IL-18基因多態(tài)性與原發(fā)性干燥綜合征的相關(guān)性　

1/1IL-18基因多態(tài)性與原發(fā)性干燥綜合征的相關(guān)性IL?18基因多態(tài)性與原發(fā)性干燥綜合征的相關(guān)性IL?18基因多態(tài)性與原發(fā)性干燥綜合征的相關(guān)性作者：

李恩澤辛苗苗胡彬閆麗萍李慧【摘要】目的探討IL?18基因?137G/C、?607C/A位點(diǎn)多態(tài)性及其血清水平與原發(fā)性干燥綜合征的相關(guān)性。

方法提取受試者白細(xì)胞DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)?限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)檢測28例原發(fā)性干燥綜合征病人和52例健康對照者IL?18基因?607C/A、?137G/C位點(diǎn)多態(tài)性，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測兩組血清IL?洗裸18含量。

結(jié)果兩組I洗L裸?18基因?137霧G/裸C、?607C/霧A位點(diǎn)裸基因型頻率及等霧位基因頻裸率比較差異均霧無顯著性(裸P)。

原霧發(fā)性干燥綜合裸征組血清霧IL?18水平亮明顯低霧于健康對照組，差亮異有霧顯著性(t=,P)亮。

霧結(jié)論血清IL?18水亮霧平表達(dá)降低可能是原發(fā)性亮霧干燥綜合征的促發(fā)因素。

霧亮【關(guān)鍵詞】白細(xì)霧胞介亮素18;基因型;霧基因頻亮率;原發(fā)性干燥霧綜合征亮[ABS霧TRACT]亮Obje霧ctiveTo亮inv霧estigate亮th霧eassociat亮i霧onofpolymo亮排rphismsof?6亮排07C/A,?137G排亮/Cpromoter排s亮ofIL?18ge排ne亮anditsse排rum亮levelwi排thpr亮imaryS排jogre亮nssy排ndrome亮.Met排hodsThe亮DNA排ofwhiteb亮lo排odcellswe亮r排eextracted亮排fromsubject亮排s,polymeras排亮echainreac排t亮ion?restr排ic亮tionfrag排men亮tlength排poly鳥morphi排sm(PC鳥R?RFL搔P)meth鳥odwa搔sapplie鳥dto搔detectpo鳥ly搔morphisms鳥o搔f?607C/A,?鳥搔137G/Cpromo鳥搔tersofIL?18搔鳥genein28pa排t鳥ientswith排pr鳥imarySjo賃gre鳥nssynd賃rome鳥(group賃A)and鳥52hea賃lthyco鳥ntro賃ls(grou鳥pB)賃;serumIL鳥?1賃8wasmeasu鳥r賃edinbothgr鳥賃oupsbyELISA陌賃.ResultsThe賃陌rewasnodif賃f陌erencesin賃IL陌?18genot賃ype陌frequen賃cyan陌dallel賃efreq陌uency賃atposi陌tion賃?607and陌?13賃7between陌gr賃oupAandgr陌o潤upB(P).Se陌潤rumIL?18ing陌潤roupAwassig潤陌nificantly潤l陌owerthant潤ha陌tingroup潤B,w陌ithstat潤isti陌caldif潤feren陌ce(t=潤,P).Co陌nclu潤sionDec陌rea潤seofseru陌mI潤L?18islik陌e潤lytobeapre陌潤cipitatingf陌潤actorofprim潤陌arySjogren潤陌ssyndrome潤.陌[KEYWO潤RDS]陌interl潤eukin陌?18;g勸enotyp陌e;ge勸nefrequ陌enc勸y;Sjogre陌n勸ssyndrome陌勸原發(fā)性干燥綜合征(陌勸PSS)是以口、眼干燥勸陌及關(guān)節(jié)腫痛為常見表現(xiàn)勸的劣一種全身性自身免疫勸性疾劣病，常呈現(xiàn)家族聚勸集性。

劣白細(xì)胞介素?1勸8(IL劣?18)可誘勸導(dǎo)IFN?劣、IL?勸2等細(xì)胞因子劣產(chǎn)生，調(diào)勸節(jié)Th1/Th劣2細(xì)胞勸平衡，有增強(qiáng)免疫劣、抗勸腫瘤的作用，并參與劣某勸些自身免疫性疾病和變劣勸態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生發(fā)展劣勸。

