AbMole 人源化單抗動(dòng)物實(shí)驗(yàn)黃金指南(上)

AbMole|人源化單抗動(dòng)物實(shí)驗(yàn)黃金指南(上)單克隆抗體以其高特異性和單一性的生物學(xué)功能，在治療腫瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反應(yīng)等多種疾病上發(fā)揮著強(qiáng)大的作用。在新藥研發(fā)和基礎(chǔ)科研領(lǐng)域，越來(lái)越多的重點(diǎn)項(xiàng)目也焦距在了人源化單抗的開(kāi)發(fā)和拓展運(yùn)用上。接下來(lái)，AbMole將通過(guò)2期原創(chuàng)性綜述為您展示各種人源化單抗在不同品系小鼠中體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的精華，希望以我們的專(zhuān)業(yè)精神為您鋪就通往成功的道路！首先，我們先了解一下人源化單抗抑制劑動(dòng)物試驗(yàn)中常用到的不同品系的小鼠：近交系小鼠通過(guò)連續(xù)多代近親交配繁殖后獲得的基因高度純合化小鼠。常見(jiàn)的品系有：BALB/c（白色）和C57BL（黑色）。具有相對(duì)完整的鼠源免疫系統(tǒng)（如B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和NK淋巴細(xì)胞等），與鼠類(lèi)移植腫瘤組織相容。如使用此類(lèi)近交系小鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，需確定所用人源化單抗抑制劑對(duì)鼠類(lèi)對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)可識(shí)別且有活性。Nude小鼠先天性胸腺缺陷的突變的體毛稀少小鼠，其免疫系統(tǒng)特征為：先天性無(wú)胸腺，缺少T細(xì)胞，T細(xì)胞功能明顯有喪失；但B細(xì)胞功能正常；NK細(xì)胞活力增強(qiáng)。是常用的異種移植動(dòng)物（如永生化人腫瘤細(xì)胞的接種和生長(zhǎng)）。SCID小鼠有自發(fā)重度聯(lián)合免疫缺陷突變的白化品系小鼠，由于該突變妨礙了T細(xì)胞和B細(xì)胞的發(fā)育和成熟，所以該品系小鼠的B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞功能聯(lián)合缺失，但卻擁有正常的NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等。是PDX（Patient-DerivedtumorXenograft，人源腫瘤異種移植）模型的良好宿主。NOD-SCID小鼠在SCID小鼠基礎(chǔ)上，與非肥胖性糖尿病小鼠（NOD/Lt）品系回交后得到的免疫缺陷型小鼠。除T和B淋巴細(xì)胞缺乏外，同時(shí)NK細(xì)胞的活性也很低，因此其較少發(fā)生免疫排斥反應(yīng)及移植物抗宿主?。℅VHD）。大家可以看出從近交系小鼠到NOD-SCID小鼠，其免疫水平是依次降低的。在NOD-SCID小鼠基礎(chǔ)之上，人們又進(jìn)一步構(gòu)建了人源化小鼠，用以模擬人體免疫細(xì)胞應(yīng)答的微環(huán)境和探索免疫系統(tǒng)與人類(lèi)腫瘤細(xì)胞或組織之間的相互作用。常見(jiàn)的人源化小鼠有如下2種：a.CD34+人源化小鼠。該品系小鼠可以通過(guò)移植人臍帶血CD34+細(xì)胞，在免疫缺陷鼠NOG/NPG體內(nèi)重建免疫系統(tǒng)后獲得。特別適用于免疫腫瘤學(xué)、傳染病、宿主-抗體疾病的長(zhǎng)期研究。b.PBMC（外周血單核細(xì)胞）人源化小鼠。該品系小鼠則多通過(guò)靜脈注射或腹腔注射分離的人外周血單核細(xì)胞入免疫缺陷鼠并重建免疫系統(tǒng)后獲得。適合用于研究T細(xì)胞調(diào)節(jié)的藥物及感染和免疫排斥研究。上述兩種人源化小鼠本質(zhì)上是通過(guò)將人的免疫細(xì)胞注射入免疫缺陷型小鼠中，在小鼠體內(nèi)重建并模擬人體免疫系統(tǒng)。每次實(shí)驗(yàn)均需單獨(dú)構(gòu)建。人源化（基因工程）小鼠該品系小鼠并不直接引入大量的人免疫細(xì)胞，而是針對(duì)性地將小鼠特定的靶點(diǎn)蛋白或其胞外段（如CTLA4和PD-1等）人源化形成轉(zhuǎn)基因小鼠。這種形式的人源化小鼠在很多情況下是可遺傳的。

