品共線生產(chǎn)，在每一種質(zhì)粒生產(chǎn)結(jié)束后，應(yīng)當(dāng)采取有效的方式對(duì)生產(chǎn)設(shè)備進(jìn)行滅活和清潔。同時(shí)考慮對(duì)可能殘留有質(zhì)粒的生產(chǎn)區(qū)域進(jìn)行滅活（如空間熏蒸）和清潔，基于質(zhì)粒的穩(wěn)定性，應(yīng)當(dāng)采用多種組合的方式進(jìn)行滅活和清潔，并考慮開發(fā)合適的采樣及檢測(cè)方法對(duì)質(zhì)粒的去除效果進(jìn)行確認(rèn)；質(zhì)粒生產(chǎn)中的敞口操作盡可能在生物安全柜、隔離器等設(shè)備保護(hù)下進(jìn)行，避免質(zhì)粒氣溶膠的產(chǎn)生，降低不同質(zhì)粒之間交叉污染的可能性；同時(shí)應(yīng)當(dāng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估對(duì)空調(diào)系統(tǒng)（如風(fēng)管、過濾器等）采取處理措施，如增加過濾器等，降低不同質(zhì)粒之間交叉污染的可能性；3.關(guān)鍵生產(chǎn)區(qū)域及生產(chǎn)設(shè)施設(shè)備的設(shè)計(jì)、使用、監(jiān)控、維護(hù)保養(yǎng)情況，特別是除菌過濾系統(tǒng)設(shè)計(jì)、使用、維護(hù)、完整性檢測(cè)、驗(yàn)證情況等（注意關(guān)注：是否在盡可能臨近灌裝線的位置進(jìn)行最終除菌過濾、除菌過濾驗(yàn)證是否能有效代表實(shí)際除菌過濾工藝、除菌過濾前是否進(jìn)行微生物限度監(jiān)測(cè)等；關(guān)注關(guān)鍵區(qū)域如分裝間及灌裝區(qū)域的氣流流型是否受到區(qū)域內(nèi)設(shè)備布局影響，在線監(jiān)測(cè)設(shè)置能否反映操作影響情況等）；4.關(guān)鍵生產(chǎn)設(shè)備確認(rèn)情況、清潔和維護(hù)保養(yǎng)情況、變更情況，包括但不限于超濾（透析）設(shè)備、純化設(shè)備、酶切設(shè)備、IVT反應(yīng)器、脂質(zhì)體制備系統(tǒng)、滅菌設(shè)備、灌封設(shè)備、包裝貼簽設(shè)備等生產(chǎn)設(shè)備；5.公用系統(tǒng)設(shè)置、確認(rèn)與變更情況，如制藥用水系統(tǒng)、潔凈區(qū)空氣凈化系統(tǒng)、直接接觸產(chǎn)品的工藝用氣系統(tǒng)等關(guān)鍵設(shè)施；6.工藝用水、直接接觸料液的管路、罐體或耗材表面，以及涉及敞口操作工藝環(huán)節(jié)的層流保護(hù)等方面，是否均能夠?qū)撛赗NA酶風(fēng)險(xiǎn)控制在可接受的范圍；7.廠房及設(shè)備表面、員工潔凈服、重復(fù)使用的生產(chǎn)和取樣器具、批記錄等，關(guān)注其清潔驗(yàn)證是否能夠有效保證避免RNA酶污染，使用的清潔劑種類是否在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中考慮了RNA酶相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)等；8.冷藏設(shè)施及冷鏈運(yùn)輸?shù)拇_認(rèn)情況；9.生產(chǎn)和檢驗(yàn)使用的關(guān)鍵衡器、量具、儀表、記錄和控制設(shè)備的校準(zhǔn)情況。（三）物料與產(chǎn)品生產(chǎn)用菌毒種、原輔料應(yīng)符合相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)管理規(guī)定，防止污染、交叉污染、混淆和差錯(cuò)。檢查要點(diǎn)包括但不限于：1.菌毒種管理 菌毒種是指直接用于疫苗制造和檢定的細(xì)菌、病毒、DNA重組工程菌等。菌毒種管理檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）生產(chǎn)和檢定用菌毒種歷史來源清晰、有證明資料；（2）企業(yè)菌種庫(kù)建立情況，應(yīng)在符合GMP條件下建立主種子批和工作種子批；工作種子批的生物學(xué)特性和遺傳學(xué)特性應(yīng)與主種子一致；菌種庫(kù)檢定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，是否符合《中華人民共和國(guó)藥典》的要求；（3）生產(chǎn)用菌毒種的存儲(chǔ)設(shè)備需滿足存儲(chǔ)需要，菌毒種保藏應(yīng)當(dāng)備份，且備份種子批應(yīng)儲(chǔ)存于不同的地點(diǎn)或區(qū)域（至少是不同建筑物）；（4）菌毒種標(biāo)簽上應(yīng)至少標(biāo)明菌毒種編號(hào)、名稱、代次、批號(hào)、制備日期等內(nèi)容；（5）菌毒種存儲(chǔ)區(qū)域應(yīng)當(dāng)建立人員授權(quán)、進(jìn)出登記制度，避免非授權(quán)人員接觸菌毒種；（6）菌毒種應(yīng)在規(guī)定的條件下專用設(shè)備保存，專人負(fù)責(zé)；出入庫(kù)應(yīng)有規(guī)定和記錄；（7）菌毒種儲(chǔ)存溫度，應(yīng)符合特定菌毒種的特征要求。