PSS病人CD4+T勸劣細(xì)胞水平降低，導(dǎo)致T位h劣1和Th2亞群的分位布出劣現(xiàn)異常，進(jìn)而引起位機(jī)體細(xì)劣胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控位失常。

本劣文對PSS病位人IL?1劣8基因?6位07C/A、劣?137位G/C位點(diǎn)多態(tài)劣性以及位血清IL?18水劣平進(jìn)位行檢測，探討其與P劣S位S發(fā)生的相關(guān)性。

現(xiàn)將劣位結(jié)果報(bào)告如下。

1對象與位劣方法研究對象收位集我劣院風(fēng)濕免疫科就診位的PS劣S病人(PSS位組)28劣例，男1例，位女27例，劣年齡27～位84歲，平均劣為歲，均位符合2002年劣PSS位國際分類(診斷)劣標(biāo)準(zhǔn)位提出的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

另劣選蓄健康獻(xiàn)血員52例作為劣蓄對照組，男3例，女49劣蓄例，年齡22～75歲，蓄劣平均歲;排除相應(yīng)疾病蓄家劣族史。

兩組研究對象蓄均無劣血緣關(guān)系，在年齡蓄和性別適比例上均無顯著蓄性差異。

適檢測方法蓄DNA制備適采集受試蓄者空腹靜脈血5適mL至蓄EDTA?K2抗適凝管蓄中，顛倒混勻。

離心適后蓄提取下層血漿和白細(xì)胞適蓄層約1mL移入高壓滅菌適怨的離心管中，用酚?氯仿怨適?異戊醇法抽提細(xì)胞D怨N適A。

將DNA沉淀移怨入m適L的LEP管中，怨120適00r/min怨離心10適min，棄去怨上清液，沉適淀自然干燥怨后，加無菌純適水充分溶怨解，置4℃冰箱適保存?zhèn)湓S用。

PCR檢適測許參考文獻(xiàn)[1]設(shè)計(jì)擴(kuò)適許增IL?18基因?60適許7位點(diǎn)的特異性引物，2許適條特異性正向引物序列許分適別為5?GTTG許CA適GAAAGTGT以AAA適AAT?TAT以TAC?適3和5?以GTTGC適AGAAA以GTGTAA適AAA?以TTATTAA適?3以，共同反向引物序適列為以5?TAACCT適?以CATTCAGGAC適以T?3，質(zhì)控正向引物適以序列為5?CTT?T以適GCTATCATTC帳C適AG?3。

?13帳7位適點(diǎn)2條特異性正向帳引物序適列分別為5?帳CCCC適AACTTT帳TACGG篇A?AGA帳AAAG?3篇和5帳?CCCCAA篇CTT帳TTACGGAA篇G?帳AAAAC?3，篇共帳同反向引物序列為5篇引?AGGAGGGC?A篇引AAATGCACTGG引篇?3，質(zhì)控正向引物引序篇列為5?CCAA引TA篇GGACTGAT引TAT篇TCCGCA?引3。

?篇607位點(diǎn)的引PCR總體篇系為25引L，包括10篇PCR引緩沖液L(含篇mmo腰l/LMgCl2篇)，腰mmol/L的dN篇T腰P，約30ng基因組篇腰DNA和1UTaq聚合篇腰酶。

質(zhì)控正向引物mo腰篇l/L，一種特異性正腰向篇引物mol/L，腰共同篇反向引物mol腰/L。

篇擴(kuò)增參數(shù)：

首先腰94℃預(yù)篇變性4min液;然后94篇℃變性20液s，62℃退篇火40s液，72℃延伸4篇0s，液共行7個(gè)循環(huán);隨篇后9液4℃變性20s，5篇5液℃退火40s，72℃篇液延伸40s，共進(jìn)行35篇液個(gè)循環(huán)。

取2條特異性正液篇向引物分別擴(kuò)增的PC液R篇產(chǎn)物于20g/L瓊液脂糖篇凝膠中電泳，電壓依80V篇，40min，依溴化乙錠翔染色，紫外線依凝膠成像系翔統(tǒng)觀察結(jié)果依并鑒定等位基翔因頻率。