在了解了不同小鼠模型的區(qū)別之后，我們一起來(lái)看看各單抗抑制劑在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的使用吧。Avelumab

(產(chǎn)品編號(hào)M3813)Avelumab是一種獨(dú)特的強(qiáng)ADCC活性的PD-L1全人源化抗體，能有效地阻止PD-L1與PD-1的結(jié)合。因?yàn)锳velumab與人和小鼠的PD-L1都有很高的親和力，所以構(gòu)建腫瘤模型時(shí)使用的是C57BL品系小鼠。首先將MB49親代細(xì)胞經(jīng)皮下注射至C57BL/6小鼠體內(nèi)，待腫瘤長(zhǎng)至適當(dāng)體積。將Avelumab及同型對(duì)照都經(jīng)DPBS稀釋后用于注射。對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行腹腔注射3次，每次間隔3天。由于Avelumab是人IgG1，因此必須在7-9天的窗口內(nèi)集中注射3次，以避免中和小鼠抗人Ig的出現(xiàn)。結(jié)果表明，Avelumab可明顯抑制MB49的腫瘤生長(zhǎng)，并提高小鼠存活率。參考文獻(xiàn)：SystemicImmunotherapyofNon–MuscleInvasiveMouseBladderCancerwithAvelumab,anAnti–PD-L1ImmuneCheckpointInhibitorTrastuzumab(產(chǎn)品編號(hào)M6218)Trastuzumab是人源化單抗抑制劑，與HER2的胞外區(qū)域相結(jié)合，適用于人源或免疫缺陷型小鼠。從EC病人處獲得的ESCC組織移植到SCID小鼠體內(nèi)。90天后再?gòu)倪@些小鼠體內(nèi)將ESCC外植體取出并進(jìn)一步移植到裸鼠體內(nèi)，以此進(jìn)行3代鼠傳鼠的移植后，基本穩(wěn)定建立具有HER2表達(dá)差異和PIK3CA基因突變的病人來(lái)源的食管鱗狀細(xì)胞癌外植體(PDECX)小鼠模型。將PDECX小鼠分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組的小鼠接受Trastuzumab的單藥治療（腹膜注射，每周4mg/kg/兩次）或Trastuzumab與AKT抑制劑AZD5363的組合（口服給藥，每天120mg/kg/兩次）治療。每周兩次檢測(cè)裸鼠的皮下腫瘤和小鼠體重。結(jié)果表明，PIK3CA基因突變且HER2表達(dá)陽(yáng)性的PDECX小鼠對(duì)Trastuzumab或AZD5363的單獨(dú)治療不敏感，但Trastuzumab與AZD5363的聯(lián)合治療能明顯地抑制該腫瘤的生長(zhǎng)。參考文獻(xiàn)：Trastuzumabanti-tumorefficacyinpatient-derivedesophagealsquamouscellcarcinomaxenograft(PDECX)mousemodelsNivolumab

