中藥飲片鑒別基礎(chǔ)知識(簡)

中藥飲片鑒別根底知識一．中藥飲片鑒別的定義與任務(wù)

1.1中藥飲片鑒別的定義

1.2中藥飲片鑒別的目的與任務(wù)二．中藥飲片鑒別的方法

2.1性狀鑒別方法

2.2顯微鑒別方法

2.3理化鑒別方法

2.4生物技術(shù)鑒別方法

2.5分類鑒別方法三．中藥飲片鑒別的內(nèi)容與依據(jù)

3.1中藥飲片鑒別的內(nèi)容

3.2中藥飲片鑒別的依據(jù)一中藥飲片鑒別的定義與任務(wù)1.1中藥飲片鑒別的定義

用性狀鑒別方法、顯微鑒別方法、理化鑒別方法、生物技術(shù)鑒別方法和分類鑒別方法鑒別中藥飲片品種真?zhèn)?、質(zhì)量優(yōu)劣的科學(xué)。1.2中藥飲片鑒別的目的與任務(wù)1.2.1中藥飲片鑒別的目的·確定品種及其不同商品規(guī)格的炮制品，識別飲片正品、混淆品及偽品?！よb別品質(zhì)，確定飲片不同的商品等級與質(zhì)量優(yōu)劣。1.2.2中藥飲片鑒別的任務(wù)

識別品種正偽，保證飲片質(zhì)量。中藥飲片品種眾多，來源廣泛。由于歷史的原因，飲片名實(shí)不符，正品、混淆品以及偽品混淆的情況嚴(yán)重存在，影響中藥飲片的臨床療效和信譽(yù)。鑒別飲片品種，弄清正品、混淆品和偽品，可保證其品種正確，質(zhì)量可靠。鑒別飲片不同規(guī)格的炮制品與商品等級，保證臨床合理用藥。中藥飲片的生品、制品含化學(xué)成分有別，臨床應(yīng)用目的有所側(cè)重，且其不同的商品規(guī)格等級與其所含成分、療效有直接的關(guān)系。鑒別飲片不同規(guī)格的炮制品與商品等級，對保證臨床合理用藥，提高臨床治療效果有重要意義。確定飲片質(zhì)量優(yōu)劣指標(biāo)，制訂切實(shí)可行的中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。中藥產(chǎn)地廣泛，采時(shí)有定，中藥飲片炮制有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。同一種中藥，不同產(chǎn)地，不同采集時(shí)間，不同炮制方法，對其活性成分有明顯影響。如秦皮以春夏之交時(shí)采集嫩皮，采后立即切絲、晾干，有效成分秦皮甲素、秦皮乙素含量高。而秋冬之季采集，水浸漬后切絲、晾干，有效成分含量低。以中藥飲片所含有代表性的活性成分為指標(biāo)，確定不同中藥飲片的地道產(chǎn)地、采集時(shí)間和炮制方法，為制訂中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)，也是中藥飲片鑒別的任務(wù)之一。二中藥飲片鑒別的方法2.1性狀鑒別方法用眼看、手摸、鼻聞、口嘗和試驗(yàn)(水試、火試)等方法觀察中藥飲片的形狀、大小、顏色、氣味、質(zhì)地和火燒爆鳴、入水浮沉等特征以鑒別其真?zhèn)蝺?yōu)劣的方法。2.1.1眼看看，系用眼睛直觀中藥飲片的形狀與顏色，切面、周邊與外外表和斷面等特征。看形狀與顏色

指看中藥飲片固有的外形特征及其色澤。如腎形的沙苑子，喇叭狀的凌霄花，切面平坦，顯銀白色光澤，中部有直徑0.3～1.5cm的空心或半透明的薄膜，縱剖面呈梯狀排列的通草；而其偽品小通草的外表為白色或淡黃色，無明顯紋理；切面平坦，顯銀白色光澤，無空心，等。觀察全草類、葉類、花類和某些動物類中藥飲片時(shí)，需先將其用水浸濕，使其展平后觀察。如觀察金錢草飲片，需將其水潤軟化后，將葉片展開置光線充足處觀察，有棕色線紋的鑒別特征；而其偽品點(diǎn)腺過路黃的葉片那么布滿腺點(diǎn)。觀察中藥飲片色澤應(yīng)在自然光下，色澤的描述，要確切、簡明，用兩種顏色復(fù)合描述時(shí)，以后種色調(diào)為主。如棕黃色，以黃色為主，黃棕色，以棕色為主，同等顏色有深淺不同時(shí)，用比較法說明。如綠色、淺綠色；紅色、淺紅色、深紅色，等。礦物類中藥飲片色澤的觀察，要注意假色與本色的分別描述，不可模糊不清?？辞忻?/p>

指看中藥飲片切面的形狀、顏色、質(zhì)地和紋理等特征。如山柰切面類白色，富粉性，中央略凸起，邊緣稍向內(nèi)翻，習(xí)稱“縮皮凸肉”，其偽品苦山柰切面多平坦或略翹，表皮多向內(nèi)翻；何首烏切面淺黃棕色或前紅棕色，有4～11個(gè)類圓形異形維管束環(huán)列，呈云錦花紋狀；檳榔切面棕紅色與乳白色相間的大理石樣花紋；雞血藤切面木部淺棕色或棕色，有多數(shù)導(dǎo)管孔，韌皮部有紅褐色或黑棕色樹脂狀分泌物，三者相間排列呈3～8個(gè)偏心性半圓形的環(huán)，其偽品白花油麻藤韌皮部有淺紅色或棕紅色樹脂狀分泌物，三者相間排列呈1～3個(gè)圓形的環(huán)；山豆根切面皮部棕黃色至淡棕色，可見棕色環(huán)紋或髓部；北豆根切面淺棕黃色，木部淡黃色、白色或類白色，髓居中心，淡黃色木部束與黃白色射線相間排列呈輻射狀等。看切面還要注意橫切片、斜切片與縱切片的區(qū)別。如黃芪橫切片為圓形，呈黃白色，中間具菊花心；斜切片呈橢圓形，縱切片呈長條形，韌皮部呈類白色、木質(zhì)部呈淡黃色。同時(shí)還要注意形成層的有無及形狀與切片中心的特征。如威靈仙形成層環(huán)明顯，中心(木部)呈四方形，而其混淆品鐵絲威靈仙那么無形成層環(huán)，只有一圈排列均勻的導(dǎo)管；香櫞橫切片呈圓形，邊緣油點(diǎn)明顯、中果皮呈黃白色，有不規(guī)那么網(wǎng)狀凸起的維管束，瓤囊9--17室，棕色或淡紅棕色，呈橘子瓣?duì)钶椛錉钆帕?，縱切片呈弧形或半橢圓形，瓤囊呈單橘瓣?duì)?。同時(shí)，還要注意形成層的有無及形狀與切片中心的特征。如威靈仙形成層環(huán)明顯，中心〔木部〕呈四方形，而其易混品，鐵絲威靈仙那么無形成層環(huán)，只有一圈排列均勻的導(dǎo)管?？赐獗砼c周邊即看中藥飲片外表的形狀、顏色、光澤和紋理及飲片周邊的狀態(tài)等特征。根莖類飲片的外表是指柱狀藥材的外外表，如白芷的外外表為灰棕色或黃棕色，有縱皺紋及突出外表的菱形皮孔，習(xí)稱“疙瘩丁”；山楂的外外表微有光澤，呈深紅色，布有較多的灰白色小點(diǎn)；木瓜的外外表呈紅色或棕紅色，有密集的皺紋，光皮木瓜果皮光滑而無皺紋；天麻的外外表有環(huán)狀芽痕；酸棗仁的外表為紫紅色或紫褐色，平滑有光澤，有的有裂紋，一面較平坦，中間有隆起的縱線紋，另一面稍突起，一端凹陷，可見線形種臍，另端有細(xì)小突起的合點(diǎn)；而其偽品理?xiàng)椚实耐獗頌辄S色、棕黃色或棕紅色，有光澤，具細(xì)小的棕黃色斑點(diǎn)；浮海石的外表為白色或類白色，外表與斷面均密具細(xì)孔；其偽品浮石外表粗糙，為灰白色或灰黃色，有多數(shù)大小不等的細(xì)孔，斷面有的具絹絲狀光澤。香櫞飲片的周邊呈波狀，其偽品柚子飲片的周邊為整齊的圓形，等?？磾嗝?/p>

指看中藥飲片的破折面、碎斷面或用刀削平后斷面的質(zhì)地及花紋等特征。如土茯苓破折面的粉性，大黃、木瓜破折面的顆粒性，虎杖、黃柏破折面的纖維性；厚樸斷面的閃亮晶星；紅參偽品商陸水浸潤后的刀削面呈角質(zhì)性，有明顯的數(shù)層同心形環(huán)紋，等。2.1.2手摸

摸，即用手捻拭中藥飲片質(zhì)地情況和用尺量度飲片大小的程度。捻拭質(zhì)地

指用手捻拭中藥飲片質(zhì)地的軟硬柔韌度和疏松、粘性等特征。如黃芪軟而綿韌，其偽品蜀葵那么硬而較脆；當(dāng)歸軟而柔，歐當(dāng)歸那么糯而糙；小通草手捏易變形，水浸后摸之有粘滑感；滑石潤滑而細(xì)膩，海桐皮有丁而頂手，燈心草質(zhì)輕而具彈性，天仙子手握具有黏性等。量度大小

指用測量工具量度中藥飲片的長短、厚薄和直徑的大小。測量多用游標(biāo)卡尺或具毫米刻度的直尺。飲片量值大于1cm時(shí)以厘米(cm)為單位，小于1cm時(shí)以毫米(mm)為單位。測量厚度時(shí)，要以中藥飲片中間為準(zhǔn)；測量細(xì)小個(gè)體中藥飲片(如車前子、葶藶子等)時(shí)，可將每10粒種子緊密排成一行，以毫米刻度尺測量后，求其平均值，得出每粒種子的量值。2.1.3鼻聞聞也稱嗅，即用鼻的嗅覺聞中藥飲片特有的氣味。多數(shù)中藥飲片氣味各殊，在熟悉其味的前提下，一嗅即可辨出真?zhèn)?。如信石、阿魏的大蒜氣；?xì)辛、零陵香的清香氣；牡丹皮、香加皮的芳香氣；防風(fēng)、秦艽的類胡蘿卜氣；丁香、金銀花的濃郁香氣；烏梢蛇、金錢白花蛇的腥臭氣及伏龍肝的土腥氣，等。嗅聞中藥飲片氣味時(shí)多可直接嗅聞，必要時(shí)可在折斷、破碎或揉搓及熱水濕潤后進(jìn)行。2.1.4口嘗

