實(shí)驗(yàn)七-苯硫脲嘗味的群體遺傳學(xué)調(diào)查

實(shí)驗(yàn)七苯硫脲嘗味的群體遺傳學(xué)調(diào)查一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.測(cè)定人群中PTC嘗味基因的表現(xiàn)型和基因型，理解孟德爾遺傳基因型與表現(xiàn)型的對(duì)應(yīng)關(guān)系。2．了解酶切擴(kuò)增多態(tài)序列（又稱為PCR-RFLP）技術(shù)的原理，學(xué)會(huì)用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）。在分子水平上測(cè)定PTC嘗味的基因型。二、實(shí)驗(yàn)原理苯硫脲（phenylthiocarbamide，PTC）是硫脲的苯基衍生物，為白色結(jié)晶粉末，因含有硫代酰胺基（N-C=S）官能團(tuán)而有苦澀味。能嘗出1/750,000-1/50,000PTC濃度溶液味道的人（苦澀味，少數(shù)人感到甜味）稱為苯硫脲“嘗味者”,只能嘗出PTC濃度大于1/24,000溶液的味道的人稱為苯硫脲“味盲者（nontaster）”。PTC嘗味能力是受單基因控制的孟德爾遺傳性狀，是由位于7號(hào)染色體上的一種苦味味覺(jué)感受器基因TAS2R38決定的，屬于常染色體不完全顯性遺傳。嘗味者中顯性基因T的純合子(TT)能嘗出1／750,000-1／6,000,000的PTC溶液的苦味，雜合子(Tt)只能嘗出1／480,000-l／380,000的PTC溶液的苦味。人類的PTC嘗味基因又名PTC、T2R38或T2R61。絕大多數(shù)嘗味者與味盲者的區(qū)別在于三處單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphisms，SNPs)：一處是145位，味盲者為G145（編碼丙氨酸ala），嘗味者為C145（編碼脯氨酸pro）；第二處是785位，味盲者為T785（編碼纈氨酸val），嘗味者為C785（編碼丙氨酸ala）；第三處在886位，味盲者為A886（編碼異亮氨酸ile），嘗味者為G886（編碼纈氨酸val）。因此味盲者PTC多肽中三處對(duì)應(yīng)的氨基酸分別是ala49、val262和ile262，被稱為AVI等位基因，而嘗味者的三處是pro49、ala262和val262，被稱為PAV等位基因。如圖1所示。圖1PTC嘗味基因上的三個(gè)SNP位點(diǎn) 味盲者的PTC編碼區(qū)有五個(gè)限制性內(nèi)切酶Fnu4H1的識(shí)別位點(diǎn)（識(shí)別序列5’-GC↓NGC3’），如果是嘗味者，則其第785位SNP恰好形成了一個(gè)額外的Fnu4H1識(shí)別位點(diǎn)（GCTGC）。因此可以利用這個(gè)SNP造成的限制性位點(diǎn)多態(tài)性，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增包含785位SNP位點(diǎn)的PTCFnu4H1基因編碼區(qū)的一部分，然后用Fnu4H1切割擴(kuò)增產(chǎn)物，根據(jù)是否能