依?137位點(diǎn)的翔PCR依總體系為25L翔，包依括10PCR緩沖翔液依L(含mmol/L翔依MgCl2)，mmol翔依/LdNTP，約30n雁翔g基因組DNA和1U雁T翔aq聚合酶。

質(zhì)控正隱向引翔物mol/L，隱一種特翔異性正向引物隱mol/翔L，共同反向隱引物mo侶l/L。

擴(kuò)隱增參數(shù)：

首先侶94℃預(yù)隱變性2min;侶然后9旨4℃變性20s，侶68旨℃退火60s，共行侶5旨個(gè)循環(huán);隨后94℃變侶旨性20s，62℃退火2侶旨0s，72℃延伸40s旨侶，共進(jìn)行25個(gè)循環(huán)。

旨取侶2條特異性正向引物旨分別侶擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物旨于20侶g/L的瓊脂糖旨凝膠中電侶泳，電壓80肘V，40m侶in，溴化肘乙錠染色，紫侶外線凝膠肘成像系統(tǒng)觀察結(jié)侶果并鑒肘定基因型。

2結(jié)果侶肘IL?18基因?607侶肘位點(diǎn)多態(tài)性電泳每肘份侶標(biāo)本分別用2條特異肘性正侶向引物做2管PC肘R，3侶01bp處為質(zhì)肘控條帶，侶196bp處袖是A/C等侶位基因特異袖性擴(kuò)增片段。

位部分標(biāo)本袖?607位點(diǎn)多位態(tài)性檢袖測電泳結(jié)果如圖1位。

標(biāo)袖本①只有C等位基因位處袖可觀察到長196bp位袖特異性擴(kuò)增片段，所以其位袖基因型為CC;標(biāo)本②～袖位④的2管PCR產(chǎn)物電袖泳位后均可觀察到長19鑄6b位p特異性擴(kuò)增片段鑄，故其位為CA基因型;鑄標(biāo)本⑤只位有A等位基因鑄處可觀察到位長196b鑄p特異性擴(kuò)增位片段，其鑄基因型則為AA位。

鑄IL?18基因?位1鑄37位點(diǎn)多態(tài)性電泳圖位鑄2為部分標(biāo)本IL?18位鑄基因?137位點(diǎn)多態(tài)性窒位電泳檢測結(jié)果，每份標(biāo)窒本位分別用2條特異性正窒向引位物做2管PCR，窒446位bp處為質(zhì)控條窒帶，26位1bp處為G窒/C等位基位因特異性擴(kuò)窒增片段。

標(biāo)本位②和④只窒有G等位基因處位可觀察窒到長261bp特位異性窒擴(kuò)增片段，所以其基位因益型為GG;標(biāo)本③和⑤位益在兩管PCR產(chǎn)物電泳后位益均可觀察到長261bp益位特異性擴(kuò)增片段，其基益因位型為GC;標(biāo)本①只益有C位等位基因處可觀察益到長度位為261bp特益異性擴(kuò)增枝片段，其基因益型則為CC枝。

兩益組IL?18基枝因?1引37G/C、?6枝07幼C/A位點(diǎn)基因型頻枝率幼和等位基因頻率的比較枝幼兩組IL?18基因幼枝?137G/C、?6幼0枝7C/A位點(diǎn)基因型幼頻率枝及等位基因頻率比幼較，差枝異均無顯著意義幼(P)枝。

見表1、2幼。

兩組血清枝IL?1映8水平的比較枝P映SS組病人和對照組枝的映血清IL?18水平分枝映別為()和()ng枝映/L，兩組比較差異有顯映枝著性(t=,PIL?映1枝8不同基因型病人血映清I枝L?18水平比較映P枝SS組病人I映L?18基枝因?607腋位點(diǎn)CC、C枝A、AA腋基因型的血清I枝L?1腋8水平分別為(枝)、腋()、()ng枝/腋L，IL?18基因?枝腋137位點(diǎn)GG、GC、硯腋CC基因型的血清IL?腋硯18水平則分別為(腋)硯、()、()n腋g/硯L，不同基因型間繡血清I硯L?18水平比繡較差異均硯無顯著性(P繡)。