嘗，即用口舌嘗試中藥飲片的味道及粘舌的程度。一般是用舌尖接觸中藥飲片或取少量置口中咀嚼一分鐘左右，使舌各部位均接觸到藥液，仔細(xì)體會其味道后再吐出來。如五味子酸、苦、甘、辛、咸五味俱全，一嘗即知；木瓜混淆品西藏木瓜與木瓜在外形上不易區(qū)別，嘗其味道木瓜味酸、略澀，西藏木瓜味極酸、叮牙。桂枝味甜，偽品陰香枝味淡而辛。貴重藥物天竺黃吸濕性強(qiáng)，口嘗粘舌，其混淆品人工天竺黃吸濕性稍差，口嘗微粘舌，其偽品竹黃無吸濕性，口嘗不粘舌。肉桂味甜、辣而渣少；石斛味淡而粘滑，等。2.1.5試驗(yàn)

驗(yàn)，即用水或火對中藥飲片進(jìn)行簡單的試驗(yàn)，觀察其形狀、顏色變化等特征。

水試

指將中藥飲片用水浸漬或共研等方法處理，觀察其形狀特征變化及理化反響現(xiàn)象，鑒別中藥飲片正偽優(yōu)劣的方法。常見的水試法如下：1〕用水浸漬將中藥飲片置入水中，浸漬一定時(shí)間，觀察其形狀和水溶液顏色的變化。如蘇木熱水浸液呈鮮桃紅色；天竺黃用水浸泡，由象牙色變?yōu)闇\綠色或天藍(lán)色；天仙子易混品水蓑衣子水浸后，表皮膨脹豎立，互相粘結(jié)成團(tuán)；胖大海、蛤蟆油用水浸漬，吸水膨脹，體積膨大數(shù)倍；煅石膏水浸漬，很快粘結(jié)成團(tuán)等。2〕投入水中將中藥飲片少許投入水中，觀察其沉浮或旋轉(zhuǎn)現(xiàn)象。如上等沉香，相對密度＞1，入水那么沉；三棱質(zhì)地緊密而重，入水也沉，而其偽品荊三棱質(zhì)地疏松，入水不沉而浮于水上；熊膽粉少許投入水中，在水面旋轉(zhuǎn)并有黃線下沉而不散；麝香少許入剛沸而靜的水中，粉末急速旋轉(zhuǎn)如飛而漸沸翻溶化。3〕與水共研或用水調(diào)合將中藥飲片加水適量研磨或用水少量調(diào)合，觀察水溶液或中藥飲片外表的變化。如乳香加水共研，呈白色或黃白色乳濁液，沒藥加水共研，那么呈黃棕色至棕褐色乳濁液；藤黃加水共研，呈黃色或黃綠色乳濁液；牛黃少許加水調(diào)合，涂于指甲上，可將指甲染黃且具清涼透甲之感，蟾酥外表滴水少許有乳白色泡沫產(chǎn)生，等。4〕水煮或水溶將中藥飲片用水煮或加水溶化，觀察其形狀與水溶液的變化等。如菟絲子用水煮沸，露出白色卷旋狀的胚，形如吐絲；羚羊絲用水煮沸，具清香氣兒而不發(fā)軟；琥珀加水煮沸變軟而不溶化；血竭加水煮沸軟化發(fā)粘，水溶液不應(yīng)有色；阿膠加水煮沸，逐漸溶化，溶液澄明；大青鹽、白礬加水溶化等。水試也稱入水，意指中藥飲片入水或與水接觸后產(chǎn)生的某些變化。水試所用的水一般指蒸餾水火試

指將中藥飲片用火燒或煅，觀察其形狀、顏色、氣味、聲音和滲出物等反響現(xiàn)象，鑒別飲片正偽優(yōu)劣的方法。常用的火試方法如下：1〕直接火燒將中藥飲片直接置于火上燒灼，以嗅其氣味，觀察光焰、色澤、爆鳴等現(xiàn)象的方法。如沉香、降香火燒，有濃香氣；琥珀火燒有松香氣；安息香火燒有苯甲酸氣；雄黃火燒有大蒜氣；爐甘石煅燒為黃色，冷后變?yōu)榘咨?，陽起石煅燒時(shí)為紅色，冷后變?yōu)楹谏?，青黛火燒產(chǎn)生藍(lán)紫色煙霧；海金沙火燒有黃色火星爆鳴聲等。2〕隔物火燒將中藥飲片置于紙上或容器中，觀察其形狀、顏色及氣味等現(xiàn)象。如將血竭少血放在白紙片上，于火上燒烤，血竭溶化成片，色澤鮮紅如血，伴有嗆鼻香氣無油跡擴(kuò)散。3〕鉑金絲沾藥火燒根據(jù)礦物類藥所含金屬離子在無色火焰中產(chǎn)生的相應(yīng)顏色。取鉑金絲，用鹽酸濕潤后，沾取藥物粉末少許，置于無色火焰〔酒精燈〕中燃燒，由火焰顏色的不同，鑒別其真?zhèn)蔚姆椒?。如含鈉離子的藥物〔大青鹽、砂〕顯持久的亮黃色火焰；含銅離子的藥物〔膽礬〕顯翠綠色火焰等。2.2顯微鑒別方法

用顯微鏡觀察中藥飲片的外表特征、組織構(gòu)造、細(xì)胞形態(tài)及其后含物的形態(tài)和性質(zhì)，以鑒別其正、偽、優(yōu)、劣的方法。解剖顯微鏡鑒別法用解剖顯微鏡觀察中藥飲片的切面、周邊、外外表等特征，以鑒別其真?zhèn)蝺?yōu)劣的方法。根類、根莖類、根與根莖類、果實(shí)類、種子類和莖木類、皮類中藥飲片，可直接置顯微鏡下觀察；葉類、花類、全草類、動物類中藥飲片可預(yù)先浸軟、展平后，置顯微鏡下觀察。各類中藥飲片觀察的要點(diǎn)如下：根類、根莖類、根與根莖類注意切面髓部的有無，維管束、射線的類型和分布特點(diǎn)，周邊形狀、外外表的紋理、皮孔的類型，等。果實(shí)類、種子類注意形態(tài)、大小、顏色、外表花紋、棱線、油點(diǎn)和毛茸等附屬物特征及切面果皮、種皮、胚乳、子葉的狀態(tài)。完整的果實(shí)還要注意所含種子的數(shù)目、形狀、大小、色澤及外表特征。全草類注意藥用各部位的有無及形態(tài)，切面和內(nèi)、外外表的腺點(diǎn)、毛茸、氣孔及附屬物等特征。莖木類注意切面紋理、年輪的有無和射線分布類型，根本組織中樹脂、油點(diǎn)、晶體等內(nèi)含物特征和外外表紋理、斑痕、皮孔等特征。皮類注意外外表紋理、斑痕、皮孔和內(nèi)外表紋理狀況及晶體的有無，切面表皮、皮層的排列比例與緊密程度、射線的類型與特點(diǎn)。葉類注意葉片的葉脈、葉緣、葉基、葉端的形狀，葉片的大小、色澤，葉片上、下外表的質(zhì)地和有無毛茸、腺點(diǎn)等特征。花類注意花全形和各局部的形態(tài)、大小、花冠、花萼、花蕊形狀與數(shù)目和花序類型。動物類該類中藥飲片的藥用部位來源復(fù)雜，有動物的全體、某一局部、生理產(chǎn)物、病理產(chǎn)物或加工品等。用解剖顯微鏡鑒別時(shí)，要根據(jù)所觀察飲片藥用部位的不同，分別注意其整體各部狀態(tài)和切面特征。礦物類注意礦物類中藥飲片的形狀—集合體的形態(tài)與晶形，顏色〔自色、他色、假色〕、條痕、光澤、透明度及外表特征，等。2.2.2生物顯微鏡鑒別法

用生物顯微鏡觀察中藥飲片的組織與細(xì)胞特征，以鑒別中藥飲片真?zhèn)蝺?yōu)劣的方法。2.2.2.1各類中藥飲片橫切面組織觀察要點(diǎn)·1〕根類、根莖類、根與根莖類〔1〕根據(jù)維管束類型，確定其為單子葉植物或雙子葉植物的根?！?〕概覽各種組織的排列方式?！?〕由外向內(nèi)仔細(xì)觀察各部組織特征，并應(yīng)注意有無木栓層；表皮細(xì)胞形狀和附屬物〔根毛、凸起等〕；皮層細(xì)胞類型、形狀及層數(shù)；內(nèi)皮層細(xì)胞凱氏點(diǎn)〔帶〕特征；維管束類型，木質(zhì)部、韌皮部的排列方式及其中的導(dǎo)管、油細(xì)胞、石細(xì)胞、晶體、射線細(xì)胞等的形狀、大小、排列方式、有無髓部和細(xì)胞內(nèi)含物特征等?！?〕細(xì)胞性質(zhì)難定時(shí)，以顯微化學(xué)反響的方法試驗(yàn)確定。

