基因工程習(xí)題

基因重組和基因工程一、單項(xiàng)選擇題1.限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生A.5′磷酸基和3′羥基基團(tuán)的末端B.5′磷酸基和3′磷酸基團(tuán)的末端C.5′羥基和3′羥基基團(tuán)的末端D.3′磷酸基和5′羥基基團(tuán)的末端E.以上都不是2.可辨認(rèn)并切割特異DNA序列的酶是A.非限制性核酸外切酶B.限制性核酸內(nèi)切酶C.限制性核酸外切酶D.非限制性核酸內(nèi)切酶E.DNA酶3.有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶，以下哪個(gè)描述是錯(cuò)誤的？A.辨認(rèn)和切割位點(diǎn)通常是4～8個(gè)bp長(zhǎng)度B.大多數(shù)酶的辨認(rèn)序列具有回文結(jié)構(gòu)C.在辨認(rèn)位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵D.只能辨認(rèn)和切割原核生物DNA分子E.只能切割含辨認(rèn)序列的雙鏈DNA分子4.在重組DNA技術(shù)中催化形成重組DNA分子的酶是A.解鏈酶B.DNA聚合酶C.DNA連接酶D.內(nèi)切酶E.拓?fù)涿?.對(duì)基因工程載體的描述，下列哪個(gè)不對(duì)的？A.可以轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞B.有限制酶的辨認(rèn)位點(diǎn)C.可與目的基因相連D.是環(huán)狀DNA分子E.有篩選標(biāo)志6.克隆所依賴的DNA載體的最基本性質(zhì)是A.卡那霉素抗性B.青霉素抗性C.自我復(fù)制能力D.自我表達(dá)能力E.自我轉(zhuǎn)錄能力7.重組DNA技術(shù)中常用的質(zhì)粒DNA是A.病毒基因組DNA的一部分B.細(xì)菌染色體外的獨(dú)立遺傳單位C.細(xì)菌染色體DNA的一部分D.真核細(xì)胞染色體外的獨(dú)立遺傳單位E.真核細(xì)胞染色體DNA的一部分8.下列哪種物質(zhì)一般不用作基因工程的載體？A.質(zhì)粒B.噬菌體C.哺乳動(dòng)物的病毒D.逆轉(zhuǎn)錄病毒ＤＮＡE.大腸桿菌基因組9.關(guān)于pBR322質(zhì)粒描述錯(cuò)誤的是Ａ．有一些限制酶的酶切位點(diǎn)Ｂ．具有1個(gè)ori.Ｃ．具有來(lái)自大腸桿菌的lacZ基因片段Ｄ．含個(gè)氨卞青霉素抗性基因Ｅ．含四環(huán)素抗性基因。10.以ｍＲＮＡ為模板催化ｃＤＮＡ合成需要下列酶A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶C.Klenow片段D.逆轉(zhuǎn)錄酶E.ＤＮＡ酶11.催化聚合酶鏈反映需要下列酶A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶C.TaqDNA聚合酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶E.限制性核酸內(nèi)切酶12.關(guān)于ＰＣＲ的描述下列哪項(xiàng)不對(duì)的？A.是一種酶促反映B.引物決定了擴(kuò)增的特異性C.擴(kuò)增產(chǎn)物量大D.擴(kuò)增的對(duì)象是ＤＮＡ序列E.擴(kuò)增的對(duì)象是RNA序列13.在基因工程中，DNA重組體是指A.不同來(lái)源的兩段DNA單鏈的復(fù)性B.目的基因與載體的連接物C.不同來(lái)源的DNA分子的連接物D.原核DNA與真核DNA的連接物E.兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)基因形成的連接物14.基因工程操作中轉(zhuǎn)導(dǎo)是指A.把重組質(zhì)粒導(dǎo)入宿主細(xì)胞B.把DNA重組體導(dǎo)入真核細(xì)胞C.把DNA重組體導(dǎo)入原核細(xì)胞D.把外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞E.以噬菌體或病毒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞15.重組DNA的篩選與鑒定不涉及哪一方法A.限制酶酶切圖譜鑒定B.PCR擴(kuò)增鑒定C.顯微注射D.藍(lán)白篩選E.抗藥篩選二、多項(xiàng)選擇題1.在分子克隆中，目的DNA可來(lái)自A.原核細(xì)胞染色體DNAB.真核細(xì)胞染色體DNAC.人工合成的DNAD.聚合酶鏈反映E.真核細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA2.重組DNA技術(shù)基本過(guò)程涉及A.目的基因的獲取B.克隆載體的構(gòu)建C.目的DNA與載體的連接D.將重組體導(dǎo)入受體菌E.