第2章 細胞生物學技術(shù)課件

第2章細胞生物學技術(shù)2.1細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法2.1.1光學顯微鏡技術(shù)顯微鏡和顯微鏡的分辨能力肉眼：0.2mm;光鏡：0.2μm;電鏡：0.2nm0.61λ分辨率DN.sinα/2=λ:

光源波長;α:物鏡鏡口角;N:介質(zhì)折射率第2章細胞生物學技術(shù)顯微鏡成像原理第2章細胞生物學技術(shù)普通復式光學顯微鏡（lightmicroscope）雙目顯微鏡第2章細胞生物學技術(shù)正置顯微鏡倒置顯微鏡第2章細胞生物學技術(shù)相差顯微鏡（phase-contrastmicroscope）（光程差或相位差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹睿嗖畎澹┪⒎指缮骘@微鏡（differential-interferencemicroscope）（厚度差轉(zhuǎn)變?yōu)槊靼挡?；增加樣品反差，立體感強）第2章細胞生物學技術(shù)熒光顯微鏡（fluorescencemicroscope）第2章細胞生物學技術(shù)熒光顯微鏡及其照片第2章細胞生物學技術(shù)黏著斑蛋白細胞骨架第2章細胞生物學技術(shù)激光共聚焦原理激光共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope）第2章細胞生物學技術(shù)激光共聚焦顯微鏡及其顯微圖像第2章細胞生物學技術(shù)黏著斑蛋白細胞骨架（應(yīng)力纖維）共定位分析第2章細胞生物學技術(shù)暗視野成像原理顯微鏡的暗視野功能第2章細胞生物學技術(shù)(A)明視野顯微術(shù)；(B)相差顯微術(shù)；(C)微分干涉顯微術(shù)；(D)暗視野顯微術(shù)第2章細胞生物學技術(shù)熒光漂白恢復技術(shù)（fluorescencerecoveryafterphotobleaching,FRAP）第2章細胞生物學技術(shù)熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET）第2章細胞生物學技術(shù)1）電鏡基本知識和結(jié)構(gòu)（波長小于0.1nm）2）樣品制備（超薄切片，負染色，冰凍蝕刻，三維重構(gòu)，掃描）3）電鏡種類掃描電子顯微鏡透射電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡和原子力顯微鏡2.1.2電子顯微鏡技術(shù)第2章細胞生物學技術(shù)透射電鏡及其圖像第2章細胞生物學技術(shù)透射電鏡照片第2章細胞生物學技術(shù)免疫電鏡照片第2章細胞生物學技術(shù)掃描電鏡及其圖像第2章細胞生物學技術(shù)掃描電鏡照片第2章細胞生物學技術(shù)冰凍蝕刻技術(shù)第2章細胞生物學技術(shù)冰凍蝕刻電鏡技術(shù)照片第2章細胞生物學技術(shù)負染色電鏡技術(shù)照片第2章細胞生物學技術(shù)2.2.1高速、超速和梯度密度離心分離各種細胞器、生物大分子及其復合物2.2細胞組分的分析方法第2章細胞生物學技術(shù)差速離心密度梯度離心第2章細胞生物學技術(shù)差速離心過程第2章細胞生物學技術(shù)2.2.2細胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖類、脂類的顯色DNA：福爾根（Feulgen）反應(yīng)－－紫紅色多糖類：PAS反應(yīng)－－黃色脂肪：蘇丹III－－紅色蛋白質(zhì)：米倫（Millon）－－紅色2.2.3特異抗原的定性與定位免疫熒光免疫電鏡免疫沉淀Westernblotting第2章細胞生物學技術(shù)2.2.5特異核酸標記技術(shù)InsituhybridizationNorthernblot(RNA);Southernblot(DNA)2.2.4放射性標記生物大分子的合成和動態(tài)3H（DNA合成）35S（蛋白質(zhì)合成）14C（碳水化合物合成）32P（核酸合成）定性、定位、半定量研究（標記，自顯影）32P（14天）,14C（5760年）,3H（12年）,35S（87天）,131I（8）第2章細胞生物學技術(shù)原位雜交技術(shù)第2章細胞生物學技術(shù)2.2.6定量細胞化學技術(shù)2.2.7細胞內(nèi)大分子的分離與分析柱層析、分子篩、免疫吸附、免疫沉淀等方法分離蛋白質(zhì)組分及復合物（交聯(lián)和變性）顯微分光光度術(shù)（紫外顯微分光光度儀、可見光顯微分光光度染色）流式細胞儀第2章細胞生物學技術(shù)蛋白質(zhì)電泳分析第2章細胞生物學技術(shù)流式細胞術(shù)第2章細胞生物學技術(shù)2.3細胞培養(yǎng)、細胞工程與顯微操作技術(shù)2.3.1細胞培養(yǎng)

1）植物細胞（單倍體細胞培養(yǎng)，原生質(zhì)體培養(yǎng)，體細胞培養(yǎng)）

2）動物細胞（原代細胞培養(yǎng)，永生細胞系）

3）非細胞體系（DNA復制，RNA轉(zhuǎn)錄，蛋白質(zhì)合成，高爾基體的膜泡運輸，細胞核裝配等）細胞提取物，細胞核提取物第2章細胞生物學技術(shù)植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)細胞的克隆第2章細胞生物學技術(shù)2.3.2細胞工程1）細胞融合與雜交植物細胞先去壁；融合方式：仙臺病毒或聚乙二醇介導，電融合等同核融合細胞，異核融合細胞，染色體丟失

2）單克隆抗體技術(shù)2.3.3顯微操作技術(shù)1975年英國科學家MilsteinandKohler,1984年獲諾貝爾獎B淋巴細胞+小鼠骨髓瘤轉(zhuǎn)移細胞核、細胞器、基因等2.3.4轉(zhuǎn)基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等第2章細胞生物學技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù)第2章細胞生物學技術(shù)顯微操作儀第2章細胞生物學技術(shù)顯微操作示意圖第2章細胞生物學技術(shù)第2章細胞生物學技術(shù)MarioCapecchi(Late1980s)(UniversityofUtah)embryonicstemcellsininnercellmassastargetcells1/104cellsundergoaprocessofhomologousrecombination.基因敲除技術(shù)第2章細胞生物學技術(shù)2.4細胞生物學研究的模式生物病毒（轉(zhuǎn)基因載體）細菌（大腸桿菌作為基因工程菌株）酵母（真核表達載體，基因功能分析）線蟲（1000個左右細胞構(gòu)成）黏菌（同步化材料）蛙（卵細胞大，易操作）果蠅（遺傳背景清楚，表型易掌握）斑馬魚（胚胎發(fā)育研究的好材料）小鼠（與人更接近）第2章細胞生物學技術(shù)學生報告題目：

1，轉(zhuǎn)基因技術(shù)及其應(yīng)用；2，細胞工程技術(shù)在生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用；3，基因敲除技術(shù)及其應(yīng)用；4，模式生物線蟲及其在細胞生物學研究中的應(yīng)用；5，模式生物斑馬魚及其在細胞生物學研究中的應(yīng)用；

按學號分組，按組確定題目，每個組確定一名組長并委派一個報告人。每個組