儲(chǔ)存期間，應(yīng)當(dāng)對(duì)儲(chǔ)存條件進(jìn)行監(jiān)控，并應(yīng)當(dāng)具備報(bào)警功能，確保菌毒種儲(chǔ)存條件符合要求；（8）應(yīng)對(duì)菌毒種工作種子批進(jìn)行穩(wěn)定性考察及判斷其代謝穩(wěn)定性/遺傳穩(wěn)定性的評(píng)估方法，及時(shí)了解菌毒種儲(chǔ)存期間的質(zhì)量變化，包括對(duì)菌種庫(kù)復(fù)蘇能力的考察，是否分析菌種儲(chǔ)存期間質(zhì)量變化情況；（9）是否開展種子庫(kù)遺傳穩(wěn)定性分析（序列大小、序列準(zhǔn)確性、質(zhì)粒限制酶切圖譜、質(zhì)?？截悢?shù)）并明確各級(jí)種子庫(kù)的限定傳代代次及依據(jù)；（10）生產(chǎn)、科研及檢定用菌毒種應(yīng)分開存放，不得存放于同一設(shè)備。2.生產(chǎn)用原輔料管理mRNA疫苗生產(chǎn)用原輔料管理應(yīng)符合《中國(guó)藥典》三部“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程”的規(guī)定，對(duì)原輔料進(jìn)行分級(jí)管理。關(guān)注用于轉(zhuǎn)錄的核苷酸和修飾核苷酸、5＇-帽類似物、用于mRNA體外合成大量使用的各種酶（如T7轉(zhuǎn)錄酶、加帽反應(yīng)過程中添加的酶等）和緩沖液、原液生產(chǎn)過程中使用的純化介質(zhì)（層析柱、磁珠、過濾膜）、溶劑等物料管理情況。原輔料檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）供應(yīng)商評(píng)估與審計(jì)情況，供應(yīng)商發(fā)生變更或相關(guān)質(zhì)量事件時(shí)，應(yīng)通過有效方式告知采購(gòu)方；（2）配制培養(yǎng)基、培養(yǎng)液、生產(chǎn)過程中使用的原材料（例如，氨基酸、維生素、牛血清、抗生素、蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽、碳水化合物等）和各種緩沖液應(yīng)符合相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；培養(yǎng)液及生產(chǎn)用緩沖液儲(chǔ)存條件與時(shí)間應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證；（3）生產(chǎn)用一次性耗材的檢查檢驗(yàn)及放行控制情況；（4）原輔材料、中間產(chǎn)品、原液及成品的接收、檢驗(yàn)、留樣、儲(chǔ)存、放行管理，如生產(chǎn)過程中酶的保存及使用情況、中間產(chǎn)品轉(zhuǎn)移場(chǎng)地使用時(shí)運(yùn)輸環(huán)節(jié)驗(yàn)證情況；（5）物料及產(chǎn)品放行程序設(shè)置及執(zhí)行情況；（6）企業(yè)相容性研究情況；（7）成品貯藏和運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)是否進(jìn)行嚴(yán)格管控以確保產(chǎn)品符合貯藏要求；（8）不合格品的處理情況，不予批簽發(fā)或者撤回批簽發(fā)的mRMA疫苗銷毀管理情況等。（四）確認(rèn)與驗(yàn)證企業(yè)的廠房、設(shè)施、設(shè)備和檢驗(yàn)儀器應(yīng)當(dāng)經(jīng)過確認(rèn)，應(yīng)當(dāng)采用經(jīng)過驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝、操作規(guī)程和檢驗(yàn)方法進(jìn)行生產(chǎn)、操作和檢驗(yàn)，并保持持續(xù)的驗(yàn)證狀態(tài)。檢查要點(diǎn)包括但不限于：1.關(guān)鍵質(zhì)量屬性評(píng)估是否充分，關(guān)鍵工藝參數(shù)控制情況；2.關(guān)注工藝驗(yàn)證情況，是否對(duì)關(guān)鍵工藝參數(shù)及重要工藝參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，如菌種培養(yǎng)、各純化工序、體外轉(zhuǎn)錄、脂質(zhì)體包封等工序的工藝驗(yàn)證情況，工藝驗(yàn)證能否滿足各工序工藝控制要求，具體項(xiàng)目可參考生產(chǎn)管理部分；3.驗(yàn)證批批量與商業(yè)化生產(chǎn)批量是否一致，原液、半成品、成品驗(yàn)證批次對(duì)應(yīng)情況；4.驗(yàn)證批批間差異情況，工藝是否穩(wěn)定，能否持續(xù)生產(chǎn)出符合既定用途和注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品；5.中間產(chǎn)品、原液、成品儲(chǔ)存條件、儲(chǔ)存期限的驗(yàn)證情況；6.需特殊管理的原輔材料（如反應(yīng)過程中使用的酶、帽子結(jié)構(gòu)、PolyA尾、NTPs等物料）反復(fù)凍融驗(yàn)證情況（如有）；7.持續(xù)性工藝確認(rèn)情況，是否對(duì)商業(yè)化生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控和趨勢(shì)分析，確保工藝和產(chǎn)品質(zhì)量始終處于受控狀態(tài)。