重組DNA分子轉(zhuǎn)化受體菌的篩選3.分子克隆又稱A.基因克隆B.DNA克隆C.單克隆抗體制備D.構(gòu)建基因組DNA文庫(kù)E.基因重組4.參與聚合酶鏈反映體系的組分有A.DNA引物B.目的DNAC.三磷酸脫氧核苷D.TaqDNA聚合酶E.RNA聚合酶5．從基因組DNA文庫(kù)或cDNA文庫(kù)分離、擴(kuò)增某一感愛(ài)好基因的過(guò)程就是A.基因克隆B.分子克隆C.DNA克隆D.構(gòu)建基因組DNA文庫(kù)E.重組DNA技術(shù)6.可用作克隆基因載體的DNA有A.細(xì)菌質(zhì)粒DNAB.真核細(xì)胞基因組DNAC.病毒DNAD.酵母人工染色體E.噬菌體DNA7．將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)菌的方法有A.接合B.轉(zhuǎn)座C.感染D.轉(zhuǎn)染E.轉(zhuǎn)化8．轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞的方法有A.磷酸鈣共沉淀法B.電穿孔C.DEAE葡聚糖法D.脂質(zhì)體載體法E.顯微注射法9．下述操作也許用于基因工程過(guò)程的是Ａ．DNA的制備和酶解Ｂ．不同來(lái)源DNA的拼接Ｃ．重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞Ｄ．細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖Ｅ．核酸分子雜交10．關(guān)于質(zhì)粒DNA的敘述對(duì)的的是A.是基因組DNA的組成部分B.具有獨(dú)立復(fù)制功能C.具有抗生素抗性基因D.具有感愛(ài)好的目的DNAE.具有編碼蛋白質(zhì)的功能三、填空題１、DNA重組技術(shù)重要涉及兩大核心技術(shù)：和。２、一個(gè)完整的基因克隆過(guò)程應(yīng)涉及：目的基因的獲取，_________的選擇與改造，_________的連接，重組DNA分子受體細(xì)胞，出含感愛(ài)好基因的重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)胞。３、限制性核酸內(nèi)切酶是由________產(chǎn)生的一類辨認(rèn)_____，并在辨認(rèn)位點(diǎn)切割鍵的核酸內(nèi)切酶。４、科學(xué)家感愛(ài)好的外源基因又稱_____，其來(lái)源有_____、_____、_____、_____等幾種途徑。５、常用的目的基因與載體連接的方式有_____、_____、_____、_____。６、根據(jù)采用的克隆載體性質(zhì)不同，將重組DNA分子導(dǎo)入細(xì)菌的方法有___、___等。７、基因組文庫(kù)具有組織或細(xì)胞的____信息，cDNA文庫(kù)具有組織或細(xì)胞的____信息。8、載體的本質(zhì)是，它應(yīng)具有下列基本條件：、、、和。四、名詞解釋1.基因工程2.DNA重組3.克隆4.DNA克隆5.目的基因6.基因載體7.質(zhì)粒8.限制性核酸內(nèi)切酶9.基因文庫(kù)10.cDNA文庫(kù)11.轉(zhuǎn)化12.轉(zhuǎn)導(dǎo)13.轉(zhuǎn)染五、問(wèn)答題１.載體應(yīng)具有以下基本條件２.常用的工具酶有哪些？其重要用途是什么？３.重組DNA技術(shù)常涉及哪些基本環(huán)節(jié)：４.常用的目的基因的獲取方法有哪些？５.常用的目的基因與載體的連接方法有哪些？５.何謂限制性核酸內(nèi)切酶？寫出大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)DNA序列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。６.解釋質(zhì)粒，為什么質(zhì)?？勺鳛榛蜉d體。參考答案1.Ａ2.Ｂ3.Ｄ4.Ｃ5.Ｄ6.Ｃ7.Ｂ8.Ｅ9.Ｃ10.Ｄ11.Ｃ12.Ｅ13.Ｂ14.E15.Ｃ二、多項(xiàng)選擇題1.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ2.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ3.Ａ、Ｂ、Ｅ4.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ5.Ａ、Ｂ、Ｃ6.Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ7.Ｃ、Ｄ、Ｅ8.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ9.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ10.Ｂ、Ｃ三、填空題１．DNA重組、克?。玻d體、目的基因與載體、導(dǎo)入、篩選３．細(xì)菌、雙鏈DNA中的特定堿基序列、磷酸二酯４．