2〕果實(shí)、種子類〔1〕果實(shí)類概覽果實(shí)構(gòu)造形式；由外向內(nèi)觀察組織細(xì)胞特征，要注意外果皮細(xì)胞形狀、顏色、氣孔與細(xì)胞內(nèi)含物、附屬物形態(tài)特征；中果皮細(xì)胞形態(tài)及其中石細(xì)胞、油細(xì)胞、晶體等的存在與否；內(nèi)果皮細(xì)胞的性質(zhì)、層數(shù)及形態(tài)與鑲接方式?！?〕種子類概覽種子組織特征的構(gòu)造方式；由外向內(nèi)仔細(xì)觀察組織細(xì)胞特征，應(yīng)注意種皮表皮細(xì)胞的形態(tài)、類型和其它特征〔突起、內(nèi)含物、黏液質(zhì)等〕；注意柵狀細(xì)胞層細(xì)胞的形態(tài)、大小、細(xì)胞壁特點(diǎn)及有無光輝帶；注意有無油細(xì)胞層、色素細(xì)胞層、營養(yǎng)層，并觀察細(xì)胞內(nèi)含物顏色、數(shù)量等特征；注意內(nèi)種皮石細(xì)胞的形狀、層數(shù)和內(nèi)含物特點(diǎn)；觀察胚芽細(xì)胞、胚細(xì)胞的形狀及其內(nèi)含物的性質(zhì)〔淀粉?；蚝哿！撑c特征，如晶體形狀、大小等。3〕莖木類〔1〕莖類根據(jù)形成層的有無，初步確定是單子葉植物的莖還是雙子葉植物的莖；根據(jù)木質(zhì)部的有無，確定是木質(zhì)莖還是草質(zhì)莖。概覽各部組織的排列方式。由外向內(nèi)仔細(xì)觀察各部組織特征。須注意表皮細(xì)胞形態(tài)及垂周壁形狀、角質(zhì)層的有無和厚薄及附屬物特征，注意觀察木栓細(xì)胞的色澤、形狀，纖維的類型和長短以及細(xì)胞內(nèi)含物〔晶體、淀粉?！?、分泌組織、細(xì)胞的形態(tài)等。〔2〕木類除按莖類順序觀察外，須注意導(dǎo)管形狀、大小、紋孔類型、管胞、木纖維、木射線的排列方式、形態(tài)及細(xì)胞內(nèi)含物特征等。4〕皮類概覽組織排列方式；由外向內(nèi)依次觀察各部特征，如木栓細(xì)胞、皮層細(xì)胞的形狀、層數(shù)、顏色、類型以及細(xì)胞內(nèi)含物特征，觀察有無厚壁組織、晶體、油細(xì)胞、黏液細(xì)胞、樹脂道、乳管和韌皮部射線的寬度、形狀及其伸展方式和細(xì)胞列數(shù)等。5〕葉類觀察上、下表皮細(xì)胞的形狀和氣孔以及角質(zhì)層厚度、垂周壁的形狀、毛茸類別與特征等。觀察葉肉組織中柵欄細(xì)胞、海綿細(xì)胞層數(shù)和形狀及細(xì)胞后含物特征。觀察葉脈的維管束類型、纖維和乳汁管類型與形態(tài)。6〕花類根據(jù)組織制片的部位不同，觀察要點(diǎn)是：花萼、花冠制片：觀察上、下表皮細(xì)胞及附屬物特征；觀察葉肉組織及其內(nèi)含物特征。雄蕊制片：觀察花藥組織方式、藥膈形狀和大小，花室構(gòu)造、花粉粒形態(tài)與構(gòu)造，尤其要注意花粉粒外表的雕紋形狀、萌發(fā)孔類型與數(shù)目特征。2.2.2.2各類飲片粉末組織的觀察要點(diǎn)1〕根與根莖類〔1〕根類要注意木栓細(xì)胞顏色、外表觀形狀、細(xì)胞壁特點(diǎn)、性質(zhì)和木薄壁細(xì)胞的有無；石細(xì)胞、纖維的顏色、大小、類型、形狀和紋孔疏密、胞腔寬窄；導(dǎo)管類型、大?。环置诮M織〔分泌細(xì)胞、分泌道、乳汁管等〕、細(xì)胞形狀、大小與分泌物顏色；草酸鈣晶體、菊糖的有無及類型、大?。坏矸哿Ｐ螤睢㈩愋?、大小、臍點(diǎn)形狀與層紋形態(tài)?！?〕根莖類與根類相似。尤須注意鱗莖、塊莖的淀粉粒形狀、大小、臍點(diǎn)形狀及復(fù)粒、半復(fù)粒等特征；黏液細(xì)胞內(nèi)含物特征；鱗葉表皮細(xì)胞顏色、形狀和細(xì)胞壁特征?！?〕果實(shí)種子類〔1〕果實(shí)類要注意果皮細(xì)胞的類型、形狀、大小、外果皮細(xì)胞垂周壁增厚情況和氣孔形狀、角質(zhì)層紋理與附屬物特征，內(nèi)果皮鑲嵌的有無及細(xì)胞排列方式；果肉薄壁細(xì)胞的形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)含物特征；石細(xì)胞、纖維、淀粉粒、晶體的有無及形態(tài)、大小等特征。〔2〕種子類要注意種皮表皮細(xì)胞外表觀與斷面觀形態(tài)、垂周壁情況；柵狀細(xì)胞層、油細(xì)胞層、色素細(xì)胞層的有無及形態(tài)；內(nèi)皮層石細(xì)胞外表觀、斷面觀形狀、大小、胞腔與內(nèi)含物特征?！?〕莖木類〔1〕莖類要注意表皮細(xì)胞外表觀、斷面觀形狀、顏色、垂周壁特征與角質(zhì)層外表紋理、氣孔、毛茸和下皮纖維的有無；纖維類型、顏色、大小、形態(tài)與紋孔類型等特征；木薄壁細(xì)胞、木栓細(xì)胞形狀特征與石細(xì)胞、導(dǎo)管類型、大小與形態(tài)特征；分泌細(xì)胞形態(tài)、大小、內(nèi)含物特征；草酸鈣晶體類型、大小、分布方式等特征。〔2〕木類要注意纖維類型、顏色、大小、紋孔類型與紋孔口相交特征；木射線細(xì)胞列數(shù)、形狀與紋孔特征；導(dǎo)管與分泌組織的類型；細(xì)胞后含物的類型、形狀及大小、團(tuán)塊的有無與形態(tài)、顏色。4〕皮類注意木栓細(xì)胞的顏色、形態(tài)、纖維類型、存在方式、形狀和胞腔內(nèi)含物性質(zhì)與顏色；石細(xì)胞形狀、大小、存在方式；分泌組織〔樹脂道、分泌細(xì)胞、乳汁管、油細(xì)胞等〕形狀、大小與分泌物顏色；篩管分子形態(tài)；細(xì)胞后含物的有無及形態(tài)、大小等特征。5〕葉類注意表皮細(xì)胞外表觀形狀、大小、垂周壁特點(diǎn)和氣孔軸式；毛茸類型、存在方式與細(xì)胞組成數(shù)目及外表有無紋理、疣點(diǎn)、胞腔內(nèi)含物特征；晶體類型、存在方式、大小；導(dǎo)管類型、直徑與存在方式；石細(xì)胞、纖維、分泌細(xì)胞的有無和形狀、大小等。6〕花類注意毛茸類型、形態(tài)、外表特征；花粉粒形狀、大小、外表紋理、突起和萌發(fā)孔類型、多少；草酸鈣晶體類型、形狀及分泌細(xì)胞、色素的有無；花托表皮細(xì)胞和纖維、花絲表皮細(xì)胞、花瓣表皮細(xì)胞的形態(tài)特征和果皮組織的有無與形態(tài)等。7〕全草類根據(jù)藥用局部的不同，觀察要點(diǎn)同各類項(xiàng)下。8〕菌藻類要注意菌絲、孢子的形狀、顏色與團(tuán)塊形態(tài)；晶體有無及形態(tài)、大小與類型。9〕動物類據(jù)中藥飲片所用動物部位不同，各類的觀察要點(diǎn)為：〔1〕動物全體要注意表皮細(xì)胞碎片形狀與色素顆粒的顏色；肌肉纖維的類型、形態(tài)、橫斷面直徑及空隙有無；剛毛形態(tài)、大小與顏色；體壁碎片顏色、形態(tài)、外表紋理及菌絲體、類結(jié)晶體、結(jié)晶體的有無；骨碎片顏色、形狀、骨陷窩形態(tài)與排列方式，骨小管粗細(xì)與外表特征。〔2〕分泌物和病理產(chǎn)物要注意團(tuán)塊顏色及其中包埋物的性質(zhì)特征，表皮組織與其它細(xì)胞的形狀、大小等?！?〕角甲類要注意碎塊顏色、形狀、橫斷面、縱斷面觀形態(tài)特征及色素顆粒顏色。10〕礦物類要注意粉末碎片與顆粒的顏色、形狀、折光性質(zhì)及外表、斷面紋理，等。粉末組織標(biāo)本片置顯微鏡下觀察，多種細(xì)胞、組織碎片等雜亂無章地聚于視野中，進(jìn)行特征描述時(shí)，要采取先多數(shù)后少數(shù)，先特殊后一般，先觀察后測試的原那么，做到多而不亂，繁而不雜，有條有理。先多數(shù)后少數(shù)就是先描述視野中多見、易見的細(xì)胞及碎片，后描述少見的、偶見的細(xì)胞及碎片。先特殊后一般即注意描述比較特殊的，有定性意義的組織、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物〔如晶體、分泌物〕等，提及一般的組織細(xì)胞特征即可。先觀察后測試就是先仔細(xì)觀察各細(xì)胞及組織碎片的形態(tài)特征，必要時(shí)進(jìn)行顯微化學(xué)試驗(yàn)，以確定細(xì)胞及其內(nèi)含物的性質(zhì)。然后再對其有鑒別意義的組織細(xì)胞進(jìn)行直徑、大小的定量測定。

細(xì)胞及其內(nèi)含物的顯微測量鑒別法

顯微鏡下測量細(xì)胞的長度、寬度、直徑、厚度和計(jì)算某一特征的數(shù)量多少，以鑒別藥物真?zhèn)蝺?yōu)劣的方法，稱為顯微測量鑒別法。其單位通常用微米〔μm〕表示。測微量尺即顯微鏡下測量細(xì)胞大小的標(biāo)尺。分鏡臺測微尺和目鏡測微尺兩局部。鏡臺測微尺也稱臺微尺或載臺量尺。為一特制的載玻片，中央有一圓形精密刻度標(biāo)尺。標(biāo)尺一般長1mm，分10大格，每大格又分10小格，每小格的長度為0.1mm，即10μm。標(biāo)尺的外圍有一黑色圓環(huán)，便于在顯微鏡下尋找標(biāo)尺的位置。鏡臺測微尺是顯微測量的標(biāo)尺，用來標(biāo)化目鏡測微尺在不同目、物鏡配合使用時(shí)的長度。目鏡測微尺也稱鏡微尺或目鏡量尺。是一直徑1.8～2.0cm，中央刻有精密平行線或網(wǎng)絡(luò)線刻度標(biāo)尺的圓形玻片，標(biāo)尺刻度面常是5mm，分為100小格。使用時(shí)放在目鏡中，用來直接測量細(xì)胞的大學(xué)，但其刻度所代表的長度是依顯微鏡的放大倍數(shù)而改變的。因此，必須用臺微尺標(biāo)化前方可使用。目鏡測微尺的標(biāo)化顯微測量前，須用臺微尺標(biāo)定目微尺在所用目、物鏡配合使用下每小格的實(shí)際長度。方法是將目微尺裝入目鏡內(nèi)，臺微尺置于載物臺上，用低倍鏡觀察到臺微尺刻度并適當(dāng)調(diào)整焦距，至能同時(shí)看清目微尺、臺微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目微尺，移動臺微尺，使兩種量尺的刻度平行，左邊的“0”刻度重合，再向右尋找第二條重合刻度，根據(jù)兩條重合刻度間兩種量尺的小格數(shù)，計(jì)算出目微尺每小格的長度〔μm〕。例如目微尺31小格〔0～31〕與臺微尺的45小格〔0～45〕重合，那么目微尺每一小格的實(shí)際長度為14.5μm，即10μm×45÷31＝14.5μm。為使用方便，可將每個(gè)不同倍數(shù)的目鏡和物鏡配合，標(biāo)定每一組目鏡與物鏡配合使用時(shí)，目微尺每一小格的實(shí)際長度值。得到一組數(shù)據(jù)〔如歐林巴斯顯微鏡目鏡與物鏡配合使用時(shí)，目鏡每一小格的數(shù)據(jù)如表〕，以隨時(shí)應(yīng)用。各組目、物鏡配合使用數(shù)值表〔μm/格〕目尺規(guī)格目鏡倍數(shù)物鏡倍數(shù)

