T-TPPA 0003-2022 中藥注射劑對(duì)豚鼠離體回腸的收縮作用操作規(guī)程

ICS

11.120.01CCS

團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/TPPA

中藥注射劑對(duì)豚鼠離體回腸的收縮作用操作規(guī)程O(píng)perating

procedure

for

medicine

injection

ileum

of

guinea

2022-12-22

發(fā)布2022-12-22

實(shí)施T/TPPA

0003-2022 前 言

..........................................................................

I1

范圍

............................................................................

12

規(guī)范性引用文件

..................................................................

13

術(shù)語(yǔ)和定義

......................................................................

14

檢測(cè)原理

........................................................................

25

材料與設(shè)備

......................................................................

25.1

材料........................................................................

25.2

設(shè)備........................................................................

26

實(shí)驗(yàn)方法

........................................................................

26.1

溶液配制

....................................................................

36.2

實(shí)驗(yàn)步驟

....................................................................

37

數(shù)據(jù)處理及判定

..................................................................

5天津市醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會(huì)

發(fā)布T/TPPA

0003-2022 本文件按照

GB/T

《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由天津天士力之驕藥業(yè)有限公司提出。本文件由天津市醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會(huì)歸口。天地藥業(yè)股份有限公司、天津紅日藥業(yè)股份有限公司。T/TPPA

0003-20221范圍法。本文件適用于中藥注射劑對(duì)豚鼠離體回腸收縮作用的評(píng)價(jià)。2規(guī)范性引用文件文件。GB/T

6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB

14925實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

環(huán)境及設(shè)施GB

19489 實(shí)驗(yàn)室

生物安全通用要求GB/T

24001

環(huán)境管理體系

要求及使用指南GB/T

45001

職業(yè)健康安全管理體系

要求及使用指南3 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1乙酰膽堿

acetylcholine乙酰膽堿是一種神經(jīng)遞質(zhì)。在組織內(nèi)迅速被膽堿酯酶破壞。能特異性地作用于各類(lèi)膽堿受體。3.2組胺

histamine部組織水腫。使細(xì)胞外Ca

內(nèi)流增加，從而導(dǎo)致回腸平滑肌收縮。T/TPPA使細(xì)胞外Ca

內(nèi)流增加，從而導(dǎo)致回腸平滑肌收縮。3.3毒蕈堿受體

muscarinic

receptor毒蕈堿受體簡(jiǎn)稱M受體，廣泛存在于副交感神經(jīng)節(jié)后纖維支配的效應(yīng)器細(xì)胞上。當(dāng)乙酰膽堿與這類(lèi)平滑肌、膀胱逼尿肌和瞳孔括約肌的收縮，以及消化腺分泌增加等。3.4組胺1型受體

histamine

receptor

1組胺1型受體簡(jiǎn)稱H1受體，是組胺受體的一種亞型，組胺通過(guò)激活H1受體產(chǎn)生支氣管平滑肌興奮、毛細(xì)血管通透性增加和部分血管擴(kuò)張效應(yīng)。臨床常用H1受體阻斷藥物治療皮膚黏膜過(guò)敏反應(yīng)。4 檢測(cè)原理M1、H1完全激動(dòng)劑，分別與M1受體和H1受體結(jié)合，通過(guò)G蛋白介導(dǎo)激活磷脂酶C，使二磷酸肌醇磷脂水解為二酰甘油及1,4,5-三磷酸肌醇。二酰甘油在細(xì)胞膜上激活蛋白激酶C，使靶蛋白磷酸化，激活鈣通道，2+5 材料與設(shè)備5.1 材料5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物±50g℃條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)3d養(yǎng)符合GB

14925和GB/T

的要求，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)符合GB

19489和GB/T

28001的要求。5.1.2 試劑試藥a）乙酰膽堿：含量不低于。b）組胺：含量不低于97.0%。c）氯化鉀、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、碳酸氫鈉、磷酸二氫鉀、葡萄糖，上述試劑均為分析純。d）水為

6682

規(guī)定的三級(jí)水。5.2 設(shè)備組織器官灌流裝置、生物信號(hào)采集系統(tǒng)。6 實(shí)驗(yàn)方法T/TPPA

0003-20226.1溶液配制6.1.1 臺(tái)氏液的配制稱取氯化鈉

8.01g、氯化鉀

0.20g、氯化鈣

0.20g、氯化鎂

0.10g、碳酸氫鈉

1.00g0.05g、葡萄糖

1.01g

1000mL，調(diào)節(jié)至

pH

至

，

內(nèi)使用。6.1.2乙酰膽堿溶液的配制稱取乙酰膽堿適量，加水配制成適宜濃度的乙酰膽堿溶液。6.1.3 組胺溶液的配制稱取組胺適量，加水配制成適宜濃度的組胺溶液。6.1.4 氯化鉀溶液的配制稱取氯化鉀適量，加水配制成適宜濃度的氯化鉀溶液。6.1.5 氯化鈣溶液的配制稱取氯化鈣適量，加水配制成適宜濃度的氯化鈣溶液。6.2 實(shí)驗(yàn)步驟6.2.1 離體標(biāo)本制備豚鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)