目的基因、制備基因組文庫(kù)、構(gòu)建cDNA文庫(kù)、PCR擴(kuò)增、人工合成DNA技術(shù)５．黏性末端連接、平頭末端連接、人工接頭法、同源多聚尾連接法６．轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)７．DNA、mRNA。8．DNA、具有獨(dú)立復(fù)制能力、具有多克隆位點(diǎn)、具有篩選標(biāo)志、具有足夠的容量、能導(dǎo)入受體細(xì)胞四、名詞解釋1、是指在體外將DNA分子“剪切”并重新“拼接”形成一個(gè)新的重組DNA分子，然后將它導(dǎo)入細(xì)菌或動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)使之表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物或改造新的生物品種。2、是指用酶學(xué)方法將不同來(lái)源的DNA進(jìn)行切割、連接，組成一個(gè)新的DNA分子的過(guò)程。3、克隆(clone)原指一個(gè)親本細(xì)胞經(jīng)無(wú)性繁殖產(chǎn)生無(wú)數(shù)個(gè)相同細(xì)胞的子代群體的過(guò)程。4、是指將重組DNA分子導(dǎo)入到合適的受體細(xì)胞中，使其擴(kuò)增和繁殖，以獲得大量的相同的DNA分子，又稱分子克隆或基因克隆。5、要分離和克隆的相應(yīng)基因常稱為目的基因。因目的基因片段需插入載體，導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)，所以對(duì)宿主細(xì)胞DNA而言，又稱它為外源性基因或外源性DNA。6、可以攜帶外源DNA進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)的DNA分子，被稱為基因載體。7、是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，能自主復(fù)制的共價(jià)閉合環(huán)狀雙鏈DNA。8、是由細(xì)菌產(chǎn)生的一類能特異辨認(rèn)雙鏈DNA中的特定堿基序列，并在辨認(rèn)位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱限制酶)。9、將所有的重組DNA分子都導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，得到分子克隆的混合體，這樣一個(gè)混合體稱為基因文庫(kù)。10、從組織細(xì)胞中分離得到純化的mRNA，然后以mRNA為模板，運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄酶合成其互補(bǔ)DNA，再?gòu)?fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后導(dǎo)入受體菌內(nèi)，擴(kuò)增，構(gòu)建cDNA文庫(kù)。11、是指以質(zhì)粒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入處在感受態(tài)的宿主細(xì)胞，并使其獲得新的表型的過(guò)程。12、以噬菌體或細(xì)胞病毒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞并獲得新的表型的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction)。13、真核細(xì)胞積極攝取或被動(dòng)導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)染。五、問(wèn)答題１、①具有獨(dú)立復(fù)制能力；②具有多個(gè)限制酶的辨認(rèn)位點(diǎn)(多克隆位點(diǎn))；③具有遺傳表型或篩選標(biāo)志；④有足夠的容量以容納外源DNA片段；⑤可導(dǎo)入受體細(xì)胞。通過(guò)人工構(gòu)建的載體，不僅能與外源基因相連接，導(dǎo)入受體細(xì)胞，還能運(yùn)用自身的調(diào)控系統(tǒng)，使外源基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制并表達(dá)。２、（1）限制性核酸內(nèi)切酶：辨認(rèn)并特異切割DNA堿基序列；（2）DNApolⅠ：催化缺口平移，制備高比度DNA探針；（3）Klenow片段：合成cDNA第二條鏈，補(bǔ)齊或標(biāo)記雙鏈DNA3′端；（4）TaqDNA聚合酶：DNA體外擴(kuò)增(PCR)；（5）逆轉(zhuǎn)錄酶：催化合成cDNA；(6)T4DNA聚合酶：聚合補(bǔ)平或標(biāo)記DNA平末端或3′凹端等；（7）DNA連接酶：催化2條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵；（8）大腸桿菌DNA連接酶：應(yīng)用于黏端DNA或切口間連接；（9）T4DNA連接酶：應(yīng)用于黏性或平末端DNA的連接；（10）末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶：給載體或cDNA加上互補(bǔ)的同聚尾、加標(biāo)記物；（11）堿性磷酸酶：防止載體自身連接、32P標(biāo)記5′端；（12）T4多核苷酸激酶：5′端磷酸化、5′端標(biāo)記放射性核素。