4

10

401/10尺形

15

12.7

5.0

1.25

10

17

6.6

1.651/2網(wǎng)形

15

133

65

12.51/5網(wǎng)形

15

50

20

52.2.3.2細(xì)胞及其內(nèi)含物實(shí)際尺度的測量

將欲測量的組織標(biāo)本片置于載物臺上，調(diào)焦觀察，轉(zhuǎn)動目鏡刻度，使測微尺的刻度重迭在目的物上，觀察該物體的總長度為多少小格，乘以每小格前述的標(biāo)化值，計(jì)算出目的物的實(shí)際長度。如采用15倍目鏡、10倍物鏡，測得觀察淀粉粒的直徑為5小格，每小格的標(biāo)化值為5μm，那么此淀粉粒的實(shí)際直徑5×5μm＝25μm。為減少誤差，顯微測量通常使用高倍鏡。但欲測量較長的纖維、乳汁管長度時(shí)，以在低倍鏡下測量為宜。測量物體的長度往往有差異，差異不大時(shí)，可記載一個(gè)數(shù)據(jù)，如直徑約25μm；差異較大時(shí)可記載最大值與最小值，如長20～50μm，假設(shè)有少數(shù)達(dá)60μm，那么可記為20～50〔～60〕μm；可記載最小值、常見值和最大值，如長15～50～80μm。葉類飲片脈島數(shù)、氣孔數(shù)和氣孔指數(shù)的測量，可用網(wǎng)格目微尺；麝香中摻雜物的測量可用血球計(jì)數(shù)器。2.2.4細(xì)胞及其后含物性質(zhì)的顯微化學(xué)鑒別法

·將藥物粉末、切片、浸出液或其升華物置載玻片上，加適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)試液，加蓋玻片后置顯微鏡下觀察反響，以鑒別其性質(zhì)的方法，稱為顯微化學(xué)鑒別法。2.2.4.1顯微化學(xué)鑒別的常用方法·〔1〕藥物粉末或切片試驗(yàn)法將藥物粉末或徒手切片置載玻片，滴加適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)試液，加蓋玻片，置顯微鏡下觀察組織、細(xì)胞產(chǎn)生的顏色或結(jié)晶狀況。如細(xì)胞壁性質(zhì)和細(xì)胞后含物性質(zhì)的反響等?！ぁ?〕透化液試驗(yàn)法藥物過25目篩的粉末，加適當(dāng)溶劑浸漬30分鐘，用吸管吸取1～2滴于載玻片，在其旁邊滴加適宜的化學(xué)試液一滴，用棉簽或棒狀尖端溝通使兩種溶液接觸，放置片刻，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察兩液接觸形成的結(jié)晶形狀與顏色。如小檗堿，莨菪堿、檳榔堿等生物堿性質(zhì)的鑒別反響?！ぁ?〕微量升華物顯微化學(xué)觀察法取藥物粉末，照升華法提取升華物，置顯微鏡下觀察升華物的形狀、顏色、必要時(shí)，滴加適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)試液后，觀察其反響現(xiàn)象。如大黃的升華物呈黃色菱針狀或羽狀結(jié)晶，滴加1%氫氧化鈉試液1滴，結(jié)晶溶解并現(xiàn)紅色；胡黃連的升華物呈針狀、針簇狀、棒狀、板狀結(jié)晶及黃色球狀物等。2.2.4.2細(xì)胞壁與細(xì)胞后含物顯微化學(xué)性質(zhì)的反響1〕細(xì)胞壁顯微化學(xué)性質(zhì)的反響〔1〕木質(zhì)化細(xì)胞壁間苯三酚鹽酸反響：加間苯三酚試液1～2滴，使材料濕潤，放置2～3分鐘或微熱，加鹽酸一滴，根據(jù)木化程度不同顯紅色→紫紅色。硫酸苯胺反響：加硫酸苯胺試液1～2滴，放置1～2分鐘或微溫，顯姜黃色?！?〕木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁蘇丹Ⅲ染色反響：如蘇丹Ⅲ試液1～2滴，放置1～2分鐘或微熱，顯桔紅色、紅色或紫紅色。再加20%氫氧化鈉試液，呈黃色，加熱后，木栓化細(xì)胞壁溶解呈黃色滴狀，角質(zhì)化細(xì)胞壁不改變形狀。氯化鋅碘反響：加氯化鋅碘試液1～2滴，顯黃色至棕色。〔3〕纖維化細(xì)胞壁：氯化鋅碘反響：加氯化鋅碘試液1～2滴，顯藍(lán)色或紫色。碘-硫酸反響：加碘試液1滴使其濕潤，放置1～2分鐘后，用濾紙吸去過多的碘液，再加硫酸液〔33→50〕1滴，顯藍(lán)色或紫色。銅氨試液反響：加新配制的銅氨試液1～2滴細(xì)胞壁逐漸膨脹后溶解。〔4〕硅質(zhì)化細(xì)胞釕紅試液反響：加釕紅試液1滴，顯紅色。2〕細(xì)胞后含物顯微化學(xué)性質(zhì)的反響〔1〕淀粉粒：加碘試液顯藍(lán)色，加5%氫氧化鉀溶液，淀粉粒先膨脹后溶解；用甘油醋酸試液裝片，置偏光顯微鏡下觀察，未糊化淀粉粒顯偏光現(xiàn)象，已糊化淀粉粒無偏光現(xiàn)象?！?〕糊粉粒：加碘試液顯棕色或黃棕色；加硝酸汞試液顯磚紅色。加三硝基苯酚試液，顯黃色。〔3〕菊糖：加10%α-萘酚乙醇試液，再加硫酸1～2滴，顯紫紅色并很快溶解；加15～20%麝香草酚醇溶液，再加硫酸1滴顯胭脂紅色并溶解?！?〕脂肪油、揮發(fā)油或樹脂：如蘇丹Ⅲ試液，顯桔紅色、紅色或紫紅色，加90%乙醇，脂肪油不溶解；揮發(fā)油溶解；加鋨酸試液，脂肪油染成棕色至黑色，揮發(fā)油與樹脂均不染色?！?〕粘液：加釕紅試液顯紅色；加亞甲藍(lán)試液呈天藍(lán)色；封藏在墨汁中，呈無色透明團(tuán)塊狀，加蒸餾水膨脹后溶解?！?〕草酸鈣結(jié)晶：加稀醋酸不溶解；加稀鹽酸溶解而無氣泡發(fā)生；加硫酸〔1→2〕溶液逐漸溶解，片刻后析出針狀或針簇狀硫酸鈣結(jié)晶。〔7〕碳酸鈣結(jié)晶：滴加稀鹽酸試液，晶體溶解，同時(shí)有氣泡發(fā)生；滴加硫酸〔1→2〕溶液，晶體溶解，產(chǎn)生氣泡，并形成散在的硫酸鈣針晶。2.3理化鑒別方法中藥飲片的理化鑒別方法主要是根據(jù)其所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)或物理化學(xué)的方法進(jìn)行鑒別，通過確認(rèn)中藥飲片中某些特征性成分的檢出，從而判斷中藥飲片的真?zhèn)蔚竭_(dá)鑒別的目的。在理化鑒別方法中常用的有微量升華法、化學(xué)鑒別法、光譜鑒別法和色譜鑒別法等，其中色譜鑒別法是應(yīng)用最多的一種鑒別手段，尤其是薄層色譜法應(yīng)用廣泛。另外，新技術(shù)、新方法——色譜指紋圖譜法、色譜聯(lián)用法、X-衍射法和差熱分析法等不斷應(yīng)用于中藥材和中藥飲片的鑒別。目前，局部中藥飲片尚無含量測定的指標(biāo)，因此，鑒別就成為中藥飲片質(zhì)量控制的一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)。2.3.1微量升華鑒別方法微量升華法是一種常用的理化鑒別方法，適宜于一些具有升華性成分的中藥飲片的鑒別。在一定的溫度下，具有升華特性成分通過升華別離以后，再根據(jù)升華性成分的理化特征進(jìn)行鑒別。探討某些中藥飲片中有效成分在一定溫度下能夠升華的性質(zhì)，根據(jù)升華物的結(jié)晶形狀、顏色來鑒別中藥飲片的真?zhèn)渭捌焚|(zhì)的優(yōu)劣。采用微量升華法得到升華物，在顯微鏡下觀察結(jié)晶形狀、顏色，并滴加適當(dāng)化學(xué)試劑，觀察其反響，來確定某些中藥飲片的鑒別特征。對不同來源、不同藥用局部的中藥飲片，可根據(jù)其升華物的特征來確定化學(xué)成分是否相同，為鑒定中藥飲片的真?zhèn)闻c質(zhì)量的優(yōu)劣提供依據(jù)。操作方法：取一塊與載玻片大小相近的金屬片，置一塊具有圓孔〔直徑2cm〕的石棉板上，金屬片中央放一內(nèi)徑約15mm，高約7mm的金屬圈，于金屬圈內(nèi)加中藥飲片粉末0.5g～1.0g，圈上方覆蓋一載玻片，在石棉板下邊用酒精燈加熱，火焰對準(zhǔn)小孔處，至粉末開始變焦黃時(shí)，去火，放冷，此時(shí)有升華物附著于載玻片上，將載玻片取下，反轉(zhuǎn)，置顯微鏡下觀察升華物的結(jié)晶形狀和顏色等，并可加適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)試劑觀察反響結(jié)果，必要時(shí)可用顯微熔點(diǎn)測定結(jié)晶的熔點(diǎn)。