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第3章基因工程第2節(jié)基因工程的基本操作程序(第2課時(shí))導(dǎo)學(xué)案【科學(xué)思維】針對(duì)人類生產(chǎn)或生活中的某一需求,選取適當(dāng)?shù)幕蚬こ痰募夹g(shù)和方法,嘗試設(shè)計(jì)獲得某一轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的方案?!究茖W(xué)探究】嘗試進(jìn)行PCR的基本操作并用電泳鑒定PCR的產(chǎn)物?!窘虒W(xué)重點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定。【教學(xué)難點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定。四、目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后,是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性,只有通過檢測(cè)與鑒定才能知道。1.分子水平的檢測(cè)(1)通過_____等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞的染色體DNA上是否插入了目的基因或檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA。(2)_______________技術(shù):檢測(cè)目的基因是否翻譯成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。2.__________水平的檢測(cè)【到社會(huì)中去】1.在實(shí)際種植過程中,棉鈴蟲是否對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因的抗蟲棉產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗性?證據(jù)是什么?2.科研工作者在沒有發(fā)現(xiàn)棉鈴蟲出現(xiàn)抗性之前,就應(yīng)該想辦法應(yīng)對(duì)。他們想出的延緩棉鈴蟲對(duì)Bt抗蟲蛋白產(chǎn)生抗性的措施有哪些?這些措施的原理是什么?有效嗎?【探究·實(shí)踐·DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定】(一)實(shí)驗(yàn)原理1.利用PCR在體外進(jìn)行DNA片段擴(kuò)增的原理:(1)PCR利用了DNA的_____原理,通過調(diào)節(jié)____來控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合,PCR儀實(shí)質(zhì)上就是一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控____的儀器。(2)PCR擴(kuò)增DNA片段還利用了___________的原理。一次PCR一般要經(jīng)歷30次循環(huán)。2.DNA片段電泳鑒定的原理:(1)DNA分子具有可_____的基團(tuán),在一定的pH下,這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷,在電場(chǎng)的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷_____的電極移動(dòng),這個(gè)過程就是電泳。(2)PCR的產(chǎn)物一般通過_______________來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的_____、DNA分子的_____和_____(遷移速率與之呈_____相關(guān))等有關(guān)。(3)凝膠中的DNA分子通過_____,可以在波長(zhǎng)為_____nm的紫外燈下被檢測(cè)出來。(二)方法步驟1.DNA片段的擴(kuò)增移液:用__________按照PCR反應(yīng)體系配方或PCR試劑盒的說明書,在_________中依次加入各組分→離心:待所有組分都加入后,蓋嚴(yán)離心管的蓋子,將微量離心管放入離心機(jī)里,離心約_____,使反應(yīng)液集中在離心管的_____(_____反應(yīng)速率)→反應(yīng):參照下表的參數(shù),設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。循環(huán)程序變性復(fù)性延伸預(yù)變性30次最后一次預(yù)變性:使DNA充分變性,以利于_____更好地和模板結(jié)合。2.DNA片段的電泳鑒定配制瓊脂糖溶液:根據(jù)待分離DNA片段的大小,用電泳緩沖液配制瓊脂糖溶液,一般配制質(zhì)量體積比__________的瓊脂糖溶液。在沸水浴或微波爐內(nèi)加熱至__________。稍冷卻后,加入適量的_______混勻→制備凝膠:將溫?zé)岬沫傊侨芤貉杆俚谷肽>?,并插入合適大小的梳子,以形成________。待凝膠溶液完全凝固,小心拔出梳子,取出凝膠放入電泳槽內(nèi)。將電泳緩沖液加入電泳槽中,電泳緩沖液沒過凝膠_____為宜→加樣:將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與_______________(內(nèi)含指示劑)混合,再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)。留一個(gè)加樣孔加入指示分子大小的___________→電泳:接通電源,根據(jù)電泳槽陽極至陰極之間的距離來設(shè)定電壓,一般為_____V/cm。待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí),停止電泳→觀察記錄:取出凝膠置于_______下觀察和照相。(三)注意1.為避免外源DNA等因素的污染,PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行__________處理。2.該實(shí)驗(yàn)所需材料可以直接從公司購(gòu)買,緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份,并在_____儲(chǔ)存。使用前,將所需試劑從冰箱拿出,放在冰塊上緩慢融化。3.在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時(shí),每吸取一種試劑后,移液器上的槍頭都必須_____。4.在進(jìn)行操作時(shí),一定要戴好_______________。5.PCR擴(kuò)增不能隨意_____試劑用量?!窘Y(jié)果分析與評(píng)價(jià)】1.你是否成功擴(kuò)增出DNA片段?判斷的依據(jù)是什么?2.你進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果是幾條條帶?如果不止一條條帶,請(qǐng)分析產(chǎn)生這個(gè)結(jié)果的可能原因?!菊n堂作業(yè)】1.下列屬于PCR技術(shù)所需條件的是() ①單鏈的核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脫氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA連接酶⑥D(zhuǎn)NA聚合酶⑦限制酶A.①②③⑤ B.①②③⑥C.①②③⑤⑦ D.①②④⑤⑦2.質(zhì)粒上的抗性基因在基因工程中的主要作用是()A.使目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)易于表達(dá)B.使受體細(xì)胞具有抗藥性C.有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)D.促進(jìn)目的基因與導(dǎo)入的外源基因相連接,提高轉(zhuǎn)基因操作的成功率3.科學(xué)家已能運(yùn)用基因工程技術(shù),讓羊合成并由乳腺分泌抗體,相關(guān)敘述中正確的是()①該技術(shù)將導(dǎo)致定向變異;②DNA連接酶能把目的基因與載體黏性末端的堿基對(duì)連接起來;③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞時(shí)采用顯微注射技術(shù);④受精卵是理想的受體。A.①②④B.①③④C.②③④D.①②③④4.采用基因工程的方法培育抗蟲棉,下列導(dǎo)入目的基因的方法正確的是()①將毒素蛋白注射到棉受精卵中;②將編碼毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中;③將編碼毒素蛋白的DNA序列與質(zhì)粒重組,導(dǎo)入農(nóng)桿菌,用該細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞,再進(jìn)行組織培養(yǎng);④將編碼毒素蛋白的DNA序列與細(xì)菌質(zhì)粒重組,借助花粉管通道進(jìn)入受精卵。①②B.③④C.②③D.①④5.利用人胰島B細(xì)胞構(gòu)建cDNA文庫(kù),然后通過核酸分子雜交技術(shù)從中篩選目的基因,篩選過程如下圖所示。下列說法不正確的是()A.cDNA文庫(kù)的構(gòu)建需要用到逆轉(zhuǎn)錄酶B.圖中的菌落是通過稀釋涂布平板法獲得的C.核酸分子雜交的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)D.從該文庫(kù)中可以篩選到胰高血糖素基因
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