血球計(jì)數(shù)板專題復(fù)習(xí)

關(guān)于血球計(jì)數(shù)板專題復(fù)習(xí)血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造和使用第2頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月

方格網(wǎng)上刻有9個(gè)大方格，其中只有中間的一個(gè)大方格為計(jì)數(shù)室，供微生物計(jì)數(shù)用。

大方格的長(zhǎng)和寬各為1mm，深度為0.1mm，即1mm×1mm×0.1mm，其容積為0.1mm3；

第3頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月

血球計(jì)數(shù)板是一種專門用于計(jì)算較大單細(xì)胞微生物數(shù)量的儀器，由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四條下凹的槽，構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面刻有一個(gè)方格網(wǎng)。

血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)第4頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月大方格中方格小方格第5頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月計(jì)數(shù)16×25型：

一般取四角的四個(gè)中方格（100個(gè)小方格）計(jì)數(shù)25×16型：一般計(jì)數(shù)四個(gè)角和中央的五個(gè)中方格（80個(gè)小方格）的細(xì)胞數(shù)。

第6頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月計(jì)數(shù)室兩種規(guī)格

1．16×25型的計(jì)數(shù)板將計(jì)數(shù)室放大，可見它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四個(gè)中方格（100個(gè)小方格）計(jì)數(shù)。

細(xì)胞個(gè)數(shù)／1mL＝100個(gè)小方格細(xì)胞總數(shù)/100

×400×10000×稀釋倍數(shù)

第7頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月2．25×16型的計(jì)數(shù)板中央大方格以雙線等分成25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格，供細(xì)胞計(jì)數(shù)用（見圖三）。一般計(jì)數(shù)四個(gè)角和中央的五個(gè)中方格（80個(gè)小方格）的細(xì)胞數(shù)。

細(xì)胞個(gè)數(shù)／1mL＝80個(gè)小方格細(xì)胞總數(shù)/80

×400×10000×稀釋倍數(shù)

第8頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月血球計(jì)數(shù)板的使用方法步驟1．鏡檢計(jì)數(shù)室。在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)；2．加樣品。將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，一次性充滿計(jì)數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去；3．計(jì)數(shù)。稍待片刻（約5min），待酵母菌細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)室底部后，將計(jì)數(shù)板放在載物臺(tái)的中央，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)室所在位置后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察、計(jì)數(shù)并記錄。第9頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月注意事項(xiàng)1.從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，建議將試管震蕩幾次，目的是什么？目的：使培養(yǎng)液中酵母菌分布均勻，以保證估算準(zhǔn)確，減少誤差2．如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過(guò)多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋。具體方法是：

搖勻試管，取1mL酵母菌培養(yǎng)液，加入成倍的無(wú)菌水稀釋，稀釋n倍后，再用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，所得數(shù)值乘以稀釋倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有4—5個(gè)酵母細(xì)胞為宜。第10頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月3．活酵母有芽殖現(xiàn)象，若芽體達(dá)到母細(xì)胞大小的一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)，若芽體小于母細(xì)胞一半時(shí)為1個(gè)酵母細(xì)胞。4．對(duì)于壓在方格界線上的酵母菌應(yīng)當(dāng)計(jì)數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的菌體數(shù)，一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理，另兩邊不計(jì)數(shù)。第11頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月5．計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算，對(duì)每個(gè)樣品可計(jì)數(shù)三次，再取其平均值。6．血球計(jì)數(shù)板的清潔血球計(jì)數(shù)板使用后，用自來(lái)水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，或用95%的乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥。通過(guò)鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)清洗直到干凈為止。第12頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月例1、通常用血球計(jì)數(shù)板對(duì)培養(yǎng)液中酵母菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，若計(jì)數(shù)室為1mm×1mm×0.1mm方格，由400個(gè)小方格組成，如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過(guò)多，難以計(jì)數(shù)，應(yīng)先

后再計(jì)數(shù)。若多次重復(fù)計(jì)數(shù)后，算得每個(gè)小方格中平均有5個(gè)酵母菌，則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有

個(gè)。（參考答案：稀釋；2×108）5×400×10000×10＝2×108

。第13頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月例2.檢測(cè)員將1mL水樣稀釋10倍后，用抽樣檢測(cè)的方法檢測(cè)每毫升藍(lán)藻的數(shù)量；將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計(jì)數(shù)室，并用濾紙吸去多余液體。已知每個(gè)計(jì)數(shù)室由25×16＝400個(gè)小格組成，容納液體的總體積為0．1mm3。

現(xiàn)觀察到圖中該計(jì)數(shù)室所示a、b、c、d、e5個(gè)中格80個(gè)小格內(nèi)共有藍(lán)藻n個(gè)，則上述水樣中約有藍(lán)藻

個(gè)／mL。5n×105第14頁(yè),共16頁(yè)，星期六，2024年，5月解析：從例題來(lái)看，是按照血球計(jì)數(shù)板的原理進(jìn)行設(shè)計(jì)試題的，還添加了相應(yīng)的圖示，題意一目了然。按照前面所述的公式，不難得出正確答案：酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)／1mL＝80個(gè)小方格細(xì)胞總數(shù)/