如大黃中的蒽醌化合物，牡丹皮中的丹皮酚，薄荷中的薄荷腦，斑蝥中的斑蝥素等，均可用微量升華法確證。大黃升華物為黃色棱柱狀或羽毛狀結(jié)晶的蒽醌類化合物，牡丹皮升華物為白色丹皮酚的簇晶，薄荷升華物為無色針晶簇〔薄荷醇〕，斑蝥升華物為片狀斑蝥素結(jié)晶，等。2.3.2化學(xué)鑒別方法化學(xué)鑒別法是選擇適宜的化學(xué)試劑，與中藥飲片中的某些化學(xué)成分產(chǎn)生一定的化學(xué)反響，從而觀察顏色的變化或沉淀的生成等。其中包括顯微化學(xué)反響、顏色反響、沉淀反響和熒光法等?；瘜W(xué)鑒別法一般是采用中藥飲片粉末或經(jīng)過一定的提取制成適宜的供試液，再經(jīng)過一定的化學(xué)反響后到達(dá)鑒別的目的。如黃連飲片粉末滴加稀鹽酸，放置5min，可見黃色結(jié)晶析出〔小檗堿的鹽酸鹽〕。顏色反響與沉淀反響是利用一定的化學(xué)試劑與中藥飲片中特征的化學(xué)成分〔或組分〕發(fā)生反響，產(chǎn)生顏色變化或生成沉淀，判別某種成分的存在與否進(jìn)行鑒別。該法在化學(xué)藥品的鑒別項(xiàng)中廣泛應(yīng)用，在中藥飲片鑒別中同樣具有重要的應(yīng)用價(jià)值，是常用的鑒別方法之一。但在實(shí)際應(yīng)用中，由于中藥飲片組分復(fù)雜，干擾因素較多，故定性鑒別中注意采用一切可行的方法排除干擾。顏色反響與沉淀反響一般可在試管中進(jìn)行，半微量試驗(yàn)也可用點(diǎn)滴板、薄層板和在紙色譜上進(jìn)行。2.3.3光譜鑒別方法光譜鑒別法是根據(jù)中藥飲片中某些化學(xué)成分在紫外-可見光區(qū)具有特征性吸收光譜從而到達(dá)鑒別的目的。因?yàn)椴煌闹兴庯嬈瘜W(xué)成分不同，該法是根據(jù)所含化學(xué)成分不飽和程度的差異，因而使得其吸收曲線在形態(tài)、峰位、峰強(qiáng)度上的差異而到達(dá)定性鑒別。在一定的條件下根據(jù)吸收光譜的特征可用于中藥飲片的鑒別，以評價(jià)其中藥飲片的質(zhì)量。其中包括紫外光譜法、熒光光譜法和紅外光譜法等。2.3.3.1紫外-可見光譜法紫外-可見光譜法〔ultravioletandvisiblespectrophotometry，UV〕具有較高的靈敏度，因此，可用來檢查中藥飲片的純度和雜質(zhì)的限量，是控制中藥飲片及其質(zhì)量的重要手段。如對山奈及其偽品苦山柰、徐長卿及其偽品竹林霄、對毛冬青及其偽品毛冬青莖、對血竭及其混淆品龍血竭的鑒別等。在使用紫外光譜法鑒定中藥飲片時(shí)，一些親緣關(guān)系較近的中藥飲片，由于化學(xué)成分相差不大，通常的紫外光譜難以到達(dá)鑒別的目的，那么可采用多溶劑紫外吸收，通過綜合比較其圖譜的差異，亦可獲得較好的鑒別效果。2.3.3.2熒光分析法熒光分析法〔fluorometry〕是根據(jù)中藥飲片中所含的某些成分在紫外光照射下吸收一定波長的能量后，發(fā)射出比吸收光的波長更長的光即為熒光，用熒光分光光度法測定在特定波長照射下，各中藥飲片相同溶劑提取液的發(fā)射熒光光譜，并比較其區(qū)別，可到達(dá)鑒別的目的。熒光法和薄層法相結(jié)合，即將中藥飲片提取液先經(jīng)薄層展開，再將薄層板置于365nm或254nm波長下觀察熒光，比較其斑點(diǎn)熒光的顏色和展開距離或?qū)⒈影逯糜诒訏呙鑳x中，用適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)和發(fā)射波長進(jìn)行掃描，可以得到各中藥飲片的熒光掃描圖用于鑒別，這類方法對于一些含有能發(fā)射熒光成分的中藥飲片尤為適用。例如，大黃和土大黃粉末，兩者的顯微特征和化學(xué)反響都很相似，但在紫外光下檢視，前者具深棕色熒光，后者顯藍(lán)紫色熒光。2.3.3.3紅外光譜法紅外光譜法〔infraredspectrum，IR〕是屬于分子吸收光譜。因紅外線的能量較低，只能引起分子振動能級躍遷，而振動能級的躍遷會伴隨著許多轉(zhuǎn)動能級的躍遷，故紅外光譜也稱之為振-轉(zhuǎn)光譜。IR法可依據(jù)峰位、峰強(qiáng)度和峰形來判斷化合物的類別，推測某些基團(tuán)的存在，進(jìn)而推斷未知化合物的結(jié)構(gòu)。紅外光譜法廣泛應(yīng)用于有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)鑒定以及化學(xué)組成的分析，多用于定性分析，也可以進(jìn)行定量分析。紅外光譜法應(yīng)用于中藥飲片的鑒別，具有制樣簡單、快速和圖譜具有“指紋性”等優(yōu)點(diǎn)，故應(yīng)用較廣。如對翻白草及其偽品委陵菜、浮海石及其偽品浮石的鑒別，皂礬及其炮制品醋皂礬的鑒別等。2.3.3.4質(zhì)譜法質(zhì)譜法〔massspectrometry或massspectroscopy，MS〕是利用多種離子化技術(shù)，按照帶電粒子〔即離子〕的質(zhì)量對電荷比值〔質(zhì)荷比，m/z〕的大小依次排列形成的圖譜，從而進(jìn)行物質(zhì)成分和結(jié)構(gòu)分析的一種方法。質(zhì)譜法應(yīng)用范圍廣，即可用于無機(jī)成分的分析，也可用于有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)分析，還可用于同位素分析，不受試樣物態(tài)的限制，對氣態(tài)、液態(tài)和固態(tài)樣品都可進(jìn)行分析。具有靈敏度高，試樣用量少，分析速度快等特點(diǎn)。在對有機(jī)化合物的質(zhì)譜分析中，可由高分辨質(zhì)譜獲得分子離子峰的質(zhì)量數(shù)，從而獲得化合物的精確相對分子質(zhì)量；從分子離子峰和碎片離子峰獲得的信息可推測有機(jī)化合物的裂解方式及其與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系；通過同位素峰強(qiáng)比及其分布特征可推算分子中Cl、Br、S等原子數(shù)；通過色譜聯(lián)用技術(shù)〔GC-MS、LC-MS等〕，可為復(fù)雜體系〔天然產(chǎn)物、生化介質(zhì)和藥物成分等〕的別離分析、鑒別和含量測定提供快速、準(zhǔn)確的分析方法，特別是采用選擇離子監(jiān)測〔selectedionmonitoring，SIM〕技術(shù)，可獲得很高的靈敏度和選擇性。當(dāng)中藥與天然產(chǎn)物提取液分子在質(zhì)譜儀的離子源中以某種方式電離后，所形成的離子在高壓電場作用下加速飛行，此時(shí)含有不同質(zhì)量的離子束，經(jīng)過質(zhì)量分析，按質(zhì)荷比的大小順序依次排列，即可得到質(zhì)譜圖。不同提取液所含化學(xué)成分不同，所得質(zhì)譜圖顯示的分子離子基峰及進(jìn)一步的裂解碎片峰那么不一致，可供其鑒別。如對連翹不同藥用部位的鑒別和含量測定，等。2.3.3.5核磁共振法核磁共振光譜法〔nuclearmagneticresonancespectroscopy，NMR〕類似于紅外和紫外光譜，是另一種形式的吸收光譜技術(shù)。在外磁場的作用下，具有磁矩的原子核存在著不同的能級，當(dāng)用一定頻率的射頻照射分子時(shí)，可引起原子核自旋能級的躍遷，即產(chǎn)生核磁共振。以核磁共振信號強(qiáng)度對照射頻率或磁場強(qiáng)度作圖，即為核磁共振光譜〔NMRspectrum〕。核磁共振光譜法〔NMRspectroscopy〕是利用核磁共振光譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)〔包括構(gòu)型和構(gòu)象〕測定、定性或定量分析的方法。目前，在化學(xué)、醫(yī)藥和生物學(xué)等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，應(yīng)用最多的是氫核磁共振簡稱氫譜〔1H-NMR〕和碳-13核磁共振簡稱碳譜〔13C-NMR〕。由于中藥飲片中的化學(xué)成分較為復(fù)雜，通常選用某一溶劑的特征提取物進(jìn)行分析，獲得該中藥成分的NMR指紋圖譜。如2.3.4色譜鑒別方法