３、（1）分離制備目的基因——“分”；（2）切割目的基因和載體——“切”；（3）目的基因與載體的連接——“接”；（4）將重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞——“轉(zhuǎn)”；（5）篩選并鑒定含重組DNA分子的受體細(xì)胞克隆——“篩”；（6）克隆基因在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)——“表”。 ４、（1）制備基因組文庫(kù)；（2）構(gòu)建cDNA文庫(kù)；（3）PCR擴(kuò)增目的基因；（4）人工合成DNA技術(shù)。５、⑴黏性末端連接：將靶基因片段和載體DNA經(jīng)相同的限制酶分別切割，使它們兩端產(chǎn)生相同的黏性末端。然后經(jīng)黏性末端堿基配對(duì)，再經(jīng)DNA連接酶作用，共價(jià)連接成新的重組DNA分子；⑵平頭末端連接：將平末端的DNA分子在T4DNA連接酶催化下，使DNA分子的3′OH和5′P進(jìn)行共價(jià)結(jié)合；⑶人工接頭法：是指運(yùn)用人工接頭加在平端DNA片段的兩端，然后用相應(yīng)限制酶切割人工接頭以產(chǎn)生黏性末端，再與帶相同黏性末端的載體相連；⑷同源多聚尾連接法：在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶催化下，在線型載體分子的兩端加上單一核苷酸如dG組成的多聚尾；而在目的DNA分子的兩端加上dC尾，兩者混合退火，然后經(jīng)DNA聚合酶Ⅰ或Klenow填補(bǔ)裂口處缺失的核苷酸，再通過(guò)DNA連接酶修復(fù)成環(huán)狀的雙鏈DNA。6、限制性核酸內(nèi)切酶(RE)是由細(xì)菌產(chǎn)生的一類能特異辨認(rèn)雙鏈DNA中的特定堿基序列，并在辨認(rèn)位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱限制酶)。限制酶的辨認(rèn)和切割位點(diǎn)通常是4～8個(gè)bp長(zhǎng)度且具有回文序列的DNA片段，重要產(chǎn)生5′突出、3′突出的黏性末端或平端。當(dāng)一個(gè)樣本DNA被一個(gè)特定的限制酶切割后，可以產(chǎn)生一批相同堿基序列的DNA片段，進(jìn)而可以用于基因重組、克隆、核酸分子雜交與序列分析等。7、質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，能自主復(fù)制的共價(jià)閉合環(huán)狀雙鏈DNA。通過(guò)人工構(gòu)建的載體，不僅能與外源基因相連接，并且質(zhì)粒具有復(fù)制起始原點(diǎn)(ori)，此起始點(diǎn)與順式作用調(diào)控元件構(gòu)成一個(gè)復(fù)制子(復(fù)制區(qū)內(nèi))，能借助宿主細(xì)菌染色體DNA復(fù)制所用的同一套酶系獨(dú)立地進(jìn)行自我復(fù)制、克隆。什么是基因工程，基因工程的基本流程？基因工程誕生的條件與標(biāo)志分別是什么？3.基因工程載體必須滿足哪些基本條件？質(zhì)粒載體有什么特性，有哪些重要類型？3.噬菌體載體有哪些？攜帶能力分別有多大？4.什么是人工微小染色體？有哪些類型？5.什么是穿梭載體？表達(dá)載體應(yīng)當(dāng)具有什么條件？7.限制性內(nèi)切核酸酶的特點(diǎn)與使用注意事項(xiàng)有哪些？18.什么是蛋白質(zhì)芯片？19.什么是基因組文庫(kù)？其構(gòu)建方法是如何的？20.什么是cDNA文庫(kù)？它的構(gòu)建流程是什么？21.構(gòu)建cDNA文庫(kù)需要用到哪些工具酶？第二章1.在基因操作中所用的限制性核酸內(nèi)切酶是指（B）A．I類限制酶B.II類限制酶C.III類限制酶D.核酸內(nèi)切酶E.RNAase2.下列關(guān)于同裂酶的敘述錯(cuò)誤的是(B)是從不同菌種分離到的不同的酶,也稱異源同工酶。它們的辨認(rèn)序列完全相同。它們的切割方式可以相同，也可以不同。有些同裂酶辨認(rèn)的完整序列不完全同樣，但切割位點(diǎn)間的序列同樣。兩種同裂酶的切割產(chǎn)物連接后，也許會(huì)丟失這兩個(gè)同裂酶的辨認(rèn)位點(diǎn)。3.多數(shù)限制酶消化DNA的最佳溫度是（A）A.37℃B.30℃C.25℃D4.下列關(guān)于限制酶的敘述錯(cuò)誤的是(B)A.