持續(xù)性工藝確認(rèn)范圍和頻率規(guī)定情況，統(tǒng)計(jì)工具使用情況；8.關(guān)鍵生產(chǎn)設(shè)備確認(rèn)情況，包括但不限于生物反應(yīng)器、離心、超濾（透析）設(shè)備、純化設(shè)備、IVT反應(yīng)器、脂質(zhì)體制備系統(tǒng)、滅菌設(shè)備、灌封設(shè)備、包裝貼簽等生產(chǎn)設(shè)備能否滿足工藝控制要求，具體確認(rèn)項(xiàng)目可參考生產(chǎn)管理部分；9.關(guān)鍵設(shè)備的清潔驗(yàn)證，包括但不限于生物反應(yīng)器、離心、超濾（透析）設(shè)備、純化設(shè)備、IVT反應(yīng)器、微流控系統(tǒng)的清潔驗(yàn)證情況，清潔程序設(shè)定、驗(yàn)證及實(shí)際執(zhí)行情況，能否避免污染與交叉污染；關(guān)注其清潔驗(yàn)證中可接受的殘留限度以及清潔方法的合理性和適用性；10.計(jì)算機(jī)化系統(tǒng)驗(yàn)證與使用情況。（五）文件管理文件是質(zhì)量保證系統(tǒng)的基本要素，企業(yè)需有內(nèi)容正確的書面質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、生產(chǎn)處方和工藝規(guī)程、操作規(guī)程以及記錄等文件。檢查要點(diǎn)包括但不限于：1.是否有經(jīng)企業(yè)相關(guān)人員審核、批準(zhǔn)的現(xiàn)行工藝規(guī)程，與注冊(cè)批準(zhǔn)的工藝是否一致，工藝規(guī)程的內(nèi)容是否包括生產(chǎn)處方、生產(chǎn)操作要求及包裝操作要求等內(nèi)容；2.生產(chǎn)用原輔包等物料、中間產(chǎn)品或待包裝產(chǎn)品、成品是否有經(jīng)企業(yè)相關(guān)人員批準(zhǔn)的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；與注冊(cè)批準(zhǔn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否一致；3.各生產(chǎn)或檢驗(yàn)活動(dòng)是否有相應(yīng)的操作規(guī)程，操作規(guī)程是否具有針對(duì)性、能否正確指導(dǎo)生產(chǎn)或檢驗(yàn)操作；4.批生產(chǎn)記錄、批檢驗(yàn)記錄是否依據(jù)現(xiàn)行批準(zhǔn)的工藝規(guī)程和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)內(nèi)容制定，能否詳細(xì)記錄關(guān)鍵操作步驟和關(guān)鍵參數(shù)，所查批生產(chǎn)、批檢驗(yàn)記錄是否符合可溯、清晰、同步、原始、準(zhǔn)確等原則；5.采用信息化手段記錄生產(chǎn)、檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的情況，是否建立了適宜的數(shù)據(jù)及記錄管理體系，能否與紙質(zhì)記錄（如使用）保持一致，且與相關(guān)記錄（設(shè)備日志等輔助記錄）保持一致；是否符合《疫苗生產(chǎn)檢驗(yàn)電子化記錄技術(shù)指南（試行）》要求。（六）生產(chǎn)管理mRNA疫苗的生產(chǎn)和包裝均應(yīng)當(dāng)按照批準(zhǔn)的工藝規(guī)程和操作規(guī)程進(jìn)行操作并有相關(guān)記錄，以確保mRNA疫苗達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并符合藥品生產(chǎn)許可和注冊(cè)批準(zhǔn)的要求。由于mRNA疫苗生產(chǎn)工藝的特殊性，各關(guān)鍵工序檢查要點(diǎn)包括但不限于：1.菌種復(fù)蘇將工作代種子接種在適宜的培養(yǎng)基中，經(jīng)傳代擴(kuò)增至規(guī)定代次和規(guī)模，獲得生產(chǎn)用種子。檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）菌毒種操作是否在相應(yīng)的生物安全級(jí)別下進(jìn)行；（2）菌種遺傳穩(wěn)定性是否經(jīng)過確認(rèn)；（3）培養(yǎng)物做純菌檢查，確保種子培養(yǎng)液無污染；（4）生產(chǎn)用種子代次是否為批準(zhǔn)的固定代次；（5）生長(zhǎng)狀態(tài)觀察及生物學(xué)特征確認(rèn)；（6）應(yīng)使用經(jīng)批準(zhǔn)的培養(yǎng)基配方；（7）接種環(huán)境的清潔、消毒，人員接種操作情況；（8）培養(yǎng)過程參數(shù)控制及培養(yǎng)終點(diǎn)控制情況，工藝驗(yàn)證情況。2.發(fā)酵和收獲菌泥生產(chǎn)用種子按比例接種至大罐培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)菌的生長(zhǎng)特性在發(fā)酵過程中適當(dāng)補(bǔ)充所需的營(yíng)養(yǎng)物，控制培養(yǎng)溫度、攪拌速度、通氣量、通氣方式、罐壓等參數(shù)，同時(shí)監(jiān)控溶氧、pH值、生長(zhǎng)濃度等。培養(yǎng)過程或培養(yǎng)結(jié)束取樣進(jìn)行純菌檢查。檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）發(fā)酵過程參數(shù)控制情況，如接種比例、溶氧、pH值、溫度、攪拌速度、培養(yǎng)溫度和通氣量等參數(shù)的監(jiān)測(cè)與記錄；（2）關(guān)注培養(yǎng)曲線及收獲期狀態(tài)（培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)濃度），發(fā)酵培養(yǎng)的工藝驗(yàn)證情況；（3）收獲培養(yǎng)物純度、質(zhì)粒保有率（外源基因拷貝數(shù)）檢查情況；（4）應(yīng)使用經(jīng)批準(zhǔn)的培養(yǎng)基配方，培養(yǎng)過程中如需補(bǔ)料，關(guān)注補(bǔ)料方式設(shè)置及實(shí)施情況；（5）發(fā)酵培養(yǎng)終點(diǎn)控制情況，離心參數(shù)控制情況。3.堿裂解及純化菌體在堿性環(huán)境下裂解，釋放出環(huán)狀質(zhì)粒，經(jīng)酸液中和、過濾、超濾濃縮、純化等工序得到環(huán)狀質(zhì)粒。檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）菌泥與緩沖液的混合比例；（2）菌液與堿液的混合比例，裂解過程的pH等參數(shù)控制情況；（3）關(guān)注裂解菌液與酸液的混合比例，中和液pH等參數(shù)控制情況；（4）層析純化質(zhì)粒時(shí)，常用的是三步純化法：①凝膠過濾層析去除RNA和宿主殘留蛋白等相對(duì)較小的雜質(zhì)；②親和層析去除開環(huán)質(zhì)粒；③陰離子交換色譜去除內(nèi)毒素等。層析工序檢查要點(diǎn)詳見層析部分；（5）純化后的超螺旋質(zhì)粒占比檢測(cè)情況和控制水平，（該比例對(duì)于后續(xù)的IVT反應(yīng)有很大的影響。美國(guó)FDA關(guān)于基因制劑質(zhì)粒DNA的指導(dǎo)意見指出，超螺旋質(zhì)粒的占比需要≥80%）。4.質(zhì)粒線性化將環(huán)狀質(zhì)粒濃縮、換液，用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切處理的線性化質(zhì)粒。檢查要點(diǎn)包括但不限于：關(guān)注酶切反應(yīng)條件，如內(nèi)切酶的用量、溫度、反應(yīng)時(shí)間等參數(shù)；純化工序過程控制情況；線性化質(zhì)粒的儲(chǔ)存方式、儲(chǔ)存條件和儲(chǔ)存時(shí)限是否經(jīng)過驗(yàn)證，如存在中間產(chǎn)品轉(zhuǎn)移生產(chǎn)場(chǎng)地使用，應(yīng)關(guān)注運(yùn)輸環(huán)節(jié)驗(yàn)證情況；線性化效率、模板濃度、DNA模板序列準(zhǔn)確性、純度、雜質(zhì)殘留控制及檢測(cè)情況等。5.體外轉(zhuǎn)錄（IVT）以線性化質(zhì)粒為模板，在反應(yīng)器或一次性反應(yīng)袋中經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄得mRNA，再經(jīng)純化去除酶、NTPs以及不含Poly(A)的mRNA、雙鏈RNA、不完整的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和聚體等雜質(zhì)后可得mRNA原液。該工序檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）關(guān)注轉(zhuǎn)錄過程原料質(zhì)量控制情況；（2）反應(yīng)器或一次性反應(yīng)袋使用情況；（3）體外轉(zhuǎn)錄工藝中的反應(yīng)體系，起始物料的配比情況及均勻度、RNA聚合酶濃度、NTP濃度、轉(zhuǎn)錄時(shí)間、溫度、終止反應(yīng)條件等參數(shù)控制情況；（4）模板去除過程控制情況，如DNA酶處理工藝中的DNA酶濃度、處理時(shí)間、溫度、終止反應(yīng)條件等參數(shù)控制情況；（5）關(guān)注加帽步驟中RNA反應(yīng)濃度、溫度、時(shí)間，加帽反應(yīng)緩沖體系、物料投料比（如5＇-帽類似物、鳥苷三磷酸、核糖核酸酶抑制劑、相關(guān)轉(zhuǎn)移酶等）、補(bǔ)料方式、反應(yīng)溫度、時(shí)間等參數(shù)控制情況；（6）純化工序過程控制情況；（7）質(zhì)量控制情況，如mRNA鑒別、mRNA序列長(zhǎng)度、序列完整性及準(zhǔn)確性、mRNA理化特性（如pH、外觀等）、mRNA含量、加帽率、純度、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（如不完整mRNA、雙鏈RNA等）、工藝相關(guān)雜質(zhì)（如殘留蛋白酶、DNA模板殘留、有機(jī)溶劑、金屬離子殘留等）、無菌、內(nèi)毒素等。6.LNP-mRNA制備在包封時(shí)利用微流控技術(shù)讓含mRNA水相和脂質(zhì)體有機(jī)相按照一定的比例和流速混合，可以得到粒徑穩(wěn)定、均一性較好的LNP-mRNA顆粒，包封后的LNP-mRNA需經(jīng)透析濃縮、過濾等步驟去除細(xì)菌、裸mRNA、空載LNP和乙醇等物質(zhì)。