色譜法〔chromatography〕又稱層析法，是利用各種組分的物理、化學(xué)性質(zhì)的差異，根據(jù)混合物中各種組分在兩相分配系數(shù)的不同進(jìn)行別離分析的方法。色譜鑒別法是根據(jù)其化學(xué)成分的保存行為通過別離而進(jìn)行鑒別的一種方法。一相是固定相，另一相是流動相，由于各組分受到兩相的作用力不同，從而使各組分以不同的速度移動到達(dá)別離的目的。從色譜過程的別離原理上講，分為分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法和分子排阻色譜法。該法具有別離度好，靈敏度高，專屬性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)，特別適應(yīng)于中藥材和中藥飲片的鑒別。常用的色譜鑒別方法有紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法和高效毛細(xì)管電泳法等。2.3.4.1紙色譜法紙色譜法〔paperchromatography，PC〕是根據(jù)不同物質(zhì)在固定相和流動相間的分配系數(shù)不同而進(jìn)行別離的一種分配層析法。以層析濾紙為載體，濾紙中6%～7%的水分以氫鍵與纖維素的羥基相結(jié)合構(gòu)成固定相，而纖維間空隙通過的溶劑為流動相，樣品組分在兩相中作反復(fù)屢次分配到達(dá)別離。由于溶質(zhì)在兩相中分配系數(shù)的差異而得到別離。方法具有簡單、別離效能較高、所需儀器設(shè)備價(jià)廉等特點(diǎn)，主要用于多功能團(tuán)或高極性化合物如糖、氨基酸等水溶性成分的分析別離，目前在中藥材中應(yīng)用較少。操作方法：將試樣溶于適當(dāng)?shù)娜軇?，點(diǎn)樣于濾紙一端，另用一適當(dāng)溶劑系統(tǒng)，借毛細(xì)現(xiàn)象從點(diǎn)樣的一端向另一端流動，此稱為展開；展開結(jié)束，取出濾紙晾干；用適當(dāng)?shù)姆椒@色。紙層析法按溶劑展開的方向，可分為上行、下行和徑向三種。上行法中又可分為單向與雙向兩種。該方法設(shè)備簡單、操作方便，所需樣品量少，應(yīng)用很廣泛，不僅可用于定性鑒別，也能用于定量分析2.3.4.2薄層色譜法薄層色譜〔thinlayerchromatography，TLC〕是一種吸附薄層色譜別離法，利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在移動相〔溶劑〕流過固定相〔吸附劑〕的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而到達(dá)各成分互相別離的目的。常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等有吸附活性的物質(zhì)。操作方法：薄層色譜法系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后，根據(jù)比移值〔Rf〕與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值〔Rf〕作比照，用以進(jìn)行藥物的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的一種方法。薄層色譜法的比移值〔Rf〕是溶質(zhì)移動的距離/溶液移動的距離，即表示物質(zhì)移動的相對距離。各種物質(zhì)的Rf值隨要?jiǎng)e離化合物的結(jié)構(gòu)，薄層板的種類、溶劑、溫度等不同而不同，但在條件固定的情況下，Rf值對每一種化合物來說是一個(gè)特定數(shù)值。薄層色譜鑒別法操作簡便，具有別離和鑒定的雙重功能和多種專屬的檢測方法，是中藥飲片最常用的鑒別方法。薄層色譜鑒別時(shí)，一般采用對照品和對照藥材對照法，即分別吸取適宜濃度的供試品、對照品或?qū)φ账幉娜芤?，在同一薄層板上點(diǎn)樣，展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色〔或熒光〕和位置應(yīng)與對照溶液的斑點(diǎn)一致。如對西洋參及其偽品人參,龍膽及其偽品秦艽尾子,毛冬青及其非藥用局部毛冬青莖的鑒別，等。2.3.4.3氣相色譜法氣相色譜法〔gaschromatography，GC〕是以氣體為流動相的色譜方法，主要用于別離分析易揮發(fā)性的物質(zhì)。氣相色譜法的流動相為氣體，稱為載氣；色譜柱分為填充柱和毛細(xì)管柱兩種，填充柱內(nèi)裝吸附劑、高分子多孔小球或涂漬固定液的載體。毛細(xì)管柱內(nèi)壁或載體經(jīng)涂漬或交聯(lián)固定液。注入進(jìn)樣口的供試品被加熱氣化，并被載氣帶入色譜柱，在柱內(nèi)各成分被別離后，先后進(jìn)入檢測器，色譜信號用記錄儀或數(shù)據(jù)處理器記錄。然后根據(jù)色譜圖上出現(xiàn)的物質(zhì)成分的峰面積或峰高進(jìn)行定量分析。對氣相色譜儀一般要求，除另有規(guī)定外，載氣為氮?dú)猓簧V柱為填充柱或毛細(xì)管柱，填充柱的材質(zhì)為不銹鋼或玻璃，載體用直徑為0.25～0.18mm、0.18～0.15mm或0.15～0.125mm經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅藻土或高分子多孔小球；常用玻璃或彈性石英毛細(xì)管柱的內(nèi)徑為0.20或0.32mm。進(jìn)樣口溫度應(yīng)高于柱溫30～50℃；進(jìn)樣量一般不超過數(shù)微升；柱徑越細(xì)進(jìn)樣量應(yīng)越少。一般情況下，檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、載體牌號、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種并符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。一般色譜圖約于30min內(nèi)記錄完畢。氣相色譜法適合于揮發(fā)性成分或通過衍生化后能氣化成分的定性、定量分析，具有靈敏度高、操作簡便，樣品無須化學(xué)前處理，提供信息量大等優(yōu)點(diǎn)。如對冰片、麝香與其偽品的鑒別，等。2.3.4.4高效液相色譜法高效液相色譜法〔highperformanceliquidchromatography，HPLC〕和其他別離方法相比，具有高靈敏度〔可達(dá)10－12～10－15g/mL〕、高選擇性、高效能、高速度及應(yīng)用廣泛等特點(diǎn)。按固定相的聚集狀態(tài)可分為液-液色譜法和液-固色譜法。按別離原理那么可分為分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法和分子排阻色譜法。高效液相色譜法是采用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有填充劑〔固定相〕的色譜柱進(jìn)行別離測定的色譜方法。經(jīng)由進(jìn)樣閥注入的供試品，由流動相帶入柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被別離后，依次進(jìn)入檢測器，由記錄儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。HPLC法配以不同的檢測器，可對多種成分進(jìn)行同時(shí)分析，一般用于含量測定，也可根據(jù)特征色譜峰進(jìn)行定性分析。HPLC法用于中藥飲片的鑒別，一般情況下，假設(shè)含量測定采用了高效液相色譜法，可同時(shí)用于該藥味的鑒別試驗(yàn)。HPLC法已廣泛應(yīng)用于各種藥物及其制劑的分析測定，尤其是在中藥與生物樣品等復(fù)雜體系的別離分析中發(fā)揮著極其重要的作用。如對黃柏與其混淆品關(guān)黃柏，對羅布麻葉與其混淆品大葉白麻葉，對何首烏、制何首烏的鑒別與含量測定等。2.3.4.5高效毛細(xì)管電泳法高效毛細(xì)管電泳法〔highperformancecapillaryelectrophoresis，HPCE〕是20世紀(jì)末開展起來的一種高效、快速別離技術(shù)，是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱別離相結(jié)合的產(chǎn)物，具有別離模式多、別離效率高、速度快和分析范圍廣的特點(diǎn)。在毛細(xì)管電泳中，由于沒有分子縱向擴(kuò)散和質(zhì)量轉(zhuǎn)移，所以色譜圖中峰形比液相色譜更敏銳，靈敏度也更好，被認(rèn)為是一種高速、高效的別離技術(shù)，再加之樣品、溶劑用量少和自動化程度高的優(yōu)點(diǎn)得到迅速開展。近年來的研究報(bào)道顯示，HPCE法在中藥分析中其優(yōu)勢尤為突出。對中藥注射液或水提取物而言，其HPCE指紋圖譜的特征性遠(yuǎn)超過HPLC指紋圖譜。如對連翹的HPCE鑒別、含量測定，等。2.3.5色譜指紋圖譜鑒別方法中藥指紋圖譜〔traditionalChinesemedicinefingerprint〕能提供從原藥材的種植、栽培、引種，中藥飲片、中成藥生產(chǎn)過程中工藝的標(biāo)準(zhǔn)與優(yōu)化，到產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定全方位的質(zhì)量保證。因此，中藥指紋圖譜也將成為研究道地藥材、稀有藥材替代品以及中藥材、中藥飲片真?zhèn)舞b別的依據(jù)。制定理想的指紋圖譜不僅能到達(dá)定性鑒別，也可用于定量分析。中藥指紋圖譜的建立應(yīng)以系統(tǒng)的化學(xué)成分研究和藥理學(xué)研究為依托，應(yīng)表達(dá)系統(tǒng)性、特征性和重現(xiàn)性〔可操作性〕三個(gè)根本原那么。a.系統(tǒng)性：指紋圖譜反映的化學(xué)成分應(yīng)包括中藥所含大多數(shù)組分的類別或指標(biāo)成分的全部。如人參中的有效成分多為皂苷類化合物，那么其指紋圖譜應(yīng)盡可能多地反映其中的皂苷成分；銀杏葉中的有效成分是黃酮和銀杏內(nèi)酯類，那么其指紋圖譜可采用兩種方法針對這兩類成分進(jìn)行分析，以到達(dá)系統(tǒng)、全面的目的。b.特征性：指紋圖譜中反映的化學(xué)信息〔表現(xiàn)為保存時(shí)間或比移值〕具有高度的選擇性，能特征地區(qū)分中藥的真?zhèn)闻c優(yōu)劣，成為中藥自身的“化學(xué)條碼”。c.重現(xiàn)性〔可操作性〕：是指建立的指紋圖譜，在規(guī)定的方法和條件下，不同的操作者、不同的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能做出相同結(jié)果，其誤差應(yīng)在允許的范圍內(nèi)，這樣才能保證指紋圖譜的通用性和實(shí)用性。中藥指紋圖譜系指中藥材、中藥飲片、提取物或中藥制劑等經(jīng)適當(dāng)處理后，采取一定的分析手段，得到能夠標(biāo)示該中藥材、中藥飲片、提取物或中藥制劑特性的共有峰的圖譜，即運(yùn)用現(xiàn)代分析技術(shù)對中藥化學(xué)信息以圖形〔圖像〕的方式進(jìn)行表征并加以描述?，F(xiàn)代分析技術(shù)包括光譜、色譜、波譜、核磁共振、X-射線衍射等以及各種聯(lián)用技術(shù)。指紋圖譜的特點(diǎn)是通過指紋圖譜的特異性，能有效鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地；通過指紋圖譜主要特征峰的含量或比例的制定，可有效地控制樣品的質(zhì)量，確保其質(zhì)量的相對穩(wěn)定。中藥指紋圖譜系指采用光譜、色譜或其它分析方法建立的用以表征中藥化學(xué)成分特征的指紋圖譜。其中色譜法最常用的是薄層色譜〔TLC或TLCS〕、氣相色譜〔GC〕、高效液相色譜〔HPLC〕和高效毛細(xì)管電泳〔HPCE〕等。中藥指紋圖譜可分為中藥材指紋圖譜、中藥飲片指紋圖譜、生產(chǎn)工藝過程中間產(chǎn)物〔中間體或提取物〕指紋圖譜和中藥制劑〔中成藥〕指紋圖譜。目前而言，最主要和最常用的是中藥化學(xué)成分指紋圖譜，特別是HPLC色譜指紋圖譜在中藥材、中藥飲片及其中藥制劑中的廣泛應(yīng)用。如對丹參不同生產(chǎn)期產(chǎn)品的HPLC色譜指紋圖譜鑒別，對北沙參不同規(guī)格飲片的HPLC色譜指紋圖譜鑒別與含量測定，等。2.3.6色譜聯(lián)用鑒別方法色譜聯(lián)用技術(shù)包括如GC-MS，HPLC-MS，HPCE-MS等方法，可提供各種信息，并且提供的信息量大，可反映幾十種、上百種化學(xué)成分組成的復(fù)雜體系，適合解決中藥復(fù)雜體系的分析要求。GC適用于揮發(fā)性化學(xué)成分。HPLC適用于非揮發(fā)性成分，中藥中的大局部化學(xué)成分均可用HPLC法得出良好的指紋圖譜。HPCE適用于大局部化學(xué)成分，特別是生物大分子肽和蛋白質(zhì)的別離，但其重現(xiàn)性有待進(jìn)一步提高。2.3.6.1氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法〔gaschromatography-massspectrometry，GC-MS〕是一種高效能、高選擇性、高靈敏度的別離分析方法。結(jié)合了色譜、質(zhì)譜兩者的優(yōu)勢，使樣品的別離、定性及定量成為自動化連續(xù)的過程。質(zhì)譜檢測器與傳統(tǒng)檢測器相比具有更高的靈敏度，樣品用量少，只需10-9g～10-12g；分析速度快、應(yīng)用范圍廣，在選擇適宜電離方法的前提下，一般化合物都能被電離，能獲得更多的化合物結(jié)構(gòu)信息，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測器的缺乏。GC-MS聯(lián)用分析的靈敏度高，適合于低分子化合物〔相對分子質(zhì)量＜1000〕的分析，尤其適合于揮發(fā)性成分的分析測定。在醫(yī)藥領(lǐng)域中質(zhì)量控制與有機(jī)溶劑殘留和中藥的農(nóng)藥殘留量測定、食品分析以及環(huán)境監(jiān)測等方面廣泛應(yīng)用。2.3.6.2液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法〔liquidchromatography-massspectrometry，LC-MS〕起始于20世紀(jì)70年代，但直到20世紀(jì)80年代中后期大氣壓電離技術(shù)〔atmospherepressureionization，API〕得到開展且逐漸成熟，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)才得以迅速開展，并很快成為分析和科研有力的工具。LC-MS法是以HPLC為別離工具，以MS為鑒定和測試手段，而通過適當(dāng)接口將二者連接成完整的分析儀器。試樣經(jīng)過HPLC系統(tǒng)進(jìn)樣，由色譜柱進(jìn)行別離，而后介入接口，試樣由液相中的離子或分子轉(zhuǎn)化為氣相離子，然后聚焦于質(zhì)量分析器中，根據(jù)質(zhì)荷比而得到別離，最后離子信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，由電子倍增器檢測，檢測信號經(jīng)放大后傳輸至計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)，即可進(jìn)行定性和定量分析。近年來，LC-MS技術(shù)已開展成為一種高度自動化、常規(guī)化的分析儀器，在醫(yī)藥學(xué)、生物學(xué)、食品化工等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，在體內(nèi)藥物以及代謝產(chǎn)物分析、藥物合成中間體、中藥材和飲片等方面越來越顯示出獨(dú)特的優(yōu)越性，可進(jìn)行定性鑒別和定量測定，如對連翹不同藥用部位有效成分的測定，等。2.3.6.3超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法〔ultrahighperformanceliquidchromatography-massspectrometry，UPLC-MS〕是通過UPLC系統(tǒng)高效別離，基于分子量的峰跟蹤檢測的一種色譜聯(lián)用技術(shù)。因常規(guī)的高效液相色譜法在別離復(fù)雜樣品時(shí)有明顯缺乏，如別離度較低、對極性化合物的保存能力差等。具有更高別離能力和更頂峰容量的超高效液相色譜系統(tǒng)的應(yīng)用越來越廣泛。超高效液相色譜是別離科學(xué)中的一個(gè)全新的類別，UPLC借助于HPLC的理論和原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。超高效液相色譜是一個(gè)新興的領(lǐng)域，與傳統(tǒng)的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及別離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。因此在蛋白質(zhì)、多肽、代謝組學(xué)分析及其它一些生物化學(xué)領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。另外，在天然產(chǎn)物的分析方面，使用UPLC與MS檢測器聯(lián)接，適合于天然產(chǎn)物的分析，特別是對中藥研究領(lǐng)域的開展是一個(gè)極大的促進(jìn)。具有快速、高靈敏度、高通量的特點(diǎn)，是最正確質(zhì)譜入口，與質(zhì)譜聯(lián)用時(shí)不需要進(jìn)行分流。