I類限制酶反映需要Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。B.

II類限制酶反映需要Mg2+、ATP。C.

III類限制酶反映需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促進(jìn)反映，但不是絕對(duì)需要。D.

I、III類限制酶對(duì)DNA有切割和甲基化活性，II類限制酶對(duì)DNA只有切割活性而無(wú)甲基化活性。E.

II5.假如一個(gè)限制酶辨認(rèn)長(zhǎng)度為6bp,則其在DNA上辨認(rèn)6bp的切割概率為(D)A.1/44B.1/66C.1/64D.1/46E.1/1066.多數(shù)II類限制酶反映最適PH是(C)A.PH:2-4B.PH:4-6C.PH:6-8D.PH:8-10E.PH:4-107.下列關(guān)于限制酶反映的說(shuō)法錯(cuò)誤的是(D)A.

限制酶辨認(rèn)序列內(nèi)或其鄰近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，也許會(huì)阻礙限制酶的酶解活性。B.

許多限制酶對(duì)線性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明顯差異的。C.

有些限制酶對(duì)同一DNA底物上不同酶切位點(diǎn)的切割速率會(huì)有差異。D.

限制酶反映緩沖系統(tǒng)一般不用磷酸緩沖液，是由于磷酸根會(huì)克制限制酶反映。E.

BSA對(duì)許多限制酶的切割活性都有促進(jìn)作用，所以酶切反映中常加入一定量的8.II類限制酶反映中必須的陽(yáng)離子是（C）A.Na+B.Ca2+C.Mg2+D.Zn2+E.Mn2+9.RFLP形成的因素是（A）A.

由于遺傳變異導(dǎo)致同源染色體中堿基的隨機(jī)變化。B.

使用不同的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行切割。C.

雜交時(shí)使用不同的探針。D.

每種染色體存在兩條。E.

提取不同的染色體DNA酶切。10.下列關(guān)于限制酶命名的表達(dá)方法，對(duì)的的是（E）A.Sau.3AIB.B.amHIC.pstID.EcorIE.HindIII11.需進(jìn)行DNA部分酶切時(shí)，控制下列哪種條件最合適（D）A.反映時(shí)間B.反映體積C.PHD.限制酶量E.反映溫度12.下列酶在反映中不需要ATP的是(D)A.E

coKB.T4DNA連接酶C.BamHID.EcoBE.DNApolI13.限制性內(nèi)切酶可特異性辨認(rèn)(B)A.雙鏈DNA的特定堿基對(duì)B.雙鏈DNA的特定堿基序列C.單鏈RNA的特定堿基序列D.單鏈DNA的特定堿基序列E雙鏈RNA的特定堿基對(duì)14.下列與RFLP相關(guān)的一條是(D)A.