該工序檢查要點(diǎn)包括但不限于：是否使用有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑引入及去除情況；水相、油相配制參數(shù)、儲(chǔ)存條件及儲(chǔ)存時(shí)限驗(yàn)證情況；混合孔徑、脂相流速、水相流速等關(guān)鍵參數(shù)控制情況；使用多臺(tái)微流控設(shè)備時(shí)，不同微流控設(shè)備之間中間產(chǎn)品的均一性；關(guān)注包封后的LNP-mRNA粒徑、空載LNP量、包封率、包封均一性等指標(biāo)控制及驗(yàn)證情況。7.層析純化分離目前在mRNA疫苗生產(chǎn)中應(yīng)用較多的層析分離技術(shù)為離子交換層析、親和層析和凝膠過濾層析等。離子交換層析影響分離的因素主要有緩沖液的pH、鹽濃度等參數(shù)；親和層析影響因素主要有緩沖液的組成、用量等參數(shù)；凝膠過濾影響因素主要有進(jìn)樣體積、柱效、柱高等參數(shù)。對(duì)層析工藝的檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）關(guān)注層析工藝與批件的一致性，如層析介質(zhì)（填料）類型、柱床體積、柱床高度、制品上樣體積、緩沖溶液組成及用量、層析壓力、層析流速、pH、電導(dǎo)等，并定期監(jiān)測(cè)柱效；（2）層析介質(zhì)(填料)的再生、使用壽命(重復(fù)使用次數(shù))是否有規(guī)定并進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證；（3）層析系統(tǒng)和層析介質(zhì)(填料)的清洗和保存能否防止污染，是否經(jīng)過驗(yàn)證；層析填料的保存條件和保存有效期是否有規(guī)定；（4）層析系統(tǒng)是否經(jīng)過確認(rèn)；（5）關(guān)注層析目標(biāo)產(chǎn)物收率，層析工藝對(duì)雜質(zhì)去除能力及效果確認(rèn)；（6）各層析循環(huán)（如涉及）之間產(chǎn)品質(zhì)量均一性；（7）各層析工序收集液保存條件和時(shí)間、存放效期驗(yàn)證情況；（8）純化工藝過程中雜質(zhì)控制情況，疫苗雜質(zhì)包括產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（如不完整mRNA、雙鏈RNA、裸mRNA、空載LNP等）和工藝相關(guān)雜質(zhì)（如蛋白質(zhì)殘留、有機(jī)溶劑殘留、DNA模板殘留、金屬離子殘留等）。8.超濾mRNA疫苗生產(chǎn)過程中超濾工藝包括透析和濃縮，超濾工藝的主要控制參數(shù)包括超濾膜的截留分子量（MolecularWeightCut-off，MWCO）、超濾膜面積、透膜壓力（Transmembranepressure，TMP）和超濾溫度等。檢查要點(diǎn)應(yīng)包括但不限于：（1）超濾工藝應(yīng)與批件一致性，關(guān)注超濾膜包的截留分子量，超濾過程中進(jìn)/出/濾過液壓力(透膜壓力)、制品溫度、緩沖液倍數(shù)（用量）；（2）超濾系統(tǒng)是否經(jīng)過確認(rèn)；（3）關(guān)注膜包的型號(hào)、面積、孔徑、數(shù)量、生產(chǎn)商材質(zhì)，以及相應(yīng)的供應(yīng)商管理情況；（4）超濾透析過程中是否有相應(yīng)監(jiān)測(cè)泄漏的措施；（5）是否有膜包使用次數(shù)、更換周期、貯存條件及方式等規(guī)定并有相關(guān)驗(yàn)證，膜包的相容性和完整性測(cè)試規(guī)定及執(zhí)行情況；（6）超濾膜包的維護(hù)、清潔、保存應(yīng)能防止污染；（7）超濾是否有最長(zhǎng)允許工藝時(shí)限規(guī)定。9.半成品配制原液經(jīng)一次配制或多次配制成為半成品。配制時(shí)，應(yīng)根據(jù)批準(zhǔn)的產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)的配方進(jìn)行計(jì)算。檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）半成品的配制、分裝、凍干、軋蓋工藝是否經(jīng)過驗(yàn)證，是否經(jīng)過無菌工藝模擬試驗(yàn)證明其無菌保證水平符合要求；（2）是否按照經(jīng)批準(zhǔn)的配方進(jìn)行半成品配制；（3）使用的計(jì)量設(shè)備是否經(jīng)過校驗(yàn)，配方的計(jì)算、物料的稱量及添加是否經(jīng)復(fù)核確認(rèn)；（4）配制工藝應(yīng)能確保配制后半成品的均一性，如物料加入后的攪拌時(shí)長(zhǎng)及攪拌轉(zhuǎn)速應(yīng)進(jìn)行規(guī)定；（5）如果需要調(diào)整pH值，應(yīng)對(duì)pH調(diào)整液的濃度及添加速度進(jìn)行規(guī)定；（6）半成品檢測(cè)用樣品應(yīng)具有代表性，且取樣操作不得引入污染；（7）半成品需要存放的，應(yīng)保存在合適的容器中并按經(jīng)過驗(yàn)證的條件（如溫度、時(shí)間）下儲(chǔ)存；（8）半成品配制完成后至除菌過濾之前的時(shí)間時(shí)隔是否有規(guī)定；關(guān)注除菌過濾壓力；除菌濾芯相容性驗(yàn)證情況及完整性檢測(cè)情況；（9）若使用一次性配制系統(tǒng)/一次性容器進(jìn)行配制，應(yīng)對(duì)制品安全性