2.3.7X-衍射鑒別方法X-射線衍射分析法〔X-raydiffractionanalysis〕應(yīng)用于單一成分的鑒定歷史較早，具有圖譜指紋性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，美國于20世紀(jì)70年代中期將其列為藥物鑒定方法之一。20世紀(jì)80年代末，X-射線衍射法在我國開始用于中藥鑒定。如對赭石及其偽品紅礦X-射線衍射的鑒別，等。目前，我國要求一類和二類中藥新藥須附有粉末X-射線衍射圖譜。2.3.8差熱分析鑒別方法差熱分析法〔differentialthermalanalysis，DTA〕是以某種在一定實(shí)驗(yàn)溫度下不發(fā)生任何化學(xué)反響和物理變化的穩(wěn)定物質(zhì)〔參比物〕與研究樣品在相同環(huán)境下等速加溫時(shí)，后者隨著溫度與時(shí)間的變化會出現(xiàn)吸熱或放熱反響，該反響的結(jié)果用熱譜圖表示。比較分析兩者熱譜圖的差異，可到達(dá)鑒別中藥飲片真?zhèn)蔚哪康?。該法樣品用量少，只需mg級的樣品，故對貴重中藥飲片尤為適宜，對于同屬不同種間的中藥飲片鑒別也有較大優(yōu)勢。如對石膏及其偽品北寒水石的差熱分析鑒定，等。2.4生物技術(shù)鑒別方法生物技術(shù)鑒別〔bioassay〕方法又稱“生物檢定”或“生物測定法”，是利用中藥(包括中藥飲片，中藥材，純成分)對生物體〔organism〕的作用強(qiáng)度，以及用DNA特異性遺傳標(biāo)記特征和基因表達(dá)差異等來鑒別中藥品種和質(zhì)量的一種方法。通常分為生物效應(yīng)鑒定法和基因鑒定法兩大類。生物效應(yīng)鑒定法是利用藥物對于生物(整體或離體組織)所起的作用，測定藥物生物活性(biologicalactivity)強(qiáng)度或藥理作用，以鑒別中藥真?zhèn)蝺?yōu)劣的方法。該法以藥理作用和分子生物學(xué)為根底，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)方法和病理模型，通過被測物與相應(yīng)的對照品在一定條件下比較其產(chǎn)生特定生物反響的劑量比例，測出藥物的活性作用。常用的方法有免疫鑒定法、細(xì)胞生物學(xué)鑒定法、藥物效價(jià)測定法和單純指標(biāo)測定法等?；蜩b定法包括DNA〔deoxyribonucleicacid,脫氧核糖核酸〕遺傳標(biāo)記鑒定法和mRNA〔messengerribonucleicacid，信使RNA〕差異顯示鑒定法等。2.4.1免疫鑒別方法免疫鑒定法是利用中藥含有的特異蛋白為抗原制備的特異抗體，與供試品中特異抗原結(jié)合產(chǎn)生沉淀反響的一種方法。它是通過制備特異抗原試劑，采用免疫電泳(immunoelectrophoresis)或瓊脂免疫擴(kuò)散等方法到達(dá)鑒定的目的。該方法多用于含有糖類、蛋白質(zhì)等具有抗原決定簇的大分子藥物成分、品種的鑒別。如對鹿茸及其偽品鹿角的鑒別等。附：梅花鹿茸及鹿角飲片中雌二醇和睪酮的放射免疫鑒別分別取梅花鹿茸、鹿角飲片各適量，粉碎后過80目篩，恒重，精密稱取0.5g，置50mL燒瓶中，精密參加30mL甲醇，回流1h，冷卻。精密吸取上清液2mL，吹干。按放射免疫鑒定的方法測定。結(jié)果：雌二醇含量梅花鹿茸為11.4±1.26ng/g，鹿角為1.73±0.28ng/g，梅花鹿茸是鹿角的6倍；睪酮〔ng／g〕含量梅花鹿茸為0.23±0.08ng/g，鹿角為0.66±0.02ng/g。梅花鹿茸是鹿角的6倍。由雌二醇含量的上下可作為評價(jià)鹿茸品質(zhì)的依據(jù)之一，并可對其偽品鹿角片進(jìn)行鑒別。2.4.2電泳鑒別方法電泳(electrophoresis,EP)是一種別離和鑒定混合物中帶電離子的技術(shù)，其原理是利用中藥含有蛋白質(zhì)帶電荷的成分，在同一電場作用下，由于各組分所帶電荷的性質(zhì)、電荷數(shù)目以及分子質(zhì)量不同，而泳動方向和速度不同，在一定時(shí)間內(nèi)，各成分的泳動率不同，結(jié)合譜帶數(shù)和染色不同到達(dá)鑒定的目的。本方法多用于含有蛋白質(zhì)和氨基酸類中藥的鑒定，其特點(diǎn)是快速、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好。常用的方法有：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電點(diǎn)聚焦凝膠電泳、不連續(xù)性聚丙烯酰胺凝膠電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、區(qū)帶毛細(xì)管電泳、膠束毛細(xì)管電泳等。如對蛤蚧及藏蛤蚧、合歡皮及山合歡皮、冬蟲夏草及亞香棒蟲草、涼山蟲草、地蠶的鑒別等。附：蛤蚧及藏蛤蚧的蛋白電泳鑒別取蛤蚧、藏蛤蚧各1g，分別加4mL生理鹽水浸泡1h，研磨成勻漿狀，轉(zhuǎn)移至5mL離心管中，離心15min〔4000r/min〕，分別取上清液各參加1/2量的丙酮，再離心l0min〔4000r/min〕，然后參加等體積40%蔗糖溶液，小心混勻，置冰箱中備用。分別取上述樣品液各30μL，注入凝膠樣品槽內(nèi)，參加電極緩沖溶液，并向上槽緩沖溶液中參加1～2滴溴酚藍(lán)指示劑示蹤，接通電源，電泳開始時(shí)電流控制在10～15mA，樣品進(jìn)入別離膠后加大到20～30mA，待指示劑行至末端1cm時(shí)，停止電泳，電泳時(shí)間約2h左右。電泳完畢后，取出膠板，浸入含有20%甲醇和70%醋酸的0.1%考馬斯亮藍(lán)R250水溶液中，脫色1h左右，再用20%甲醇和7%醋酸水溶液脫色至背景清晰為止。蛤蚧具7條譜帶。A區(qū)具有1條Rf值為0.05的一級寬帶。B區(qū)具6條譜帶，4條一級譜帶，Rf值分別為0.32，0.44，0.55，0.62；2條三級譜帶，Rf值分別為0.67及0.74。C區(qū)無譜帶。藏蛤蚧A區(qū)均無譜帶。C區(qū)具1條譜帶，Rf值為0.92；B區(qū)具3條譜帶，Rf值分別為0.53，0.63，，0.74。結(jié)果見圖1。