不同限制酶在單個(gè)染色體DNA上的限制性圖譜。B.

兩種物種個(gè)體間的限制性圖譜。C.

同一個(gè)體等位基因的限制性圖譜。D.

同一物種不同個(gè)體的限制性圖譜。E.

非同源染色體用同種限制酶切形成的限制酶圖譜。15．限制酶的星號(hào)活性是指在非正常條件下，限制酶（A）A.

辨認(rèn)和切割序列發(fā)生變化。B.

切割活性大大提高。C.

辨認(rèn)和切割序列與本來(lái)完全不同。D.

可以任意切割DNA。E.

只能部分切割DNA。三．填空題1．限制酶是一類專門切割DNA的酶，它能特異性辨認(rèn)切割雙鏈（單、雙）DNA。2．II型限制酶辨認(rèn)位點(diǎn)一般長(zhǎng)度為4~6個(gè)核苷酸對(duì)。3．個(gè)體之間DNA限制酶片段長(zhǎng)度存在差異稱限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）。4．限制酶命名采用Smith和Athens建議的方案，第一個(gè)字母大寫取自來(lái)源細(xì)菌的屬名；第二、三個(gè)字母取自來(lái)源細(xì)菌的種名；第四個(gè)字母（假如有）取自來(lái)源菌的株系。5．需要部分酶切時(shí)可采用的方法有（1）減少酶的用量（2）縮短反映時(shí)間（3）增大反映體積。6．限制酶辨認(rèn)序列為n個(gè)堿基，則其切割頻率的理論值應(yīng)是4n。7．限制性內(nèi)切酶通常保存在50%濃度的甘油溶液中。8．甘油濃度是導(dǎo)致一些酶的星活性的因素之一，在酶切時(shí)反映體系中的甘油濃度應(yīng)控制在5%以下。9．限制與修飾是宿主的一種保護(hù)體系，它是通過(guò)對(duì)外源DNA的限制和對(duì)自身DNA的修飾來(lái)實(shí)現(xiàn)的。10．II型限制酶既具有辨認(rèn)位點(diǎn)的專一性，也具有切割位點(diǎn)的專一性。它作用時(shí)需要Mg2+離子作輔助因子。第三章習(xí)題選擇題1.關(guān)于PCR擴(kuò)增停滯的因素有很多種，但下列各項(xiàng)中（B）項(xiàng)不是重要因素。A.底物（模板）過(guò)剩B.dNTP的大量消耗C.產(chǎn)物的聚集D.非特異性產(chǎn)物的競(jìng)爭(zhēng)性克制2.Clark作了一個(gè)有趣的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在雙鏈DNA的末端加一個(gè)堿基，重要是加（B）A.dGTPB.dATPC.dCTPD.dTTP3.有簡(jiǎn)并引物的3’端盡量使用品有簡(jiǎn)并密碼的氨基酸，這是由于（A）A.TaqDNA聚合酶具有一定的不精確性B.便于排除錯(cuò)誤堿基的摻入C.易于退火D.易于重組連接4.PCR實(shí)驗(yàn)的特異性重要取決于（C）A.DNA聚合酶的種類B.反映體系中模板DNA的量C.引物序列的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)度D.四種dNTP的濃度E.循環(huán)周期的次數(shù)5.有關(guān)PCR的描述下列哪項(xiàng)不對(duì)的：（D）A.是一種酶促反映B.引物決定了擴(kuò)增的特異性C.擴(kuò)增的產(chǎn)量按Y=m(1+X)nD.擴(kuò)增的對(duì)象是氨基酸序列E.擴(kuò)增的對(duì)象是DNA序列6.有關(guān)PCR的描述下列哪項(xiàng)對(duì)的：(ABC)A.polymerasechainreaction的字首縮寫B(tài).1993年獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)C.已廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各學(xué)科D.可以準(zhǔn)確對(duì)擴(kuò)增模板定量E.以上都對(duì)7.PCR反映產(chǎn)物的特異性取決于(E)A鎂離子濃度B退火溫度C引物堿基組成和長(zhǎng)度D循環(huán)次數(shù)E.A+B+C填空1.Clark發(fā)現(xiàn)用TaqDNA聚合酶得到的PCR反映產(chǎn)物不是平末端，而是有一個(gè)突出堿基末端的雙鏈DNA分子。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)設(shè)計(jì)了克隆PCR產(chǎn)物的。2.在簡(jiǎn)并引物的設(shè)計(jì)中，經(jīng)常要用到dI（次黃嘌呤），因素是。3.簡(jiǎn)并引物PCR重要是根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列設(shè)計(jì)引物來(lái)合成相應(yīng)的基因。4.SSC是由NaCl和檸檬酸鈉組成的試劑，其中NaCl的作用是使，而檸檬酸鈉的作用是。KEY1.T-載體2.dI可以和任何載體相匹配3.一組混合4.DNA溶解；作為螯合劑克制核酸酶的活性簡(jiǎn)答題1.你打算擴(kuò)增下圖所示的兩段序列之間的DNA，請(qǐng)從所列出引物中選出合適的一對(duì)，5’-GACCTGTGGAAGCCATACGGGATTG-3’3’-CTGGACACCTTCGGTATGCCCTAAC-5’引物1引物25’-GACCTGTGGAAGC5’-CATACGGGATTG5’-CTGGACACCTTCG5’-GTATGCCCTAAC5’-CGAAGGTGTCCAG5’-GTTAGGGCATAC5’-GCTTCCACAGGTC5’-CAATCCCGTATG答：引物1：5’-GACCTGTGGAAGC；引物2：5’-CAATCCCGTATG2.PCR反映涉及引物與DNA模板鏈間的解鏈與復(fù)性。討論循環(huán)溫度范圍對(duì)引物-DNA雙螺旋穩(wěn)定性的影響及對(duì)PCR產(chǎn)率的影響。答：由于GC對(duì)間是三個(gè)氫鍵的作用力，比兩個(gè)氫鍵作用力的AT對(duì)要穩(wěn)定，因此DNA的解鏈與退火都是依賴于G+C的含量與A+T的含量的比例。GC對(duì)普遍比AT對(duì)更傾向于非特異性的復(fù)性，所以GC含量高的引物比AT含量高的引物更適合于PCR反映。PCR的基本原理是什麼？用PCR擴(kuò)增某一基因，必須預(yù)先得到什麼樣的信息？（1）運(yùn)用DNA半保存復(fù)制的原理，在體外進(jìn)行DNA的變性、復(fù)性和引物延伸。（2）至少要預(yù)先知道足夠合成一對(duì)引物的靶DNA序列。3.何謂簡(jiǎn)并引物？簡(jiǎn)并引物設(shè)計(jì)的一般原則是什麼？答：簡(jiǎn)并引物是指根據(jù)肽鏈的氨基酸序列（或部分序列），并充足考慮密碼子的簡(jiǎn)并性而設(shè)計(jì)的，用于PCR擴(kuò)增的混合引物之間具有不同的堿基組成，但堿基數(shù)量是相同的。由于充足考慮了密碼的簡(jiǎn)并性，在這種混合引物中必然有一種引物可以和該基因的DNA序列精確互補(bǔ)。簡(jiǎn)并引物設(shè)計(jì)的一般原則是：（1）選擇保守區(qū)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物；（2）選擇簡(jiǎn)并性低的氨基酸密碼區(qū)設(shè)計(jì)引物；（3）注意密碼的偏愛(ài)性；（4）使用盡也許短的引物，以減少簡(jiǎn)并性，最短可用15~20個(gè)堿基。（5）由于TaqDNA聚合酶在PCR