進(jìn)行充分評(píng)價(jià)（包括相容性試驗(yàn)等）；一次性配制系統(tǒng)/一次性容器使用前包裝方式應(yīng)能控制污染風(fēng)險(xiǎn)，配制系統(tǒng)的攪拌方式應(yīng)能滿足工藝要求；（10）半成品配制工藝應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證，確定關(guān)鍵控制參數(shù)，包括加料程序、混勻方式、制品pH范圍、配制時(shí)限及溫度等；應(yīng)在經(jīng)驗(yàn)證的工藝時(shí)限內(nèi)完成配制；（11）原液及半成品的包裝方式、存放溫度及時(shí)間是否經(jīng)過驗(yàn)證；原液及半成品微生物控制情況；（12）原液、半成品、成品批次劃分與對(duì)應(yīng)情況。10.分裝、軋蓋及燈檢包裝mRNA疫苗的分裝、軋蓋、燈檢、包裝、貯藏、運(yùn)輸?shù)炔僮鳎瑧?yīng)按照《中國(guó)藥典》三部通則《生物制品分包裝及貯運(yùn)管理》的規(guī)定進(jìn)行。檢查要點(diǎn)包括但不限于：（1）關(guān)注批號(hào)及亞批號(hào)的劃分及編制規(guī)則；（2）分裝容器及用具的清潔、滅菌工藝應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證；（3）待分裝半成品配制完成至分裝放置時(shí)限是否經(jīng)過驗(yàn)證；（4）分裝過程中的產(chǎn)品的均一性控制情況；（5）mRNA疫苗是對(duì)溫度較為敏感的疫苗制品，應(yīng)關(guān)注分裝過程中的對(duì)產(chǎn)品溫度的控制措施；（6）分裝開始至結(jié)束時(shí)間應(yīng)有時(shí)限規(guī)定，培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)時(shí)間是否能夠覆蓋最長(zhǎng)時(shí)限；（7）應(yīng)對(duì)密封后溶液進(jìn)行容器密閉性檢查；（8）生產(chǎn)過程抽樣應(yīng)具有代表性，應(yīng)在分裝過程中前、中、后階段分別抽樣；（9）制品貯存溫度與生產(chǎn)環(huán)境溫度不一致時(shí)，應(yīng)通過質(zhì)量研究確定各工序生產(chǎn)時(shí)限；（10）如使用全自動(dòng)燈檢機(jī)，應(yīng)對(duì)比評(píng)估全自動(dòng)燈檢與人工燈檢的檢測(cè)效能，使用前進(jìn)行校準(zhǔn)和檢查。11.儲(chǔ)存和運(yùn)輸疫苗的儲(chǔ)存和運(yùn)輸應(yīng)符合《疫苗流通和預(yù)防接種管理?xiàng)l例》及其相關(guān)規(guī)定。（1）關(guān)注企業(yè)是否制定對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)、搬運(yùn)、暫存、倉(cāng)儲(chǔ)及物流管理制度；（2）貯存區(qū)的設(shè)計(jì)和建造應(yīng)能滿足產(chǎn)品貯存條件（如溫濕度、避光）和安全貯存的要求，產(chǎn)品貯存條件應(yīng)符合藥品注冊(cè)批準(zhǔn)的要求，貯存環(huán)境是否可持續(xù)監(jiān)測(cè)，是否配備報(bào)警設(shè)備，報(bào)警方式設(shè)置及控制情況；（3）冷鏈儲(chǔ)存和運(yùn)輸設(shè)備設(shè)施是否有效管理并符合預(yù)定用途，冷鏈運(yùn)輸是否經(jīng)過驗(yàn)證，超溫條件下的暴露時(shí)限以及冷鏈運(yùn)輸過程中是否有全程的溫度控制和記錄；（4）應(yīng)對(duì)冷庫(kù)、儲(chǔ)運(yùn)溫、濕度監(jiān)測(cè)系統(tǒng)以及冷藏運(yùn)輸?shù)脑O(shè)施設(shè)備進(jìn)行確認(rèn)及定期的再確認(rèn)，冷庫(kù)、冷藏車及冷藏箱應(yīng)根據(jù)國(guó)家要求及GSP標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證，包括熱分布，斷電、開門、外界環(huán)境等惡劣條件挑戰(zhàn)試驗(yàn)；（5）生產(chǎn)和運(yùn)輸過程中如存在脫冷鏈情況，應(yīng)依據(jù)脫冷鏈時(shí)間和溫度對(duì)制品質(zhì)量影響進(jìn)行相關(guān)研究，確定可允許的脫冷鏈時(shí)間和可接受的溫度限度；（6）疫苗是否實(shí)施效期預(yù)警管理，疫苗應(yīng)按照規(guī)定的發(fā)貨順序進(jìn)行發(fā)貨，無法在有效期內(nèi)配送至接種單位的疫苗不得進(jìn)入流通環(huán)節(jié)；（7）如采用配送企業(yè)運(yùn)送產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)符合上述有關(guān)規(guī)定，至少包括資質(zhì)審核、配送能力評(píng)估、簽訂儲(chǔ)存配送合同和質(zhì)量協(xié)議、配送企業(yè)資料備案等；（8）發(fā)運(yùn)記錄應(yīng)完整，至少包括產(chǎn)品名稱、規(guī)格、批號(hào)、數(shù)量、收貨單位和地址、聯(lián)系方式、發(fā)貨日期、運(yùn)輸方式等；（9）追溯體系應(yīng)完整，應(yīng)保證疫苗最小包裝單位生產(chǎn)和銷售環(huán)節(jié)的可追溯性。