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備案號(hào)：37939-2013DB22DB22/T1820—2013糧食中串珠鐮刀菌的PCR檢測(cè)PCRdetectionofFusariummoniliformingrains2013-05-15發(fā)布2013-09-0吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1GB4789.15食品微生物學(xué)檢GB/T4789.16食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)WS/T230臨床診斷中聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)串珠鐮刀菌是一種重要的農(nóng)作物病原真菌，能引起禾本科作物的根腐、莖腐和穗腐，是玉米青枯模板DNA先經(jīng)高溫變性成為單鏈，在DNA聚合酶作用和適宜的反應(yīng)條件下，根據(jù)模板序列設(shè)計(jì)的兩條引物分別與模板DNA兩條鏈上相應(yīng)的一段互補(bǔ)序列發(fā)生退火而相互結(jié)合，接著在DNA聚合酶的作4.2馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基（Po2）；），上游：5’-CTTGGTCATGGGCCAGTCAA4.15分子量標(biāo)記：2000bpDNAMa5.10紫外分光光度計(jì)。3加入500μLCTAB、40μL蛋白酶K，震蕩均勻，65℃水浴30min；加入500μL酚：三氯甲烷：異戊醇的異丙醇，震蕩混勻，12000r/min離心10min；棄上清液，用預(yù)熱至65℃TE緩沖液溶解DNA（TE量1)，強(qiáng)烈震蕩，12000r/min離心15min；吸取上層水相至新的1.5mL離心管中，加入等體積的異采用紫外分光光度法測(cè)定DNA，所測(cè)得OD值為將DNA溶液做適當(dāng)?shù)南♂?，放入紫外分光光度?jì)的比色皿中，于260nm處測(cè)定其吸收值，1檢驗(yàn)過程中分別設(shè)空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照。空白對(duì)照設(shè)為以水代替DNA模板；陰性對(duì)照采4用電泳緩沖液（1×TAE）制備1.0%~1.2%瓊脂糖凝膠（55℃~60℃時(shí)加入溴化乙錠至終濃度為0.5用2000bpDNAMarker作參照。9V/cm恒壓電在陰性對(duì)照未出現(xiàn)條帶，陽性對(duì)照出現(xiàn)預(yù)期1.6kb的擴(kuò)增條帶條件下，如測(cè)試樣擴(kuò)增條帶，表示樣品中無串珠鐮
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