(產(chǎn)品編號(hào)M6100)Nivolumab是一種通過(guò)基因工程改造的、人類(lèi)免疫球蛋白(Ig)G4單克隆抗體，靶向具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能的人類(lèi)細(xì)胞表面受體程序性死亡-1（PD-1,PCD-1），適用于人源小鼠。首先分離收集人的淋巴細(xì)胞，并通過(guò)尾靜脈注射將其注入NPG小鼠體內(nèi)以構(gòu)建PBMC人源化小鼠。待小鼠血液中人CD45陽(yáng)性細(xì)胞超過(guò)25%后，為小鼠皮下接種KHOS細(xì)胞，并每隔5天以10mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射無(wú)菌鹽水或Nivolumab，總共注射五次。結(jié)果表明，Nivolumab能夠抑制體內(nèi)骨肉瘤轉(zhuǎn)移。同時(shí)，Nivolumab治療組的肺轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)明顯少于對(duì)照組。參考文獻(xiàn)：PD-1axisexpressioninmusculoskeletaltumorsandantitumoreffectofnivolumabinosteosarcomamodelofhumanizedmouseAdalimumab

(產(chǎn)品編號(hào)M6222)Adalimumab是靶向TNF-alpha的人源化單克隆抗體，抑制TNF-alpha，適用于人源及非人源化小鼠。首先將有BALB/c背景的SKG小鼠進(jìn)行分組，一部分腹腔內(nèi)注射經(jīng)PBS稀釋的Curdlan，另一部分僅注射PBS。然后再將一半數(shù)量的注射了Curdlan的小鼠給與Adalimumab的治療。結(jié)果顯示，Adalimumab能很明顯地改善由Curdlan誘導(dǎo)的SKG小鼠外周關(guān)節(jié)炎。參考文獻(xiàn)：EffectoftumornecrosisfactorinhibitiononspinalinflammationandspinalankylosisinSKGmiceAtezolizumab

(產(chǎn)品編號(hào)M6101)Atezolizumab是人源、IgG1單克隆抗體，阻止PD-L1與PD-1和B7.1的相互作用，但不影響PD-L2與PD-1的相互作用，適用于人源及非人源化小鼠。首先將CT26細(xì)胞經(jīng)皮下注射入BALB/C小鼠體內(nèi)，待腫瘤長(zhǎng)至適當(dāng)體積，再將Atezolizumab或?qū)φ誌gG經(jīng)腹膜注射入小鼠。之后收集腫瘤，并檢測(cè)其中活細(xì)胞上CD80或CD86的表面表達(dá)。結(jié)果表明，Atezolizumab能夠很好地消耗腫瘤浸潤(rùn)APC上的CD80。參考文獻(xiàn)：PD-L1:CD80Cis-HeterodimerTriggerstheCo-stimulatoryReceptorCD28WhileRepressingtheInhibitoryPD-1andCTLA-4PathwaysBevacizumab

(產(chǎn)品編號(hào)M6166)Bevacizumab是一種人源化血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）抗體，適用于人源及非人源化小鼠。將Nluc-H1915細(xì)胞皮下接種入SCID小鼠構(gòu)建腫瘤模型。當(dāng)腫瘤長(zhǎng)至適當(dāng)體積時(shí)，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，分別以5mg/kg的劑量每周一次注射HuIgG和Bevacizumab。在第22天檢測(cè)腫瘤體積以及Nluc活性。結(jié)果表明，接受Bevacizumab治療的小鼠腫瘤平均體積以及平均Nluc活性均顯著低于對(duì)照組。參考文獻(xiàn)：Bevacizumabsuppressesthegrowthofestablishednon-small-celllungcancerbrainmetastasesinahematogenousbrainmetastasismodel

Ipilimumab

(產(chǎn)品編號(hào)M6104)Ipilimumab(MDX-010,BMS-734016)是一種免疫調(diào)節(jié)單克隆抗體，靶向細(xì)胞表面抗原CTLA-4；也是一種免疫檢查點(diǎn)抑制劑。培養(yǎng)來(lái)自于正常健康白細(xì)胞供體的外周血單核細(xì)胞（PBMC），并用不同濃度的SEB刺激。然后將10μg/mL的Ipilimumab，Nivolumab或HuIgG4同種型對(duì)照加入其中。第3天通過(guò)ELISA測(cè)量IL-2分泌。結(jié)果表明，在SEB刺激的PBMC培養(yǎng)物中，雖然單獨(dú)使用Nivolumab或Ipilim