12.生產(chǎn)管理檢查要點(diǎn)還應(yīng)包括但不限于：（1）各生產(chǎn)、包裝工序操作與工藝要求是否一致，設(shè)備運(yùn)行參數(shù)是否在規(guī)定范圍內(nèi)；（2）能否采取有效措施防止混淆、差錯(cuò)、污染與交叉污染，如是否采取有效措施防止RNA酶污染；（3）共線生產(chǎn)管理情況，企業(yè)共線生產(chǎn)管理是否符合《中國(guó)藥典》《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010版修訂）及其附錄、其余相關(guān)法規(guī)中的規(guī)定，共線風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是否充分；（4）無菌保障情況：關(guān)注搖瓶培養(yǎng)、種子培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)、環(huán)狀質(zhì)粒、線性化質(zhì)粒、原液生產(chǎn)階段中微生物及RNA酶控制、成品生產(chǎn)階段的無菌保證情況；關(guān)注取樣、加料、中間品轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)，各類連接的無菌保障程度；人員更衣確認(rèn)、無菌工藝模擬試驗(yàn)情況、共線風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、清潔消毒驗(yàn)證、關(guān)鍵潔凈生產(chǎn)區(qū)潛在污染風(fēng)險(xiǎn)（如灌封間等關(guān)鍵A級(jí)及B級(jí)區(qū)域是否存在難以有效清潔消毒的死角，灌裝緩沖罐及過濾系統(tǒng)設(shè)計(jì)與安裝情況是否存在對(duì)關(guān)鍵B級(jí)區(qū)的不利影響，對(duì)灌裝期間A級(jí)區(qū)可能開門干預(yù)位置外部B級(jí)區(qū)域進(jìn)行延展層流設(shè)計(jì)必要性的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理等）、防止污染和交叉污染的措施；關(guān)鍵區(qū)域的氣流煙霧試驗(yàn)、潔凈環(huán)境監(jiān)測(cè)情況等。（七）質(zhì)量控制和質(zhì)量保證企業(yè)應(yīng)當(dāng)建立符合疫苗質(zhì)量管理要求的質(zhì)量目標(biāo)，將疫苗注冊(cè)的有關(guān)安全、有效和質(zhì)量可控的所有要求，系統(tǒng)地貫徹到疫苗生產(chǎn)、控制及產(chǎn)品放行、貯存、發(fā)運(yùn)的全過程中，確保所生產(chǎn)的疫苗符合預(yù)定用途和注冊(cè)要求。1.實(shí)驗(yàn)室管理mRNA疫苗質(zhì)量檢驗(yàn)包括原輔料檢驗(yàn)、中間產(chǎn)品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)，特別關(guān)注DNA轉(zhuǎn)錄模板、mRNA原液、制劑中間產(chǎn)物和制劑成品的鑒別、理化、含量、純度和安全性項(xiàng)目。除對(duì)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查外，檢查要點(diǎn)包括但不限于：質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室的人員、設(shè)施、設(shè)備是否與mRNA疫苗產(chǎn)品性質(zhì)和生產(chǎn)規(guī)模相適應(yīng)；檢驗(yàn)儀器設(shè)備按生產(chǎn)要求配置和使用的情況；檢驗(yàn)儀器設(shè)備的操作規(guī)程、使用日志等文件的管理情況；儀器設(shè)備的校準(zhǔn)、變更、確認(rèn)與驗(yàn)證的管理情況等；實(shí)驗(yàn)室人員是否經(jīng)過與所從事的檢測(cè)操作相關(guān)的技能培訓(xùn)，并定期進(jìn)行培訓(xùn)效果評(píng)估；分析方法的轉(zhuǎn)移及確認(rèn)情況，新建立或改良的方法是否進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證；標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌返墓芾砬闆r，標(biāo)準(zhǔn)品/參考品應(yīng)能夠溯源。如自制工作標(biāo)準(zhǔn)品/參考品，是否建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，是否按照規(guī)定用法定標(biāo)準(zhǔn)品/參考品進(jìn)行標(biāo)化并確定有效期；動(dòng)物房的設(shè)計(jì)、建造及動(dòng)物飼養(yǎng)管理要求等，應(yīng)當(dāng)符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理的相關(guān)規(guī)定；生產(chǎn)和檢定用動(dòng)物應(yīng)當(dāng)符合《中華人民共和國(guó)藥典》的要求，應(yīng)使用符合相關(guān)要求或級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，除另有規(guī)定外，均應(yīng)使用清潔級(jí)或清潔級(jí)以上的動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)來源清晰；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)為專職人員，并應(yīng)當(dāng)經(jīng)過培訓(xùn)，考取相關(guān)資格證書。