圖1

蛤蚧、藏蛤蚧電泳圖譜

1.蛤蚧2.藏蛤蚧

a.一級帶，b.二級帶，c.三級帶2.4.3生物效價(jià)鑒別方法生物效價(jià)測定〔estimationofbiologicalpotency〕法是在嚴(yán)格控制的試驗(yàn)條件下，通過比較標(biāo)準(zhǔn)品和供試品對生物體或離體器官與組織的特定〔生理或病理〕生物效應(yīng)，從而評價(jià)中藥的質(zhì)量、鑒別中藥品種的方法。該方法的主要原那么是將供試品與對照品(包括中藥飲片，中藥材，純成分)在嚴(yán)格規(guī)定的條件下，比較它們對生物體所產(chǎn)生的反響強(qiáng)度，再計(jì)算出中藥或其制劑的劑量標(biāo)準(zhǔn)，以鑒別其品質(zhì)、品種。中藥的效價(jià)通常以1g中藥中所具有的“作用單位”數(shù)來表示。如對板藍(lán)根的效價(jià)(titer)的測定,等。附：板藍(lán)根與馬藍(lán)根的效價(jià)(titer)測定將板藍(lán)根、馬藍(lán)根樣品粉碎，經(jīng)丙酮脫脂，分別用緩沖液〔Tris-HClpH＝7，NaAc，HacpH＝5〕，與樣品按〔5∶1V/W〕浸泡過夜，冷凍離心10min〔10000r/min〕，取其上清液備用。用96孔板測定板藍(lán)根凝集素血凝活性，每孔參加緩沖液25μL，再取待測樣品25μL參加第一孔，并進(jìn)行倍比稀釋，然后每孔參加2～3%兔血紅細(xì)胞懸浮液25μL，室溫下30min后觀察結(jié)果，并計(jì)算各樣品的血凝活性效價(jià)。結(jié)果見表1、表2、表3。表1馬藍(lán)根凝集素血凝活性測定結(jié)果將不同產(chǎn)地、不同血凝活性的馬藍(lán)根和板藍(lán)根凝集素樣品編號待測。用雞胚培養(yǎng)法測其抗病毒成效。結(jié)果見表1-2、1-3。表2板藍(lán)根凝集素抗病毒作用〔1〕〔流感病毒A1/京防/97-53H1N1〕表3板藍(lán)根凝集素抗病毒作用〔2〕〔流感病毒A1/京防/262/95〕由上結(jié)果說明，馬藍(lán)根、板藍(lán)根存在血凝活性差異。馬藍(lán)根凝集素的血凝活性普遍比板藍(lán)根高。從菘藍(lán)板藍(lán)根中提取的凝集素幾乎均無血凝活性。板藍(lán)根凝集素的抗病毒成效與其血凝活性的上下有關(guān)。兩者呈正相關(guān)，即血凝效價(jià)愈高，抗流感病毒能力就愈強(qiáng)。據(jù)此結(jié)果可達(dá)鑒別馬藍(lán)根、板藍(lán)根的目的。2.4.4DNA遺傳標(biāo)記鑒別方法DNA遺傳標(biāo)記鑒別法是根據(jù)不同生物類中藥個(gè)體遺傳物質(zhì)DNA的差異來鑒別中藥的一種方法。動、植物的外部形態(tài)和所含化學(xué)成分的多少往往隨生態(tài)環(huán)境的改變而發(fā)生變化。中藥(特別是植物、動物中藥)的形狀隨入藥部位、加工方法的變化而變化，這些變化常給中藥的鑒別帶來困難。眾所周知，動、植物依靠細(xì)胞分裂繁衍后代，在這種繁殖過程中親代將保持種群外部形態(tài)、組織功能、生理和生化特征等遺傳信息遺傳給子代，即在細(xì)胞分裂的過程中遺傳物質(zhì)由親代遺傳給子代。大量的研究證明，遺傳物質(zhì)存在于細(xì)胞核中，細(xì)胞核中的染色體是遺傳基因的載體。染色體的數(shù)目和形態(tài)是動物和植物體內(nèi)比較穩(wěn)定的重要特征。在由DNA、RNA和蛋白質(zhì)組成的染色體中，DNA是絕大多數(shù)生物(除少數(shù)病毒外)的遺傳物質(zhì)。同種生物的細(xì)胞中具有相同的DNA，不同種生物的細(xì)胞中具有不同的DNA。DNA遺傳標(biāo)記鑒別方法就是以上述理論為依據(jù)，借助相應(yīng)的技術(shù)到達(dá)鑒別中藥正偽的目的。如對訶子及其近緣品種RAPD鑒別，等。

附：訶子及其近緣品種RAPD鑒別

實(shí)驗(yàn)樣品見表3。結(jié)果見圖2、表4表3實(shí)驗(yàn)樣品編號樣品產(chǎn)地純度A260/A281絨毛訶子TenninaliachebulaRetz.var.tomentellaKurt.云南1.012訶子TenninaliachebulaRetz.廣東1.053小訶子TenninaliachebulaRetz.f.macrocarpa廣東1.054恒河訶子TenninaliachebulaRetz.var.gangetica（Robx.）C.B.Clarke廣西1.045銀葉訶子TenninaliaargyrophyllaPott.etPrain.云南1.036大訶子TenninaliachepulaRetz.f.macrocarpanov.ined.廣東1.067毛訶子Tenninaliabillerica（Gaertn.）Roxb.云南1.081

2

3

4

5

6

7

M1234567M1.絨毛訶子〔云南〕2.訶子〔云南〕3.小訶子〔廣東〕4.恒河訶子〔廣西〕5.銀葉訶子〔云南〕6.大訶子〔廣東〕7.毛訶子〔云南〕M.Marker〔200~3000bp〕100.a-引物S354：CACCCGGATG；b-引物S30：GTGATC-GCAG根據(jù)上述結(jié)果可達(dá)鑒別訶子及其近緣品種的目的。8條引物中有1條各樣品指紋圖根本一致〔圖2-a〕，7條能產(chǎn)生多態(tài)性〔圖2-b為其中一條〕，說明各品種間有著較近的親緣關(guān)系。

2.4.5細(xì)胞生物學(xué)鑒別方法細(xì)胞生物學(xué)鑒別法是采用染色體〔chromosome〕的核型分析技術(shù)對中藥品種進(jìn)行的鑒別。中藥某個(gè)特定種群的生物體細(xì)胞中染色體的形態(tài)、組型、帶型是穩(wěn)定不變的，代表著該種群的根本遺傳特征，根據(jù)該特征即可以鑒別中藥、中藥飲片的品種。由于染色體形態(tài)只能在細(xì)胞分裂的中、后期觀察，故該方法只適用于果實(shí)類和種子類中藥、中藥飲片品種的鑒別。根據(jù)染色體的排列，制成核型模式圖；或用“不對稱核型分類”標(biāo)準(zhǔn)確定其核型，并與染色體的背景資料比較，即可到達(dá)中藥、中藥飲片品種鑒定的目的。如對梔子及水梔子染色體核型的比較鑒別，等。附：梔子〔GardeniajasminoidesEllis〕及水梔子〔GardeniajasminoidesEllisvar.grandifloraNakaihe〕核型的鑒別結(jié)果見表5-1，表5-2。圖3-1，圖3-2。表5-1梔子與水梔子染色體核型比較表5-2梔子核型分析圖3-1梔子的染色體及核型圖圖3-2梔子染色體核型帶型模式

A湖北恩施產(chǎn)梔子，B湖北恩威產(chǎn)水梔子，C廣西永福產(chǎn)水梔子。梔子和水梔子的染色體數(shù)目均為2n＝22。染色體較小，在晚前期與中期分裂相中，最長染色體為4μm，最短的僅1μm。三個(gè)樣品的染色體相對長度變化為3.82%～15.40%，但染色體的類別、長短染色體的構(gòu)成不同。著絲點(diǎn)位置以中部〔m〕和近中部〔sm〕為主，梔子有7對中間著絲點(diǎn)染色體，而水梔子有6對。三者都有1對隨體，梔子的隨體位于第9對染色體上，為中部著絲點(diǎn)；兩個(gè)水梔子的隨體位于第4對染色體上，為近中部著絲點(diǎn)〔st〕。染色體長度比為3.12～3.60，N，F(xiàn)值〔臂指數(shù)〕均為42，臂比值大于2的染色體百分比為0.27～0.45，屬于2B核型，染色體核型不對稱系數(shù)〔ASK%〕63.1%～64.1%，核型較為對稱。Giemsa帶型以c/c為主。

2.5分類鑒別方法分類鑒別方法亦稱基源鑒別法。是運(yùn)用分類學(xué)的方法將中藥飲片的來源〔原植物、原動物、原礦物〕鑒定清楚，以確定其學(xué)名的方法。2.5.1生物類中藥飲片的分類鑒別方法2.5.1.1源于生物中藥的基源名稱—學(xué)名a.學(xué)名的定義：源于生物中藥的基源名稱是用拉丁文或拉丁化了的希臘文字書寫，按照國際命名法規(guī)定，給每種生物〔植物、動物〕所取的國際上統(tǒng)一使用的科學(xué)名稱，即學(xué)名。如人參來源于五加科植物人參PanaxginsengC．A．Mey．的根，敗醬草來源于敗醬科植物黃花敗醬PatriniascabiosaefoliaFisch．或白花敗醬PatriniavillosaJuss.的全草，暴馬子皮來源于木犀科植物暴馬丁香Syingareticulate(BL.)Haravra.mandshurica(Maxim.)Hara的枯燥皮或枝皮，龍船花來源于茜草科植物龍船花IxorachinensisLam.的枯燥花。烏稍蛇來源于游蛇科動物烏稍蛇Zaocysdhumnades(Cantor)去除內(nèi)臟的全體，蟾酥來源于蟾蜍科動物中華大蟾蜍BufobufogargarizansCantor或黑眶蟾蜍BufomelanostictusSchneider耳后腺及皮膚腺的枯燥分泌物，等。為了區(qū)別成千上萬種藥物基源，防止混淆，以利正確用藥、科學(xué)研究與學(xué)術(shù)交流，每種生物都有一個(gè)國際上統(tǒng)一的名稱—學(xué)名，因該名稱用拉丁文表示，所以也稱為拉丁學(xué)名，上述PanaxginsengG．A．Mey、PatriniascabiosaefoliaFisch．、PatriniavillosaJuss.、Syingareticulate(BL.)Haravra.mandshurica(Maxim.)Hara、IxorachinensisLam.Zaocysdhumnades(Cantor)、BufobufogargarizansCantor、BufomelanostictusSchneider就依次是人參、黃花敗醬、白花敗醬、暴馬丁香、龍船花、烏稍蛇、中華大蟾蜍、黑眶蟾蜍的學(xué)名。 b.學(xué)名的根本分類單位學(xué)名的根本分類單位是種，藥物的根本分類單位也是種。習(xí)慣上所說的源于生物中藥的藥物的種，廣義的概念與學(xué)名的種是一致的。實(shí)際上，一種藥物并不都是由一個(gè)種(即一種基源)所組成，不少藥物是由2個(gè)或2個(gè)以上的種所組成，如柴胡