3d

12h

200g±50g

的豚鼠

6～10

死后，5min

10cm

處取出約

10cm

0℃臺(tái)氏液沖洗干

3

2cm

有

37℃臺(tái)氏液的麥?zhǔn)纤〔壑校⒕徛ㄈ?/p>

氧氣和

2～3個(gè)氣泡/秒。調(diào)整前負(fù)荷在

，用生物信號(hào)采集系統(tǒng)平衡

min，期間每

臺(tái)氏液，待回腸平滑肌自發(fā)性收縮運(yùn)動(dòng)處于平衡狀態(tài)后，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。6.2.2 供試品對(duì)靜息離體回腸影響的評(píng)價(jià)～400μL

3min作用強(qiáng)弱。加入供試品后收縮張力明顯降低，且與加入前相比有顯著性差異（P＜0.05的供試品對(duì)靜息離體回腸平滑肌的收縮有抑制作用。按照如下公式計(jì)算抑制率：抑制率(%)=(G

-G

給藥前×100% ……式1式中：G

給藥前—給藥前回腸收縮平均張力G

給藥后—給藥后回腸收縮平均張力待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L的乙酰膽堿溶液，平衡，記錄加入乙酰膽待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L的組胺溶液，平衡，記錄加入組胺溶液前待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L的氯化鉀溶液，平衡3min，記錄加入氯化鉀溶抑制率越大表明供試品對(duì)靜息離體回腸平滑肌收縮的抑制作用越強(qiáng)。6.2.3 供試品對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的離體回腸收縮影響的評(píng)價(jià)a)乙酰膽堿誘導(dǎo)的離體回腸收縮模型的建立-8 -4堿溶液前后3min前相比有顯著性差異（P＜0.05），表明乙酰膽堿誘導(dǎo)的離體回腸收縮模型制備成功。b) 供試品對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響3min內(nèi)離體回腸平滑肌收縮張力的變化，通過(guò)張力值參數(shù)比較作用強(qiáng)弱。加入供試品后收縮張力明顯降低，且與加入前相比有顯著性差異（P＜0.05），表明所加入的供試

6.2.2

項(xiàng)下式

1

對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的離體回腸平滑肌收縮的抑制作用越強(qiáng)。6.2.4 供試品對(duì)組胺誘導(dǎo)的離體回腸收縮影響的評(píng)價(jià)a) 組胺誘導(dǎo)的離體回腸收縮模型的建立-8 -4后3min性差異（P＜0.05），表明組胺誘導(dǎo)的離體回腸收縮模型制備成功。b) 供試品對(duì)組胺引起的豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響3min內(nèi)離體回腸平滑肌收縮張力的變化，通過(guò)張力值參數(shù)比較作用強(qiáng)弱。加入供試品后收縮張力明顯降低，且與加入前相比有顯著性差異（P＜0.05），表明所加入的供試6.2.2項(xiàng)下項(xiàng)下式1組胺誘導(dǎo)的離體回腸平滑肌收縮的抑制作用越強(qiáng)。6.2.5 供試品對(duì)氯化鉀誘導(dǎo)的離體回腸收縮影響的評(píng)價(jià)a)氯化鉀誘導(dǎo)的離體回腸收縮模型的建立-5 -1液前后3min有顯著性差異（P＜0.05），表明氯化鉀誘導(dǎo)的離體回腸收縮模型制備成功。b)

供試品對(duì)氯化鉀誘導(dǎo)的豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響3min內(nèi)離體回腸平滑肌收縮張力的變化，通過(guò)張力值參數(shù)比較作用強(qiáng)弱。加入供試品后收縮張力明顯降低，且與加入前相比有顯著性差異（P＜0.05），表明所加入的供試待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10待回腸平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，加入10

～10

mol/L的氯化鈣溶液平衡3min，記錄加入氯化鈣溶液

項(xiàng)下式

1

氯化鉀誘導(dǎo)的離體回腸平滑肌收縮的抑制作用越強(qiáng)。6.2.6 供試品對(duì)氯化鈣誘導(dǎo)的離體回腸收縮影響的評(píng)價(jià)a) 氯化鈣誘導(dǎo)的離體回腸收縮模型的建立-4 -1前后3min顯著性差異（P＜0.05），表明氯化鈣誘導(dǎo)的離體回腸收縮模型制備成功。b) 供試品對(duì)氯化鈣引起的豚鼠離體