見表硯2。

繡表1IL?18硯基因?繡607C/A位點(diǎn)硯多態(tài)繡性分布及其比較(例硯(繡/%))組別n基因硯繡型頻率CCCAAA等位硯怨基因頻率CA對照組52怨硯13()28()11怨(硯)54()50()怨PS硯S組287()1怨4()硯7()28()怨28()硯表2I隅L?18基因硯?137隅G/C位點(diǎn)多態(tài)硯性分布隅及其比較(例(硯/%隅))組別n基因型頻硯率隅GGGCCC等位基因硯隅頻率GC對照組5238硯隅()13()1()89隅硯()15()PSS組隅2硯822()5()1隅()硯49()7()3淤討論硯PSS是一淤種慢性系統(tǒng)硯性自身免疫淤性疾病，在多硯種因素的淤共同作用下，可墟導(dǎo)致機(jī)淤體細(xì)胞和體液免疫墟異常淤，表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞和墟漿淤細(xì)胞對靶器官的進(jìn)行性墟淤浸潤，造成靶器官功能障墟淤礙。

研究表明，PSS病淤墟人疾病活動(dòng)期體內(nèi)T細(xì)豫胞墟亞群數(shù)量分布存在明豫顯異墟常，表現(xiàn)為CD4豫+T淋墟巴細(xì)胞水平降低豫，而CD墟8+T淋巴細(xì)豫胞水平升高墟[2?3]豫。

CD4+T墟淋巴細(xì)胞豫水平降低，導(dǎo)致墟Th1豫和Th2亞群的分墟布出豫現(xiàn)異常，進(jìn)而引起機(jī)墟體豫細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控失常暈袖，如PSS活動(dòng)期病人體暈袖內(nèi)IFN?等細(xì)胞因子袖暈水平有明顯下降，對疾袖病暈的進(jìn)展影響較大[4袖]。

暈IL?18屬于I袖L?1暈家族成員，它可袖誘生IF暈N?等細(xì)胞袖因子。

IN暈F?的生袖成可促進(jìn)Th暈0細(xì)胞向袖Th1細(xì)胞分化暈，從而邀調(diào)節(jié)Th1/Th暈2細(xì)邀胞平衡，因此認(rèn)為，暈I邀L?18是調(diào)節(jié)Th1暈邀/Th2細(xì)胞因子的重要暈邀因子[5]。

MATER邀暈A等[6]研究表明，邀I暈L?18在IL?1邀2誘暈導(dǎo)新生CD4+T邀淋巴細(xì)暈胞分化為Th1邀細(xì)胞時(shí)起暈加強(qiáng)作用，在邀IL?12暈協(xié)同作用下邀，IL?18暈可強(qiáng)烈誘邀導(dǎo)IFN?等暈Th1邀型細(xì)胞因子的產(chǎn)生暈，導(dǎo)邀致組織損傷。

本研究暈結(jié)邀果顯示，PSS病人血暈邀清IL?18水平明顯低暈邀于對照組，推測PSS病邀暈人血清IL?18水平邀降暈低可能導(dǎo)致Th1細(xì)邀胞分暈泌IFN?水平猙下降，暈Th2細(xì)胞分泌猙IL?4暈水平相對增高猙。

進(jìn)一步引暈起Th1型猙細(xì)胞免疫反應(yīng)暈下調(diào)而T堯h2型細(xì)胞免疫暈反應(yīng)相堯?qū)υ鰪?qiáng)，Th1/暈Th堯2細(xì)胞免疫失衡擴(kuò)大暈，堯使機(jī)體在多種因素的侵暈堯襲下引起免疫反應(yīng)異常，櫻堯通過各種細(xì)胞因子和炎癥堯櫻遞質(zhì)的作用，造成PS堯S櫻病人組織的損傷。

細(xì)堯胞因櫻子的表達(dá)量受基因堯調(diào)控，櫻編碼細(xì)胞因子的堯結(jié)構(gòu)基因櫻轉(zhuǎn)錄效率下降堯可導(dǎo)致細(xì)胞櫻因子的表達(dá)堯量降低。

近年櫻來，對I堯L?18基因啟櫻動(dòng)子區(qū)堯單核苷酸多態(tài)性(櫻SN堯P)與疾病的關(guān)系研櫻究堯有諸多報(bào)道，許多研究櫻堯結(jié)果顯示，IL?18基櫻堯因多態(tài)性能影響疾病的發(fā)蟻櫻生、發(fā)展[7?9]。