2.質(zhì)量控制情況（1）中間產(chǎn)品、原液、成品穩(wěn)定性考察情況：是否有穩(wěn)定性考察方案或計(jì)劃，包括研究對(duì)象、批次、樣品數(shù)量、環(huán)境（如溫度、濕度、光照、震動(dòng)等）、時(shí)間、考察項(xiàng)目、檢測(cè)方法、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等；中間產(chǎn)品（涉及儲(chǔ)存的）、原液、半成品（涉及儲(chǔ)存的）、成品等是否進(jìn)行穩(wěn)定性考察；穩(wěn)定性考察的樣品應(yīng)具有代表性，如工藝驗(yàn)證、偏差涉及的批次、新申報(bào)的疫苗及變更引起的穩(wěn)定性考察一般至少三批；上市產(chǎn)品每種規(guī)格、每種包裝形式應(yīng)每年至少考察一批；（2）生產(chǎn)過程中各工序關(guān)鍵項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果及趨勢(shì)分析；（3）物料檢驗(yàn)情況，如原輔料檢驗(yàn)（如脂質(zhì)體原料、堿基等）、中間產(chǎn)品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)，關(guān)注DNA模板、mRNA原液、制劑中間產(chǎn)物和制劑成品的鑒別、理化、含量、純度和安全性，以及LNP-mRNA體系粒徑均一性、包封率等項(xiàng)目；（4）關(guān)注如含量（RNA,脂質(zhì)），純度，生物活性，序列鑒別，包封率，加帽率，產(chǎn)品和工藝相關(guān)雜質(zhì)，反應(yīng)溶劑殘留等控制項(xiàng)目及質(zhì)控方法的方法驗(yàn)證；（5）實(shí)驗(yàn)室超標(biāo)與超常結(jié)果處理情況；（6）是否存在委托檢驗(yàn)及委托檢驗(yàn)項(xiàng)目的管理與執(zhí)行情況。3.數(shù)據(jù)管理情況（1）關(guān)注企業(yè)采用信息化手段記錄生產(chǎn)、檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的情況，生產(chǎn)檢驗(yàn)信息和采集系統(tǒng)驗(yàn)證、使用情況；（2）關(guān)鍵批次生產(chǎn)、檢驗(yàn)（原輔料、中間產(chǎn)品、成品及相關(guān)穩(wěn)定性考察）相關(guān)數(shù)據(jù)（包括記錄）、工藝驗(yàn)證、清潔驗(yàn)證、設(shè)備確認(rèn)及日常監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)是否符合可溯、清晰、同步、原始、準(zhǔn)確等原則的情況，數(shù)據(jù)保存應(yīng)當(dāng)確保能夠完整地重現(xiàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生的步驟和順序生產(chǎn)、檢驗(yàn)或其他相關(guān)記錄中的簽名能夠追溯至數(shù)據(jù)的創(chuàng)建者、修改人員及其他操作人員；（3）是否建立了適宜的數(shù)據(jù)及記錄管理體系；生產(chǎn)和檢驗(yàn)所用計(jì)算機(jī)化系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證，相關(guān)用戶分級(jí)管理權(quán)限是否設(shè)置合理，相關(guān)制度文件能否有效措施防止數(shù)據(jù)的修改、刪除、覆蓋等，以確保數(shù)據(jù)可靠；（4）電子數(shù)據(jù)管理的情況（可產(chǎn)生電子數(shù)據(jù)的生產(chǎn)設(shè)備、檢驗(yàn)設(shè)備的權(quán)限和數(shù)據(jù)管理，煙霧試驗(yàn)、培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)等關(guān)鍵視頻數(shù)據(jù)管理）等。4.偏差管理情況（1）偏差處理操作規(guī)程、記錄等管理文件的制定情況；偏差的發(fā)現(xiàn)、報(bào)告、調(diào)查、評(píng)估和處理的執(zhí)行情況；糾正預(yù)防措施的執(zhí)行、記錄及有效性評(píng)估的情況等；（2）是否根據(jù)偏差性質(zhì)、范圍、對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量潛在影響程度制定偏差分類標(biāo)準(zhǔn)，分類的準(zhǔn)確性；涉及重大偏差生產(chǎn)批次的調(diào)查、評(píng)估、處置情況；可能影響產(chǎn)品質(zhì)量的重大偏差調(diào)查、審核、處理、評(píng)估過程向省級(jí)局報(bào)告的情況等；（3）超標(biāo)超趨勢(shì)等異常情況的管