藥物電泳技術(shù)-等電點(diǎn)聚焦（制藥技術(shù)課件）_第1頁(yè)
藥物電泳技術(shù)-等電點(diǎn)聚焦（制藥技術(shù)課件）_第2頁(yè)
藥物電泳技術(shù)-等電點(diǎn)聚焦（制藥技術(shù)課件）_第3頁(yè)
藥物電泳技術(shù)-等電點(diǎn)聚焦（制藥技術(shù)課件）_第4頁(yè)
藥物電泳技術(shù)-等電點(diǎn)聚焦（制藥技術(shù)課件）_第5頁(yè)
已閱讀5頁(yè)，還剩5頁(yè)未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

電泳技術(shù)--等電聚焦電泳等電聚焦電泳—電泳技術(shù)大綱1.等電聚焦電泳概念2.等電聚焦電泳特點(diǎn)3.等電聚焦操作等電聚焦電泳—電泳技術(shù)將等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)混合物加入有pH值梯度的凝膠介質(zhì)中，在電場(chǎng)內(nèi)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，各組分將分別聚焦在各自等電點(diǎn)相應(yīng)的pH值位置上，最后，樣品的各組分在各自的等電點(diǎn)聚焦成一條清晰而穩(wěn)定的窄帶。（一）等電聚焦電泳概念等電聚焦電泳—電泳技術(shù)①使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度；②由于“聚焦效應(yīng)”，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；③電泳速度快;④分辨率高;（二）等電聚焦電泳特點(diǎn)等電聚焦電泳—電泳技術(shù)⑤加入樣品的位置可任意選擇；⑥可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)的等電點(diǎn);⑦適用于中、大分子量（如蛋白質(zhì)、肽類(lèi)、同工酶等）生物組分的分離分析。（二）等電聚焦電泳特點(diǎn)等電聚焦電泳—電泳技術(shù)

（1）凝膠配制：凝膠濃度T為5％-7.5％

（2）加樣：任意位置（三）等電聚焦電泳操作等電聚焦電泳—電泳技術(shù)（3）電泳

①開(kāi)始電泳時(shí)恒壓60V，15min，目的在于使小分子的，泳動(dòng)快的載體兩性電解質(zhì)可在短時(shí)間內(nèi)形成一個(gè)粗略的pH梯度。

②此后，恒流為8mA，是為了避免電泳開(kāi)始時(shí)介質(zhì)中帶電顆粒較多，電泳電流過(guò)高而破壞凝膠。（三）等電聚焦電泳操作等電聚焦電泳—電泳技術(shù)③當(dāng)各種蛋白質(zhì)逐漸泳動(dòng)，到各自等電點(diǎn)位置時(shí)，帶電顆粒逐漸減少，出現(xiàn)電阻增大，電壓隨之增高現(xiàn)象。（三）等電聚焦電泳操作等電聚焦電泳—電泳技術(shù)④當(dāng)電壓升到550V時(shí)，帶電顆粒已大為減少，電流不再偏高，故恒壓到580V，繼續(xù)電泳120min后，蛋白質(zhì)顆粒慢慢地集中到它等電點(diǎn)位置。⑤電流接近于零時(shí)，蛋白質(zhì)顆粒不再泳動(dòng)，電泳也到此結(jié)束。

（三）等電聚焦電泳操作等電聚焦電泳—電泳技術(shù)（4）固定及染色：

TCA固定，考馬斯亮藍(lán)染色。（5）等電點(diǎn)測(cè)定：Marker與未知樣品同時(shí)電泳染色后，以pH值為縱軸，距陰極距離為橫軸，做p

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論