蟻I櫻L?18基因?60蟻7C櫻/A和?37G/蟻C位點(diǎn)櫻分別存在核因子蟻cAMP櫻反應(yīng)元件結(jié)合蟻蛋白和組蛋櫻白H4轉(zhuǎn)錄蟻因子結(jié)合部位櫻，SIV蟻A等[9]研究櫻認(rèn)為其蟻多態(tài)性可能影響I櫻L?蟻18的轉(zhuǎn)錄水平。

張櫻平蟻安等[10]采用體外櫻蟻PBMC培養(yǎng)和刺激方法櫻蟻研究IL?18基因型和蟻櫻表型的關(guān)系，結(jié)果表明蟻兩櫻個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性蟻對I櫻L?18分泌和表蟻達(dá)無明櫻顯影響。

本研究蟻對IL?櫻18基因?6蟻07C/A櫻、?137蟻G/C位點(diǎn)多櫻態(tài)性分析蟻結(jié)果表明，兩組櫻IL?影18基因?607櫻C/影A、?137G/C櫻位影點(diǎn)基因型頻率和等位基櫻影因頻率均無顯著性差異，櫻影未得出IL?18基因?影盂607C/A、?13影7冤G/C位點(diǎn)多態(tài)性與影PS冤S相關(guān)的結(jié)論。

同影時(shí)，對冤不同基因型間的影血清IL冤?18水平進(jìn)影行統(tǒng)計(jì)學(xué)分冤析，也未得影出基因多態(tài)性冤可影響I影L?18血清水冤平的結(jié)影論。

由此推斷，I冤L?影18基因?607C冤/影A、?137G/C位冤影點(diǎn)多態(tài)性與某些疾病的易冤影感性有關(guān)，并非完全是通影冤過對于其表達(dá)量的影響影而冤發(fā)揮作用，可能是該影位點(diǎn)冤與其他相鄰位點(diǎn)存謅在連鎖冤失衡的共同結(jié)果謅，也可能冤與樣本大小、謅種族差異、冤地域差異以謅及遺傳因素和冤環(huán)境因素謅之間存在著復(fù)雜冤的相互謅作用等原因有關(guān)。

冤【參謅考文獻(xiàn)】[1]雁謅VILMANTASG,雁謅BINGH,WENXH謅雁,etal.Clon謅i雁ngandmuta謅ti雁onanalys謅iso雁fthehum謅anIL雁?18pro謅motor雁:apos謅sibler雁oleo謅fpolymo雁rph謅ismsinex雁pr謅essionreg雁u謅lation[J].雁洲JNeuroimmun雁洲ol,2001,112洲雁:146?152.洲雁[2]VILLA洲RRE雁ALGM,AL洲COCE雁R?VARE洲LAJ,L雁LOREN洲TEL.Cy雁toki洲negenea雁ndC洲D(zhuǎn)25antig雁en洲expressio雁n洲byperipher雁洲albloodTcel雁洲lsfrompatie洲雁ntswithpri洲m雁arySjogre洲n雁ssyndrom洲e[J雁].Autoi洲mmun雁ity,19洲95,20雁(4):2洲23.[雁3]H枕US,TAOD,雁HE枕P.Immunop雁h枕enotypingo牙枕flymphocyte牙虛TandBintheP虛牙eripheralb虛l牙oodofsyst虛em牙iclupuse虛ryt牙hematos虛us[J牙].JTon虛gjiMe牙dUniv虛ersity牙,200虛1,21(2)牙:10虛8.[4]K牙O虛HRIYAMAK,K牙虛ATAYAMAY.Di牙虛sproportion虛牙ofhelperTc虛e牙llsubsets虛in牙peripher虛alb牙loodofp虛atie牙ntswit虛hprim牙arySj虛?gren牙ssyn虛drome[J牙].A職utoimmun牙it職y,2000,32牙(職1):67?72.牙職[5]KIMURAK職牙,KAKIMIK,W職I牙ELANDS,et職al牙.Interle職uki牙n?18inh職ibit牙shepat職itisB牙virus職replic牙atio職ninthel牙ive職rsoftran牙sg職enicmic